神经生长因子对大鼠脊髓损伤后神经元凋亡的影响

目的探讨神经生长因子(NGF)对脊髓损伤保护作用的分子机制.方法采用Allen's法以25 gcm力致伤大鼠T8脊髓,经蛛网膜下腔导管于术后即刻、2、4、8、12、24 h各注入NGF溶液,并与生理盐水组(NS组)和正常对照组作对照,采用免疫组织化学方法和末端单位标记法(TUNEL)原位末端标记法分别检测bcl-2、bax蛋白在脊髓神经元的表达及神经元凋亡情况.结果正常组中脊髓灰质bax蛋白阳性细胞吸光度(A)值为34.51±4.47,NS组中bax蛋白表达增加,以2 h及12 h最为显著,而NGF组与NS组相比,bax蛋白表达明显减少(P＜0.01).正常组中脊髓灰质bcl-2蛋白表达的A值为19.72±2.92,NS组中bcl-2表达下降,而NGF组与NS组相比较,bcl-2蛋白表达明显增多(P＜0.01).TUNEL检测结果显示,正常对照组中未见神经元凋亡,NS组中自2 h后可见神经元凋亡,NGF组与NS组相比,神经元凋亡指数明显减少(P＜0.01).结论NGF能通过抑制bax蛋白的表达,促进bcl-2表达抑制脊髓损伤后神经元凋亡,从而保护损伤的脊髓组织,这可能是NGF对脊髓损伤具有保护作用的机制之一.     

大剂量甲基强的松龙对大鼠急性脊髓损伤后神经细胞Bcl-2表达及细胞凋亡的影响

目的：观察大剂量甲基强的松龙（MP）治疗对大鼠急性脊髓损伤（ASCI）后神经细胞凋亡及凋亡基因Bcl-2的影响。方法：选取48只雌性SD大鼠随机等分为2组,对照组与治疗组,按Nystrom法制备大鼠急性脊髓损伤模型。治疗组伤后30min经腹膜腔注入MP30mg／kg,以后每小时腹膜腔注入MP5．4mg／kg,维持24h;对照组应用生理盐水替代MP,处理方法同治疗组。两组分别于伤后4、8h及1、3、7、14d灌注固定后取材。免疫组织化学检测损伤段脊髓内Bcl-2蛋白表达,TUNEL检测细胞凋亡,染色结果应用图像分析仪进行半定量分析。结果：大鼠ASCI后4h即可见脊髓内TUNEL阳性细胞,8h表达达高峰,此后表达量逐渐下降,14d时仍可见少量阳性细胞。凋亡相关蛋白Bcl-2在伤后4h即可见表达,伤后1d达高峰,伤后14d仍有表达,与对照组相比,治疗组伤后8h、1d和3d时凋亡细胞数减少有统计学意义,伤后8h和1d Bcl-2蛋白表达增高有统计学意义。结论：大剂量甲基强的松龙治疗可抑制大鼠ASCI后神经细胞凋亡,并增加凋亡相关蛋白Bcl-2的表达：     

bcl-2和bax基因与细胞凋亡的关系及在脊髓损伤中的作用

目的探讨bcl2和bax基因与细胞凋亡的关系及在脊髓损伤中的作用。方法采用Allen法挫伤大鼠T10节段脊髓,随机分为7组,其中6组为实验组,1组为对照组,每组在SCI后2、4、8、24h、3、7d取材,每一时间点4只。免疫组织化学法检测bax和bcl2基因表达,采用原位末端标记法检测凋亡细胞。结果正常组大鼠脊髓中未见凋亡细胞。实验组在损伤2h出现阳性细胞,伤后8h阳性细胞数目达高峰为84.53±8.00,以后逐渐减少。bax基因表达的高峰也在伤后8h为0.311±0.012,说明bax基因促进了细胞的凋亡,而此时bcl2基因开始出现表达增多,至伤后24h表达达高峰,之后缓慢降低,而与此相对应的是细胞凋亡开始逐渐减少(P<0.01)。结论凋亡相关基因bax与bcl2可能参与了脊髓继发性损伤,细胞凋亡在脊髓继发性损伤过程中起着关键性作用。     

大鼠脊髓急性损务后神经细胞凋亡及相关基因表达

目的：研究脊髓急性损伤后神经细胞的凋亡及相关基因的表达,方法：大鼠脊髓（T8、T9）经中度压迫损伤后,分别在30min,2h,4h,8h,24h,48h,72h,7d,14d和21d处死取材（各间组n=4)。应用HE染色、免疫组化及凋亡细胞原位未端标记法对脊髓组织进行标记。结果：损伤4h后,在损伤段及邻近段可见末端标记阳性神经元,损伤段灰质中阳性细菌数8h达高峰,24h白质中阳性胶质细胞数量达高峰。相邻节段阳性细胞数72h达高峰。损伤后P53及Bax大量表达,而Bcl-2仅少量表达。结论：脊髓损伤后神经细胞的凋亡发损伤期的重要病理变化。     

急性胰腺炎大鼠肾上腺损伤中bax与bcl-2表达的研究

目的 观察急性胰腺炎(AP)大鼠肾上腺损伤时细胞凋亡及调控基因bcl-2和bax蛋白的表达及作用.方法 采用牛磺胆酸钠逆行胰胆管注射法建立AP模型.术后3、6、12 h检测血皮质酮水平,观察肾上腺病理,TUNEL检测细胞凋亡,免疫组织化学检测bcl-2和bax蛋白表达.结果 与SO组比较,AP3 h组血清皮质酮显著增高,随后逐渐降低(P＜0.05).随病程延长,肾上腺细胞凋亡指数增高,bax蛋白表达增强,bax/bcl-2比值亦逐渐升高(P值均＜0.05),并与凋亡指数(AI)呈正相关(r =0.759,P＜0.05).结论 bax和bcl-2可能参与了AP肾上腺损伤的发病过程.通过激活bcl-2和抑制bax的蛋白表达,减少细胞凋亡发生从而保护肾上腺结构和功能,可能为今后AP及相关肾上腺损伤的药物及基因治疗提供依据和新思路.     

川芎嗪对大鼠脊髓损伤后bcl-2、bax基因表达的影响

目的 探讨川芎嗪对脊髓损伤后脊髓组织bcl-2、bax基因表达的影响。方法 120只SD 大鼠随机分成两组:生理盐水(SAL)组、川芎嗪(TMP)组;采用Allen WD法以10g×2．5cm致伤力损 伤T8脊髓,TMP组术后即刻给予川芎嗪[200mg／kg]腹腔注射,SAL组腹腔注射等量生理盐水。采用 RT-PCR和免疫组织化学染色(SABC方法)分别检测SCI后基因bcl-2、bax的mRNA水平和蛋白表 达变化。结果 ①bcl-2mRNA和蛋白在脊髓损伤后2h、6h、12h、24h、48h均有表达,随时间的推移 逐渐升高,24h达到高峰,后逐渐下降;而TMP组bcl-2mRNA和蛋白各时间点的表达均明显升高,与 SAL组相比,各时相点均有非常显著性差异(P<0．01)。②SAL组baxmRNA在SCI后2h、6h、12h、24h、 48h均有表达,随时间的推移逐渐升高,24h达到高峰,后逐渐下降;而TMP组baxmRNA各时间点的 表达均明显降低,与SAL组相比,伤后6h有显著性意义(P<0．05),而其余各时相点均有非常显著性 差异(P<0．01)。结论 TMP可以促进脊髓损伤后bcl-2基因表达和蛋白产物的增加,抑制bax基因 的表达和蛋白产物的增加,这可能是TMP对脊髓损伤具有保护作用的分子机制之一。     

髓鞘相关蛋白抗体对大鼠脊髓损伤早期bcl-2与bax表达的影响

目的 探讨髓鞘相关蛋白(Nogo-A)抗体应用于脊髓损伤动物模型中对bcl-2与bax表达的影响.方法 建立大鼠急性脊髓损伤实验动物模型.180只大鼠随机分成对照组、损伤组和损伤后Nogo-A抗体治疗组,每组各60只.不同时间点损伤节段脊髓取材,分别行苏木素-伊红(HE)染色、免疫组织化学法检测bcl-2、bax表达并进行定量分析.结果 HE染色后光镜下观察:损伤后治疗组出血、小胶质细胞增生和炎细胞浸润均较损伤组轻.bcl-2、bax在损伤组和治疗组表达呈现动态变化,损伤后24 h bcl-2表达达高峰(3组分别为0.1004±0.0091、0.1890±0.0100、0.2456±0.0179,F=197.541,P＜0.01);损伤后8 h bax表达达高峰(3组分别为0.1084±0.0041、0.3440±0.0070、0.2472±0.0071,F=1856.199,P＜0.01);3组各时间点的图像分析结果 经单因素方差分析,差异有统计学意义(P＜0.05),治疗组和损伤组比较,bcl-2表达增强而bax表达减弱.结论 Nogo-A抗体治疗脊髓损伤能抑制bax表达,促进bcl-2表达,减轻脊髓继发性损伤.     

大鼠牵张性脊髓损伤后细胞凋亡及相关基因表达的实验研究

目的观察大鼠牵张性脊髓损伤后细胞凋亡现象,检测脊髓损伤后凋亡相关基因的表达。方法大鼠脊髓T13～L2经牵张损伤,皮层体感诱发电位(CSEP)监测P1N1波幅下降至术前波幅70%后,分别于术后30min、6h、1、4、7、14、21d处死大鼠,取材(n=4)。应用流式细胞仪、原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术观察脊髓细胞凋亡情况,用免疫组化检测p53、bax和bcl2的表达。结果流式细胞仪及TUNEL法检测显示,损伤组术后6h凋亡细胞开始增多,术后7d细胞凋亡率达高峰,随后开始回落,持续21d,与空白对照组及椎板切除组比较,差异有显著性意义(P<005,001)。TUNEL法染色显示,白质中出现大量胶质细胞凋亡。免疫组化染色显示损伤组术后6h开始,p53、bax和bcl2阳性表达开始增多,p53阳性细胞数术后4d达高峰,bax和bcl2术后7d达高峰,损伤组各时相点的阳性表达与空白对照组与椎板切除组比较差异有显著性意义(P<005,001)。结论牵张性脊髓损伤后存在细胞凋亡现象,从形态上看包括神经元和胶质细胞凋亡,细胞凋亡是牵张性脊髓损伤继发损害中细胞死亡的一种重要形式,也是继发损伤期的重要病理变化。凋亡相关基因p53、bax大量表达,可能在脊髓细胞凋亡过程中起重要作用。     

重组人红细胞生成素与β-七叶皂甙钠治疗大鼠脊髓损伤的实验研究

目的:观察重组人红细胞生成素(rHu-EPO)和β-七叶皂甙钠治疗大鼠脊髓损伤后功能恢复、损伤段神经细胞凋亡情况。方法:30只SD大鼠根据损伤及治疗情况分为4组:空白组、损伤组、治疗A组和治疗B组,观察药物治疗前后大鼠的神经功能行为、红细胞、血红蛋白的变化。损伤后12d处死动物,损伤段脊髓标本做组织学切片,HE染色;做免疫组化检测凋亡因子(包括bcl-2,bax,fas);TUNEL标记凋亡细胞;比较各组间差别。结果:治疗A、B组在用药后,红细胞、血红蛋白数值明显高于治疗前,且与损伤组比较,神经功能有显著提高(P<0.05)。凋亡指标检测:fas、bax、TUNEL显示,损伤组的凋亡阳性细胞明显多于治疗组;bcl-2显示,治疗组的阳性表达明显多于损伤组(P<0.05)。结论:rHu-EPO能抑制脊髓神经细胞凋亡,对损伤脊髓的神经功能具有保护作用,联合应用rHu-EPO和β-七叶皂甙钠效果更明显。     

大鼠脊髓急性损伤后神经细胞凋亡及相关基因表达△

目的研究脊髓急性损伤后神经细胞的凋亡及相关基因的表达.方法大鼠脊髓(T8、T9)经中度压迫损伤后,分别在30min、2h、4h、8h、24h、48h、72h、7d、14d和21d处死取材(各时间组n=4).应用HE染色、免疫组化及凋亡细胞原位末端标记法对脊髓组织进行标记.结果损伤4h后,在损伤段及邻近段可见末端标记阳性神经元,损伤段灰质中阳性细胞数8h达高峰,24h白质中阳性胶质细胞数量达高峰.相邻节段阳性细胞数72h达高峰.损伤后P53及Bax大量表达,而Bcl-2仅少量表达.结论脊髓损伤后神经细胞的凋亡是继发损伤期的重要病理变化.     

脊髓损伤后促红细胞生成素对bcl-2的影响

目的 探讨促红细胞生成素（EPO）对大鼠脊髓损伤后伤区脊髓细胞凋亡和神经功能恢复的影响。方法 Wistar大鼠210只，随机分为4组：假手术组、脊髓损伤组、脊髓损伤加重组人EPO治疗组、脊髓损伤加生理盐水治疗组。采用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记（TUNEL标记法）检测神经元和少突胶质细胞凋亡，Western blot免疫印迹法和免疫组化染色检测bcl-2表达，免疫组化染色和图像分析方法观察对白质内神经纤维（NF-200染色）的保护作用，通过感觉诱发电位（SSEP）、运动诱发电位（MEP）和大鼠BBB后肢运动功能评分，观察损伤脊髓传导功能的恢复。结果 EPO保护组bcl-2在各时相点的表达明显增高，8h和7d时神经元和少突胶质细胞的TUNEL阳性细胞数明显减少；在7d时白质中NF-200阳性神经纤维明显增多；SSEP和MEP的平均潜伏期和波幅以及BBB功能评分明显提高，与损伤组和生理盐水治疗相比，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论 EPO通过上调bcl-2的表达，在抑制脊髓损伤后神经元和少突胶质细胞的凋亡中起到神经保护作用。     

Expression and effect of Caspase-3 in neurons after tractive spinal cord injury in rats

Thereisextensiveapoptosisafterinjuryofthecentralnervoussystem.Apoptosisisarathercomplicatedprocess,involvingwithsubtleregulationsofmacromolecules,likecellreceptor,adaptormolecule,proteaseandinhibitor.Among them,Caspaseproteasefamilyisthecoreinthe processo…     

大鼠脊髓慢性压迫及减压后神经细胞凋亡及其相关基因的表达

目的：观察慢性压迫性脊髓损伤后及减压后神经细胞凋亡和Bcl-2mRNA，P53mRNA,CASPASE-3神经功能恢复的影响。方法：将55只同龄Wistar大鼠，置入后路渐进式压迫装置，制作成慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为假手术对照组（A组5只），慢性脊髓压迫组（B组25只），减压组（C组25只）。应用原原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记（TUNEL）技术及原位杂交检测方法，观察各组细胞凋亡率及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA、P53mRNA、CASPASE－3在慢性压迫性脊髓损伤后及减压后的表达，分别于损伤后及减压后1、3、7、14、28d对慢性脊髓损伤区进行细胞凋亡及原位杂交检测。结果：A、B、C三组均发现神经细胞凋亡及细胞凋亡相关基因Bcl-2mRNA、P53mRNA，CASPASE－3的表达，A、B、C三组细胞凋亡率及阳性细胞灰度值比较，差异有显著性意义（P＜0．05）。阳性细胞表达程度与细胞凋亡的减少及神经功能的恢复相一致。结论：慢性压迫性脊髓损伤可导致大量的神经细胞凋亡，同时激活内源性保护机制，使脊髓发生适应性改变，减压可能通过激活此机制而减轻神经细胞凋亡，起到保护作用。     

DNA damage and repair system in spinal cord ischemia

BACKGROUND AND PURPOSE: Spinal cord ischemia-reperfusion injury may be initiated by a number of mediators, including reactive oxygen species. Recent studies have shown that human MutY homologue (hMYH), human 8-oxo-7,8-dihydrodeoxyguanine (8-oxoG) glycosylase (hOGG1), and human MutS homologue 2 (hMSH2) are important DNA mismatch repair genes. We hypothesized that ischemia-reperfusion injury in spinal cord causes DNA damage manifested by 8-oxoG production and activates the DNA repair system involving hMYH, hOGG1, and hMSH2. METHODS: Spinal cords of rabbits were removed at 1, 3, 6, 24, and 48 hours after 30 minutes of infrarenal aortic occlusion. DNA damage was determined with 8-oxoG staining. The expression and localization of DNA repair enzymes, such as hMYH, hOGG1, and hMSH2, were studied with Western blot analysis and immunohistochemical staining. The level of apoptosis was determined with TUNEL study. Activation of caspase-3, an enzyme induced by cellular injury that leads to apoptosis by degrading cellular structural proteins, was also studied. RESULTS: DNA damage monitored with 8-oxoG level was significantly present from 1 hour to 6 hours after reperfusion in gray matter neurons of ischemic spinal cord. The levels of hMYH, hOGG1, and hMSH2 were markedly increased in gray matter neurons at 6 hours after reperfusion. Caspase-3 was also induced at 6 hours to 24 hours after reperfusion in ischemic spinal cord. However, the peak level of TUNEL reactivity was found at 48 hours after reperfusion in spinal cord neurons. CONCLUSION: This study has shown, for the first time, the rapid expression of DNA damage-repair processes associated with spinal cord ischemia and subsequent reperfusion.     

转化生长因子-β1对脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响

 目的 探讨转化生长因子(Transforming growth factor-β1,TGF-ββ1)对大鼠脊髓损伤后神 经细胞凋亡及神经动能恢复的影响。方法 采用改良 Allen爷s撞击法制作脊髓损伤大鼠模型, 根据干预 方式不同随机分为对照组、模型组、TGF-β1治疗组(渗透微泵持续蛛网膜下腔泵入 1μg/h TGF-β1)、 TGF-β1抗体组(渗透微泵持续蛛网膜下腔泵入 1μg/h TGF-β1中和抗体), 按设定的不同时间点随机处死各组的实验动物, 取材。应用 TUNEL法、RT-PCR、Western blot和免疫组织化学染色分别检测不同组 别在神经细胞凋亡, 脊髓组织细胞中 TGF-β1和 Fas的 mRNA及蛋白质表达差异。通过 BBB运动功能 评分法评估大鼠后肢运动功能恢复情况。结果 脊髓损伤后 TGF-β1和 Fas表达时间依赖性增加, Fas 表达 24h达高峰, TGF-β1表达 7d达高峰。脊髓损伤后神经细胞凋亡增加, 其中 8h神经元凋亡明显, 7 d神经胶质细胞凋亡明显。局部应用 TGF-β1, 可显著下调损伤脊髓组织 Fas表达, 减少 8h和 7d时神 经元凋亡及神经胶质细胞凋亡数量, BBB运动功能评分结果显示, TGF-β1治疗组大鼠后肢运动功能明显改善(P约0.01)。结论 脊髓损伤部位应用 TGF-β1可抑制 Fas mRNA及蛋白质的表达, 减少脊髓损伤 部位神经细胞的凋亡, 有利于促进脊髓神经功能的恢复。     

大剂量甲基强的松龙对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡影响的实验研究

目的:观察大剂量甲基强的松龙对大鼠慢性压迫性脊髓损伤后神经细胞凋亡及神经功能恢复的影响。方法:将60只同龄Wistar大鼠,置入后路渐进式压迫装置,制作成中度慢性压迫性脊髓损伤模型。随机分为大剂量甲基强的松龙治疗组(A组,30只)和单纯慢性压迫性脊髓损伤组(B组,30只)。应用原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记(TUNEL)技术,分别于慢性压迫性脊髓损伤后1、3、7、14、28d对脊髓损伤区进行细胞凋亡检测。结果:A、B两组均发现细胞凋亡,两组细胞凋亡率比较,差异有显著性(P<0.01和0.05)。治疗组细胞凋亡的减少与神经功能的恢复相一致。结论:慢性压迫性脊髓损伤可导致细胞凋亡,大剂量甲基强的松龙对神经细胞凋亡可起到抑制作用。