真核细胞DNA聚合酶

近年来,其核细胞DNA体外复制模型的建立及蛋白纯化技术的提高,DNA聚合酶基因的克隆,真核细胞DNA聚合酶研究取得了很大进展。迄今为止,已发现α、β、γ、δ、ε、ζ等6类真核细胞DNA聚合酶,分别在DNA复制和修复等事件中起到重要作用。     

错配修复系统的生物学效应和机理

在ＤＮＡ正常代谢中，碱基错配、插入或缺失可导致基因组ＤＮＡ复制错误。已证明在细菌、酵母及高等真核细胞中，都存在错配修复系统。这方面的研究已取得了一些进展，包括Ｅ．ｃｏｌｉ．中的Ｍｕｔ ＨＬＳ修复系统，酵母中的错配修主其蛋白以及真核细胞中的错配修复基因及蛋白。这对消除ＤＮＡ生物合成错误，增加染色体复制的可信性，防止自由突出以及肿瘤的发生发展、诊断和治疗有着重要意义。     

血红蛋白α、血红蛋白β与卵巢癌的相关性

一、血红蛋白α和β（Hb-α和Hb-β）的结构和功能 人们对血浆中血红蛋白的结构和功能研究已经比较深入，但对血清中游离血红蛋白单链的产生和功能研究却较少。人体血浆中正常的血红蛋白是由一对α链和一对非α链组成的四聚体。α链由141个氨基酸残基构成，含较多组氨酸。非α链有β、γ、δ、ζ、ε5种；后2种与α链、γ链分别组成胚胎早期（妊娠3月以内）的血红蛋白、HbGower－1（ζ2ε2）、HbGower－2（α2ε2）、HbPortland（ζ2γ2）。     

激活蛋白-2转录因子在乳腺癌中的作用

 摘要： 激活蛋白-2 （Activating protein, AP-2) 转录因子家族包括AP-2α、β、γ、δ、ε五个成员,在调节细胞增殖、分化和凋亡以及哺乳动物的胚胎发育中起到重要作用;近年研究发现激活蛋白-2与乳腺癌的发生相关,至少三个AP-2家族成员AP-2α、AP-2β、AP-2γ在乳腺癌中表达;抑制癌基因P53和WWox、转录共激活物DEK、癌基因HER2的表达、以及AP-2蛋白质修饰状态是调控AP-2在乳腺癌中作用的重要因素。     

PCR中DNA聚合酶的忠实性

ＰＣＲ 中使用的耐热ＤＮＡ聚合酶会产生不同程度的ＤＮＡ 复制错误,直接影响基因分析的方法设计、准确性及灵敏度。常用聚合酶的ＤＮＡ复制错误率依次为Ｐｆｕ＜ ｄｅｅｐ Ｖｅｎｔ＜ Ｖｅｎｔ＜ Ｔａｑ＜ ＵＩＴｍａ,ＰｆｕＥｘｏ,各聚合酶有不同的突变热点。对聚合酶忠实性起决定性作用的是聚合酶本身的结构特性,３′５′核酸外切酶校正阅读活性有利于聚合酶的忠实性,Ｍｇ２ ＋ｄＮＴＰｓ、ｐＨ 等反应条件都会影响聚合酶的错误率。     

RNA聚合酶Ⅱ的一种刺激因子的抗体对细胞核RNA合成的抑制作用

真核细胞基因特定的活化机制几乎不知道,但一般认为RNA聚合酶Ⅱ催化的转录作用是基因表达的最基本过程,因而这个酶对RNA合成的调节作用是真核细胞基因表达的一个重要研究课题。本实验从艾氏腹水瘤细胞中纯化了一种蛋白质,即蛋白因子S-Ⅱ,是一种碱性蛋白质,分子量40500,具有刺激RNA聚合酶Ⅱ的活性。用S-Ⅱ制备了抗S-Ⅱ血清,按Marluft法分离艾氏腹水瘤细胞核进行研究。已经知道细胞核中有三种RNA聚合酶(Ⅰ～Ⅲ),聚合酶Ⅰ合成核糖体RNA,聚合酶Ⅲ合成小分子量RNA,这两种酶的活性不受α-鹅膏蕈碱(α-amanitin)的影响。RNA聚合酶Ⅱ合成mRNA,它的活性可被α-aminitin抑制,实验观     

T细胞抗原受体ζ链的分子克隆

T细胞抗原受体(TCR)是一种位于T细胞表面、含有多个亚单位的受体复合物,简体之为CD3。其功能有两种,一是识别特异抗原;二是将抗原结合转变为生化信号以启动T细胞的免疫反应。CD3至少由7条链组成,即α,β,γ,δ,ε和2条ζ链。其中γ,δ,ε三条链结构非常相似。     

聚合酶链反应技术在优生优育中的应用前景

聚合酶链反应(ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ,ＰＣＲ)技术的原理类似于ＤＮＡ的体内复制,只是在试管中给ＤＮＡ的体外合成提供一种合适的反应条件模板ＤＮＡ、寡板苷酸引物、ＤＮＡ聚合酶、Ｍｇ2 、合适的缓冲体系和ＤＮＡ变性、复性、及延伸的温度与时间等。1986年ＰＥ-Ｃｅｔｕｓ公司发现并提纯了耐热ＤＮＡ聚合酶,1987年推出了ＰＣＲ自动化热循环仪,1988年,首先获得了基因工程方法生产的耐热ＤＮＡ聚合酶。此后,ＰＣＲ逐渐被应用于各个领域,并迅速发展。至今已衍生出了膜结合ＰＣＲ、原位ＰＣＲ、锚定ＰＣＲ、重组ＰＣ…     

聚合酶链反应技术检测弓形虫核酸的研究

本文通过克隆的ＲＨ株弓形虫核酸ＴＧＲ４片段，设计并合成了一对长度为２０ｂｐ的寡核苷酸引物，扩增靶序列长度为７７８ｂｐ，建立了聚合酶链反应技术检测弓形虫核酸的特异敏感方法。检测７株弓形虫株及临床疑似弓形虫病患者样本，均出现特异扩增带，而其它８种病原体以及正常人及动物的ＤＮＡ均未见特异扩增带。扩增产物用地高辛素标记作探针，与以上出现特异扩增带的ＤＮＡ模板能斑点杂交，而与无扩增带的其余模板ＤＮＡ无斑点杂交。结果显示，该引物具有高度的保守性及特异性。在含１０５个人白细胞中，可检测到２个弓形虫ＤＮＡ或１ｐｇＤＮＡ。并通过人工感染弓形虫鼠血样品的检测表明，所建立的聚合酶链反应体系具有高度的敏感性，能早期检出弓形虫感染样品，在弓形虫病的临床诊断中具有重要的应用价值。     

一氧化氮——新奇的抗寄生虫免疫分子

近年来发现，ＩＦＮ－γ可与ＩＬ－２／ＩＮＦ－α／ＴＮＦ－β／ＬＰＳ协同诱导巨噬细胞（Ｍψ）产生大量的一氧化氮（ＮＯ）。ＮＯ作为活化Ｍψ的一种细胞毒效应分子，在抑制和杀伤寄生虫的抗感染免疫中起重要作用。ＮＯ通过作用于宿主细胞的线粒体呼吸酶、ＤＮＡ合成酶及顺乌头酸酶，与这些酶的活性部位－Ｆｅ－Ｓ基结合，形成铁－亚硝酰基复合物，抑制酶的活性，从而断靶细胞的能量合成及ＤＮＡ复制，引起宿主细胞的死亡。     

错配修复系统的生物学效应和机理

在ＤＮＡ正常代谢中，碱基错配、插入或缺失可导致基因组ＤＮＡ复制错误。已证明在细菌、酵母及高等真核细胞中，都存在错配修复系统。这方面的研究已取得了一些进展，包括Ｅ．ｃｏｌｉ中的ＭｕｔＨＬＳ修复系统，酵母中的错配修复基因及其蛋白以及真核细胞中的错配修复基因及蛋白。这对消除ＤＮＡ生物合成错误，增加染色体复制的可信性，防止自由突变以及肿瘤的发生发展、诊断和治疗有着重要意义。     

T淋巴细胞生存与死亡的决定

Ｔ淋巴细胞抗原受体(ＴＣＲ)通常以异二聚体(α/β或γ/δ)的形式存在,大多数胸腺和外周Ｔ淋巴细胞表达ＴＣＲγ/δ,而只有5%以下的Ｔ淋巴细胞和某些内皮组织中的Ｔ淋巴细胞表达ＴＣＲγ/β[1]。ＴＣＲα/β的γ/δ分子胞内区都很短,只有3～5个氨基酸残基。因此,ＴＣＲ分子本身不能传递抗原刺激信号,而由ＣＤ3分子传递。高度可变的ＴＣＲ分子与恒定的ＣＤ3分子组成Ｔ细胞抗原受体复合物(ＴＣＲ/ＣＤ3),共同完成抗原刺激信号的传递。人的ＣＤ3分子由γ、δ、ε和ζ-ζ同二聚体组成,在所有的ＴＣＲ 的Ｔ细胞中表达,在胎儿ＴＣＲ-的ＮＫ细胞上…     

双歧杆菌DNA对小鼠巨噬细胞中PKC和NF-κB的影响

目的：探讨青春型双歧杆菌的DNA对巨噬细胞中6种PKC和NF-κB的影响。方法：通过激光共聚焦显微镜观察小鼠腹腔巨噬细胞中PKCα、PKCβI、PKCβII、PKCγ、PKCε和PKCζ的荧光强度,以免疫细胞化学染色法检测巨噬细胞中NF-κB^＋细胞的密度。结果：双歧杆菌DNA注射组小鼠腹腔巨噬细胞中,PKCα和PKCβII的平均荧光强度明显高于对照组（P〈0.01）;而PKCβI、PKCγ、PKCε和PKCζ的平均荧光强度在两组间则无统计学意义（P〉0.05）。双歧杆菌DNA注射组巨噬细胞中,NF-κB^＋细胞的密度显著高于对照组（P〈0.01）。结论：青春型双歧杆菌的DNA可通过活化PKCα、PKCβII和NF-κB来激活巨噬细胞。     

PPARγ与动脉粥样硬化

PPARs是核受体超家族中的一类由配体激活的核转录因子，包括α、β／δ、γ1和γ2（PPARγ1的变异体，其氨基末端含有额外的30个氨基酸序列）四种亚型。PPARα是PPARs中最先被发现的．在肝细胞、心肌细胞及肾小管细胞内呈高水平表达：PPARδ的组织表达较为广泛；PPARγ主要表达于大肠细胞、脂肪细胞和脾细胞中。另外在动脉血管内皮细胞和平滑肌细胞中这三种受体也均有表达。此外，在动脉粥样硬化的损伤处．也监测到了PPARα和PPARγ。     

正常人T淋巴细胞cDNA文库一未知DNA片段的克隆与分析（摘要）

正常人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库一未知ＤＮＡ片段的克隆与分析（摘要）蔡铀庆，朱锡华（第三军医大学分子免疫学研究室重庆６３００３８）本研究设计并合成了一对引物。从正常人Ｔ淋巴细胞ｃＤＮＡ文库中，采用聚合酶链式反应，经α－互补颜色筛选和ＰＣＲ方法筛选，获得一...     

染色体上引物原位DNA合成技术及其应用

染色体上引物原位ＤＮＡ合成技术因具有简便，快速，不需克隆基因作探针等优点而被认为是现行原位杂交技术的替代者。本文介绍了该技术的操作程序，其中包括非放射性的引物原位ＤＮＡ标记，合成技术和本实验室刚刚建立的引物原位ＤＮＡ氚标记合成技术，并讨论了该技术的特点和不足之处。     

DNA复制的研究进展

“半保留”的DNA复制是在多种酶及蛋白质因子作用下完成的复杂过程。DNA复制时,可能以特异的四文样寡聚核苷酸顺序为原点,在DNA解开酶及解链蛋白的协同作用下,由ATP为解提供能量,使DNA的双链解开,以间断复制的方式进行新链的合成。RNA引物是在引物酶及多种蛋白质因子参与下合成的。真核细胞的染色质是由组蛋白,NHC蛋白和DNA组成的复杂结     

髓母细胞瘤增殖活性的研究及其与预后的关系

增殖细胞核抗原（ＰＣＮＡ）为ＤＮＡ合成中聚合酶δ的辅助蛋白。ＰＣＮＡ的水平直接与ＤＮＡ的合成和细胞的增殖密切相关，并在其中发挥重要作用〔１〕。因此，ＰＣＮＡ的表达反映了细胞增殖活性〔２〕。ＰＣＮＡ表达的水平与肿瘤的预后和分化程度等方面也有一定的关系〔...     

遗传性HbF持续存在综合征的研究进展

人类血红蛋白的成熟必须经历胚胎→胎儿→成年几步有序的发育转换(developmen-tal switch),珠蛋白基因簇(如五个β样基因5′ε-~Gγ-~Aγ-δ-β3′)就是依此表达顺序而作线性排列的。由胎儿血红蛋白(HbF=α_2~Gγ_2     

大鼠N—乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ融合蛋白的表达和纯化

γ谷氨酰转肽酶作为一个肿瘤标志酶在肝瘤早期诊断上日益受到重视。酶活性升高是由于合成糖蛋白糖链的Ｎ－乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅲ（ＧｎＴⅢ）活性升高所致。且其敏感度和特异性远远高于血清和组织中γ－ＧＴ活性测定。我们在从大鼠肾脏纯化制备出ＧｎＴⅢ纯酶（纯化１５３０００倍）的基础上，根据氨基酸序列分析结果设计寡核苷酸引物，用聚合酶链反应合成ＧｎＴⅢｃＤＮＡ，连接到含麦芽糖结合蛋白质（ＭＢＰ）ｃＤＮＡ的载体Ｍａ