镍化合物诱发恶性转化细胞的端粒酶活性表达

目的：探讨二种镍化合物诱发细胞恶变过程中端粒酶活性的变化。方法：二种镍化合物转化细胞接种BALB／c裸鼠，应用端粒重复序列扩增法(telomeric repeat amplification protocol，TRAP)检测转化细胞和肿瘤细胞的端粒酶活性。结果：结晶型硫化镍和氯化镍诱发的BALB／c-313恶性转化细胞的端粒酶活性均表现为阳性。结论：镍化合物诱发的细胞恶性转化涉及了端粒酶活性改变，提示了端粒酶表达与镍转化作用有关。     

乙酸镍对人支气管上皮细胞系的恶性转化研究

目的：建立乙酸镍(niekel acetate)对永生化人支气管上皮细胞系(16BHE)的恶性转化模型，为下一步关于镍化合物致癌的分子机制的研究提供相应的恶性转化细胞。方法：通过克隆形成率实验确定乙酸镍对16HBEK细胞转化浓度后，对16HBE细胞进行分阶段多次染毒：每隔20d染毒1次，每次染毒24h。染毒12次后，通过软琼脂集落形成试验和鼠体内致瘤试验鉴定细胞恶性转化程度。结果：经乙酸镍多次处理16HBE细胞至75代时，细胞生长速度加快，排列紊乱，失去接触抑制，出现复层生长，并可在软琼脂上生长，且呈剂量反应关系，但在第75代之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内成瘤，病理组织学证实为低分化鳞状细胞癌。结论：乙酸镍具有使16HBE细胞发生恶性转化的能力。     

MALIGNANT TRANSFORMATION IN BALB/c-3T3 CELLS INDUCED BY CRYSTALLINE NICKEL SULFIDE

采用细胞灶法测定结晶型硫化镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３诱发细胞转化的活性,结果表明当硫化镍浓度≥０．２５μｇ／ｃｍ２时转化率增高（Ｐ＞０．０５）,且有剂量反应关系。各剂量组转化灶细胞共６份经软琼脂培养试验均获阳性结果,而对照细胞则为阴性,提示硫化镍诱发的转化细胞具有锚着不依赖性,即恶性特征。     

结晶型硫化镍诱发BALB／c—3T3细胞恶性转化

采用细胞灶法测定结晶型硫化镍对ＢＡＬＢ／ｃ－３Ｔ３诱发细胞转化的活性，结果表明当硫化镍浓度≥０．２５μｇ／ｃｍ＾２时转化率增高，且有剂量反应关系。各剂量组经灶细胞共６份经软琼脂培养试验均获阳性结果，而对照细胞则为阴性，提示硫化镍诱发的转化细胞具有锚着不依赖性，即恶性特征。     

结晶型NiS诱发人支气管上皮细胞系恶性转化

目的:研究结晶型硫化镍(NiS)诱发SV-40 Large T抗原永生化的人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化作用.方法:体外用不同浓度结晶型NiS多次处理16HBE细胞,软琼脂集落形成和裸鼠成瘤试验鉴定转化细胞的恶性度.结果:细胞培养至35代,发现NiS可诱导16HBE恶性转化.转化细胞排列紊乱,重叠生长,在软琼脂中的集落形成率显著高于对照组(P＜0.01),并呈时间剂量依赖关系;转化细胞在裸鼠体内成瘤,组织学证实为低分化鳞状细胞癌.结论:结晶型NiS有较强的诱导人支气管上皮细胞恶性转化能力；该转化模型为镍致癌机制的分子水平研究提供了理想的研究系统。     

结晶型NiS诱发恶性转化细胞中的p16基因和FHIT基因的变化

目的 检测结晶型NiS诱发永生化人支气管上皮细胞系(16HBE)恶性转化过程中脆性组氨酸三联体基因(FHIT)和p16基因的变化,探讨镍化合物致癌的分子机制。方法 采用RT-PCR、DNA序列分析、银染PCR—SSCP方法检测恶性转化细胞、成瘤细胞中FHIT基因和p16基因的变化。结果 与对照组16HBE相比,转化细胞、成瘤细胞p16基因第2外显子、第2-3外显子末见突变,mRNA表达末见异常;FHIT基因第5,6,7,8外显子及第1-4外显子、第5-9外显子末见突变,但发现转化细胞、成瘤细胞FHIT基因的mRNA失表达或出现异常转录本;对其中FHIT基因第5-9外显子的一异常转录本测序分析显示,FHIT第6,7,8外显子缺失,第5,9外显子异常拼接,且中间插入一个36bp的小片段。结论 在结晶型NiS诱发16HBE恶性转化过程中,p16基因在DNA和mRNA水平末见异常改变,提示p16基因在镍致癌过程中可能不发挥作用;FHIT基因在mRNA水平出现缺失或异常转录本,表明FHIT基因在镍致癌过程中可能发挥一定作用;镍诱导的FHIT基因异常,可能是将外源致癌物、染色体脆性部位不稳定性和细胞恶变相联系起来的一个分子事件,FHIT基因可能是镍等外源致癌物作用的主要靶基因之一。     

结晶型硫化镍及反式-BPDE恶性转化16HBE细胞hMSH2基因甲基化的研究

背景与目的： 对结晶型硫化镍(Nickel sulfide,NiS)及反式二氢二醇环氧苯并芘(anti-7,8,-dihydrodiol-9,10-epoxide benzo[a] pyrene,BPDE)恶性转化及成瘤的人支气管上皮细胞(Human bronchial epithelial,16HBE)hMSH2基因启动子甲基化状况及其mRNA表达进行研究,探讨镍及反式-BPDE的表遗传致癌机制。材料与方法： 采用甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)法和RT-PCR法检测结晶型NiS及反式-BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子甲基化状况及其mRNA表达,与非转化的16HBE细胞进行比较;并用去甲基化因子5-Azac(5-Aza-2′-deoxycytidine)处理有异常甲基化的细胞。 结果： 发现结晶型NiS及反式-BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子区存在CpG岛的高甲基化;与非转化16HBE细胞比较,转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因mRNA表达下降;有异常甲基化的细胞经去甲基化处理后甲基化消失。结论： 结晶型NiS及反式-BPDE恶性转化及成瘤的16HBE细胞hMSH2基因启动子区CpG岛的高甲基化使其mRNA表达下降,并可能导致hMSH2基因表达抑制,这可能是结晶型NiS及反式-BPDE诱导16HBE细胞转化和成瘤的一种表遗传致癌机制。甲基化的可逆性对今后研究其表型逆转以及药物治疗提供了重要依据。     

支原体与肿瘤关系研究进展

近年研究表明 ,支原体感染能导致细胞恶性转化 ,与肿瘤形成有关 ;支原体蛋白能促进肿瘤转移 ,并与肿瘤抗原有一定关系。本文从以上方面概述支原体与肿瘤的关系。     

细胞杂交在癌细胞生物学研究中的应用

 细胞融合技术在许多学科领域中都得到了广泛的应用。它也为癌细胞生物学的研究开辟了广阔的前景。除了众所周知的“杂交瘤”能产生单克隆抗体外,利用恶性和正常细胞的杂交细胞进行恶化分析,研究其抗肿瘤作用,探讨恶性调控机理等也取到了一定成就一、通过细胞杂交进行恶性分析 Van der Noordaa研究了SV₄₀转化的大鼠细胞和正常小鼠细胞的杂交细胞,认为正常细胞和恶性细胞融合产生的杂交细胞的性质是中间型的。     

EB病毒与鼻咽癌的关系

在非洲伯基特淋巴瘤和鼻咽癌(N.PC)细胞中都曾查出 EB 病毒(E.B.V)。当将伯基特淋巴瘤细胞进行体外培养,病毒的产生在一定比例可被激活;如在培养中未被激活,可加溴脱氧尿核甙(bromdeoxy-uridine)以诱导。但培养的鼻咽癌上皮细胞内没有观察到。EB 病毒这种培养过程受非恶性浸润细胞的增生干扰。将鼻咽癌组织通过无胸腺小鼠传代,能将非恶性浸     

肿瘤表型抑制和抗癌基因

癌细胞积聚了能使其逃避正常增殖控制的遗传学变化。肿瘤发生似乎就是通过细胞水平的隐性突变引起。在体外将致癌细胞和正常细胞融合,结果提示,转化和恶性表型的出现是由正常细胞遗传信息的丢失或失活引起。在肿瘤细胞和正常细胞的杂交体中,肿瘤亲本的增殖控制发生异常,可部分或完全地通过正常亲本基因恢复。这些假定的基因称为“隐性癌基因”、“肿瘤抑制基因”或“抗癌基因”。它们的功能异常将导致肿瘤发生。另一方面,人体和动物的许多肿瘤中,原癌基因发生遗传变化,癌基因被激活。若将激活的癌基因(如ras基因)引入非恶性培养细胞中,将致     

癌症分子基础与临床：第二讲 癌基因与抑癌基因

癌的生成涉及多种基因的变化，现c发现与癌有关的主要的基因变化既响促进细胞生长的癌基因活化，也有抑制细胞增殖的抑癌基因的失活。分别简介如下。一、癌基因（Oncosene）癌基因是指其产物与细胞的肿瘤性转化有关的的基因，其发现可追溯自动物致瘤病毒的研究。R000于1门1年首先发现鸡肉瘤病毒，以后研究证明它是一种RNj＼逆转录病毒，它含有一种特殊的基因，能引起培养的细胞转化和恶性表型，也能在动物中引起恶性肿瘤，这种基因被称为病前的癌基因（v－one）。以后陆续分离和克隆出许多种动物的v－one，并且发现在脊椎动物的基因组中存…     

细胞转化与癌基因的分离

体外培养条件下的正常细胞,转化细胞与肿瘤细胞在形态结构、生理功能上有许多不同表现。其中最突出的特点是转化细胞和肿瘤细胞都获得了无限增殖的能力(ImmortalitY)但转化细胞往往表现具有不死性,染色体改变等特性,而没有致瘤能力。肿瘤细胞或恶性转化细胞除了具有不死性以外,还可在裸鼠或新生小鼠体内形成肿瘤。细胞又如何从正常状态转变成具有恶性表型的肿瘤细胞,这个问题是多年来人们所探讨的重要课题之一。目前的研究认为,基因突变或基因表达异常是细胞恶性变的主要原因。近几年来,人们     

人永生化食管上皮细胞恶性转化的验证

目的 检查永生化人胚食管上皮细胞系（SHEE）的恶性表型、成瘤性和侵袭力,证实此细胞系传至85代（SHEE85）已完全恶性转化。方法 培养的SHEE85细胞用光镜和电镜观察细胞形态;以流式细胞仪检查细胞周期;行细胞软琼脂培养;以裸小鼠和SCID小鼠接种检测其成瘤性;以细胞培养于羊膜的体外方法和移植至SCID小鼠腹腔的体内方法测定其侵袭力。结果 SHEE85在光镜下细胞生长拥挤,大小不一;电镜下见细胞呈增殖状态。DNA组方图统计细胞增殖指数为47％,高倍体细胞12％。软琼脂培养多细胞大集落形成率4％。接种的4只裸小鼠和4只SCID小鼠皆成瘤。结论 SHEE85已完全恶性转化,并且有较强侵袭力。此细胞系可作为研究食管癌癌变细胞和分子机制可靠的模型。     

Tpr-Met致NIH3T3细胞恶性转化的分子机制初探

[目的]探讨NIH3T3细胞恶性转化的分子机制。[方法]用表达Tpr-Met的重组质粒转染NIH3T3细胞致其恶性转化,用软琼脂集落实验和3H-TdR掺入DNA的方法检查细胞的生长状态及增殖性,用Westernblot检测其c-Met及P-Erk、P-Akt表达水平,用EMSA实验检测NF-кB的结合活性。[结果]转染Tpr-Met的细胞形态有明显改变,能在软琼脂中形成集落,形成的集落大且明显增多,转染pcDNA3.1/c-Met/Tpr-Met的细胞集落数分别是0,71±10和160±12,说明Tpr-Met能诱导NIH3T3细胞恶性转化。用3H-TdR掺入DNA的方法来检测细胞的增殖性,发现转染Tpr-Met的NIH3T3细胞和转染c-Met的NIH3T3细胞相比,转染Tpr-Met的细胞增殖能力明显增强,差异有极显著性(P<0.01)。转化后的NIH3T3细胞DNA与NF-кB的结合能力明显增强,并且P-Erk和P-Akt的表达水平上调。[结论]NF-кB参与了Tpr-Met致NIH3T3细胞恶性转化的信号调控,提示阻断该信号途径有可能抑制肿瘤的生长和转移。     

慢性粒细胞白血病伊马替尼耐药性的机制与对策

慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia,CML）是造血干细胞异常转化而产生的髓系恶性克隆性白血病。CML发病的最大特点是存在特异性的费城染色体。其遗传学异常特征为t（9;22）（q34;q11）易位,产生Bcr-Abl融合基因。Bcr-Abl融合蛋白属非受体酪氨酸激酶（tyrosine kinase,TK）,其二聚体形式Bcr-Abl融合蛋白的TK活性失控,导致自身及细胞内许多底物蛋白的酪氨酸残基磷酸化,激活多条信号传递途径,干扰细胞的基本活动,如诱导细胞恶性转化和增殖,抑制细胞凋亡,削弱细胞的黏附作用等,从而导致CML。因此,Bcr-Abl酪氨酸激酶被认为是最理想的分子靶向。     

Smad4基因沉默小鼠转移性胰腺癌中MMP-9和CD31的表达及意义

背景与目的探讨siRNA干扰Smad4基因对PanIN细胞恶性转化作用,从而阐明PanIN恶性转化的新机制。方法构建和筛选能特异性静默PanIN细胞中Smad4表达     

ANXⅠ在原发性肺癌及BEP2D转化细胞系中的表达

[目的]体内、外的许多感染模型证实,ANXⅠ介导糖皮质激素的抗炎症效应,被认为是糖皮质激素抗炎症效应中的第二信使。然而,ANXⅠ与原发性肺癌之间的相关性尚未知晓。本文对此进行研究。[方法]采用免疫组化方法检测60例原发性肺癌标本中ANXⅠ的表达分布;蛋白组学方法描绘ANXⅠ在永生化、转化与恶性转化中的表达状况。[结果]ANXⅠ的表达分布与原发性肺癌的组织学分型相关（P<0.05）;在永生化细胞中表达丰度低,转化细胞较高,恶性转化细胞中最高。[结论]ANXⅠ可能参与原发性肺鳞癌形成的启动或促进阶段,对人支气管上皮细胞恶性转化具有较为重要的作用。     

化学致癌作用

化学致癌物引起的细胞恶性转化机制迄今尚末阐明。考虑致癌物本身或它在体内代谢产物可能通过以下任一途径,引起细胞恶性转化:①引起体细胞突变;②选择体内已有的恶性细胞;③激活潜伏的致瘤病毒;④基因组外改变(epigenomicchanges)。     

CELL MALIGANNT TRANSFORMATION IN VITRO IN-DUCDE BY TRIS (2-METHYL-1-AZIRIDINYL) PHOSPHINEOXIDE

本试验采用叙利亚金黄地鼠胚胎Ｓｙｒｉａｎｈａｍｓｔｅｒｅｍｂｒｙｏ（ＳＨＥ）细胞的体外恶性转化方法，检测出Ｔｒｉｓ（２－ｍｅｔｈｙｌ－１－ａｚｉｒｉｄｉｎｙｌ）ｐｈｏｓｐｏｈｉｎｅｏｘｉｄｅ（ＭＡＰＯ）可诱导ＳＨＥ细胞形态学恶性转化。转化细胞嗜碱性强、核浆比例增大、排列方向紊乱、可交叉重叠生长。从转化集落分离的细胞生长旺盛、染色体数目异常、可被较低浓度的植物凝集素凝集、在半固体琼脂内非贴壁依赖生长、接种免疫抑制动物可长出肿瘤。上述结果表明：ＭＡＰＯ具有诱导ＳＨＥ细胞恶性转化的作用，预示它对人类有潜在的致癌危险性。