转谷氨酰胺酶3(TGM3)促进肝细胞肝癌(HCC)增殖侵袭的潜在机制及其临床意义

 目的 研究转谷氨酰胺酶3 （transglutaminase 3，TGM3）在肝细胞肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）发生、发展过程中的作用及其预测HCC预后的临床价值。方法 收集复旦大学附属中山医院HCC患者标本和临床资料进行分析，用qRT-PCR和Western blot方法检测28例HCC患者癌和癌旁TGM3表达差异，利用组织芯片染色结果及临床随访资料对92例HCC患者行Kaplan-Meier及Cox回归分析，探究TGM3不同表达水平对患者预后的影响。shRNA下调HCC细胞系Huh7和97H的TGM3表达水平，利用CCK-8法、克隆形成实验、Transwell小室实验、裸鼠皮下成瘤实验分析干扰后细胞增殖、迁移、侵袭及皮下成瘤能力的变化，Western blot检测PI3K/AKT、MAPK/EPK、NF-κB信号通路、上皮间质转化（epithelial-mesenchymal transition，EMT）及凋亡相关蛋白的变化。结果 TGM3在HCC中高表达，Kaplan-Meier生存分析表明TGM3高表达组的中位复发时间和中位生存期均较低表达组显著缩短（15.00个月vs.49.25个月，P<0.05；38.63个月vs.未达到；P<0.05）；多因素Cox回归分析发现TGM3表达水平是HCC患者术后复发和死亡的独立预后因素（HR=2.31，P=0.029；HR=2.78，P=0.009）。体内外实验表明TGM3表达下调可以抑制HCC细胞的增殖、侵袭及皮下成瘤能力。TGM3下调使AKT、ERK、p65蛋白磷酸化水平降低，cleaved caspase 3水平增高，EMT相关指标E-钙黏素表达增加，N-钙黏素、纤维连接蛋白及波形蛋白表达下降。结论 TGM3可能通过影响多条信号通路和EMT过程促进HCC的增殖和侵袭，并可作为HCC患者潜在的预后指标及治疗靶点。     

肝细胞肝癌的上皮间质转化机制研究进展

肝细胞肝癌的病死率在全球恶性肿瘤中居第5位[1-2],全球每年新增肝细胞肝癌患者约为626 000例,约占全球癌症发病率的5%。我国每年约有110 000例死于肝细胞肝癌,肝细胞肝癌的病死率在我国恶性肿瘤中居第二位[3],肝细胞肝癌切除率<     

大鼠宫腔粘连(IUA)模型中的上皮间质转化(EMT)现象

 目的 探索宫腔粘连（intrauterine adhesion，IUA）中的上皮间质转化（epithelial-mensenchymal transition，EMT）现象。方法 24只雌性大鼠通过机械损伤或假手术方式建立大鼠宫腔粘连（IUA-L）和对照模型（IUA-R、Sham-L、Sham-R），术后7天及28天分别取材，通过HE染色和Masson染色计算腺体数量及纤维化率，通过免疫组化CD31计算微血管密度（microvascular density，MVD），通过免疫组化E-cadherin和N-cadherin观察EMT现象，通过转化生长因子β1（transforming growth factor β1，TGF-β1）计算炎症反应以及其与E-cadherin、N-cadherin的相关性。结果 造模7天和28天后，IUA-L组腺体数量低于IUA-R组（P<0.05）；IUA-L组纤维化率高于IUA-R组和Sham-L组（P<0.001）；IUA-L组的MVD值低于IUA-R组和Sham-L组（P<0.001）；E-cadherin的7天/28天平均光密度（mean optical density，MOD）在IUA-L组（0.008 5±0.002 6）/（0.002 8±0.000 5）低于IUA-R组（0.048 9±0.004 8）/（0.033 2±0.003 1）和Sham-L组（0.039 2±0.003 9）/（0.035 4±0.004 7）（P<0.001）；N-cadherin的7天/28天MOD在IUA-L组（0.0546±0.0061）/（0.1000±0.012 3）高于IUA-R组（0.008 0±0.002 5）/（0.012 6±0.004 4）和Sham-L组（0.010 0±0.003 6）/（0.005 2±0.001 2）（P<0.01）；TGF-β1 7天/28天MOD在IUA-L组高于IUA-R组和Sham-L组（P<0.01）。IUA-L组中，TGF-β1与N-cadherin不相关（P=0.694），与E-cadherin相关（r=0.288，P<0.05）。结论 大鼠发生IUA可能导致腺体数量和MVD下降，纤维化率上升，同时大鼠IUA模型中存在EMT现象。提示大鼠IUA的发生可能与EMT现象相关。     

小RNA在器官纤维化上皮-间质转化(EMT)中的作用

 小RNA是一类长度约22~28个核苷酸的非编码小分子RNA,近年来发现其在转录后水平和翻译水平的基因调控过程中发挥重要作用。上皮-间质转化(epithelial mesenchymal transition,EMT)是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程,它在生理和病理过程中发挥了重要作用。近年来发现小RNA在各种器官纤维化的EMT过程中也起了重要作用。本文就小RNA在器官纤维化EMT过程中的作用作一综述,以期为器官纤维化疾病的治疗提供新的思路。     

SPNS2在肝细胞性肝癌中的表达及其与上皮间质转化的关系

目的 探讨鞘氨醇-1-磷酸转运体(SPNS2)在肝细胞肝癌(HCC)中的表达及其与上皮细胞间质转化(EMT)之间的相关性.方法 收集10例HCC新鲜临床标本和70例HCC手术标本石蜡切片(包括癌组织和对应癌旁组织)及其临床相关病理资料,检测SPNS2及EMT的两个主要标志物N-钙黏蛋白(N-cadherin)、E-钙黏...     

高尔基体蛋白73和上皮-间质转化相关分子在肝细胞肝癌组织中的表达及其与预后的关系

目的探讨高尔基体蛋白73(Golgi glycoprotein 73,GP73)和上皮-间质转化(Epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在肝细胞肝癌组织中的表达及其与预后的关系。方法采用免疫组织化学方法检测GP73、E-cadherin和Vimentin蛋白在75例肝细胞肝癌及癌旁组织中的表达,应用Spearman分析其与肝癌患者临床病理特征的关系,Kaplan-Meier生存曲线分析其与预后的关系。结果在肝癌组织中GP73表达高于癌旁组织(χ2=73.60,P<0.05)。肝癌组织中GP73的表达与Vimentin呈正相关(r=0.46,P<0.05),与E-cadherin呈负相关(r=-0.49,P<0.05)。GP73的表达与肝癌患者Edmondson分级、TNM分期及血管侵犯有关(P<0.05)。Kaplan-Meier生存分析表明GP73低表达组中位生存时间13个月,高表达组中位生存时间7个月,差异有统计学意义(P<0.05)。结论 GP73在肝细胞肝癌组织中表达高于癌旁组织,其表达可能与肝癌的发生发展、侵袭转移有关,有助于判断预后。     

西奥骨化醇抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化

目的 研究西奥骨化醇(seocalcitol,EB1089)对TGF-β1诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transitions,EMT)的抑制作用.方法 用不同浓度维生素D类似物EB1089(1、10、100、1 000 nmol/L)作用于肝癌细胞SMMC-7721 6、12、24、48 h,筛选出具有统计学意义的作用浓度和时间.将肝癌细胞SMMC-7721分为4组(EB1089组、TGF-β1组、EB1089+TGF-β1组和空白对照组),分别干预48 h.用相差倒置显微镜观察细胞形态变化;通过实时RT-PCR和Western blot分别检测E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的mRNA和蛋白表达情况;迁移实验和侵袭实验检测EB1089对肝癌细胞SMMC-7721侵袭和迁移能力的影响.结果 TGF-β1作用后肝癌细胞SMMC-7721呈现长梭形,并伸出较多触角,EB1089能明显改善这种形态变化;EB1089可有效升高TGF-β1所致的E-cadherin mRNA和蛋白低表达(P＜0.05),同时降低N-cadherin、Vimentin mRNA和蛋白表达(P＜0.05);EB1089对TGF-β1诱导的细胞侵袭、迁移具有抑制作用(P＜0.05).结论 维生素D类似物EB1089能有效抑制TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化现象和侵袭、迁移能力.     

肝细胞肝癌(HCC)中PDGF-A的表达及其临床意义

 目的    阐明血小板源性生长因子A(platelet-derived growth factor A,PDGF-A)在人肝细胞肝癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达情况及临床意义。方法  在手术切除的50例HCC组织中,应用定量RT-PCR的方法检测PDGF-A mRNA水平,并分析其与临床病理分期之间的关系。采用Western blot检测正常肝细胞株L02和7株肝癌细胞株中PDGF-A蛋白质水平。运用免疫组化方法在43例HCC石蜡组织中检测PDGF-A蛋白质水平。再利用免疫荧光双染色方法检测HCC组织中间质区域炎症细胞中PDGF-A与炎症细胞标志物(CD4、CD8、CD19和CD68)共表达情况。结果    与相应癌旁肝组织相比,HCC癌组织PDGF-A mRNA水平升高,约50%(24/50例)癌组织PDGF-A mRNA水平是癌旁肝组织的2倍及以上,这种差异在BCLC 0期和C期的HCC病例中更为显著。PDGF-A蛋白质见于L02、SMMC-7721、HCCLM3和MHCC97-H细胞株,而HepG2、Hep3B、Huh7和BEL-7402细胞株未检测到该蛋白质。近60%的HCC病例中,肝癌细胞表达PDGF-A,阳性染色有两种分布方式:弥漫于胞质内及在细胞质/细胞膜局部聚集。PDGF-A也大量分布于肿瘤间质区域和紧邻癌组织间质区域的炎症细胞(CD4+、CD8+、CD19+和CD68+)中。结论    HCC癌组织PDGF-A基因表达高于癌旁肝组织,在早期和进展期(BCLC 0和C期)病例更为明显;PDGF-A蛋白表达于HCC癌细胞和间质炎症细胞。     

TGF-β1诱导人肝HL7702细胞发生上皮细胞间质转化的实验研究

目的:探讨体外培养的人肝细胞系在重组人转化生长因子β1(TGF-β1)诱导下是否发生上皮-间质转化(epithelial-mesenchyme transition,EMT)以及相关标志物的表达变化。方法:人类肝细胞HL7702在含20%小牛血清的1640培养液培养2 d,改用无血清培养并TGF-β1分别诱导24 h,48 h,72 h;观察诱导前后细胞的形态学变化,实时荧光定量RT-PCR及蛋白质免疫印迹技术分析细胞中EMT相关基因和蛋白表达情况。结果:显微镜下观察到TGF-β1诱导前,肝细胞是不规则的六边形,诱导后细胞形态拉长变成纺锤形,细胞间隙变大;实时荧光定量RT-PCR和免疫印迹显示上皮化标志物E-钙黏附蛋白在TGF-β1诱导后的细胞中表达显著下降,而间质化标志物N-钙黏附蛋白、波形蛋白和Twist却显著增加。结论:正常人类肝细胞株HL7702经重组人TGF-β1的诱导发生上皮-间质转化,这为深入研究TGF-β1和肝纤维化之间的关系奠定了基础。     

槲皮素对TGF-β诱导的人肺癌A549细胞上皮间质转化的影响

目的探讨槲皮素对TGF—β诱导的人肺癌A549细胞上皮间质转化的影响。方法在体外分别采取槲皮素及阴性对照DMSO干预经或不经TGF—B（10ng／mL）诱导的人肺癌A549细胞12、24、48、72h后,MTT法检测不同浓度槲皮素对A549细胞增殖的影响;RT—PCR和Westemblot实验检测上皮间质转化标志性因子E—cad—herin、N—cadherin、Vimentin的表达变化。结果与阴性对照组相比,不同浓度槲皮素作用的实验组A549细胞的增殖能力降低,同时在mRNA和蛋白水平E—cadherin上调以及N—cadherin、Vimentin的表达下调（P〈0．05）。结论槲皮素能够抑制TGF—β诱导的人肺癌A549细胞的增殖,且呈时间一剂量依赖性,阻止A549细胞发生上皮间质转化,降低A549细胞的迁移侵袭运动能力。     

慢性牙周炎患者基础治疗前后龈沟液中肝细胞生长因子水平的变化

目的 观察HGF在慢性牙周炎患者基础治疗前后的变化.方法 用滤纸条的袋内取样法取15例慢性牙周炎患者30个牙位治疗前后的GCF样本,采用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)测定其中的HGF水平.结果 治疗后慢性牙周炎患者的HGF水平较治疗前显著下降(P＜0.01).结论 HGF水平反映牙周组织的炎症破坏程度,可作为评价疗效的客观指标,在判断牙周组织的活动性破坏中有意义.     

肝细胞生长因子体外抑制SMMC-7721人肝细胞癌细胞生长

目的 :观察肝细胞生长因子 (HGF)对体外培养的人肝细胞癌细胞的生长效应。方法 :将处于指数生长期的SMMC 772 1细胞经过 (HGF处理组 )或不经 (对照组 )HGF处理培养 1～ 4d ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)法检测细胞数 ,并进行细胞周期分析。结果 :HGF对SMMC 772 1细胞增殖具有剂量依赖性抑制作用。在实验浓度内 ,使用最高浓度的HGF(rhHGF为 2 0 μg·L-1、cHGF为 10 0mg·L-1)对细胞增殖抑制作用最强。使用不同浓度 (5、10、2 0 μg·L-1)rhHGF处理 3d的培养细胞均有一半以上停留在G0 /G1期。结论 :HGF对SMMC 772 1人肝细胞癌细胞的体外生长有强烈的抑制作用 ,这与细胞生长阻滞在G0 /G1期有关。     

肝细胞生长因子对高糖及结缔组织生长因子培养的肾小管上皮细胞纤维化的影响

目的：探讨肝细胞生长因子（HGF）对高糖及结缔组织生长因子（CTGF）诱导肾小管上皮细胞（HKC）纤维化的影响.方法：体外培养HKC,分别在高糖及CTGF环境下加入不同浓度人重组肝细胞生长因子（rhHGF）,以RT-PCR检测转化生长因子β1（TGF-β1）、CTGF、以及纤维化指标Ⅳ型胶原（COL4A1）、纤连蛋白（FN）、α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）等的基因表达.结果：高糖及CTGF刺激下,细胞因子和纤维化指标表达均不同程度增加,其中,CTGF作用下,COL4A1表达明显低于高糖组（P＜0.01）.高糖及CTGF环境下加入rhHGF后,纤维化指标显著降低（P＜0.01）,其中高糖＋rhHGF组,CTGF表达减少,TGF-β1表达无明显改变（P＞0.05）.结论：HGF可通过抑制TGF-β下游因子CTGF的表达,发挥抗肾小管上皮细胞纤维化作用,但CTGF并不是其惟一的阻断途径.     

肝细胞生长因子及其受体在子宫内膜癌组织中的表达及其意义

目的 :研究肝细胞生长因子HGF及其受体c-Met在子宫内膜癌组织中的表达及其与子宫内膜癌手术病理分期、病理分级的关系。方法 :采用免疫组织化学S -P法 ,检测 5 2例子宫内膜腺癌、12例正常子宫内膜组织中HGF及其受体c -Met的表达 ,并结合肿瘤的手术病理分期、病理分级 ,对结果进行 χ2 检验、Fisher精确概率法等统计分析 ,从而判断其价值。结果 :子宫内膜癌组织中HGF及c -Met表达较正常子宫内膜组织明显增高 ;子宫内膜癌的期别越晚、分化越差 ,c -Met表达越强。结论 :HGF、c -Met的过度表达与子宫内膜癌的发生发展有关 ;c -Met与子宫内膜癌的手术病理分期、病理分级密切相关。     

肝细胞生长因子及受体促进人大肠癌细胞血管内皮生长因子表达

目的:观察不同浓度肝细胞生长因子对体外培养的大肠癌细胞血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法:体外培养人大肠癌细胞,分别加入不同浓度的人重组肝细胞生长因子和或其受体抑制剂Herbimycin A(HA),用Western blot、RT-PCR、ELISA等方法检测肝细胞生长因子对其受体磷酸化表达及大肠癌细胞VEGF表达的影响.结果:肝细胞生长因子在10～100 ng/ml浓度范围内较对照组相比显著促进大肠癌细胞VEGF mRNA(增加了4～5倍)、蛋白质表达(增加了3～10倍);Western blot检测肝细胞生长因子引起其受体磷酸化,并与其诱导的VEGF表达相关.结论:体外培养条件下,肝细胞生长因子呈剂量依赖性促进大肠癌细胞VEGF表达,其表达与其受体磷酸化水平相关;其受体磷酸化抑制剂可以抑制大肠癌细胞VEGF表达.     

人肝细胞生长因子在CHO细胞的表达和生物学活性

将人肝细胞生长因子（ＨＧＦ）ｃＤＮＡ（２．２ｋｂ）经ＤＮＡ连接酶插入到ｐＥＥ１４质粒的多克隆位点上，构建了ｐＥＥ１４／人ＨＧＦ（１１．４５ｋｂ）真核细胞表达质粒。用Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将ｐＥＥ１４／ＨＧＦ质粒转导至ＣＨＯ细胞表达，表达ｐＥＥ１４／人ＨＧＦ的ＣＨＯ细胞的培养上清液能促进原代培养大鼠细胞的ＤＮＡ合成，ＣＨＯ细胞表达和合成的人ＨＧＦ的水平高于２９３和ＮＳＯ细胞。     

脑缺血大鼠HGF及VEGF的表达及其相关性

目的研究脑缺血大鼠肝细胞生长因子（HGF）及血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达情况及其相关性。方法48只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组及大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血大鼠模型组,分别于2h、6h、12h、24h、3d、7d、14d处死动物,采用免疫组织化学法观察各组脑组织HGF和VEGF的表达。结果HGF在假手术组几乎无表达,缺血2hHGF表达增加,并随时间延长表达逐渐上升,缺血组与对照组比较均有统计学差异（P〈0．01）。VEGF假手术组即有表达,缺血6h表达明显增加,在3-14d时表达增高达高峰,缺血组与对照组比较均有统计学差异（P〈0．01）。结论脑缺血后HGF及VEGF表达增高,两者可能起相互协同促进作用,共同参与缺血灶周围血管新生及脑保护作用。     

OAZ1基因稳定表达SCC15细胞株的构建及其对舌鳞状细胞癌上皮间质化的影响

目的 探索鸟氨酸脱羧酶抗酶(OAZ1)对舌鳞癌细胞株SCC15上皮间质化的影响及相关机制.方法 构建框移位点突变的OAZ1过表达慢病毒表达载体pLVX-Neo-OAZ1-IRES-ZsGreen,包装病毒并感染SCC15细胞,采用有限稀释法挑取荧光强度较高的单克隆细胞株;利用RT-PCR和Western blot检测OAZ1以及上皮间质化相关基因(E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、Zeb1、Snail、Twist1、TGF-β1、Smad1)的mRNA水平和蛋白水平.结果 成功构建了OAZ1基因稳定表达的SCC15细胞株,且OAZ1的过表达可以抑制Vimentin、N-cadherin、TGF-β1的mRNA和蛋白水平表达;此外,OAZ1可以促进Smad1的蛋白水平降低.结论 OAZ1可以抑制舌鳞癌细胞的上皮间质化,其机制可能涉及TGF-β1信号通路和Smad1信号通路的抑制.     

人肝细胞生长因子基因慢病毒载体的构建及其在骨髓间充质干细胞中的表达

目的:构建人肝细胞生长因子(HGF)基因慢病毒载体pNL-HGF-增强绿色荧光蛋白(EGFP)并转染骨髓间充质干细胞(BMSCs),检测HGF基因在BMSCs中的表达.方法:采用基因重组技术,利用限制性内切酶酶切获取HGF基因序列并克隆到慢病毒载体pNL-EGFP上,构建重组慢病毒质粒pNL-HGF-EGFP;将慢病毒...