E2F-1对胃癌细胞侵袭转移影响的观察

目的:探讨E2F-1对人胃癌细胞MGC-803生物学行为的影响。方法:利用脂质体将pCMV-E2F-1-HA质粒和pCMV-HA质粒分别转染人胃癌细胞MGC-803,应用RT-PCR和蛋白质印迹法检测MGC-803细胞中E2F-1基因的表达;应用体外侵袭实验、迁移实验、细胞基质黏附实验和克隆实验分别检测E2F-1对胃癌细胞MGC-803的侵袭力、迁移力、黏附能力和增殖力的影响。结果:转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞检测到E2F-1的表达;转染pCMV-E2F-1-HA质粒的MGC-803细胞的侵袭力、迁移能力和增殖力较转染pCMV-HA质粒的MGC-803细胞和未转染的MGC-803细胞明显降低(P<0.05),细胞黏附能力未见明显变化,P=0.072。结论:E2F-1高表达对人胃癌细胞MGC-803的生物学特性有较大的影响,具有抑制其侵袭转移的作用。     

E2F-1基因反转录病毒载体的构建及其对人胃癌细胞MGC-803增殖的影响

目的:通过构建人同源基因E2F-1反转录病毒表达载体,观察E2F-1过表达对胃癌细胞MGC-803增殖的影响.方法:应用基因重组技术将E2F-1基因克隆到反转录病毒载体pLXSN中,并将经酶切和RT-PCR检测正确的重组载体转染PA317包装细胞,收集病毒上清液感染胃癌细胞MGC-803.应用 RT-PCR和Western印迹法检测MGC-803/pLXSN-E2F-1细胞中E2F-1 mRNA和蛋白的表达情况.应用克隆形成实验和MTT法检测细胞的增殖情况.结果:经酶切和RT-PCR检测结果显示,成功构建E2F-1反转录病毒表达载体.与MGC-803和MGC-803/pLXSN组相比, MGC-803/pLXSN-E2F-1组E2F-1 mRNA和蛋白的表达明显上调(P<0.05).MGC-803/pLXSN-E2F-1组的克隆形成率为48%,明显低于MGC-803组的81%和MGC-803/pLXSN组的77%,差异有统计学意义(P<0.01).MGC-803/pLXSN-E2F-1组的细胞增殖率明显慢于MGC-803组和MGC-803/pLXSN组(P<0.01).结论:成功构建了E2F-1基因过表达的反转录病毒表达载体,并将其成功感染MGC-803细胞,E2F-1过表达可抑制MGC-803细胞的增殖.     

转录因子E2F-1 siRNA对胃癌MGC803细胞体外侵袭及增殖能力的影响

背景与目的:转录因子E2F-1作为细胞周期进程中重要的调控因子,与肿瘤的发生有着密切的关系.本研究通过转染人E2F-1基因的小干扰RNA (small interfering RNA,siRNA)表达质粒,探讨其对胃癌MGC803细胞中E2F-1表达及侵袭和增殖能力的影响.方法:用脂质体LipofectamineTM 2000将具有短发夹结构的人E2F-1 siRNA表达质粒转染至MGC803细胞,以逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印迹(Western blot)技术分别检测E2F-1 mRNA及蛋白的表达;应用体外侵袭实验及克隆实验分别检测E2F-1 siRNA表达质粒对MGC803细胞侵袭力和增殖能力的影响.结果:成功转染E2F-1 siRNA表达质粒48 h后.MGC803细胞中E2F-1基凶mRNA表达的抑制率超过90%;与未转染组及阴性对照组细胞比较,E2F-1蛋白的表达分别降低81.5%和79.6%.转染pSilencer4.1-E2F-1质粒组的穿膜细胞数(18.0±2.6)与阴性对照组(48.0±4.6)和空白对照组(54.0±5.6)比较差异有统计学意义(P<0.05),其细胞集落形成数(46.0±2.0)与阴性对照组(122.3±1.5)和空白对照组(128.7±2.1)比较差异也有统计学意义(P<0.05).结论:E2F-1 siRNA表达质粒可显著下调E2F-1基因在胃癌MGC803细胞中的表达,在一定程度上抑制胃癌细胞的侵袭和增殖.     

抑制膜联蛋白A2表达对人胃癌细胞株裸鼠移植瘤生长的影响及机制

摘 要：［目的］ 通过体内研究探讨膜联蛋白A2（ANXA2）对胃癌生长的影响及相关作用机制。［方法］ 常规培养人胃癌细胞株BGC-823;将细胞接种到裸鼠皮下制备移植瘤模型。制模成功后随机分组,分别以脂质体/ANXA2-siRNA复合物（实验组）、脂质体/Non-siRNA复合物（对照组）或生理盐水（空白组）分别在各组肿瘤局部注射,每4d干预1次。干预4次后处死,绘制肿瘤生长曲线并比较瘤重。应用荧光定量RT-PCR及免疫组化技术检测各组ANXA2、增殖细胞核抗原（PCNA）、p27mRNA和蛋白表达。［结果］ 裸鼠皮下移植瘤造模成功率100.00%（15/15）。实验组肿瘤生长比其他两组缓慢,最终体积实验组为（1680.26±110.51）mm3,对照组为（2194.18±188.48）mm3,空白组（2172.37±212.36）mm3（F=9.341,P=0.004）;肿瘤重量实验组（20.63±0.46）g,对照组为（22.92±0.86）g,空白组为（23.44±0.90）g（F=11.688,P=0.002）。PCR及免疫组化结果显示实验组ANXA2、PCNAmRNA和蛋白表达明显低于其他两组（P<0.05）,而p27mRNA和蛋白表达明显高于其他两组（P<0.01）。［结论］ 抑制ANXA2基因表达后胃癌移植瘤的生长明显受到抑制,这可能与ANXA2基因调控PCNA、p27表达有关。     

E2F-1和Rb基因表达与乳腺乳头状瘤病及导管内癌的相关性

目的　研究细胞周期调控因子E2F 1和Rb与乳腺乳头状瘤病及导管内癌的相关性 ,探讨乳头状瘤病癌变的某些分子机制。方法　采用原位杂交法和免疫组化法对 4 0例乳腺轻度乳头状瘤病、4 0例重度乳头状瘤病和 4 0例导管内癌进行了检测 ,观察E2F 1和Rb基因mRNA和蛋白的表达情况。结果　E2F 1mRNA表达阳性率在乳腺轻度乳头状瘤病、重度乳头状瘤病和导管内癌中分别为17.5 %、4 5 .0 %和 80 .0 % ;蛋白表达阳性率分别为 2 0 .0 %、4 7.5 %和 77.5 %。E2F 1mRNA和蛋白表达三组间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,组间两两比较 ,差异也有显著性 (P <0 .0 1)。Rb基因mRNA表达阳性率在乳腺轻度乳头状瘤病、重度乳头状瘤病和导管内癌中分别为 90 .0 %、5 0 .0 %和 2 0 .0 % ;蛋白表达阳性率分别为 85 .0 %、5 2 .5 %和 2 2 .5 %。Rb基因mRNA和蛋白表达三组间差异有显著性 (P <0 .0 1) ,组间两两比较 ,差异也有显著性 (P <0 .0 1)。随着乳腺乳头状瘤病程度的加重最终进展为癌 ,E2F 1mRNA和蛋白表达阳性率呈上升趋势 ;RbmRNA和蛋白表达阳性率呈下降趋势。E2F 1和RbmRNA表达均与蛋白表达呈正相关 ,但这两种调控因子的表达呈负相关。结论　E2F 1和Rb基因mRNA和蛋白表达可作为癌症早期较有价值的参考指标 ,有助于从乳腺乳头状瘤病     

E2F-1基因真核表达载体的构建及其对胃癌细胞株MKN-45增殖的影响

背景与目的:E2F-1基因在多种肿瘤细胞中过表达,并表现出抑制或促进肿瘤细胞增殖的不同特性.本研究通过构建E2F-1基因真核表达载体.分析E2F-1过表达对胃腺癌细胞株MKN-45的影响.方法:巢式聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增E2F-1基因片段,用pCMV-HA载体构建真核重组质粒,转染MKN-45细胞(转染COS-7细胞用以鉴定所构建的载体).Western blot检测转染情况.并通过克隆形成实验、MTS法检测细胞增殖情况,流式细胞仪分析细胞周期,观察E2F-1过表达对MKN-45细胞的影响.结果:pCMV-E2F1-HA重组质粒成功转染MKN-45细胞.转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞形成的克隆数为4.7±1.8,明显少于转染空载体组的30.2 6.7(P＜0.01).转染pCMV-E2F1-HA的MKN-45细胞增殖随时间而减慢,第5、6、7天的细胞增殖率分别为73.5%、63.5%和56.1%,明显低于转染空载体组(P＜0.01).与转染空载体组相比,表达E2F-1基因的MKN-45细胞在G0/G1期所占比例明显提高(71.4% vs.59.7%,P＜0.05),S期所占比例明显下降(18.7% vs.30.7%,P＜0.05).结论:成功构建E2F-1基因真核表达载体,E2F-1过表达可抑制MKN-45细胞的增殖.     

乳腺癌组织中E2F-1和Skp2的表达及意义

目的:研究乳腺癌组织中E2F-1、Skp2的表达及其与临床病理指标和预后的关系。方法:应用免疫组化SP法,检测56例乳腺癌组织、30例癌旁正常乳腺组织石蜡切片中E2F-1和Skp2的表达,并分析与临床病理学指标之间的关系。结果:56例乳腺癌组织中E2F-1、Skp2的表达率分别为60.71%和51.79%。E2F-1和Skp2的表达与乳腺癌的组织学分级、临床TNM分期和淋巴结转移有关(P<0.05),而与原发肿瘤大小、患者年龄、病理类型无关(P>0.05)。在乳腺浸润性导管癌中E2F-1与SKP2表达水平呈显著正相关(P<0.05)。结论:E2F-1、SKP2高表达与乳腺癌的发生、发展及浸润转移有关,可作为判断乳腺癌生物学行为和预后的重要指标。     

膀胱肿瘤组织中Rb、E2F-1及P21的表达及其意义

目的：检测膀胱肿瘤组织中Rb、E2F-1及P21蛋白的表达,探讨三者在膀胱肿瘤组织发生和发展中的作用及临床价值。方法：采用免疫组织化学方法检测122例膀胱肿瘤组织中Rb、E2F-1及P21蛋白的表达。结果：在膀胱移行细胞乳头状瘤和膀胱移行细胞癌中Rb蛋白表达的阳性率分别为93.3%（28/30）和68.5%（63/92）,膀胱癌组低于乳头状瘤组,组间差异有统计学意义（P=0.007）。E2F-1、P21蛋白在膀胱癌与乳头状瘤组中阳性表达率分别为70.7%（65/92）、46.7%（14/30）和72.8%（67/92）、50.0%（15/30）,膀胱癌组高于乳头状瘤组,组间差异有统计学意义（P=0.017;P=0.021）。E2F-1和P21蛋白在膀胱癌组织中阳性表达率随组织分化程度的降低而升高。Spearman等级相关分析显示膀胱肿瘤组织中Rb与E2F-1、P21蛋白表达呈负相关（r=-1.000,P〈0.05,r=-1.000,P〈0.05）;E2F-1和P21蛋白表达呈正相关（r=1.000,P〈0.05）。结论：Rb、E2F-1及P21蛋白的表达异常可能与膀胱移行细胞癌的发生发展有关,Rb、E2F-1及P21蛋白的联合检测可为诊断膀胱移行细胞癌及临床判断组织恶性程度提供参考。     

膀胱肿瘤组织中Rb、E2F-1及P21的表达及其意义

目的:检测膀胱肿瘤组织中Rb、E2F-1及P21蛋白的表达,探讨三者在膀胱肿瘤组织发生和发展中的作用及临床价值.方法:采用免疫组织化学方法检测122例膀胱肿瘤组织中Rb、E2F-1及P21蛋白的表达.结果:在膀胱移行细胞乳头状瘤和膀胱移行细胞癌中Rb蛋白表达的阳性率分别为93.3%(28/30)和68.5%(63/92),膀胱癌组低于乳头状瘤组,组间差异有统计学意义(P=0.007).E2F-1、P21蛋白在膀胱癌与乳头状瘤组中阳性表达率分别为70.7%(65/92)、46.7%(14/30)和72.8%(67/92)、50.0%(15/30),膀胱癌组高于乳头状瘤组,组间差异有统计学意义(P=0.017;P=0.021).E2F-1和P21蛋白在膀胱癌组织中阳性表达率随组织分化程度的降低而升高.Spearman等级相关分析显示膀胱肿瘤组织中Rb与E2F-1、P21蛋白表达呈负相关(r=-1.000,P<0.05,r=-1.000,P<0.05);E2F-1和P21蛋白表达呈正相关(r=1.000,P<0.05).结论:Rb、E2F-1及P21蛋白的表达异常可能与膀胱移行细胞癌的发生发展有关,Rb、E2F-1及P21蛋白的联合检测可为诊断膀胱移行细胞癌及临床判断组织恶性程度提供参考.     

胃癌中E2F-1的表达及其临床意义

目的探讨胃癌中E2F-1的表达及其临床意义.方法采用免疫组化技术对49例人原发性胃癌癌组织与癌旁正常黏膜中E2F-1的表达进行检测,通过统计学方法分析其表达情况以及与肿瘤分期、病理分型、淋巴结转移、侵袭深度之间的相互关系.结果 E2F-1在癌组织与癌旁正常黏膜中的阳性表达率分别为79.6%(39/49)和26.5%(13/49),差异有显著性(P<0.001).癌组织、癌旁正常黏膜中E2F-1的表达在不同的临床病理特征之间差异无显著性(P>0.05).结论胃癌中E2F-1超表达和反常表达与胃癌的发生有关.     

新型肿瘤导向肽TMTP1融合抗菌肽抑制裸鼠胃癌和前列腺癌移植瘤的生长与转移

目的 探讨新型肿瘤导向肽TMTP1与抗菌肽D(KLAKLAK)2偶联后对胃癌、前列腺癌生长与转移的抑制效应.方法 建立人前列腺癌裸鼠皮下移植瘤模型和胃癌裸鼠原位移植瘤模型,分别腹腔注射50 μmol/L磷酸盐缓冲液(对照组)、50 μmol/L TMTP1(TMTP1组)和50 μmoL/LTMTP1-GG-D(KLAKLAK)2[TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组],验证新型融合多肽TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2对肿瘤组织的亲和能力,测量瘤体大小,行形态学观察,采用原位细胞凋亡法检测肿瘤组织的凋亡并绘制生存曲线.结果 在前列腺癌皮下移植瘤中,对照组、TMTP1组和TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组裸鼠的中位生存时间分别为50、55和70 d(P ＜0.05),肿瘤体积分别为(2.5±0.3)cm3、(1.8±0.2)cm3和(0.3 ±0.1)cm3(P ＜0.01).在胃癌皮下移植瘤中,对照组、TMTP1组和TMTP1-GG-D (KLAKLAK)2组裸鼠的中位生存时间分别为25、30和45 d(P ＜0.05),肿瘤体积分别为(3.8±0.4)cm3、(3.2 ±0.2)cm3和(0.4±0.1)cm3(p＜0.01).在胃癌原位肿瘤中,对照组和TMTP1组裸鼠的胃组织可见巨大的原位肿瘤,而TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组原位肿瘤体积明显缩小.对照组和TMTP1组裸鼠的肝脏、脾脏和腹壁均可见白色转移灶,TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组裸鼠无肉眼可见转移灶.对照组、TMTP1组和TMTP1-GG-D(KLAKLAK)2组细胞的凋亡率分别为(31.9±1.5)％、(37.2±2.3)％和(69.7±2.1)％(P＜0.01).结论 新型肿瘤导向肽TMTP1与抗菌肽融合后可有效抑制肿瘤的生长与转移,有望成为一种新型的抗肿瘤药物.     

沉默SIAH2基因抑制人肝癌细胞HepG2裸鼠移植瘤生长实验研究

目的 本研究前期实验发现,靶向SIAH2的shRNA载体能显著抑制HepG2细胞SIAH2 mRNA和蛋白的表达,并抑制细胞体外增殖.本研究从体内水平验证靶向SIAH2的干扰载体对人肝癌细胞HepG2细胞裸鼠移植瘤生长的抑制作用.方法 转染pGenesil-SIAH2的HepG2细胞作为实验组,命名为HepG2-SIAH2;转染空载体pGenesil-1的HepG2细胞作为阴性对照组,命名为HepG2-neo;未转染任何质粒的HepG2细胞作为空白对照组,通过G418筛选出稳定转染细胞株.将15只裸鼠随机分为3组,接种肿瘤细胞后观察裸鼠成瘤情况.4周后测量肿瘤的体积和瘤体质量,绘制移植瘤生长曲线,并用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法检测移植瘤中SIAH2的表达情况.结果 稳定转染pGenesil-SIAH2的细胞株构建成功,3组裸鼠接种癌细胞后均有肿瘤形成.与空白对照组和阴性对照组相比,实验组肿瘤生长速度明显减慢,实验组平均瘤体积(261.57±41.141)mm3,明显低于阴性对照组(494.35±93.236) mm3(P=0.015)和空白对照组(418.3±28.576 5)mm3(P=0.012),差异有统计学意义;实验组平均瘤体质量为(0.162±0.02)g,明显低于阴性对照组(0.358±0.12)g(P=0.032)和空白对照组(0.322±0.24)g(P=0.028).实验组瘤体内SIAH2 mRNA相对表达量为0.83±0.35,明显低于阴性对照组2.35±0.96(P=0.003)和空白对照组2.57±0.41(P=0.006),差异有统计学意义.实验组瘤体内SIAH2蛋白表达量为0.72±0.02,明显低于阴性对照组2.61±0.67(P=0.004)和空白对照组2.49±0.91(P=0.007),差异有统计学意义.结论 靶向SIAH2的shRNA干扰载体能有效抑制人肝癌裸鼠移植瘤的生长,SIAH2有可能成为肝癌基因治疗新的分子靶.     

重组人生长激素联合氟尿嘧啶对人胃癌裸小鼠皮下移植瘤作用的实验研究

目的:探讨不同剂量重组人生长激素(rhGH)对人胃癌裸小鼠皮下移植瘤的作用,及联合化疗(5-FU)的治疗效果。方法:建立人胃癌MKN-45裸小鼠皮下移植瘤模型,将荷瘤裸小鼠随机分为对照组,常规剂量GH组,小剂量GH组,5-FU组,常规剂量GH/5-FU组,小剂量GH/5-FU组,治疗10天,观察治疗效果。结果:治疗结束时两GH组的裸小鼠体质量明显大于对照组(P<0·05),两GH/5-FU组的裸小鼠体质量明显大于5-FU组(P<0·05),两GH/5-FU组与对照组比较没有统计学差异(P>0·05),两GH/5-FU组之间、两GH组之间比较无统计学差异(P>0·05)。与对照组相比,两GH组皮下移植瘤的体积和质量没有显著增大(P>0·05),5-FU组和两GH/5-FU组明显减少(P<0·05);5-FU组与两GH/5-FU组比较无显著性差异(P>0·05)。与对照组相比,两GH组的G0/G1期、S期、G2/M期肿瘤细胞百分比及增殖指数PI无显著性差异(P>0·05);与5-FU组相比,两GH/5-FU组的G0/G1期、S期、G2/M期肿瘤细胞百分比及增殖指数PI无显著性差异(P>0·05)。不同的GH剂量对实验结果无明显影响。化疗药物5-FU引起明显的白细胞减少(P<0·05),以及腹泻等胃肠道反应,对脏器及脏器功能无明显影响。结论:rhGH应用于荷瘤动物,显著增加机体质量,未明显促进肿瘤生长,对机体也无不良影响。联合化疗时,rhGH不影响化疗的进行,并可改善化疗时的机体状况。     

IP6对结肠癌裸鼠皮下移植瘤细胞生长抑制及其机制的探讨

目的:研究肌醇六磷酸(IP6)对HT-29细胞裸鼠皮下移植瘤生长的抑制作用.方法:建立HT-29细胞裸鼠移植瘤模型,随机分为对照组(生理盐水组)、低剂量IP6组和高剂量IP6组,用药20 d后处死小鼠.比较各组抑瘤作用和裸鼠一般状态的变化,透射电镜观察移植瘤细胞形体变化,TUNEL法检测移植瘤细胞凋亡情况,并运用RT-PCR、蛋白质印迹法检测移植瘤Bcl-2及Bax基因和蛋白的表达.结果:IP6组出现典型凋亡现象,PCR及蛋白检测也显示IP6可显著上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05);在移植瘤质量和体积方面,用药组与对照组差异无统计意义,P＞0.05,但用药组移植瘤呈现下降趋势.结论:IP6可能通过促进细胞凋亡而起到抑制和延缓肿瘤生长的作用,其机制可能与上调Bax蛋白表达和下调Bcl-2蛋白表达有关.     

E2F-1和survivin蛋白在非小细胞肺癌中的表达及其与HPV感染的相关性研究

背景与目的:人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)与人类多种恶性肿瘤密切相关,而肺癌中亦有HPV的检出引起了众多学者的关注.本实验旨在研究非小细胞肺癌(non-small cell 1ung cancer,NSCLC)中高危HPV感染情况及其与E2F-1和survivin蛋白表达的关系,初步探讨HPV感染可能导致.NSCLC发生、发展的分子机制.方法:特异型PCR检测47例NSCLC和13例肺良性病变组织中是否有HPV16、18DNA存在:免疫组化SP法检测E2F-1和survivin蛋白在肺病变组织中的表达.结果:NSCLC组HPV16、18DNA检出率为42.55%(20/47),明显高于肺良性病变组的7.69%(1/13,P＜0.05).NSCLC组中HPV的感染率与患者的吸烟史、组织学类型及分化程度有关(P＜0.05),而与患者的年龄、性别及淋巴结转移无关(P＞0.05).NSCLC组中E2F-1蛋白表达阳性率为59.57%(28/47),其中64.29%(18/28)呈高表达,显著高于肺良性病变组23.08%(3/13,P＜0.025).NSCLC中survivin蛋白表达阳性率为61.70%(29/47),而肺良性病变组无表达.NSCLC组中E2F-1、survivin蛋白表达呈正相关(r=0.3151,P＜0.05),且两者在HPV阳性组的阳性表达率分别为85.00%(17/20)和80.00%(16/20),均显著高于HPV阴性组的40.74%(11/27)和48.15%(13/27),差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:HPV16、18感染在NSCLC的发生中可能有病因学意义,其致癌机制可能与E2F-1和survivin蛋白表达上调有关.