吉西他滨对鼻咽癌HNE2细胞株的放射增敏作用及其机制研究

目的研究低浓度吉西他滨对人鼻咽癌HNE2细胞系的放射增敏作用及其机制,并探讨用药后最佳放射时间。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定吉西他滨24h IC10值。以该浓度吉西他滨处理HNE2细胞4、8、12、24h,弃药后立即给予6MV X线单次照射0、2、4、6、8Gy,用克隆形成实验计算各组的放射增敏比,流式细胞仪法分别检测、比较各组的细胞凋亡率及细胞周期变化。Western blot法测定各组细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的表达水平。结果吉西他滨的24h IC10值为0.21μg/mL,吉西他滨处理4、8、12、24h后的放射增敏比分别为1.09、1.18、1.23和1.37。流式细胞仪检测显示吉西他滨联合射线主要诱导S期阻滞,且S期细胞比例及细胞凋亡率随吉西他滨作用时间延长而增加。4组中bcl-2的表达随作用时间延长逐步下降,而bax的表达则逐步上升。结论低浓度吉西他滨对HNE2细胞有放射增敏作用,其增敏比随作用时间的延长而延长,以作用24h后增敏作用最强。增敏机制可能与诱导S期阻滞及促进凋亡有关。     

吉西他滨对人子宫颈癌HeLa细胞系的放射增敏作用

目的 探讨化疗药物吉西他滨对人子宫颈癌(HeLa)细胞系的放射增敏作用.方法 MTT法确定细胞抑制率≤10%的吉西他滨(dFdC)浓度(IC10),用该浓度吉西他滨分别孵育细胞4、8、12及24h,于弃药前、弃药后立刻及弃药后12h,分别行2、4及6 Gy 60Co γ线照射.计数细胞存活分数,计算增敏比.结果 吉西他滨IC10浓度为0.01μmol/L,该浓度吉西他滨分别作用于细胞4、8、12及24 h,弃药后立刻照射,增敏比分别为1.19、1.35、1.72、1.93.作用24h,弃药前、弃药后立刻及弃药后12 h照射,增敏分别为1.91、1.93、1.52.结论 吉西他滨对HeLa细胞具有放射增敏作用.增敏作用随药物作用时间的延长而增加,持续作用短时间(4 h)就可产生放射增敏作用,作用24 h效果显著.弃药前照射及弃药后立刻照射,增敏效果好于弃药后12 h照射.     

吉西他滨对非小细胞肺癌细胞株A-549放疗增敏的机制

目的:研究吉西他滨(GEM)对体外培养非小细胞肺癌细胞的细胞周期改变和凋亡影响,及其放疗增敏的作用及机制。方法:体外培养非小细胞肺癌细胞株A-549,分单纯培养细胞组、单纯照射组、单纯吉西他滨组及吉西他滨联合放疗组(联合放疗组);单纯照射组采用源皮距(SSD)为100 cm,剂量2 Gy,6 MV光子线照射;吉西他滨组采用MTT法选择对细胞生长抑制率≤10%的药物浓度(IC10)即为GEM的最佳实验浓度;联合放疗组采用最佳实验浓度的GEM加上述同等条件的照射剂量和方法;流式细胞仪分析上述各组细胞的细胞周期和凋亡率。结果:经MTT法检测显示,GEM在0.020-0.030μmol/L之间时为最佳实验浓度。流式细胞仪分析各处理组细胞的细胞周期和凋亡率结果表明,各处理组之间细胞在S期时的比例有显著差异(P<0.05),G2/M、S期比值变化最为明显;细胞凋亡率亦有统计学差异(P<0.05);单纯采用GEM浓度为0.02,0.03μmol/L时没有明显差别(P>0.05)。结论:吉西他滨可以具有放射增敏和协同作用,其机制可能与吉西他滨能改变A-549细胞生长周期并诱导其凋亡有关。     

调强适形放疗联合吉西他滨化疗治疗局部晚期胰腺癌

目的:探讨调强适形放疗联合吉西他滨治疗局部晚期胰腺癌的疗效和毒性反应。方法:2009年1月至2010年5月共收治局部晚期胰腺癌患者21例,采用调强适形放疗(IMRT),总量50.4～56 Gy;同步化疗方案为:吉西他滨1 000 mg/m2,第1、8、15天静脉滴注,28 d为1周期,与放疗同时开始,同步放化疗结束后1个月巩固化疗2～4周期。结果:所有患者均完成同步放化治疗。有效率为57.14%,局部控制率为90.48%。疼痛缓解率85.71%(18/21),生活质量明显改善,无治疗相关性死亡;1、2年生存率分别为66.67%和23.85%,中位生存期为18个月。结论:调强适形放疗同步吉西他滨治疗局部晚期胰腺癌疗效显著,能提高局部控制率,延长生存期,缓解疼痛,提高生活质量,且毒副反应能够耐受。     

吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌临床观察

目的:观察吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌的疗效及不良反应.方法:41例晚期胰腺癌患者,采用吉西他滨1000mg/m2,静滴30分钟,d1,d8;卡培他滨1250mg/ m2,2次/日,口服d1～14.21天为1疗程,治疗2疗程后评价疗效及不良反应.结果:41例均可评价疗效,共完成周期数为126个,完全缓解(CR)0例,部分缓解(PR)9例,稳定(SD)13例,进展(PD)19例,总有效率(CR+PR)21.95%,疾病控制率(CR+PR+SD)53.66%,中位疾病进展时间4.1个月,中位生存期为7.3个月(1.5～19.7个月)常见不良反应为中性粒细胞减少、迟发性腹泻、恶心、呕吐和手足综合征等,多为Ⅰ～Ⅱ度.结论:吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌疗效肯定,不良反应轻,耐受性好,是晚期胰腺癌的有效治疗方案.     

RNA干扰AKT2影响人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤对吉西他滨的敏感性

目的 探讨RNA干扰AKT2对人胰腺癌细胞株裸鼠移植瘤对吉西他滨敏感性的影响.方法 构建荷胰腺癌裸鼠模型,采用腹腔给药和瘤内注射方式,以吉西他滨配合AKT2 siRNA表达载体对荷瘤鼠进行联合干预治疗,对比观测裸鼠肿瘤生长情况,RT-PCR检测肿瘤细胞AKT2 mRNA的表达,免疫组织化学法检测肿瘤AKT2蛋白表达,DNA末端原位标记法(TUNEL法)检测细胞凋亡指数. 结果化疗+AKT2-siRNA组移植瘤组织中AKT2 mRNA及AKT2蛋白表达明显低于空白对照组、化疗组、化疗+空白质粒组.化疗+AKT2-siRNA组瘤重、肿瘤体积显著低于其他各组.化疗+AKT2-siRNA组抑瘤率、凋亡指数显著高于其他各组.结论 RNA干扰AKT2明显提高人胰腺癌细胞株对吉西他滨化疗的敏感性.     

吉西他滨联合奥沙利铂治疗晚期胰腺癌

目的 评价吉西他滨联合奥沙利铂治疗晚期胰腺癌的疗效.方法 用吉西他滨1 000 mg/m^2＋5%GS 250 mL,ivgtt 30 min d1,d8;奥沙利铂130 mg/m^2＋5%GS 500 mL,ivgtt 2 h d1.每3～4周重复用药.治疗晚期胰腺癌21例.结果 可评价16例,完全缓解0例、部分缓解2例、稳定8例、进展6例,有效率为12.5%.毒副反应能够耐受.结论 吉西他滨联合奥沙利铂治疗晚期胰腺癌具有一定疗效,且毒副反应低.     

吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌26例效果观察

目的:分析吉西他滨联合卡培他滨一线治疗晚期胰腺癌的效果。方法:晚期胰腺癌接受吉西他滨联合卡培他滨方案:吉西他滨1 000 mg/m2,静脉滴注30 min,第1、8天;卡培他滨1 000mg/m2,2次/天,口服,第1～14天。每3周为1个周期,观察其总生存期、无进展生存期、客观缓解率、临床获益率、糖类抗原19-9、缓解率和毒副反应等。结果:26例中部分缓解5例,疾病稳定7例,肿瘤进展14例,总客观缓解率为19.2%,临床获益率46.2%,糖类抗原19-9缓解率61.5%,中位生存期7.8个月,中位无进展生存期为6.2个月,1年期生存率为26.3%。结论:吉西他滨联合卡培他滨治疗晚期胰腺癌的化疗方案临床获益较高,毒性可耐受,值得临床研究和应用。     

吉西他滨静脉滴注治疗晚期胰腺癌疗效分析

目的　评价吉西他滨 (健择 )单药治疗胰腺癌的疗效。方法　对 16例晚期胰腺癌患者给予吉西他滨10 0 0mg/m2 ,连续 7周 ,休息 1周 ,为 1疗程。结果　 16例患者中PR 2例 ,SD 9例 ,PD 5例。疾病相关症状有较好改善 ,包括疼痛减轻 ,KPS积分提高。结论　吉西他滨静脉滴注治疗晚期胰腺癌能较好改善疾病相关症状。     

吉西他滨对胰腺癌血管内皮生长因子的影响

目的 观察胰腺癌患者采用吉西他滨(GEM)化疗后血清血管内皮生长因子(VEGF)表达水平的变化,探讨其临床意义.方法 对22例胰腺癌患者采用GEM化疗,并采用ELISA法检测患者治疗前、后VEGF的表达水平,与健康体检者进行对照.化疗6个疗程后分析疗效与VEGF表达水平的关系.结果 胰腺癌患者VEGF表达水平高于健康体检组(P＜0.01);化疗3个疗程后VEGF表达水平明显下降(P＜0.01);化疗6个疗程后,客观有效者的VEGF表达水平明显低于病程进展者(P＜0.05).结论 检测胰腺癌患者血清VEGF水平有助于对胰腺癌的诊断和GEM化疗效果的评价.     

DNA损伤和修复在肝癌中的研究进展

人体细胞中DNA损伤后会引起细胞一系列反应,主要包括损伤信号的传导、损伤与修复、诱导细胞死亡等.肝癌的发生正是由于这些诱因同时作用于损伤修复系统的某个环节,使DNA损伤不能修复或不能正确修复,从而使肝细胞发生恶性转化,最后导致肝癌的发生.因此,损伤DNA的累积则成为肝癌发生的重要分子机制,对其深入研究将会为肝癌的治疗奠定基础.该文通过查阅相关文献,综述近年来DNA损伤和修复在肝癌中的研究进展.     

骨肉瘤DNA损伤修复相关基因表达与预后的关系

目的研究DNA损伤修复基因MPG、APE1、XRCC1和MGMT在人体骨肉瘤中的表达特点及其与患者预后的关系,为判估骨肉瘤对化疗的反应性及其预后提供有价值的指标.方法应用免疫组化方法检测60例骨肉瘤组织和3株骨肉瘤细胞中MPG、APE1、XRCC1和MGMT的表达,按染色强度将其分为低表达组和高表达组.统计分析它们与临床病理及患者预后的关系.结果3株骨肉瘤细胞中APE1和XRCC1呈强阳性,MPG和MGMT呈弱阳性.60例骨肉瘤中MPG、APE1、XRCC1和MGMT高表达分别为40例(65%)、43例(72%)、23例(38%)和32例(53%).APE1表达和患者年龄,Price's分级和WHO分型有显著性差异(P＜0.05),MPG表达和WHO分型有显著性差异(P＜0.05).Spearman秩相关检验显示上述4项指标之间密切相关.单因素相关分析显示APE1和MPG表达与患者预后有显著性差异(P＜0.05),COX比例风险模型显示MPG表达与患者预后有关(P＜0.01).结论DNA损伤修复基因MPG、APE1、XRCC1和MGMT的共同表达是骨肉瘤的特点,APE1和MPG表达对于判估骨肉瘤患者的预后可能更有意义.     

健择诱导人胰腺癌细胞凋亡的实验研究

目的 探讨健择(盐酸吉西他滨)诱导胰腺癌细胞凋亡可能的途径.方法 采用RT-PCR、Western-blot及激光密度扫描技术、Annexin Ⅴ-FITC/ PI双染法对健择诱导胰腺癌Panc-1细胞发生凋亡过程中caspase-3、bax和survivin基因表达及细胞凋亡率进行了检测分析.结果 健择可以诱导胰腺癌细胞发生凋亡,5 mg/L组24 h凋亡率达(18.83±0.78)%,凋亡率随健择浓度升高而升高,25 mg/L组在用药48 h后凋亡率高达(42.47±2.77)%.并且caspase-3、bax基因表达量随细胞凋亡的发生而升高, 与健择的浓度成正比关系;但survivin基因表达量随细胞凋亡的发生而降低,与健择的浓度成反比关系.结论 凋亡调节基因bax、caspase-3的上调及survivin的下调可能与健择诱导胰腺癌细胞凋亡有关系.     

Association between polymorphisms of DNA repair gene XRCC1 and DNA damage in asbestos-exposed workers

INTRODUCTION Asbestos is an important environmental carcinogen and remains the primary occupational concern in many countries. The most important pulmonary disease associated with asbestos fiber exposure is asbestosis (diffuse interstitial pulmonary fibro…     

吉西他滨联合适形放射治疗局部晚期胰腺癌

目的 评价吉西他滨联合适形放射治疗局部晚期胰腺癌的疗效.方法 前瞻性分析2003年4月至2005年6月收治的54例局部晚期胰腺癌患者的临床资料,其中25例采用吉西他滨联合适形放疗(试验组),29例采用吉西他滨单药化疗(对照组).结果 试验组和对照组的有效率分别为69.6%和39.3%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);远处转移率分别为43.5%和53.6%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);6个月生存率分别为78.3%和53.6%,两组比较差异无统计学意义(P＞0.05);12个月生存率分别为52.2%和25.0%,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05);临床获益率分别为82.6%和60.7%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05);严重不良反应发生率分别为43.4%和32.1%,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 吉西他滨联合适形放射治疗局部晚期胰腺癌,在近期有效率、12个月生存率方面优于单纯吉西他滨化疗,但在临床获益率、远处转移率、6个月生存率及严重不良事件方面,二者差异无统计学意义. Abstract： Objective To evaluate the effect of gemcitabine plus three dimensional conformal radiotherapy on patients with locally acvanced pancreatic cancer. Methods Fifty-four patients with locally advanced pancreatic cancer from April 2003 to June 2005 were enrolled, one of 25 patients were treated with gemcitabine plus three dimensional conformal radiotherapy (experiment group), the other 29 patients were treated only with gemcitabine (control group). Results The general remission rate was 69.6% in experiment group and 39.3% in control group, showing a significant statistical difference between two groups(P＜0.05)). There were no statistical difference between the two groups in metastases rate (43.5% vs 53.6%,P＞0.05), survival rate of six months (78.3%vs 53.6%, P＞0.05),clinical benefit response(82.6%vs 60.7%, P<0.05)and grave adverse events(43.4% vs 32.1%, P<0.05), but there were significant difference in survival rate of twelve months between two groups (53.6% vs 25.0%, P＜0.05). Conclusions Gemcitabine plus three dimensional conformal radiotherapy may be better than single chemotherapy of gemcitabine in general remission rate and survival rate of twelve months in patients with locally advanced pancreatic cancer, but there were no difference between two groups in clinical benefit response, metastases rate, survival rate of six months and grave adverse events.     

外源核苷酸对受损小鼠胸腺细胞DNA修复的影响

目的:探讨外源核苷酸对受损小鼠胸腺细胞DNA修复的影响.方法:采用10 μmol/L的N-甲基-N-硝基-N亚硝基胍(MNNG)诱导小鼠胸腺细胞DNA损伤后,在终浓度分别为0,0.1,1和10 mmol/L核苷酸的RPMI-1640基础培养基或完全培养基中培养,在培养的第2,5 h采用单细胞凝胶电泳技术分析细胞DNA损伤和修复情况.结果:培养2 h时,基础培养基中各组间的拖尾细胞百分率差异无统计学意义(P＞0.05);完全培养基中核苷酸能降低拖尾率(P＜0.01).5 h时,随着核苷酸添加浓度的升高,拖尾率均降低(P＜0.01).在相同的培养基中,各组的彗星尾长在2 h差异无统计学意义(P＞0.05),5 h后,在基础培养基中添加1,10 mmol/L的核苷酸使得彗星尾长降低(P＜0.05);在完全培养基中添加1,10 mmol/L的核苷酸也使得彗星尾长降低(P＜0.01).在培养的2～5 h内,补充核苷酸均能提高基础培养基(P＜0.05)和完全培养基(P＜0.01)中DNA修复细胞的百分率.结论:外源核苷酸能明显促进受损小鼠胸腺细胞DNA的修复,且核苷酸的作用与其添加水平有关.     

氯乙烯致DNA损伤与DNA修复基因甲基化

目的探讨氯乙烯职业接触的早期效应DNA损伤与O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶基因MG-MT、错配修复基因hMLH1启动子甲基化的关系。方法氯乙烯接触工人按淋巴细胞双核微核数分为DNA损伤组(72例)和非损伤组(43例),采用甲基化特异的PCR法检测修复基因的甲基化。结果hMLH1基因在DNA损伤组和非损伤组均未检测到甲基化,MGMT基因在DNA非损伤组未检测到甲基化,在DNA损伤组MGMT发生甲基化频率为6.9%(5/72)。结论在氯乙烯致DNA损伤阶段,可检出MGMT基因甲基化异常。     

DNA氧化损伤修复基因hOGG1高表达细胞株的建立

目的联合pcDNA3.1(+)/Myc-HisA-hOGG1和pGL3promoter荧光质粒稳定转染人肺腺癌A549细胞获得hOGG1基因高表达细胞株,并初步探讨转染细胞生物学特性的变化。方法成功构建pcDNA3.1(+)/Myc-His A载体后,大量抽提阳性重组子并在Fu GENE6的介导下联合pGL3promoter荧光质粒转染A549细胞(转染组),同时设空白对照组(A549)和阴性对照组[PGL3+pcDNA3.1(+)/Myc-HisA转染的A549细胞]。生物荧光检测转染细胞hOGG1mRNA表达的改变,蛋白质免疫印迹法检测转染细胞hOGG1蛋白表达水平。将3组细胞于不同高氧条件下培养,相差显微镜观察形态学变化,彗星试验比较各组细胞对抗损伤和修复能力的情况,同时测定DNA氧化损伤标志物8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)的变化。结果转染细胞荧光素酶稳定表达,蛋白印迹检测转染组hOGG1蛋白明显高于两对照组细胞,提示hOGG1基因高表达细胞株建立成功。相同高氧条件下,转染组形态学变化明显减轻,彗星细胞率和olive tail moment明显低于空白组和阴性对照组,修复完成率高,修复时间缩短(P<0...     

单细胞凝胶电泳评价顺铂致人卵巢癌细胞DNA损伤修复的实验研究

目的：采用单细胞凝胶电泳(彗星实验)研究顺铂致人类卵巢癌H08910细胞DNA的损伤及修复，为彗星实验应用于临床检测肿瘤细胞对化疗药物的敏感性奠定基础。方法细胞采用0．02 EC50、0．03 ECS0及O．05 EC50三种浓度顺铂处理1h，更换培养基后，继续培养3h、24h和48h进行彗星电泳实验。结果：顺铂处理后造成H08910细胞产生明显的DNA损伤，呈现不同彗尾长度的彗星。顺铂浓度增加，平均彗尾长度增加；一定顺铂浓度下，彗尾长度随培养时间的延长逐渐减小，较低浓度(0．02 EC50)处理的细胞在培养48h后彗尾长度可恢复至接近对照组的水平；在顺铂处理0．02 EC50浓度下随培养时间延长，彗星出现比率逐渐下降，而0．05 EC50浓度处理的细胞彗星比率则呈上升趋势。结论彗星实验检测DNA损伤及修复的敏感度较高，H08910细胞可修复一定浓度的顺铂引起的DNA损伤。     

细梗香草皂苷联合吉西他滨对胰腺癌细胞BxPC-3抑制作用的研究

目的观察细梗香草皂苷（LC）和吉西他滨(GEM）单药及联合用药对人胰腺癌BxPC-3细胞增殖和凋亡的影响,探究LC抗胰腺癌的作用机制。方法培养人胰腺癌BxPC-3细胞时加入不同浓度梯度的LC与GEM,采用MTS法检测细胞增殖抑制率,计算两种药物的半抑制浓度（IC50）和联合作用指数（CI）。将细胞分为4组,A组（对照空白）、B组（GEM1滋mol/L）、C组（LC15滋g/ml）和D组（GEM1滋mol/L+LC15滋g/ml联合用药）,培养后采用AnnexinⅤ-FITC/PI法观察LC与GEM对BxPC-3细胞的诱导凋亡作用;Westernblot法检测抗多聚（ADP-核糖）聚合酶（PARP）、抗半胱氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）的表达。结果8~64滋g/ml的LC及1.25~20滋mol/L的GEM均对BxPC-3细胞的增殖有抑制作用,且呈浓度依赖性,其IC50分别为16.55滋g/ml和1.27滋mol/L。15滋g/ml的LC与各个浓度的的GEM协同作用最强,CI值为0.53~0.65。B、C、D组的早、晚期凋亡率与A组比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）,且D组与B、C组的早期凋亡率比较差异均有统计学意义（均P＜0.01）。C、D组与A组比较,PARP蛋白表达水平明显降低（均P＜0.05）;B、C、D组与A组比较,Caspase-3蛋白表达水平增加（均P＜0.05）。结论LC有抑制胰腺癌细胞生长的作用,与GEM联合作用效果更好;其作用机制可能是通过激活Caspase-3表达,分解PARP,从而诱导细胞凋亡。