曲古抑菌素A增加人肝癌Bel7402细胞对TRAIL敏感度的实验

目的 探讨曲古抑菌素A(Trichostatin A,TSA)联合肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)相关凋亡诱导配体(TNF related apoptosis inducing ligand,TRAIL)对肝癌细胞Bel7402增殖凋亡的影响及其机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)染色法分别检测TSA、TRAIL及低浓度TSA联合TRAIL处理Bel7402细胞的生长抑制率;4,6-二脒基-2-苯基吲哚二盐酸盐(DAPI)染色法对药物联合处理后的细胞进行凋亡形态学观察;免疫细胞化学和Western blot技术观察药物联合作用后p65蛋白在细胞中表达和定位的变化.结果 不同浓度TSA作用6、12和24 h对人肝癌Bel7402细胞的增殖没有明显抑制作用,而作用48 h后的细胞增殖抑制率明显升高,和对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);不同浓度TRAIL处理Bel7402细胞存活率没有明显改变;低浓度TSA(20 ng/ml)预处理能够增加Bel7402细胞对TRAIL治疗的敏感度,TSA预处理联合TRAIL(100ng/ml)作用细胞24 h后,细胞生存率为(57.1±5.4)％,和单独药物处理组及对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05);DAPI染色显示TSA和TRAIL联合作用后Bel7402细胞有核凋亡出现.荧光显微镜观察证明单独应用TSA(200 ng/ml)或TRAIL(100 ng/ml)处理的细胞p65蛋白有部分核内移位,而两种药物联合应用导致p65蛋白表达量降低,并且发生明显的核内转移和集聚.结论 低浓度TSA能够增加肝癌Bel7402细胞对TRAIL的敏感度;其机制可能是两种药物联合应用降低p65的表达和活性,从而诱导Bel7402细胞凋亡.     

TRAIL与阿霉素联用协同杀伤人结肠癌细胞SW480

背景与目的:肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumornecrosisfactor-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)可选择性杀伤肿瘤细胞,而不影响正常细胞生长。当一部分肿瘤细胞对TRAIL不敏感时,特定的其它药物可增强其杀伤作用。本文旨在探讨结肠癌细胞SW480对TRAIL的敏感性,以及TRAIL与阿霉素联用对细胞的杀伤作用及可能作用机制。方法:常规培养结肠癌细胞SW480。利用MTT法检测细胞毒性作用,流式细胞术定量分析凋亡细胞比例,透射电镜在亚细胞结构形态上证实凋亡细胞,Westernblot分析p53及bcl-2蛋白表达变化。结果:(1)SW480细胞对TRAIL不敏感,100ng/mlTRAIL只能杀伤7.8%的细胞,IC50>1000ng/ml,且不存在浓度依赖性。(2)SW480细胞对阿霉素敏感,存在浓度依赖性作用,IC50=65μmol/L,0.86μmol/L的阿霉素对细胞不表现杀伤作用。(3)TRAIL与阿霉素合用表现出协同作用,亚毒性浓度TRAIL(100ng/ml)与亚毒性浓度阿霉素(0.86μmol/L)联用可杀伤80%SW480细胞。流式细胞学证实这种杀伤作用主要通过诱导细胞凋亡实现,透射电镜亦观察到大量凋亡细胞存在。药物作用前后,p53及bcl-2蛋白表达水平无明显改变。结论:结肠癌细胞株SW480对TRAIL不敏感,但TRAIL与亚毒性浓度阿霉素联用对癌细胞有协同杀伤作用,这种细胞毒性作用主要表现     

阿霉素联合TRAIL对人肝癌细胞增殖与TRAIL受体表达的影响

目的 探讨阿霉素联合肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）对肝癌细胞HepG2和SMMC-7721增殖及TRAIL受体表达的影响。方法 采用MTT法分别检测阿霉素、TRAIL及低浓度阿霉素联合TRAIL处理HepG2和SMMC-7721细胞的生长抑制率;RT-PCR和Western blotting分别检测阿霉素作用前后HepG2和SMMC-7721细胞TRAIL受体DR4、DR5的mRNA和蛋白表达水平。结果 3种浓度阿霉素（0.86、8.6、86μmol／L）作用24h后,对HepG2和SMMC-7721细胞的生长抑制率分别为（8.84±0.44）％和（8.67±1.22）％、（24.12±1.11）％和（25.39±2.26）％、（64.55±4.05）％和（66.2±3.74）％,呈浓度依赖性,不同浓度组之间差异均有统计学意义（P＜0.05）。4种浓度TRAIL（10、100、500、1000ng／ml）作用24h后,对HepG2和SMMC 7721细胞的生长抑制率分别为（5.83±0.25）％和（5.66±0.56）％、（9.60±1.38）％和（8.96±1.13）％、（11.87±1.43）％和（12.11±1.84）％、（15.12±3.84）％和（16.16±1.41）％,其他3种浓度分别与10ng／ml TRAIL比较,差异均有统计学意义（P＜0.01）。低浓度阿霉素联合TRAIL作用于HepG2和SMMC-7721细胞,低浓度阿霉素能够增加HepG2和SMMC-7721细胞对TRAIL治疗的敏感性,并且随着时间的延长和TRAIL浓度的增加,细胞抑制率逐渐增加,呈时间 效应和剂量 效应关系;无论在mRNA还是蛋白水平,阿霉素处理后HepG2细胞死亡受体DR4、DR5的表达水平较未处理组显著增加;在SMMC-7721细胞,阿霉素处理后,DR5的表达水平显著增加,而DR4的表达水平与阿霉素未处理组相似。结论 低浓度阿霉素能够增加肝癌细胞对TRAIL治疗的敏感性,其机制可能是阿霉素增加死亡受体特别是DR5的表达水平,从而诱导细胞凋亡增加,TRAIL在肝癌治疗方面存在潜在的临床应用价值。     

奥沙利铂通过上调死亡受体表达增强TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的实验研究

目的:研究奥沙利铂对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,探讨死亡受体5(DR5)在TRAIL诱导细胞凋亡中的作用.方法:采用MTT法测定细胞活力、采用流式细胞仪检测细胞凋亡,采用Western blot检测DR5蛋白表达.结果:100ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制,诱导不超过5%的细胞凋亡;TRAIL(100ng/ml)联合奥沙利铂(23.44μg/ml)引起明显的细胞增殖抑制和细胞凋亡(P＜0.05),TRAIL没有明显改变死亡受体5(DR5)的表达,而23.44 μg/ml奥沙利铂作用胃癌细胞24小时后,明显上调了DR5的表达.结论:奥沙利铂通过上调DR5的表达增强TRAIL诱导的胃癌细胞凋亡.     

紫杉醇提高胃癌MGC803细胞对TRAIL的敏感性

目的:研究紫杉醇对TRAIL诱导胃癌细胞凋亡的影响,探讨死亡受体5(DR5)在TRAIL诱导细胞凋亡中的作用。方法:采用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,western blot检测蛋白表达。结果:在MGC803细胞中,100ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制和细胞凋亡,TRAIL(100ng/ml)联合紫杉醇(3.41g/ml)引起明显的增殖抑制和细胞凋亡(P<0.05)。TRAIL单药没有改变死亡受体5(DR5)的表达,而3.41g/ml紫杉醇作用MGC803细胞后明显上调了DR5的表达。结论:紫杉醇通过上调DR5的表达增强TRAIL诱导的胃癌MGC803细胞凋亡。     

白藜芦醇联合TRAIL抑制乳腺癌细胞抗凋亡蛋白Bcl-xl表达

目的:探讨白藜芦醇(Resveratrol,RES)联合TRAIL对乳腺癌细胞凋亡及凋亡相关蛋白Bcl-xl表达的影响。方法:50μmol/L RES、100ng/ml TRAIL及二者联合分别处理乳腺癌MDA-MB-231和MCF-7细胞,MTT法检测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡,Real time PCR检测Bcl-2、Bcl-xl和Mcl-1的mRNA表达,Western blot检测Bcl-xl、Bcl-2和Mcl-1蛋白表达。结果:MTT结果显示RES、TRAIL均能明显抑制乳腺癌细胞增殖,且联合组抑制率高于单独处理组(P<0.05)。RES、TRAIL单独或联合能诱导MDA-MB-231细胞凋亡,凋亡率分别为(16.34±0.34)%,(43.52±0.99)%和(73.60±2.80)%,与对照组的(4.13±0.25)%比较有统计学意义(P<0.05);而对MCF-7凋亡影响不明显。Realtime PCR结果显示RES联合TRAIL能明显抑制MDA-MB-231细胞Bcl-xl mRNA表达,联合组与对照组比较有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果显示RES联合TRAIL能抑制Bcl-xl蛋白的表达而对Bcl-2和Mcl-1抑制不明显。结论:RES能增强TRAIL诱导乳腺癌细胞凋亡敏感性,这可能与二者抑制抗凋亡蛋白Bcl-xl的表达有关。     

表阿霉素提高胃癌BGC823细胞对TRAIL的敏感性

目的：研究表阿霉素对TRAIL诱导胃癌细胞BGC823细胞凋亡的影响,探讨脂筏和死亡受体4（DR4）在TRAIL诱导细胞凋亡中的作用。方法：采用MTT法测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡,免疫荧光显微技术检测脂筏和DR4在细胞膜的分布。结果：（0.1-50）μg/ml表阿霉素处理BGC823细胞24h,抑制细胞增殖50%的药物浓度（IC50）为（4.61±0.62）μg/ml。在BGC823细胞中,100ng/ml的TRAIL导致轻度的增殖抑制和细胞凋亡,TRAIL（100ng/ml）联合表阿霉素（4.61μg/ml）引起明显的增殖抑制和细胞凋亡（P〈0.05）。与对照组相比,100ng/ml的TRAIL作用BGC823细胞24 h,没有引起明显的脂筏聚集或DR4聚集。表阿霉素（4.61μg/ml）明显促进脂筏聚集和DR4聚集,同时观察到DR4和脂筏的共定位。表阿霉素和TRAIL联合作用24 h,同样观察到DR4定位在聚集的脂筏内。结论：表阿霉素通过促进DR4在脂筏聚集增强TRAIL诱导的胃癌BGC823细胞凋亡。     

TRAIL联合白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡影响的研究

目的:探讨 TRAIL 联合白藜芦醇对乳腺癌MDA-MB-231 细胞株增殖及凋亡的影响.方法:MTT 法和软琼脂集落形成实验检测细胞增殖;DAPI染色法及流式细胞术检测细胞凋亡;流式细胞术检测细胞表面DR4、DR5蛋白表达.结果:50 ng/mL TRAIL与50和100 μmol/L白藜芦醇联合作用14 d后,MDA-MB-231细胞在软琼脂中集落形成率分别为(2.49±0.08)%和(1.38±0.07)%,与相应浓度TRAIL、白藜芦醇单独应用比较及组间比较,差异有统计学意义,P<0.01.50 ng/mL TRAIL与50和100 μmol/L白藜芦醇联合作用后,对MDA-MB-231细胞增殖抑制率为(62.43±2.07)%、(87.32±1.44)%;细胞凋亡率为(53.59±1.44)%、(73.72±1.96)%,与单独应用相应浓度TRAIL、白藜芦醇比较及组间比较,差异有统计学意义,P<0.01.50、100和200 μmol/L白藜芦醇作用后,细胞膜表面DR4、DR5的荧光指数分别为1.80±0.07、2.11±0.14、2.59±0.16和2.16士0.08、2.92±0.25、3.90±0.06,与对照组(FI 值分别为1.52±0.04和1.61±0.13)比较及组间比较差异有统计学意义,P<0.05.结论:TRAIL与白藜芦醇联合可协同抑制MDA-MB-231 细胞增殖并诱导其凋亡,DR4,DR5蛋白表达的上调可能是其协同效应的机制之一.     

TRAIL联合紫杉醇对人脑胶质瘤U87细胞的抑制效应及其可能的机制

目的:研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)联合紫杉醇处理对人脑胶质瘤U87细胞的抑制效应及其可能的机制。方法:MTT法检测紫杉醇组、TRAIL组和TRAIL/紫杉醇组对U87细胞增殖的抑制率;流式细胞术检测不同给药方案对U87细胞凋亡的影响;Western blotting检测不同处理后U87细胞TRAIL死亡受体(death receptor,DR)4、DR5以及caspase-8和caspase-3的表达水平。结果:MTT结果显示,单独应用TRAIL或紫杉醇可有效抑制U87细胞的增殖,并呈浓度依赖性。TRAIL(500 ng/ml)/紫杉醇(0.5μmol/L)联合给药组可协同抑制U87细胞的增殖,相互作用指数(coefficient of drug interaction,CDI)为0.59;且联合用药组对U87细胞增殖的抑制率明显高于TRAIL和紫杉醇单独用药组[(70.24±3.68)%vs(27.01±2.36)%,(21.31±4.85)%,P<0.01];TRAIL/紫杉醇联合用药组U87细胞凋亡率明显高于对照组、TRAIL组及紫杉醇组[(67.67±2.46)%vs(1.80±1.13)%、(22.13±2.18)%、(35.90±2.53)%,P<0.01]。TRAI与紫杉醇联合用药组U87细胞中DR4、caspase-8及caspase-3的表达比TRAIL组或紫杉醇组显著增加(P<0.05),而DR5表达则无明显变化(P>0.05)。结论:TRAIL联合紫杉醇处理通过上调DR4、caspase-8及caspase-3的表达,抑制U87细胞的增殖,诱导U87细胞凋亡。     

PI3K/Akt通路在EGFR/KRAS不同遗传背景NSCLC细胞对TRAIL敏感性中的作用

[目的]探讨PI3K/Akt通路在肿瘤坏死冈子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand,TRAIL)诱导携带EGFR/KRAS不同基因表型的非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)细胞凋亡中的作用.[方法]CCK8法检测TRAIL对A549和PC9细胞活性的影响;Western blot检测TRAIL作用后Ak1 、p-Akt蛋白表达的变化.使用PI3K特异性抑制剂LY294002处理细胞,CCK8法检测对TRAIL抗细胞增殖活力的影响;流式细胞术检测对TRAIL诱导细胞凋亡和细胞周期影响.[结果]当TRAIL浓度＜100 ng/ml时,A549和PC9细胞的存活率与对照组无明显差异.当TRAIL浓度分别为100 ng/ml[(64.29±11.39)％vs (100±12.07)％,t=6.900,P=0.020]、[(74.57±9.70)％vs(100±11.20)％,t=4.786, P=0.041]和500ng/ml[(48.85±10.92)％vs(100±12.07)％,t=13.390,P=0.006] [(46.34±8.99)％vs(100±11.20)％,t=18.419,P=0.003]时,A549和PC9细胞存活率明显低于对照组.TRAIL以时间依赖的方式上调A549和PC9细胞内的p-Akt的水平.使用LY294002抑制PI3K/Akt通路活性能够明显增加TRAIL抑制A549细胞[(40.74±2.53)％vs(64.29±9.30)％,t=6.092,P=0.026]和PC9细胞[(42.38±3.40)％) vs(74.57±7.92)％,t=12.689,P=0.006]增殖的能力,诱导更多的A549细胞[(44.98±8.99)％vs(23.07±2.92)％,t=7.836,P=0.016)]和PC9细胞[(46.32±7.42)％vs(3.44±1.46)％,t=40.727,P=0.001)]凋亡,并使细胞周期更多地阻滞在G0/G1期[(73.60±3.43)％vs(60.20±5.48)％;(70.51±3.86)％ vs(42.37±4.55)％](P均＜0.05).[结论]TRAIL引起的PI3K/Akt通路活化,可拮抗TRAIL的诱导凋亡作用.抑制PI3K/Akt活性可明显增强EGFR-TKI敏感的和EGFR-TKI不敏感的NSCLC细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感性.     

TRAIL及其受体与肿瘤

TRAIL是新近发现的TNF家族的新成员,能选择性诱导肿瘤细胞凋亡,且与传统的放疗、化疗有协同作用,有可能成为一种新型抗肿瘤制剂.本文就TRAIL及其受体TRAILR的研究进展作一综述.     

TRAIL receptor-targeted therapy

Tumor necrosis factor (TNF)-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) is a member of the TNF family of cytokines. Based on its ability to induce apoptosis selectively in a wide variety of cancer cell lines and human tumor xenografts, TRAIL has been in drug development as a potential biological agent for cancer therapy. A variety of chemotherapy agents have been shown to enhance the cytotoxic effects of TRAIL. The potential benefits of TRAIL as an anticancer therapy have been further indicated by its ability to enhance the efficacy of radiotherapy. Preclinical studies have shown the potential use of agonistic monoclonal antibodies that selectively bind TRAIL death receptors for cancer therapy. This review provides an overview of TRAIL receptor-mediated apoptosis of tumor cells, with TRAIL or agonistic monoclonal antibodies only or with chemotherapy drugs. Treatment of tumor xenografts with these ligands, alone or in combination with chemotherapy or radiation, are discussed along with preliminary information about early clinical trials. Additional clinical trials with TRAIL receptor ligands in combination treatment regimens are required to determine their potential for targeted therapy of cancer.     

TRAIL系统与卵巢肿瘤

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)是新近发现的肿瘤坏死因子家族成员,它可以选择性杀伤肿瘤细胞及转化细胞,对正常组织细胞没有杀伤作用,而且可以增强放化疗的敏感性,这些特点使其在卵巢肿瘤治疗中有着广泛的应用前景.现就TRAIL系统与卵巢肿瘤的研究作一综述.     

TRAIL受体在人肝细胞癌中的表达及TRAIL诱导的肝癌细胞凋亡

目的 研究了RAIL受体在肝癌组织及肝癌细胞中的表达,探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)及其受体在肝癌细胞凋亡诱导中的作用。 方法 应用RT-PCR法和免疫组化方法检测肝癌组织及细胞系SK-Hepl中TRAIL受体的表达,并以TRAIL蛋白和γ-干扰素作用于SK-Hepl细胞,观察其对细胞的凋亡诱导作用。 结果 在肝癌组织及肝癌SK-Hepl细胞系中均可检测到TRAIL受体,其中,死亡受体DR4、DR5在肝癌、癌旁组织以及SK-Hepl肝癌细胞系中均呈高表达,而诱骗受体DcR1及DcR2呈低表达,明显低于正常组织。TRAIL对肝癌细胞有凋亡诱导作用,与干扰素的协同时,其作用明显增强。 结论 肝癌组织中存在着TRAIL受体的表达,TRAIL可诱导肝癌SK-Hepl细胞系凋亡,其作用与DR4、DR5的高表达有关。     

Targeting Apo2L/TRAIL receptors by soluble Apo2L/TRAIL

The early observation that Apo2L/TRAIL preferentially triggers apoptosis in tumor cells over normal cells highlighted its potential as a candidate therapeutic in cancer. Since its identification in the mid-1990s, our increased understanding of Apo2L/TRAIL and Apo2L/TRAIL receptor signaling has led to the development of several agonists designed to promote tumor cell apoptosis through death receptor engagement. Recombinant human Apo2L/TRAIL/dulanermin is unique in that it is the only agonist which binds both Apo2L/TRAIL death receptors. In pre-clinical studies dulanermin demonstrates broad spectrum anti-tumor activity and the ability to cooperate with multiple conventional and targeted therapies. Results from early stage clinical trials indicate that dulanermin is well tolerated and shows some evidence of clinical activity. Not all tumors are likely to be equally sensitive to apoptosis induction by Apo2L/TRAIL. Therefore, an increased understanding of the regulation of Apo2L/TRAIL signaling should aid in the identification of molecular signatures that define a patient population likely to respond. In this review, current knowledge and new insights about Apo2L/TRAIL signaling is discussed with the focus on the development of Apo2L/TRAIL as a cancer therapeutic.