蟾毒灵对肝细胞生长因子诱导阿法替尼耐药的逆转作用

目的：探讨蟾毒灵对肝细胞生长因子（ HGF）诱导的阿法替尼耐药肺癌细胞H1975生长的影响,并分析其可能的作用机制。方法采用外源性HGF和重组HGF腺病毒转染内源性HGF诱导的方法建立阿法替尼耐药的肺癌细胞H1975,应用四甲基偶氮唑蓝（ MTT）法检测蟾毒灵、阿法替尼及联合用药对阿法替尼耐药细胞H1975增殖的抑制作用,Transwell实验检测药物对阿法替尼耐药细胞H1975侵袭能力的影响,酶联免疫吸附试验（ ELISA）法检测转染后H1975细胞分泌的HGF水平以及药物对HGF分泌水平的影响,Western blot检测药物干预后EGFR、cMet信号通路及上皮细胞?间质转化（ EMT）相关蛋白的表达。结果 MTT结果显示,在外源性和内源性HGF刺激下,阿法替尼对H1975细胞生长无抑制作用,经蟾毒灵与阿法替尼联合处理后,可明显抑制肿瘤细胞的生长。Transwell实验结果显示,在外源性HGF作用下,阿法替尼组的穿膜细胞数为（118．92±37．29）个;蟾毒灵组的穿膜细胞数为（88．84±19．53）个;阿法替尼与蟾毒灵联合组的穿膜细胞数为（48．98±11．43）个,与阿法替尼组和蟾毒灵组比较,差异均有统计学意义（均P＜0．05）。 ELISA结果显示,H1975／HGF细胞（转染重组HGF腺病毒的H1975细胞）分泌高水平的HGF,蟾毒灵和阿法替尼干预后,H1975／HGF细胞分泌HGF水平差异无统计学意义（P＞0．05）。 Western blot结果显示,蟾毒灵联合阿法替尼能明显下调阿法替尼耐药细胞中 p?EGFR、p?cMet、p?AKT、p?ERK、vimentin 和 snail 蛋白的表达,上调E?cadherin蛋白的表达。结论蟾毒灵联合阿法替尼可显著抑制阿法替尼耐药细胞H1975的增殖,阻止H1975肺癌细胞侵袭;蟾毒灵逆转 HGF 诱导的 H1975肺癌细胞对阿法替尼耐药,可能与阻断cMet／PI3K／AKT、cMet／MAPK／ERK信号通路以及阻止EMT进程有关。     

肝细胞生长因子诱导敏感非小细胞肺癌细胞对吉非替尼耐药及机制的研究

背景与目的肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)受体(c-Met)可能与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)对吉非替尼耐药有关。本研究旨在探讨HGF诱导不同基因型NSCLC对吉非替尼耐药及耐药机制。方法选择NSCLC细胞EGFR突变型PC-9和EGFR野生型H292,用HGF诱导这两株细胞,通过MTT法检测细胞增殖,PI法检测细胞周期,Annexin V-PE法检测细胞凋亡,应用免疫印迹(Western blot)技术检测细胞中c-Met、p-Met的表达。结果吉非替尼对PC-9和H292的生长抑制作用呈浓度依赖性,HGF诱导后吉非替尼抑制两种细胞的生长曲线往右移。PC-9和H292的HGF和吉非替尼处理组(HG)比吉非替尼处理组(G)均有更高的存活率(P<0.05),HG组与G组两组间细胞凋亡及细胞周期无统计学差异(P>0.05)。HGF明显增加PC-9和H292中p-Met的表达。吉非替尼能明显抑制HGF诱导PC-9增加表达的p-Met,但不能抑制HGF诱导H292增加表达的p-Met。结论 HGF可诱导敏感肺癌细胞PC-9和H292对吉非替尼耐药,HGF刺激c-Met磷酸化可能是敏感肺癌细胞对吉非替尼耐药的重要机制。     

c-Met信号通道参与HGF诱导不同基因型非小细胞肺癌细胞株对吉非替尼耐药

背景与目的肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)诱导非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)对吉非替尼耐药,可能与其受体c-Met激活有关。本研究旨在探讨c-Met及其下游信号通道是否参与HGF诱导不同基因型NSCLC细胞株对吉非替尼耐药。方法选择人NSCLC细胞株表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)突变型PC-9、PC9/R和EGFR野生型H292、A549,用HGF诱导细胞,通过MTT法检测细胞增殖,Annexin V-FITC法检测细胞凋亡,应用免疫印迹技术检测细胞中c-Met及下游通道的变化。结果吉非替尼对PC9、H292、A549的生长抑制作用呈浓度依赖性,HGF诱导后吉非替尼抑制细胞的生长曲线明显往右移。在PC9、H292、A549细胞中,吉非替尼和HGF处理组的细胞凋亡率比吉非替尼处理组均减少(P<0.05),在PC9/R细胞中无明显减少(P>0.05)。HGF能激活PC9、H292、PC9/R、A549细胞中c-Met及其下游通道蛋白。在PC9、H292、A549细胞中,吉非替尼和HGF处理组的p-Met、p-Akt、p-Stat3、p-Erk1/2蛋白表达比吉非替尼处理组均增高,在PC9/R细胞中无明显增高。结论在体外HGF诱导不同基因型NSCLC细胞株对吉非替尼耐药,c-Met及其下游信号通道参与HGF诱导不同基因型NSCLC细胞株对吉非替尼耐药。     

c-Met小分子酪氨酸激酶抑制剂ARQ197对肺癌H1299细胞放射增敏作用的实验研究

目的 观察酪氨酸激酶抑制ARQ197对肺癌H1299细胞的放射增敏作用及机制。方法 首先用不同浓度的重组人肝细胞生长因子(HGF)和ARQ197分别处理H1299 细胞,应用克隆形成实验法检测细胞增殖,筛选出用于放射敏感性研究的HGF和ARQ197的合适浓度。随后将细胞分为对照组、HGF处理组、ARQ197处理组、HGF+ARQ197处理组,观察不同组别之间差异。最后用蛋白印记检测HGF、单纯放射或联合应用ARQ197对c-Met及下游Akt和Erk1/2蛋白表达和活化的影响。结果 H1299细胞的克隆形成率随着HGF浓度增加呈进行性升高,而ARQ197则进行性下降。LQ模型细胞存活曲线示HGF、HGF+ARQ197处理及ARQ197对H1299细胞的放射增益比分别为0.85、1.20、1.27(存活分数为0.1时的剂量比)。H1299细胞在HGF刺激后p-cMet、p-Akt、p-Erk1/2高表达,HGF+ARQ197中随着ARQ197浓度增加p-cMet、p-Akt、p-Erk1/2蛋白表达进行性下降。细胞接受2 Gy照射后p-cMet、p-Akt、p-Erk1/2高表达,但照射+ARQ197后p-cMet、p-Akt、p-Erk1/2蛋白表达显著下降,但总的cMet、Akt、Erk1/2蛋白表达无明显变化。结论 ARQ197通过抑制HGF/c-Met及其下游传导通路的活化对离体肺癌H1299细胞有显著放射增敏作用。     

肝细胞生长因子诱导不同基因型非小细胞肺癌细胞株对埃罗替尼耐药及机制的研究

背景与目的肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor ,HGF)受体(c-Met)可能与非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)对埃罗替尼耐药有关。本研究旨在体外研究HGF诱导不同EGFR基因型NSCLC细胞对埃罗替尼耐药及可能的耐药机制。方法 选择不同EGFR基因型NSCLC细胞(PC9、H292、A549),用HGF诱导或(和)埃罗替尼处理细胞,通过MTT法检测细胞增殖,PI法检测细胞周期,Annexin V-FITC法检测细胞凋亡,Western blotting检测细胞中c-Met、EGFR、ErbB3及其磷酸化蛋白的表达。结果 埃罗替尼对三种细胞的生长抑制作用均呈浓度依赖性,埃罗替尼对HGF诱导的药物-存活率曲线明显往右移。实验分为四组：C组(control)、H组(HGF)、E组(erlotinib)、HE组(HGF erlotinib)。在每种细胞分组中,HE组凋亡率均比E组减少(P<0.05)。在H292、A549,HE组与E组比较,G0/G1期比例减少(P<0.05)、S期比例增多(P<0.05)。HGF能迅速活化三种细胞内p-Met蛋白磷酸化,HE组与E组比较,p-Met蛋白含量明显升高。结论 在体外,在体外HGF诱导不同EGFR基因型NSCLC细胞株对埃罗替尼耐药,c-Met磷酸化活化可能是HGF诱导NSCLC细胞株对埃罗替尼耐药的重要机制。     

肝细胞生长因子对人结肠癌细胞系内皮生长因子表达影响的观察

目的:探讨人重组肝细胞生长因子(rhHGF)对结肠癌细胞SW480和SW620中3种内皮生长因子VEGF-A、VEGF-C和VEGF-D表达的影响.方法:实验分对照组(5%胎牛血清)和HGF组(80 ng/mL的HGF).采用MTT法分析HGF对肿瘤细胞增殖的作用,流式细胞术检测HGF对细胞周期的影响.48 h后进行蛋白质印迹法检测,并对信号强度进行相对定量分析.结果:HGF能促进SW480和SW620增殖.流式细胞术结果显示,与对照组相比,SW480的HGF组中的G0/G1期细胞减少,S期细胞增多,G2/M期细胞增多,但HGF对SW620细胞周期的影响不明显.SW480细胞HGF组的VEGF-A表达量是对照组的1.59倍,SW620细胞HGF组的VEGF-A表达量是对照组的2.08倍(P＜0.01);SW480细胞HGF组的VEGF-C表达量是对照组的1.37倍,SW620细胞HGF组的VEGF-C表达量是对照组的1.27倍(P＜0.01);SW480细胞HGF组的VEGF-D表达量是对照组的1.46倍,SW620细胞HGF组的VEGF-D表达量是对照组的1.38倍(P＜0.01).结论:HGF通过上调结直肠癌细胞VEGF-A、VEGF-C和VEGF-D的表达而促进肿瘤血管和淋巴管的新生,可能是潜在的结直肠癌治疗的新靶点.     

肝细胞生长因子及其受体mRNA在星形细胞瘤中的表达

目的　探讨肝细胞生长因子(HGF)及其受体(c Met)mRNA在正常脑组织和脑星形细胞瘤中的表达规律,探讨其与肿瘤增殖、肿瘤血管生成、临床病理及生存时间之间的关系。方法　用原位杂交法检测57例脑星形细胞瘤和5例正常脑组织标本HGF、c Met mRNA的表达;用免疫组织化学方法检测PCNA在肿瘤细胞中的表达,CD34 免疫组化反应检测并计算微血管密度(MVD),并结合临床病理资料进行分析。结果　在正常脑组织中未见HGF 和c Met 表达,而在脑星形细胞瘤中HGF、c Met、PCNA及CD34表达随病理级别的增高而明显增强(P<0.05),随生存期的延长而明显减弱(P<0.05),并且与患者的性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径无关(P>0.05);HGF表达与c Met、PCNA的表达及MVD之间显著相关。结论　HGF/c Met在脑星形细胞瘤的形成与发展过程中起重要作用,它可促进肿瘤增殖及瘤组织内微血管的发生,并对预后判断有指导意义。     

姜黄素对肝细胞生长因子诱导的前列腺癌细胞上皮细胞间质化的逆转作用

目的:探讨姜黄素对肝细胞生长因子诱导前列腺癌DU145细胞上皮细胞间质化的影响及可能机制。方法:将DU145细胞分为3组:正常对照组、HGF组、HGF联合姜黄素组。分组干预48小时后,显微镜观察细胞形态变化,划痕试验及Transwell试验检测细胞迁移、侵袭能力,Western blot检测上皮细胞表面标志E-Cadherin和间质细胞表面标志Vimentin的变化,以及HGF/c-Met信号通路分子的表达情况。Real time RT-PCR检测c-Met mRNA的表达变化。结果:分组处理48h,HGF处理组细胞较正常对照组细胞迁移能力显著增强,HGF联合姜黄素处理组细胞迁移能力与HGF处理组相比明显下降;Western blot结果发现,相对于正常对照组,HGF处理组E-cadherin表达水平下降而Vimentin表达水平上升,而姜黄素能明显逆转HGF诱导的EMT相关蛋白表达的改变。进一步研究发现姜黄素能显著下调c-Met mRNA和蛋白水平,进而抑制HGF/c-Met信号下游p-AKT和p-ERK信号以及Snail的表达。结论:姜黄素可逆转HGF诱导的前列腺癌细胞DU145迁移能力,可能与其抑制c-Met的表达和上皮细胞间质化有关。     

上皮-间质转化和胰岛素样生长因子Ⅰ型受体在非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药中的作用

目的:探讨上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)和胰岛素样生长因子Ⅰ型受体(insulin-like growth factor Ⅰ receptor,IGF-1R)在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)对表皮生长因子受体-酪氨酸激酶抑制剂(epidermal growth factor receptor-tyrosine kinase inhibitors,EGFR-TKIs)获得性耐药中的作用.方法:选用EGFR基因突变型和野生型的人肺腺癌细胞PC-9和H460,分别用吉非替尼和厄洛替尼将其诱导成耐药的PC-9/ZD和H460/ER细胞.MTT法检测各组细胞的增殖情况,划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印迹法和RT-PCR法分别检测IGF-1R及EGFR信号通路分子及EMT相关分子的蛋白和mRNA表达.结果:PC-9/ZD和H460/ER为EGFR-TKI获得性耐药细胞,分别对吉非替尼和厄洛替尼的敏感性显著下降,差异有统计学意义(P＜0.05).与PC-9和H460细胞相比,耐药的PC-9/ZD和H460/ER细胞形态呈现间质细胞表型,细胞侵袭和迁移能力增加(P＜0.05).PC-9/ZD和H460/ER细胞中间质标志分子vimentin的mRNA和蛋白表达量均显著增加(P＜0.05),PC-9/ZD细胞的E-cadherin表达量显著减少(P＜0.05).与PC-9和H460细胞相比,PC-9/ZD与H460/ER细胞的IGF-1R及其磷酸化蛋白表达量显著增加(P＜0.05),AKT和ERK磷酸化水平明显上调(P＜0.05).PC-9/ZD细胞的EGFR磷酸化水平与PC-9细胞相比未见明显差异(P＞0.05),而H460/ER细胞的EGFR磷酸化水平较H460细胞显著降低(P＜0.05).结论:EGFR突变型PC-9细胞和野生型H460细胞的获得性耐药细胞中均发生了EMT,并且IGF-1R信号蛋白表达增多,提示EMT及IGF-1R信号转导通路均可能在NSCLC的EGFR-TKIs获得性耐药中起重要作用.     

HGF、c-Met、p-Met在NSCLC中的表达及与EGFR表达的相关性

摘 要：［目的］ 通过检测非小细胞肺癌患者中HGF、c-Met和p-Met的表达情况,分析其与临床病理特征关系,并与EGFR表达的相关性。［方法］ 收集经手术切除非小细胞肺癌患者的标本100例,采用免疫组化方法检测HGF、c-Met、p-Met蛋白的表达水平,并收集这些患者既往检测EGFR的表达情况。［结果］ HGF阳性表达率为64%,c-Met阳性表达率为47%,p-Met阳性表达率为3%。HGF、c-Met的表达与吸烟状态、年龄、性别、临床分期、分化程度、病理类型均无统计学差异;p-Met阳性表达患者均为EGFR突变的HGF强表达的腺癌患者。HGF、c-Met的表达水平与EGFR表达水平无相关性。［结论］ HGF、c-Met的阳性表达与吸烟状态、年龄、性别、临床分期、分化程度、病理类型以及EGFR的表达水平均无关。p-Met的阳性表达患者均为HGF强表达的腺癌EGFR突变型。     

神经生长因子及其受体与神经系统肿瘤的关系

研究表明神经生长因子(NGF)及其高亲和力受体酪氨酸激酶受体(TrkA)在神经系统肿瘤中表达发生改变,并且NGF及TrkA的高表达预示着神经母细胞瘤(NB)和髓母细胞瘤(MB)的良好预后,而在胶质瘤,NGF及TrkA的高表达和核转位与肿瘤的恶性程度密切相关.研究NGF及TrkA在神经系统肿瘤中的表达及亚细胞定位将为肿瘤的诊疗开辟新途径.     

胃腺癌组织c⁃MET EGFR和HER⁃2的表达与病理特 征及预后关系研究

目的 探讨酪氨酸蛋白激酶Met（c⁃MET)、表皮生长因子受体（EGFR）和人表皮生长因子受体2（HER⁃2) 的表达与胃腺癌 临床病理学特征及预后的相关性。 方法 选取2016年1月至2018年1月西安交通大学医学院附属三二〇一医院收治的87例行胃 癌根治术的胃腺癌患者为研究对象,采用免疫组织化学法检测组织c⁃MET、EGFR和HER⁃2蛋白的表达,并分析其与Ki⁃67蛋白、临 床病理特征的相关性,随访3年,根据c⁃MET、EGFR和HER⁃2蛋白表达情况分为阳性组与阴性组（c⁃MET阳性组37例,阴性组50 例;EGFR阳性组33例,阴性组54例;HER⁃2阳性组39例,阴性组48例）,比较各组间无复发生存率及总生存率,采用Cox比例风险 回归模型（Cox回归）分析进行多因素生存分析。 结果 胃腺癌中,c⁃MET、EGFR和HER⁃2蛋白阳性率分别为42.53%、37.93%和 44.83%,高于癌旁正常组织,差异有统计学意义（P<0.05）。患者病理特征中,低分化程度、浸润深度（T3+T4 ）、TNM分期Ⅲ期、有淋巴 结转移、有远处转移、有癌栓的胃腺癌患者的c-MET、EGFR和HER-2蛋白阳性率高于中高分化、浸润深度（T1+T2 ）、TNM分期Ⅰ、Ⅱ 期、无淋巴结转移、无远处转移、无癌栓患者,差异有统计学意义（P<0.05）。c⁃MET、EGFR和HER⁃2蛋白阳性表达与Ki⁃67蛋白阳性 表达均呈正相关（r=0.319、0.338、0.374;均P<0.05）。随访3年,31例患者死亡,存活率为64.37%;31例患者复发,无复发生存率为 64.37%。c⁃MET、EGFR和HER⁃2阳性组中位生存时间分别为19.95、19.28和21.49个月,阴性组中位生存时间分别为33.84、33.10 和33.26个月。c⁃MET、EGFR和HER⁃2阳性组中位无复发生存时间分别为14.59、13.84和15.35个月,阴性组分别为27.83、27.37和 27.57个月。c⁃MET、EGFR和HER⁃2阳性组无复发生存率及总生存率低于表达阴性组（P<0.05）。 EGFR蛋白阳性是影响胃腺癌总 生存期的独立预后因素（RR=4.278, 95%CI=2.099~8.713, P<0.05）。 结论 胃腺癌c⁃MET、EGFR和HER⁃2蛋白表达与分化程度、浸 润深度、TNM分期、淋巴结转移、远处转移及癌栓有关,c⁃MET、EGFR和HER⁃2蛋白表达阳性患者复发率更高,无复发生存率及总生 存率低,且预后差。EGFR蛋白阳性是影响患者总生存期的独立预后因素。     

化疗与靶向药物联合治疗胰腺癌研究进展

以吉西他滨为基础的化疗是胰腺癌的主要治疗方法。近年来对于胰腺癌化疗的研究除了吉西他滨与其他化疗药物的联合和给药方法的改进之外,主要集中在化疗与分子靶向药物的联合以及不同靶向药物之间联合应用的探讨。     

血管内皮生长因子及其受体在白血病中的表达及作用

血管内皮生长因子(VEGF)及其受体的表达,在白血病细胞的增殖和存活中发挥了重要作用.几乎所有类型的白血病均可见VEGF及其受体的表达,VEGF及其受体与白血病的预后及分期等密切相关.     

表皮生长因子受体单抗相关生物标志研究进展

表皮生长因子受体（EGFR）靶向药物的出现为恶性肿瘤的治疗提供了新的选择。研究表明，西妥昔单抗联合化疗治疗晚期结直肠癌及肺癌较单用化疗有效率提高10％～20％。然而EGFR单抗昂贵的价格及只对部分患者有效限制了其临床的合理应用，如能有效利用疗效预测生物标志，指导临床用药，不但能明显提高治疗有效率，避免患者不必要的不良反应，也能减少患者在经济及时间上的浪费。文章对相关预测生物标志的研究进行了较为深入的综述。     

靶向治疗联合新辅助放化疗在局部进展期直肠癌中的应用

目前新辅助放化疗联合全直肠系膜切除术（TME）是局部进展期直肠癌（LARC）的标准治疗模式.靶向药物在LARC新辅助治疗中耐受性及安全性良好,但与常规新辅助放化疗相比较,病理完全缓解（pCR）率并无提高,仍需大样本随机对照研究证实其在LARC新辅助治疗中的作用.     

色素上皮衍生因子的抗肿瘤潜能

色素上皮衍生因子（PEDF）是一种内源性的非抑制性丝氨酸蛋白酶抑制剂,具有神经营养、神经保护、抗血管生成、抗血管渗漏和促进凋亡等生物学活性。研究表明,PEDF可以直接或间接地抑制肿瘤,从而有望成为潜在的抗肿瘤药物。     

急性白血病治疗前后骨髓中VEGF、CTGFmRNA水平的研究

目的 探讨血管内皮生长因子-C（VEGF-C）、结缔组织生长因子（CTGF）mRNA在急性白血病患者骨髓表达及治疗前后变化情况,研究其在白血病发生发展、浸润转移中的相互作用和临床意义。方法 71例初发急性白血病患者,对照组30例缺铁性贫血患者。收集研究对象骨髓液单个核细胞,应用Real-time PCR方法对VEGF-C及CTGF mRNA表达水平进行检测。结果 初发急性白血病患者骨髓中VEGF-C、CTGF mRNA表达明显高于对照组,两者呈正相关（r=0.709,P<0.05）。经1周期化疗后,达完全缓解患者及部分缓解患者与未治疗时比较,VEGF-C、CTGF mRNA表达水平明显降低（P<0.05）,未缓解患者与初发时比较,差异无统计学意义（P>0.05）。VEGF-C、CTGF mRNA的表达在急性白血病骨髓增生不同程度各组及是否伴髓外浸润各组之间比较,差异有统计学意义（P<0.05）。结论 VEGF-C、CTGF在急性白血病发生发展中具有协同作用,共同参与了白血病的发生、浸润及转移,并且与白血病预后相关。