抗弓形虫IgM抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步应用

目的采用时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）建立高灵敏的抗弓形虫（TOX）IgM抗体的检测方法。方法采用二抗间接法建立抗TOX IgM抗体的TRFIA。结果方法的批内和批间变异系数（CV）分别为1.9%和3.8%,敏感性为0.4 U/mL,可测范围为0.4-200 U/mL,20%、50%和80%的有效剂量（ED20、ED50和ED80）分别为36.3、88.2和147.8 U/mL。检测健康体检人员的血清,标本的测定值为（5.3±2.3）U/mL,建议阳性阈值为10 U/mL。结论抗TOX IgM抗体的TRFIA敏感性高、稳定性好,在优生优育及器官移植上具有很好的应用前景。     

抗弓形虫IgM抗体时间分辨荧光免疫分析法的建立及初步应用

目的采用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)建立高灵敏的抗弓形虫(TOX)IgM抗体的检测方法。方法采用二抗间接法建立抗TOX IgM抗体的TRFIA。结果方法的批内和批间变异系数(CV)分别为1.9%和3.8%,敏感性为0.4 U/mL,可测范围为0.4~200 U/mL,20%、50%和80%的有效剂量(ED20、ED50和ED80)分别为36.3、88.2和147.8 U/mL。检测健康体检人员的血清,标本的测定值为(5.3±2.3)U/mL,建议阳性阈值为10 U/mL。结论抗TOX IgM抗体的TRFIA敏感性高、稳定性好,在优生优育及器官移植上具有很好的应用前景。     

Sm~(3+)标记抗心磷脂抗体IgM时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的Sm3+标记时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和兔抗人IgM抗体分别作为固相抗原和钐标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-钐标记兔抗人IgM抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgM抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgM抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgM抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TRFIA检测其血清中的ACA-Ig抗体,计算临床特异度。结果利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.39%、3.26%和3.94%,批间(n=8)精密度分别为2.92%、3.73%和4.35%;方法的灵敏度为0.1 MPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.956;将1份ACA-IgM抗体强阳性的血清标本从2483 MPL U/L倍比稀释至0.151 MPL U/L,ELISA方法较好的线性范围在4.85-310.4MPL U/L,而TRFIA方法在0.151-2483MPL U/L都有较好的线性。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgM抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。     

抗心磷脂抗体IgG时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立高灵敏度、宽量程的定量检测患者血清中的抗心磷脂抗体(anticardiolipin antibody,ACA)IgG的时间分辨荧光免疫分析方法。方法采用ACA抗原(心磷脂+β2糖蛋白I)和鼠抗人IgG抗体分别作为固相抗原和铕标记抗体,如果样本中存在ACA抗体,则形成ACA抗原-ACA抗体-铕标记鼠抗人IgG抗体复合物,加入解离增强液解离铕离子,检测荧光强度,样本中ACA-IgG抗体含量与荧光强度成正比;对建立的时间分辨荧光免疫(time-resolved fluoroimmunoassay,TRFIA)法检测ACA抗体的线性范围、精密度、检测范围进行分析;对25例ACA-IgG抗体阳性血清标本分别利用TRFIA及ELISA法检测ACA-IgG抗体,分析其相关性;收集50例健康献血者,利用TR-FIA检测其血清中的ACA-IgG抗体,计算临床特异度。结果 利用SPSS 13.0统计软件进行统计学分析,TRFIA法检测高、中、低3种浓度混合血清的批内(n=20)精密度分别为2.34%、3.25%和3.87%,批间(n=8)精密度分别为2.89%、3.67%和4.50%;方法的灵敏度为0.1GPL U/ml;TRFIA法检测健康献血者,临床特异度为98%;TRFIA与ELISA 2种方法检测结果的一致性检验采用相关性分析,相关系数为0.987;TRFIA比ELISA的检测范围更宽,稳定性能好。结论首次建立稳定的高灵敏度和宽检测范围的TRFIA法检测人血清中的ACA-IgG抗体,对早期诊断自身免疫性疾病及监测疗效具有重要意义,该方法以其优势有望在各检验科室得以普遍应用。     

抗HBc时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的　用竞争法建立抗HBc时间分辨荧光免疫分析 (TRFIA)方法。方法　以基因重组HBcAg包被板 ,Eu3 -异氰酸苄基二乙烯三胺四乙酸 (Eu3 DTTA)标记抗HBc IgG单克隆抗体 ,建立抗HBcTRFIA方法。数据采用Log Logit函数和四参数Logistic函数数据处理程序处理。结果　方法的批内和批间变异系数分别为 2 30 %和 6 30 % ,回收率为 96 72 % ,灵敏度为 0 2NCU/ml。本方法与抗HBs和抗HBe无交叉反应 ,Eu3 标记物稳定 6个月以上。结论　TRFIA是一种新的抗HBc免疫检测技术 ,具有灵敏度高和稳定性好等优点 ,能够用于定量测定抗HBc IgG     

丙型肝炎病毒抗体桥式双抗原夹心时间分辨荧光免疫分析法的建立

目的建立丙型肝炎病毒抗体桥式双抗原夹心时间分辨荧光免疫分析法。方法采用丙型肝炎病毒基因重组多表位嵌合蛋白作为包被抗原,生物素标记抗原作为桥接抗原,链霉亲和素标记铕作为示踪物,配制以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液,自建方法的校准品以国家标准血清物质GBW（E）090047为溯源,应用桥式双抗原夹心法建立丙型肝炎病毒抗体时间分辨荧光免疫分析法。结果自建方法在0．031—4．00NCU／ml内,相关系数可达0．99;分析内和分析间变异系数均小于10％;灵敏度可达0．016NCU／ml;校准品的效价比在0．90～1．10,平均回收率为101．47％;与相关疾病的抗原或抗体无明显交叉反应,其表观浓度值均小于0．03NCU／ml;参考值为0．05NCU／ml;符合国家检定标准的要求;37℃恒温箱烘烤7d后检测性能无明显改变;与同类方法学比对符合性好。结论自建方法精密度好,灵敏度高,特异性强,准确性好,线性范围宽,符合率高,能满足临床检测需要。     

甲状腺过氧化物酶抗体间接时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

目的建立甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体间接时间分辨荧光免疫分析法（TRFIA）。方法用TPO抗原包板,用铕（Eu^3＋）标记兔抗人IgG做标记物,建立检测人血清TPO抗体的间接TRFIA。结果TPO抗体-TRFIA的敏感性为1.0 IU/mL;线性范围达1 000 IU/mL;批内变异系数（CV）为3.1%-3.6%,批间CV为3.3%-3.6%;平均回收率为98.89%;与电化学发光分析法（ECLIA）比对,相关系数达0.983 2;与临床诊断高度相关。结论本研究建立的TPO抗体-TRFIA是一个高灵敏和可靠的检测方法,有助于甲状腺疾病的临床诊断。     

时间分辨荧光免疫分析法及其临床应用

时间分辨荧光免疫分析法(Time-ResolvedFluoroimmunoassay,TR-HA)同荧光免疫分析法(FIA)的不同之处在于标记物不是荧光素,而是采用稀土元素铕(Eu)标记抗原或抗体。基于Eu~(3+)独特的光谱学性质,配合荧光检测仪的时间门电路的使用,从而解决了FIA 的自然本底荧光干挠问题,大大提高了免疫分析的灵敏度(10~(-17)mol/L),接近或略高于RIA 法,且没有放射性危害和放射性废物。该技术具有测量范围宽、特异性强、标记物稳定及货架寿命长、检测速度快、操作较简便等优点。因此,自八十年代初期崛起后,迅速得     

丙型肝炎病毒抗体的时间分辨荧光分析法检测

解离 增强时间分辨荧光免疫分析法 (ＤＥＬＦＩＡ)以具有双功能基团的镧系元素螯合物铕标二抗 (羊抗人ＩｇＧ)为示踪物[1] ,采用固相夹心法 ,在免疫反应完成后加入特殊的增强液 ,将铕从标记抗体上解离下来 ,并与增强液中的组分形成新的具有强烈荧光的螯合物 ,荧光强度与被测标本的浓度成正比。我们采用ＤＥＬＦＩＡ对丙型肝炎抗体进行定量分析 ,以酶联免疫法对照 ,结果报告如下。1　材料与方法1 1　标本来源　苏州大学附属第二医院 ,江苏省肿瘤医院 ,南京钟阜医院抗 ＨＣＶ阳性标本 ,静脉采血分离血清 - 2 0℃保存。1 2　试剂　由美生公司提…     

时间分辨荧光免疫分析法与ELISA检测丙型肝炎病毒抗体的比较

目的探讨时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)与酶联免疫吸附试验(ELISA)检测丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)的临床应用价值。方法对189例HCV疑似感染者血清标本,同时采用TRFIA和ELISA进行抗-HCV检测。结果在189例标本中,TRFIA检测抗-HCV阳性53例,ELISA阳性45例,两种方法差异无统计意义(P0.05),符合率为95.77%。当标本中抗-HCV的S/CO≥2时,两种方法差异无统计学意义(P0.05),但当1≤S/CO2时,两种方法阳性检出率差异有统计学意义(P0.05)。结论 TRFIA检测抗-HCV与ELISA相比,特异性好、灵敏度高,提高了临床检测水平,具有较高的临床应用价值。     

弓形虫IgG和IgM抗体双标记时间分辨荧光免疫分析的建立及其初步临床应用

TOX是一种对人类具有极大潜在危害的细胞内寄生原虫,我国人群感染率为5%～20%[1].当患有艾滋病、肿瘤等免疫功能受损或抑制性疾病时,TOX作为一种机会性感染寄生虫可引起广泛的临床症状,甚至死亡[2].TOX还是引起先天性感染疾病的病原体之一,孕妇妊娠期间感染可造成胎儿宫内感染,常致畸胎、死胎,存活者也常有畸形、弱智及发育障碍[1,3].目前国内外对TOX感染的实验室诊断主要是血清IgG和IgM抗体检测.我们研制双标记TRFIA分析法定量检测TOX-IgG/IgM的试剂盒,并与德国赛润公司的ELISA试剂盒检测临床标本结果进行比较评价.     

时间分辨荧光免疫法测定乙型肝炎病毒标志物

目的 探讨100例经酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)和乙型肝炎病毒核心抗体(抗-HBc)IgG均阳性的患者,再用时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)检测其病毒含量,了解二者的符合程度、灵敏度及其特异性,并与HBV DNA含量作比较.方法 用TRFIA测定100例上述患者乙型肝炎病毒两对半(HBV M)血清含量,实时荧光定量聚合酶链反应法测定HBV DNA含量.结果 100例乙型肝炎患者中,HBsAg、HBeAg、抗-HBc均阳性者45例,HBsAg、抗-HBe、抗-HBc均阳性者42例,HBsAg、抗-HBc均阳性者13例,阳性率分别为45%、42%、13%.且HBV DNA含量处在一个低水平(102～104copy/ml)的患者最多,但有的患者病毒含量很高,在106～108copy/ml之间.结论 TRFIA法特异性,敏感性都比ELISA高,用TRFIA可使低水平乙型肝炎病毒(HBV)感染或复制得以检出,同时TRFIA用于HBV M含量检测可间接反映病毒的感染状况,同时也为临床疗效提供动力学观察.     

时间分辨荧光免疫分析法测定HBsAg的方法学评价

<正>时间分辨荧光免疫分析技术(TRFIA)具有灵敏度高、重复性好、标准曲线动态范围宽、标志物存储时间长等优点,已广泛用于临床,特别是近年来,作为检测乙型肝炎标志物的方法之一已逐步受到人们的重视。关于TRFIA的方法学评价较全面的报道并未见到,本文以检测HBsAg为例,对TRFIA方法学评价作了以下探讨。     

孕妇血清巨细胞病毒IgM抗体调查

近期研究发现，在新生儿先天性感染中，由巨细胞病毒（Cytomegalovirus，CMV）引起的高达3．5％[1]。受染新生儿表现为小头畸形、肝脾肿大、黄疸、紫癜、肺炎等，此先天性感染多因母亲在孕期患有CMV活动性感染，出现CMV血症，病毒直接通过胎盘进入胎儿体内[1]。因此，早期诊断孕妇是否存在CMV感染是阻断CMV传播，实现优生的首要环节。本文应用快速ELISA法调查兰州地区孕妇血清特异性CMV－IgM抗体水平，现报道如下。1材料与方法1.1研究对象在我院产科建卡定期检查的孕妇共974例。年龄21～37y，按孕程分为三组：一组孕程4～12w，4…     

总甲状腺素时间分辨荧光免疫分析方法的建立

目的 建立总甲状腺素(TT4)时间分辨荧光免疫分析(TrFIA)竞争检测法.方法 用羊抗鼠IgG包板,对应的抗T4抗体(Anti-T4)为竞争抑制抗体,用Eu3 标记T4-BSA做标记物,以β-萘甲酰三氟丙酮为主要成分的增强液,竞争法TrFIA检测人血清中的TT4.结果 TT4-TrFIA的灵敏度达6.895 nmol/L(1.000 nmol/L=0.7778 ng/ml);批内CV为4.12%～5.62%,批间CV为5.58%～8.61%;特异性好;平均回收率为99.16%;线性范围在11.0～300.0 nmol/L之间;热稳定性好;与TT4微粒子酶免疫分析技术(MEIA)比对,相关系数达0.9544.结论 建立的TT4-TrFIA法具有灵敏度高,特异性强,稳定性好,测定范围宽,检测时间短和非放射性等优点,具有良好的应用价值.     

时间分辨荧光免疫法检测乙型肝炎病毒标志物

目的探讨时间分辨荧光免疫分析技术（TRFIA）检测乙型肝炎病毒（HBV）5项血清学指标的临床应用价值。方法用酶联免疫吸附试验（ELISA）和TRFIA同时测定188例患者HBV血清标志物5项指标。结果两种方法测定乙型肝炎表面抗原（HBsAg）、乙型肝炎表面抗体（抗-HBs）、乙型肝炎e抗原（HBeAg）、乙型肝炎e抗体（抗-HBe）、乙型肝炎核心抗体（抗-HBc）结果符合率分别为94．7％、96．8％、95．7％、89．4％和90．4％,经成组卡方检验,两种检测方法结果相关性良好（P〈0．01）,经配对卡方检验,两种方法检测HBsAg、抗-HBs、HBeAg结果差异无统计学意义（P〉0．05）,检测抗-HBe、抗-HBc结果差异有统计学意义（P〈0．05）。TRFIA法阳性率高于ELISA法。结论TRFIA法是一种灵敏、特异、准确的定量检测方法,对评估HBV感染后病情转归及抗病毒治疗的疗效具有重要的临床意义。     

P—选择素时间分辨荧光免疫分析法的建立及临床应用

目的　建立时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA)用于检测血栓形成相关疾病患者的血浆P 选择素的含量 ,并探讨其临床意义。方法　用抗人血小板单抗SZ 5 1 IgG包被 ,将Eu3+ N (对 异硫氰酸苄基 ) 二乙烯四乙酸与另一个血小板单抗S12连接以制备Eu3+ S12示踪剂 ,β 二酮为发光增强剂 ,采用平衡饱和法建立时间分辨荧光免疫分析法 (TRFIA)用于分析糖尿病、高血脂、脑梗塞患者及正常人血浆中P 选择素含量的变化 ,并与流式细胞术 (FCM)和酶标记免疫吸附分析法 (ELISA)作比较。结果　方法灵敏度为 0 98ng/ml,批内和批间CV分别为 4 2 3 %和 6 6 7% ,平均回收率为 97 2 4% ,可测范围为 4 1～ 80ng/ml。应用TRFIA测定 2 2例高血脂、18例脑梗塞患者和 2 0例正常人血浆中P 选择素含量 ,分别为 8 0 8± 1 4ng/ml,12 5 1± 3 6ng/ml和19 0 4± 7 9ng/ml,显著高于正常人 (3 0 7± 1 6 4ng/ml) (P <0 0 1)。同时与ELISA和FCM方法检测血浆内P 选择素和血小板膜表面表达情况作比较 ,结果一致。结论　TRFIA检测血浆P 选择素的方法可靠、灵敏、方便 ,具有较高的临床使用价值     

瞬时受体电位通道5时间分辨荧光免疫分析法的建立和验证

目的以瞬时受体电位通道5(TRPC5)作为乳腺癌肿瘤耐药标志物,建立乳腺癌耐药体外诊断方法。方法采用时间分辨荧光技术建立TRPC5时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA),以TRPC5-血蓝蛋白(KLH)为免疫原免疫新西兰大白兔制备抗TRPC5抗体;黏蛋白(MUC1)抗体包被免疫磁珠处理样本;TRPC5多肽包被96孔板为固相抗原,与游离TRPC5共同竞争有限的抗TRPC5抗体;用Eu3+-羊抗兔抗体进行示踪。结果 TRPC5 TRFIA的敏感性为1 ng/m L,精确度测量范围为5~500 ng/m L,各孔计数值变异系数(CV)为5.5%,平均回收率为94.6%,运用TRFIA检测,3个效应点检测值ED80、ED50、ED20分别为(4.68±0.13)、(321.66±2.77)和(714.42±4.07)ng/m L,经过临床样本检测发现化疗耐药患者的样本检测结果与化疗耐受尚可患者相比,差异有统计学意义(P0.000 1)。结论 TRPC5 TRFIA可对乳腺癌化疗耐药及化疗尚可患者进行区分,具有临床应用意义,值得进一步研究。     

时间分辨荧光免疫分析法乙型肝炎血清标志物分析灵敏度的建立与分析

[目的]乙型肝炎表面抗原和表面抗体定量测定试剂盒。[方法]时间分辨荧光免疫分析法的分析灵敏度进行建立与分析，以便更好的指导临床诊断和进行流行病学研究。[结果]通过实验研究，乙型肝炎病毒表面抗原定量检测试剂盒和表面抗体定量检测试剂盒的检测低限分别为0．0356ng／ml和0．548mIU／ml，生物检测限分别为0．200ng／ml和5．00mIU／ml，功能灵敏度分别为0．200ng／ml和5．00mIU／ml，线性范围分别为0．200ng／ml-300ng／ml和5．00mIU／ml～1200mIU／ml，并达到中国药品生物制品检定所检定要求。[结论]时间分辨荧光免疫分析法乙型肝炎病毒定量检测试剂盒具有灵敏度高，线性范围宽，特异性强的特点，已能有效应用于临床体外诊断和流行病学研究。