端粒酶抑制剂对舌癌细胞株端粒酶活性和细胞周期的作用

目的研究舌癌细胞经端粒酶抑制剂(3′-叠氮-3′-脱氧胸腺核苷,AZT)处理后端粒酶活性和细胞周期的变化情况.方法采用端粒重复序列扩增(telomeric repeat amplification protocol,TRAP)-PCR-ELISA方法检测舌癌细胞系Tca8113经AZT作用前后端粒酶活性的变化,流式细胞仪分析细胞周期变化.结果AZT可显著抑制Tca8113细胞端粒酶活性,而且这种抑制效应有浓度依赖性(经0.3、0.6、1.0、1.5 mol/L的AZT处理12小时的Tca8113端粒酶活性分别为0.69±0.03、0.61±0.08、0.53±0.11、0.50±0.02,未经AZT处理的Tca8113细胞端粒酶活性为0.76±0.06).流式细胞仪结果显示经AZT处理的细胞G2/M期含量显著增高(62.8%),未处理组为19.7%(P＜0.05).结论AZT可以明显抑制舌癌细胞的端粒酶活性,并使肿瘤细胞停滞在G2/M期,有抗肿瘤的作用.     

hTR基因反义核酸对K562细胞端粒酶活性和凋亡的影响

目的: 研究人类端粒酶(hTR)基因的反义核酸对K562细胞端粒酶活性和细胞凋亡的影响.方法:采用TRAP法检测K562细胞在反义核酸处理前后端粒酶活性的变化,以及采用TUNEL法观察反义核酸处理前后细胞凋亡的变化.结果:hTR基因反义核酸能有效抑制K562细胞的端粒酶活性,并且诱导K562细胞发生凋亡.结论:hTR基因反义核酸能显著抑制肿瘤细胞的端粒酶活性,为恶性肿瘤治疗提供了一条新的有效的途径.     

苦参碱对K562细胞端粒酶hTERT-mRNA表达及其酶活性影响作用的研究

目的：观察苦参碱对K562细胞hTERT-mRNA表达及端粒酶活性的影响作用,并明确两者的相关性。方法：以0.1～2mg/ml苦参碱处理K562细胞48h后,RT-PCR检测其hTERT-mRNA表达,同时行TRAP-PCR-ELISA端粒酶活性检测。结果:K562细胞为一强端粒酶活性细胞株,在浓度分别为0.1、05、10、20mg/ml苦参碱作用后,K562细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,同时伴有端粒酶活性下降,抑制率分别为0.％、13.％、91.7％和98.6％。结论：苦参碱可降低K562细胞hTERT-mRNA表达,同时伴端粒酶活性下降;端粒酶活性强度与hTERT-mRNA表达有关。     

反义寡核苷酸对K562细胞增殖和端粒酶活性的影响

 目的　研究靶向封闭端粒酶反转录酶（hTERT）mRNA的反义硫代寡核苷酸（ASPSODN）对K562细胞目的基因的抑制及其对端粒酶活性及细胞增殖周期和凋亡的影响 。方法　ASPSODN转染到人类红白血病细胞株K562,采用MTT法、酶联免疫吸附（ELISA）法和流式细胞术（FCM）检测K562细胞的增殖、端粒酶活性、细胞凋亡和细胞周期的改变,RT-PCR检测hTERT mRNA的表达。结果　0.6 μmol／L的ASPSODN（0.42±0.16）能明显下调hTERT表达（P＜0.05）,端粒酶相对活性降至52 %;MTT法检测显示明显抑制K562细胞增殖活性;FCM显示细胞凋亡率为10.31 %,PI染色显示细胞被阻止在G1／G0期,S期及G2／M期的细胞减少,但无特征性的凋亡峰。结论　ASPSODN靶向 hTERT 能特异性抑制K562细胞hTERT mRNA的表达,明显下调端粒酶活性,抑制K562细胞增殖,并通过降低细胞的端粒酶活性而诱发细胞凋亡。     

异土木香内酯通过bcr-abl-STAT5信号通路抑制慢性粒细胞白血病耐药细胞K562/A02增殖

目的 探讨异土木香内酯对慢性粒细胞白血病耐药细胞K562/A02增殖的抑制作用及其机制.方法6.25、12.5、25、50、100μmol/L的异土木香内酯作用于K562/A02细胞24、48 h,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测其对K562/A02细胞的增殖抑制效果;10、15、20μmol/L异土木香内酯作用于K562/A02细胞24 h,流式细胞术检测细胞周期及凋亡;Western blot法检测增殖相关蛋白表达水平.多组间比较采用单因素方差分析.结果异土木香内酯能够显著抑制K562/A02细胞增殖,并呈浓度依赖性(P<0.05),作用24 h的半数抑制浓度(IC50)值为(15.00±1.03)μmol/L;阴性对照组及10、15、20μmol/L异土木香内酯作用后K562/A02细胞凋亡率分别为(2.71±0.52)%、(19.10±1.55)%、(27.61±2.32)%和(32.01±3.01)%,呈浓度依赖性(F=33.901,P<0.05);S期细胞比例分别为(57.80±2.11)%、(68.62±2.89)%、(78.44±3.51)%和(80.61±2.90)%,呈浓度依赖性(F=51.328,P<0.05).异土木香内酯明显降低bcl-2、p-bcr-abl、p-STAT5、细胞周期蛋白依赖性激酶2(CDK2)和细胞周期蛋白A(cyclin A)的表达(P<0.05),上调细胞色素C、Bax和p21的表达(P<0.05).结论异土木香内酯能够通过bcr-abl-STAT5信号通路抑制K562/A02细胞增殖.     

冬凌草甲素对K562细胞端粒酶活性调控和细胞周期的影响

目的 目的：研究冬凌草甲素(ORI)对K562细胞端粒酶活性及其细胞周期的影响。方法 采用MTT法观察不同浓度ORI对K562细胞增殖的影响：采用端粒重复序列扩增法(TRAP)．酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测了端粒酶活性变化；采用流式细胞仪测定细胞周期各时相百分比。结果 ORI可明显抑制K562细胞增殖；在一定的浓度范围内，ORI可下调K562细胞端粒酶活性。流式细胞仪结果显示，经ORI处理的K562细胞，细胞周期各时相分布发生变化，G2／M期细胞增多，S期细胞减少。结论 ORI可下调K562细胞的端粒酶活性，其机制可能与其细胞周期阻滞作用有关。     

高三尖杉酯碱对慢性粒细胞白血病患者骨髓CD+34细胞端粒酶活性的影响

目的:观察高三尖杉酯碱(HHT)对慢性粒细胞性白血病(CGL)患者骨髓CD+34细胞端粒酶活性的影响.方法:采用TRAP端粒酶测定法测定与HHT短期培养后的患者骨髓CD+34细胞端粒酶活性的变化.结果:培养24 h后,HHT使CGL患者骨髓CD+34细胞端粒酶活性下降了51%,而正常CD+34细胞端粒酶活性仅下降了32%,差异有显著性(P＜0.05).羟基脲(HU)使CGL患者骨髓CD+34细胞端粒酶活性下降了21%,使对照组酶活性下降了24%,差异无显著性(P＞0.05).结论:HHT对CGL患者和正常骨髓CD+34细胞端粒酶活性均有抑制作用,其抑制作用强于HU;HHT对CGL患者CD+34细胞端粒酶活性的抑制作用强于对正常CD+34细胞的抑制.     

TNF-α对白血病K562及K562/ADM细胞hTERT及mdr1表达的抑制作用

目的:观察TNF-α对人髓系白血病细胞K562及其耐药细胞K562/ADM hTERT基因表达、端粒酶活性的抑制以及对多药耐药(multidrug resistance-1,mdrl)基因表达的影响。方法:K562及K562/ADM细胞传代培养,加入5×10~6U/L的TNF-α培养24h进行诱导实验;MTT法检测K562和K562/ADM细胞的增殖能力,流式细胞术检测K562和K562/ADM细胞的凋亡,RT-PCR检测hTERT和mdrl mRNA的表达,ELISA法检测端粒酶活性。结果:TNF-α诱导K562及K562/ADM细胞表现持续的生长抑制作用,且具有时效关系(P<0.05);TNF-α诱导K562及K562/ADM细胞的凋亡率增加(P<0.05),而且耐药细胞K562/ADM凋亡的增加更明显(P<0.01);hTERT基因与端粒酶活性的表达密切相关(r=0.983,P<0.05),TNF-α诱导后两者也同时下调(P<0.01);多药耐药mdrl基因伴随着hTERT基因的下调而下调(r=0.966,P<0.05)。结论:TNF-α能诱导白血病K562及K562/ADM细胞系hTERT基因表达的抑制,端粒酶活性下调的同时多药耐药基因mdrl的表达也下调。     

冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制

目的：研究冬凌草甲素诱导白血病K562细胞凋亡的机制。方法：以不同浓度的冬凌草甲素作用于体外培养的K562细胞，检测细胞生长抑制率．观察细胞凋亡时的形态学变化．对细胞凋亡前后的端粒酶活性进行检测。结果：冬凌草甲素可显著降低K562细胞的端粒酶活性．抑翻细胞的生长，诱导细胞发生凋亡。并呈现出明显的量-效与时-效关系。结论：冬凌草甲素能抑制K562细胞的生长并诱导细胞发生凋亡．降低细胞端粒酶活性可能是其重要作用机制之一。     

若参碱对K562细胞端粒酶hTERT—mRNA表达及其酶活性影响作用的研究

目的：观察苦参碱对K562细胞hTERT-mRNA表达及端粒酶活性的影响作用,并明确两者的相关性。方法：以0．1－2mg/ml苦参碱处理K562细胞48h后,RT－PCR检测其hTERT-mRNA表达,同时行TRAP－PCR－ELISA端粒酶活性检测。结果：K562细胞为一强端粒酶活必细胞株,在浓度分别为0．、0．5、1．0、2．0mg/ml苦参碱作用后,K562细胞hTERT-mRNA表达明显受抑,同时伴有端粒酶活性下降,抑制率分别为0．3％、13．0％、91．7％和98．6％。结论：苦参碱可降低K562细胞hTERT-mRNA表达,同时伴端粒酶活性下降;端粒酶活性强度与hTERT-mRNA表达有关。     

Farnesyltransferase inhibitors: antineoplastic properties, mechanisms of action, and clinical prospects

Farnesyltransferase (FTase) inhibitors are among the current wave of molecularly targeted anti-cancer agents being used to attack malignancy in a rational manner. A large body of preclinical data indicates that FTase inhibitors block cancer cell proliferation through both cytostatic and cytotoxic effects. Interestingly, FTase inhibitors have rather limited effects on normal cell function, suggesting that they may target unique aspects of cancer cell pathophysiology. The development of FTase inhibitors was predicated on the discovery that the Ras oncoproteins must be post-translationally modified to transform cells. However, recent work indicates that the anti-neoplastic effects of FTase inhibitors depend on altering the post-translational modifications of non-Ras proteins as well. In particular, a critical target protein that responds to FTase inhibition by blocking tumor cell growth is RhoB, an endosomal Rho protein that functions in receptor trafficking. In this review, we survey the biological foundations for the clinical development of FTase inhibitors, and consider some of the latest mechanistic studies that reveal how these agents affect cellular physiology.     

Role of LMP1 in immune control of EBV infection

The Epstein-Barr virus (EBV) encoded latent membrane protein (LMP1) plays a crucial role in the long-term persistence of this virus within the cells of the immune system. Not only is this protein critical for the transformation of resting B cells by EBV, it also displays pleiotropic effects on various cellular proteins expressed in the host cell. These include up-regulation of expression of B cell activation antigens, adhesion molecules and various components of the antigen processing pathway. Here we discuss how LMP1 acts like an expression 'switch' which, depending on the stage of EBV infection, manoeuvres various pathways that either modulate the immune system towards or against its survival.     

Identification of EBV transforming genes by recombinant EBV technology

Epstein-Barr virus (EBV) is able to infect primary B-lymphocytes but usually does not proceed to replicate more virions. Instead, EBV persists as an incomplete virus and expresses 12 gene products that transform the growth of these cells into continuously proliferating lymphoblastoid cell lines. Because EBV is associated with several human malignancies, there is intense interest in delineating the molecular functions of these EBV gene products in transformation. This review focuses on the recombinant EBV technologies that have been developed to introduce specific mutations into EBV and test the functions of these EBV genes in primary B-lymphocyte growth transformation.     

New aspects of integrin signaling in cancer

Members of the integrin family of cell adhesion receptors influence several important aspects of cancer cell behavior, including motility and invasiveness, cell growth, and cell survival. Engagement of integrins with extracellular matrix (ECM) proteins can activate members of the Rho-family of small GTPases; conversely, Rho- and Ras-family proteins can influence the ability of integrins to bind their ligands. These events impinge on the control of cell motility, and ultimately on invasive and metastatic behavior. Integrin engagement with ECM also has important effects on cell survival, particularly for cells of epithelial origin. In some cases, specific integrins have selective effects on the efficiency of signal transduction in cell survival pathways.     

腹部压块对膈肌运动影响的研究

目的 :研究腹部压块对膈肌运动的影响。方法 :选择拟行立体适形放疗患有肺癌或肝脏肿瘤的患者 2 0例。按治疗体位仰卧于体部立体放疗定位负压袋内 ,待患者呼吸平稳后 ,将灯光野的中心点置于膈顶运动的最低点 ,在膈肌运动至最高位时拍摄照片 ,测量膈肌运动的最大幅度 ;然后 ,将心形腹部压块放置于患者剑突下 ,并用定位框架的腹带交叉固定 ,按压程度以不引起患者呼吸困难或其他不适为标准 ,5min后按上述方法再次测量膈肌运动的最大幅度。结果 :2 0例患者未加腹部压块的运动幅度为0 6 2～ 2 6 7cm ,平均 (1 4± 0 6 4)cm ,加腹部压块后的膈肌运动幅度为 0 2 8～ 2 0 8cm ,平均 (1 0±0 5 5 )cm ,加腹部压块后膈肌运动幅度平均减小 (0 4± 0 34)cm ,P =0 0 0 0。加腹部压块后 90 % (18/2 0 )的患者膈肌运动幅度受到不同程度的限制 ,但有 10 % (2 /2 0 )的患者膈肌运动幅度增加。结论 :腹部压块可使大部分患者膈肌运动的幅度减小 ,但少部分患者例外 ,即腹部压块并不能使所有膈肌周围肿瘤的照射容积减少。建议在制定放射治疗计划前应预先进行测量和评价     

ABCG2在肺癌中表达的定量研究

目的 观察ABCG2在肺癌和癌周肺组织的表达,从量化角度阐明其在肺癌组织中表达的病理学意义.方法 常规石蜡包埋、HE切片确诊,用免疫组化SP法检测ABCG2在肺癌和癌周肺组织的定位和表达,用LeicaQ500MC图像分析系统对其表达强度进行定量分析,并用表达的阳性单位(positive unit PU)反映其表达强度.结果 ABCG2蛋白在肺癌和癌周正常肺组织中的表达主要定位在细胞质和细胞膜.在癌周正常肺组织的支气管和细支气管上皮呈弥漫表达,腺上皮呈灶性表达;肺鳞癌和肺腺癌弥漫或大片表达,肺鳞癌表达的PU值高于肺腺癌(P＜0.001),肺大细胞癌和肺小细胞癌不表达,PU值接近于零.癌周肺组织表达的PU值高于各型肺癌(P＜0.05).ABCG2蛋白表达的PU值在肺癌原发灶和转移灶之间无差别(P＞0.05),且与肺癌患者的性别、年龄、转移和TNM分期未见明显相关性(P＞0.05),与肺癌分化程度有关(P＜0.001).分化程度越高,PU值越高,但高分化肺癌和癌周肺组织的表达PU值差异无显著性(P＞0.05).结论 ABCG2蛋白表达程度与肺癌类型及分化程度具有相关性,可能成为判断其指标之一.     

Post-translational regulation of COX2 activity by FYN in prostate cancer cells

While increased COX2 expression and prostaglandin levels are elevated in human cancers, the mechanisms of COX2 regulation at the post-translational level are unknown. Initial observation that COX2 forms adduct with non-receptor tyrosine kinase FYN, prompted us to study FYN-mediated post-translational regulation of COX2. We found that FYN increased COX2 activity in prostate cancer cells DU145, independent of changes in COX2 or COX1 protein expression levels. We report that FYN phosphorylates human COX2 on Tyr 446, and while corresponding phospho-mimetic COX2 mutation promotes COX2 activity, the phosphorylation blocking mutation prevents FYN-mediated increase in COX2 activity.     

74例原发性气管腺样囊性癌的临床分析

目的探讨原发性气管腺样囊性癌的临床特点。方法74例患者均经病理或细胞学证实。T分期中T18例（10.8%）,T219例（25.7%）,T323例（31.1%）,T424例（32.4%）。纵隔淋巴结阳性8例（10.8%）。远处转移2例（2.7%）。62例（83.8%）接受手术治疗,27例手术完全切除,R1或R2切除35例。单纯手术24例,单纯放疗12例,综合治疗38例。结果复发或转移的患者共43例（58.1%）,局部复发20例,远处转移17例,局部复发＋远处转移6例。除2例外,所有远处转移患者均有肺转移。第一次复发或转移的中位时间为32月,第二次、第三次复发或转移的中位时间分别为12月和6月。所有患者中位生存时间55月,5年、10年总生存率分别为69.7%和35.9%。结论原发性气管腺样囊性癌治疗效果较好。病变长度、T分期以及包含手术的治疗可能是影响预后的因素。患者治疗后出现多次复发或转移,积极治疗仍能获得长期生存的机会。远处转移中肺转移最多见。     

喉原发性恶性淋巴瘤的诊断治疗(附11例报告)

目的根据１１例原发于喉的恶性淋巴瘤的病例，结合文献探讨分析该病的诊断、治疗及预后。材料与方法１９７１～１９９５年共收治１１例原发于喉的恶性淋巴瘤，其主要临床表现为声嘶、咽喉痛、吞咽痛、进食异物感、吞咽困难等。间接喉镜或纤维导光镜可见声门上区或声门区肿物，肿物形态不一，可为息肉样、结节样、粘膜光滑性肿物或仅为坏死糜烂性改变。所有病例均经病理证实为非霍奇金淋巴瘤（Ｎｏｎ－Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓｌｙｍｐｈｏｍａ，ＮＨＬ），确诊后均行放疗，６～８ＭＶＸ线，局部野２例，扩大野９例，ＤＴ５０～７０Ｇｙ，中位ＤＴ５５Ｇｙ，放疗后均未行预防性化疗。结果全部病人疗后随访１８～１８０月，其中７例无病生存１８～１８０月，４例于疗后９～１２０月复发，均位于照射野外，２例因不能接受有效化疗死亡，２例接受正规放、化疗至今已分别无瘤生存３６月、６０月。结论原发于喉的恶性淋巴瘤少见，临床上容易误诊，确诊有赖于病理证实。放疗的局部控制作用良好，即使复发，积极治疗仍有治愈的可能。     

原发性小肠恶性肿瘤的诊治

目的探讨原发性小肠恶性肿瘤临床表现的共同规律和有效的诊断方法及治疗措施,以利早期诊断与提高疗效。方法对７５例原发性小肠恶性肿瘤进行分析,生存率计算用寿命表法,生存分析用ＣＯＸ模型。结果１３例做Ｘ线胃肠钡餐检查,诊断准确率达８４．６％。根治性切除术后１,３,５年生存率分别为８７．５％、６８．７％和４８．１％,姑息性切除术后１,３,５年生存率分别为５７．９％、３３．８％和２４．１％。用ＣＯＸ模型对各临床因素进行预后分析,选入模型的因素有年龄、组织学类型、肿瘤部位和手术方式。结论Ｘ线胃肠钡餐检查是最有价值的诊断方法。根治性手术切除是最有效的治疗手段。影响原发性小肠恶性肿瘤预后的因素有年龄、组织学类型、肿瘤部位和手术方式,而化学治疗意义不大。