结核分支杆菌耐异烟肼分子机制的研究

目的探讨耐异烟肼结核分支杆菌KatG基因突变在结核分支杆菌耐异烟肼耐药性测定中的应用价值。方法采用聚合酶链反应——单链构象多态性(PCR-SSCP)分析72株结核分支杆菌KatG基因突变。其中32株为异烟肼(INH)敏感株,40株为INH耐药株,用PCR-SSCP图谱鉴定扩增产物有无突变,H37RV标准株作对照。结果所有INH敏感株SSCP带谱与对照相同;40株INH耐药株中15株与对照相同,25株有不同程度的差异,INH耐药KatG基因突变或缺失的阳性率为62.5%。结论多数结核分支杆菌耐INH是由于其KatG基因突变所致,用PCR-SSCP筛选突变株可达到快速检测结核分支杆菌INH耐药的目的。     

84例初治肺结核患者的菌型鉴定与耐药性分析

目的了解门诊和住院初治肺结核患者的耐药情况,为临床初治肺结核患者的治疗提供实验数据。方法收集2006～2008年初治肺结核患者痰中分离培养的84株结核分支杆菌菌株进行菌型鉴定,并对链霉素(SM)、异烟肼(LNH)、利福平(RFP)、乙胺丁醇(EMB)的耐药性进行测试。结果84株结核分支杆菌中,人型结核分支杆菌83株,牛型分支杆菌1株;84株结核分支杆菌中耐单药26株,耐2种药13株,耐3种药2株,其耐药率分别为30.9%、15.5%和2.4%。结论应重视初治肺结核患者的耐药情况,根据结核杆菌药敏试验结果合理使用抗结核药物。     

用噬菌体检测技术检测结核分支杆菌的临床应用评价

目的评价噬菌体检测技术检测临床标本中结核分支杆菌的优缺点.方法对52名活动性肺结核患者的痰标本分别用涂片镜检法、噬菌体法、聚合酶链反应(PCR)法进行结核分支杆菌检测,同时选取15例正常人痰标本作为对照组.结果 3种方法检测15例对照组标本均无1例阳性.但研究组噬菌体法阳性标本48例,镜检法阳性标本38例,PCR阳性标本50例,其中痰涂片镜检阳性者,噬菌体法和PCR法均为阳性;而50例PCR法阳性者包含了48例噬菌体法阳性者,另有2例仅PCR法阳性.结论噬菌体法检测结核分支杆菌立意新颖,准确可靠.其对结核分支杆菌的检出率大大高于涂片镜检法,同时又不需要特殊的实验室和实验设备,值得临床检验科推广使用.     

PCR技术在结核分支杆菌诊断及耐药性检测中的应用

对肺结核及肺外结核的早期诊断一直是临床医学的一个挑战;痰涂片检查简单易行但检出率低;结核菌培养是诊断的金标准但费时且菌量较少时出现假阴性是其主要缺陷.近年来结核杆菌耐药株的增多使问题更趋复杂.聚合酶链反应(PCR)检测技术,以灵敏度高、特异性强、简便、快速等优点,在结核分支杆菌的快速诊断及耐药性检测方面发挥了重要作用.     

聚合酶链反应-探针杂交-酶显色用于结核分支杆菌的检测

目的　评价聚合酶链反应 探针杂交 酶显色方法 ,检测结核分支杆菌。方法　收集 131例活动性肺结核患者和 30例非结核呼吸系疾病患者的痰标本以双盲法进行痰涂片抗酸染色检查 ,结核菌培养、PCR 探针杂交 酶显色法、PCR 琼脂糖凝胶电泳技术检查对比。结果　涂片法、培养法、PCR 探针杂交 酶显色法的敏感性分别为 2 6 72 %、4 1 2 2 %、70 2 3% ,PCR 探针杂交 酶显色法的敏感性显著高于培养法和涂片法 (P <0 0 1)。PCR 探针杂交 酶显色法和PCR琼脂糖凝胶电泳法的敏感性分别为 70 2 3%、70 99% ,特异性分别为 96 6 7%、86 6 7% ,前者特异性比后者高 ,且PCR 探针杂交 酶显色法只检出结核分支杆菌和牛型分支杆菌。结论　PCR 探针杂交 酶显色技术检测结核分支杆菌灵敏度高 ,特异性好 ,简便快速 ,同时能筛检非结核分支杆菌。因此 ,该技术具有很强的临床应用价值     

结核分支杆菌耐喹诺酮等四种耐药基因检测的临床应用和评价

目的：采用聚合酶链反应-单链构象多态性分析(PCR—SSCP)检测结核分支杆菌耐药基因(rPOB、katG、rPSL和gyrA)，评估它的临床应用价值。方法：通过Bactec-960快速培养，利用PCR-SSCP和药物敏感试验了解96例肺结核病人结核分支杆菌耐药情况，分析临床治疗效果。结果：利福平、异烟肼、链霉素和喹诺酮类耐药率分别为59．4％、52．1％、62．5％和51．0％。分离株rPOB、katG、rPSL和gyrA基因突变率分别为57．3％、45，8％、58，3％和47．9％，药敏试验联合耐药基因检测指导治疗效果满意。结论：结核分支杆菌耐药与基因突变有关，耐药基因检测指导治疗是一种新探索，与药敏试验联合应用可互相弥补，可成为临床指导用药的好方法。     

噬菌体裂解法与TaqMan-PCR法检测结核分支杆菌的比较

目的 :比较研究噬菌体裂解法与 Taq Man- PCR法在结核分支杆菌快速检测中的价值。方法 :用噬菌体裂解法和 Taq Man- PCR法检测 3株结核分支杆菌标准株、1 3株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌以及 2 4 5份肺结核患者的痰标本、1 2 8例结核性胸膜炎胸腔积液、4 9例非结核性痰标本。结果 :噬菌体裂解法 :3株结核分支杆菌标准株均为阳性 ,而 1 3株非结核分支杆菌和 7株非分支杆菌、4 9例非结核性痰标本均为阴性 ;应用噬菌体裂解法和 Taq Man- PCR法检测 2 4 5份肺结核患者的痰标本的阳性率分别为 4 6 .9%和 5 1 .0 %,二者差异无显著性 (P>0 .0 5 )。两种方法检测 1 2 8例结核性胸膜炎胸腔积液阳性率分别为 4 0 .6 %和 4 2 .2 %,二者差异无显著性 (P>0 .0 5 )。结论 :噬菌体裂解法简便、快速 ,具有较高的敏感性和特异性 ,是一种崭新的结核分支杆菌快速检测方法。     

结核分支杆菌耐链霉素耐药基因的检测

目的：探讨结核分支杆菌对链霉素(SM)的耐药分子机制,评估应用聚合酶链反应－单链构象多态性（PCR－SSCP）技术检测rpsL基因突变在结核分支杆菌对SM耐药性测定中的应用价值。方法：采用PCR－SSCP方法对71株结核分支杆菌临床分离株（其中药物敏感株35株,耐SM或含耐SM耐多药株36株）和30例耐SM肺结核病人痰标本的rpsL基因突变进行检测。结果：以结核分支杆菌H37RV为对照,35株药物敏感株的rpsL基因PCR扩增产物267bp片段SSCP图谱正常;36株耐SM分离株中,26株rpsL基因SSCP图谱异常,其突变率为72．2％。30例耐SM肺结核病人痰标本有22例PCR扩增阳性,14例SSCP图谱与H37RV株有差异,rpsL突变率为63．6％。结论：rpsL基因突变是SM耐药性的重要分子机制,PCR－SSCP技术可以快速、准确地检测结核分支杆菌rpsL基因突变,该技术有望直接用于临床标本耐药性检测。     

结核分支杆菌rpoB基因突变与对利福平耐药的关系

目的:研究结核分支杆菌耐利福平(RFP)分离株rpoB基因突变情况并评价英应用价值.方法:采用多聚合酶链式反应-单链构象多态性分析法(PCR-SSCP法)对60株结核分支杆菌rpoB基因进行检测.结果:以结核分支杆菌标准株H37Rv为对照,60株PCR扩增阳性的结核分支杆菌中,共有32株发生突变,总突变率为53.3%(32/60);24株药物敏感株有4株rpoB基因有突变,突变率为16.7%;36株耐药株中,28株rpoB基因有突变,突变率为77.8%.耐药菌株突变率明显高于敏感菌株的突变率(P<0.05).结论:rpoB基因突变是耐RFP结核分支杆菌耐药性的主要分子机制;应用PCR-SSCP可快速检测结核分支杆菌对RFP的耐药性.     

结核分枝杆菌耐药分析及基因检测研究

目的了解长春市结核分支杆菌菌株的耐药状况,建立适合我国国情的结核分支杆菌耐药株的快速检测手段。方法采用普通改良罗氏培养,对2004年7月-2007年12月间分离培养的结核分支杆菌进行菌株鉴定及药物敏感实验,并利用PCR反向斑点杂交技术(RDB)和测序方法对rpoBr、psL、KatG和embB基因进行检测。结果 625株结核分支杆菌中,其耐药比例为32.96%。耐药顺位次序为INH 18.17%、RIF 17.26%S、M 10.74%、EMB 7.31%。复治患者的耐药率高于初治患者。在随机抽取的菌株中,RDB检出的rpoBr、psL、KatG和embB基因突变率分别为88.9%、83.3%、91.6%和86.1%,和测序结果的符合率分别为87.9%,87.9%、91.4%和89.1%。结论长春市结核病患者总耐药比例高于我国结核病总耐药率,耐药状况具有本市的耐药特点,耐药的产生与菌株基因突变有较为密切的关系。结核病人耐药情况比较严重,需要更严格的执行结核病控制策略,防止耐药病人及耐药菌株的产生和传播。     

Management of complex tuberculosis cases: a focus on drug-resistant tuberculous meningitis

ABSTRACT

Introduction: Drug-resistant tuberculous meningitis has been reported worldwide. Isoniazid mono-resistance is the most frequent cause of drug-resistant tuberculous meningitis, a life-threatening disease. Extensive drug-resistant tuberculous meningitis has also been reported in some isolated case reports.

Areas covered: We reviewed the current literature on drug-resistant tuberculous meningitis, as well as drug-resistant tuberculosis.

Expert commentary: Drug-resistant tuberculous meningitis is a life-threatening disease and needs prompt diagnosis and treatment. Xpert MTB/RIF Ultra technology can detect Mycobacterium tuberculosis and rifampicin resistance in cerebrospinal fluid (CSF) even with low numbers of bacilli. The optimum antituberculosis drug regimen for multidrug-resistant tuberculous meningitis is largely unknown as no second-line antituberculosis drug-containing regimen has been tested in a randomized controlled fashion in drug-resistant tuberculous meningitis. A combination of levofloxacin, kanamycin, ethionamide, linezolid, and pyrazinamide would be an appropriate regimen because of excellent CSF profile of most of these drugs. End TB Strategy will help in checking the increasing challenge of drug-resistant tuberculous meningitis as it aims to eliminate all kinds of tuberculosis by the year 2035.     

The diagnostic challenge of abdominal tuberculosis in nonendemic countries: A case series from a tertiary hospital in Germany

Abdominal tuberculosis is a rare clinical condition in nonendemic countries and should be included as differential diagnosis by unspecific abdominal complaints, especially in patients with immigration background from high‐prevalence regions.     

The Emergence of Extensively Drug‐Resistant Tuberculosis: A Global Health Crisis Requiring New Interventions: Part I: The Origins and Nature of the Problem

Surveillance studies and outbreak investigations indicate that an extensively drug‐resistant (XDR) form of tuberculosis (TB) is increasing in prevalence worldwide. In outbreak settings among HIV‐infected, there is a high‐case fatality rate. Better outcomes occur in HIV‐uninfected, particularly if drug susceptibility test (DST) results are available rapidly to allow tailoring of drug therapy. This review will be presented in two segments. The first characterizes the problem posed by XDR‐TB, addressing the epidemiology and evolution of XDR‐TB and treatment outcomes. The second reviews technologic advances that may contribute to the solution, new diagnostics, and advances in understanding drug resistance and in the development of new drugs.     

左氧氟沙星联合化疗对28例复治肺结核的临床观察

目的观察左氧氟沙星联合化疗治疗复治肺结核的临床效果。方法将56例复治肺结核患者随机分为2组,28例采用左氧氟沙星联合化疗为治疗组,28例采用标准DOTS方案治疗为对照组。治疗一年间,留取两组患者痰液行结核分枝杆菌涂片检查,并观察两组3、6、12个月的痰菌阴转率和12个月时的X线吸收好转率。结果治疗组3、6、12个月患者痰菌阴转率分别是53.6%、75.0%、82.0%,对照组3、6、12个月痰菌阴转率分别是17.9%、32.0%、40.0%;两组12个月X线吸收好转率分别为89.3%、46.4%。两组比较,痰菌阴转率及X线吸收好转率差异均有显著性(P<0.01)。结论左氧氟沙星联合化疗治疗复治肺结核有明显优势。     

西藏地区169例复治失败肺结核病例耐药状况检测

目的 了解西藏地区复治肺结核患者中的结核分枝杆菌对抗结核化学药物的耐药状况,为有效防治肺结核病提供科学依据.方法 收集西藏自治区结核病防治所2000-2005年复治失败病例169例痰标本,用改良罗氏培养基分离培养结核分枝杆菌,绝对浓度法检测分离菌株对4种抗结核药物[链霉素(SM)、异烟肼(INH)、乙氨丁醇(EMB)、利福平(RFP)]的耐药性测定.结果 共检测169株结核分枝杆菌,其中耐药株165株,总耐药率高达97.63%,其中耐多药(所耐药物中含R和H)133例,耐多药率为78.70%.复治失败的耐药率和耐多药率明显高于全国46.50%的水平.对RFP、INH、SM和EMB的耐药率分别为91.12%(154/169)、84.02%(142/169)、75.15%(127/169)和21.30%(36/169).结论 西藏地区属高耐药区,应加强结核分枝杆菌的耐药监测和控制.     

噬菌体裂解法检测结核分枝杆菌的应用价值

[目的]研究噬菌体裂解法检测结核分枝杆菌的价值。[方法]应用噬菌体裂解法检测标准菌株H37Rv，5株非分枝杆菌，20株临床分离株及50例临床确诊的肺结核患者标本。[结果]标准菌株、临床分离株的噬菌体裂解试验均为阳性，非分枝杆菌为阴性，50例临床标本中，涂阳培阳、涂阴培阳、涂阴培阴的噬菌体裂解试验阳性率分别为95％、77％、25％，总的阳性检出率为68％。[结论]噬菌体裂解试验检测结核分枝杆菌具有较高的敏感性和特异性，并具有简便、快速的特点。     

5种结核分枝杆菌检测方法的临床应用价值研究

目的评价5种结核分枝杆菌检测方法对肺结核的辅助诊断价值。方法统计2018年1-10月在广州医科大学附属第一医院住院的患者,分为临床诊断肺结核患者和临床诊断非结核普通住院患者共209例,用结核培养法、PCR-荧光探针法、结核感染T淋巴细胞酶联免疫斑点试验(T-SPOT.TB)法、抗酸染色法、利福平耐药实时荧光定量核酸扩增检测技术(Xpert MTB/RIF)法分别进行检测,比较这5种方法在临床诊断中的价值。结果结核培养法、抗酸染色法、PCR-荧光探针法、T-SPOT.TB法、Xpert MTB/RIF法阳性率分别为16.8%、23.4%、39.2%、53.0%、52.2%。结核培养法灵敏度为52.17%,特异度为100.00%;抗酸染色法灵敏度为42.45%,特异度为96.67%;PCR-荧光探针法灵敏度为76.00%,特异度为97.98%;T-SPOT.TB法灵敏度为91.67%,特异度为79.80%;Xpert MTB/RIF法灵敏度为99.09%,特异度为100.00%。结论Xpert MTB/RIF法是最值得推荐的方法,也是唯一可以作为诊断结核感染的分子生物学方法,如果能够联合这几种方法,可以快速、准确地对结核感染进行诊治。     

结核病和肺癌患者痰及胸腔积液中结核分枝杆菌L-型的检测

目的探讨结核分枝杆菌L-型(MTB-L)在结核病和肺癌患者痰、胸腔积液两种临床标本中检出的意义。方法选取华北石油总医院2007年2～11月门诊及住院确诊为肺癌的患者110例为肺癌组,选择同期该院健康体检者42例为健康健康对照组,选择同期门诊及住院101例肺癌胸腔积液患者为结核病组,比较3组的MTB-L的资料。结果结核病组IK抗酸染色检测痰和胸腔积液标本中阳性率分别为42.9%、34.4%,均高于肺癌组(26.8%,21.1%,P<0.05);结核病组痰和胸腔积液标本中MTB-L阳性率分别为57.1%、40.6%,均高于肺癌组(24.4%,26.3%,P<0.05)。结论 MTB-L感染在肺癌的形成过程中可能起到一定的作用。     

结核感染T细胞斑点试验及抗结核抗体检测在结核诊断中的应用价值评价

目的评价结核感染T细胞斑点试验和血清学结核抗体(TB-Ab)检测两种方法在结核辅助诊断中的性能。方法回顾性分析2015年1月至2016年3月浙江大学附属第二医院医院就诊确诊为结核患者的结核感染T细胞斑点试验(TSPOT.TB)及TB-Ab检测结果。结果在112例结核患者中,101例T-SPOT.TB检测阳性,灵敏度为90.18%,32例TB-Ab检测阳性,灵敏度为28.57%。其中肺结核41例,40例T-SPOT.TB阳性,灵敏度为97.56%;18例TB-Ab检测阳性,灵敏度为43.9%。肺外结核71例患者中,61例T-SPOT.TB检测阳性,灵敏度为85.91%,14例TB-Ab检测阳性,灵敏度为19.7%。结论 T-SPOT.TB检测不受标本采集的影响,灵敏度高,T-SPOT.TB的各项综合评价指标均优于血清学结核抗体(TB-Ab),对活动性肺结核的辅助诊断具有较高价值。