Nm23-H1基因对膀胱癌化疗敏感性的体外实验研究

目的: 探讨外源性人抑癌基因nm23 H1 对膀胱癌细胞系T -24 细胞化疗敏感性的影响。方法: 将nm23 -H1真核表达质粒通过脂质体转染技术导入人膀胱癌细胞株T -24,利用免疫组化及Western blot法鉴定质粒的表达。利用MTT法、流式细胞仪分析技术检测T -24细胞转染前后化疗药物对细胞增殖、细胞凋亡的变化。结果: 顺铂组(CDDP)细胞生长明显受到抑制,细胞凋亡增加;顺铂转染前后细胞凋亡指数分别为(26.51±0.98)%、(63.21±0.58)%,两者间差异有统计学意义。结论: Nm23- H1 基因能增强顺铂的化疗敏感性,为基因联合化疗药物治疗膀胱癌提供了参考依据。     

nm23-H1基因对口腔癌Acc-M细胞株的转移能力及化疗敏感性影响的体外研究

目的　通过 nm2 3- H1的转化及导入 Acc- M细胞株 ,建立稳定、高效、低毒的转染方法 ,观察 nm2 3- H1对 Acc- M细胞株侵袭转移能力及化疗敏感性的影响。方法　采用基因转化技术 ,制备高纯度的 nm2 3- H1真核表达质粒。用阳离子脂质体介导的转染技术 ,将 nm2 3- H1基因转染到口腔腺样囊性癌 Acc- M细胞株。用免疫组化技术检测转染前后的 nm2 3- H1的表达。并用 transwell小室和冲刷实验 ,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。采用 MTT法观察 nm 2 3- H1对 Acc- M化疗敏感性影响。结果　 1使用重组的 p CMV - Neo- Bam的真核表达载体 ,将 nm 2 3- H 1转染口腔癌细胞 ,并获得稳定表达。 2 Acc- M细胞株 nm2 3- H 1基因的转染前后表达水平有明显差异。 3转染后的 Acc- M细胞侵袭、粘附、趋化运动能力均显著降低。 4转染前后使用 C- DDP的 L D50 分别为2 .6 4± 0 .4 7,1.85± 0 .4 1(P<0 .0 1)。结论　 nm2 3- H1对 Acc- M细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用 ,同时具有对铂类药物的化疗增敏功能     

nm23-H1基因对 T-24细胞株侵袭、粘附和趋化性影响的实验研究

目的 探讨nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞株的转染及表达,观察nm23-H1对人膀胱癌T-24细胞侵袭转移能力的影响。方法 ①采用已经通过基因工程技术构建的nm23-H1基因的真核表达载体,利用电穿孔基因转染技术将nm23-H1基因导入人膀胱癌T-24细胞,利用G418筛选、免疫组织化学、流式细胞方法检测nm23-H1基因的转录和表达情况。②利用Transwell小室和冲刷实验,观察转染前后细胞的侵袭、粘附、趋化运动能力的变化。结果以电穿孔转染技术将nm23-H1基因转染T-24细胞后,获得稳定表达;免疫组织化学和流式细胞结果显示T-24细胞株nm23-H1基因的传染前后表达水平有明显差异;发现转染后T-24细胞侵袭、粘附、趋化运动能力有明显的降低。结论 nm23-H1基因对人膀胱癌T-24细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用。     

p16,nm23-H1基因蛋白在膀胱癌的表达及与临床意义

目的探讨抑癌基因p16及肿瘤抑制基因nm23-H1在膀胱中的表达及临床意义.方法应用免疫组织化学s-p法检测18例正常膀胱组织中及38例膀胱移行细胞癌组织中p16及nm23-H1的表达.结果p16在正常组织、膀胱癌中阳性表达率分别为88.8%(16/18),47.4%(18/38),二者间有显著差异性(P＜0.01).nm23-H1在正常膀胱组织、膀胱癌中阳性表达率分别为83.3%(15/18),44.7%(17/38),二者间有显著差异(P＜0.01).提示p16,nm23-H1阳性表达率与膀胱移行细胞癌的临床分期、临床分级、肿瘤大小及是否转移有密切关系.结论p16、nm23-H1在膀胱癌中的阳性表达对抑制肿瘤生长、浸润和转移起重要作用,可作为膀胱癌患者预测转移和预后及判断膀胱移行细胞癌生物学行为的良好指标.     

转移抑制基因nm23-H1在胆管细胞癌中的表达

目的探讨转移抑制基因nm23-H1的表达与胆管细胞癌临床病理及预后的关系.方法25例胆管细胞癌标本,制成石蜡切片,采用免疫组织化学ABC法染色.结果11例(40%)为阳性表达,14例(56%)为阴性表达.nm23-H1的表达与肿瘤大小、肿瘤部位、侵及浆膜、肝外转移、肿瘤破裂、淋巴结转移、侵及门静脉、分化程度和生存率无关.术后2年内的复发率nm23-H1阴性表达例(71.4%)高于阳性表达例(45.5%),但这一区别没有显著性差异(P>0.05).结论nm23-H1在胆管细胞癌中所起的作用不同. nm23-H1的表达对胆管细胞癌不具有预后指示作用.     

癌组织nm23-H1基因表达对胃肠道癌浸润与转移的影响及意义

目的通过检测、分析癌组织中nm23-H1基因表达,探讨nm23-H1对胃肠道癌浸润、转移的影响及临床意义。方法应用免疫组化技术检测62例胃肠道癌术后标本nm23-H1基因的蛋白表达,采用χ2检验进行统计学分析。结果nm23-H1在胃肠道癌组织中的阳性表达率为62.9%(39/62),Ⅰ Ⅱ与Ⅲ Ⅳ患者之间nm23-H1的阳性表达有显著性差异(P<0.05)。nm23-H1的表达与局部淋巴结转移呈负相关(P<0.01)。在高分化组nm23-H1的表达明显降低(P<0.05),与癌栓的形成无关(P>0.05)。结论癌组织中nm23-H1基因的蛋白表达增强或减弱可能与胃肠道肿瘤转移有内在联系;可通过调控癌细胞的转移潜能,影响胃肠道癌浸润和淋巴结转移;可作为胃肠道肿瘤判断预后的指标,指导临床正确综合治疗。     

鼻咽癌Survivin和nm23-H1基因的表达及意义

鼻咽癌是我国高发恶性肿瘤之一,占头颈部肿瘤发病率首位,其分化程度低,可早期发生淋巴结转移,其形成和发展受多种因素影响,依靠目前临床的检诊手段很难发现。Survivin是最近发现的一种凋亡抑制蛋白,其选择性地表达于常见的恶性肿瘤,而在成人终末分化组织一般不表达或低表达。许多学者研究表明Survivin在肿瘤组织中的过表达与生存期缩短、预后不良、     

nm23-H1基因在胃癌中表达及临床意义

目的探讨胃癌组织中转移抑制基因23-H1（nn／23-H1）蛋白表达与胃癌浸润转移的关系。方法采用免疫组化SP法,检测50例胃癌组织中nm23-H1蛋白。结果nm23-H1蛋白的表达与胃癌浸润深度和胃癌组织的分化程度无关,与淋巴结转移及TNM分期有关。结论nm23-H1能够抑制胃癌浸润转移。rim231H1蛋白低表达对判断病变进展及转移和复发有重要参考价值。     

nm23-H1基因抑制肿瘤侵袭转移机制的研究进展

侵袭和转移是恶性肿瘤基本的生物学特性,也是肿瘤患者死亡的主要原因.肿瘤的侵袭转移是一个多基因(包括转移相关基因和转移抑制基因)调控、多阶段、多步骤发生的复杂过程[1].转移相关基因的激活和(或)转移抑制基因的失活均可诱导肿瘤转移表型的产生.导致肿瘤的侵袭转移.nm23-H1基因是一个重要的肿瘤转移抑制基因,已经成为当今肿瘤转移的研究热点之一.本文就国内外nm23-H1基因调控肿瘤侵袭转移分子机制的研究进展综述如下.     

nm23-H1基因在人贲门癌中的表达

目的 :检测转移抑制基因 nm2 3- H1在贲门癌中的表达 ,探讨其与贲门癌生物学特性和其他病理学指标的关系。方法 :应用免疫组化染色技术对 2 8例贲门癌组织中的 nm2 3- H1进行检测并与正常组织对照。结果 :贲门癌及其相应的正常组织中 nm2 3- H1蛋白表达率分别为 67.9%和71 .4% ,两者间无显著性差异 ( P<0 .0 5)。 nm2 3- H1蛋白在贲门癌中的表达 ,随肿瘤浸润程度的增加而表达下降 ( P>0 .0 5) ;在淋巴结转移阳性组贲门癌中 ,表达阳性率为 46.2 % ,而淋巴结转移阴性组为 92 .8% ,两者差异显著 ( P<0 .0 5)。结论 :nm2 3- H1蛋白表达在肿瘤分化程度高组与低组之间 ,无显著性差异。     

N-cadherin与nm23-H1在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨神经型钙黏蛋白(N-cadherin)和nm23-H1在乳腺癌中的表达及意义。方法采用免疫组织化学方法检测126例乳腺癌组织N-cadherin和nm23-H1的表达,并与临床病理资料作对照分析。结果 N-cadherin在乳腺癌组织的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移及TNM分期有统计学意义(P<0.05),与病理类型无关(P>0.05);nm23-H1在乳腺癌组织的表达与肿瘤的大小、淋巴结转移及TNM分期有统计学意义(P<0.05),与病理类型无关(P>0.05)。结论 N-cadherin和nm23-H1可以作为评估乳腺癌转移和预后的指标。     

KAI-1和nm23-H1的表达与结直肠癌侵袭转移的关系研究

目的 检测结直肠癌组织中KAI-1、nm23-H1基因及蛋白的表达,探讨其在结直肠癌浸润转移中的作用及临床意义.方法 以45例结直肠癌手术标本为研究对象,分别采用荧光实时定量PCR和免疫组织化学方法检测肿瘤组织和切端组织中KAI-1、nm23-H1的mRNA及蛋白表达水平,并结合临床病理资料进行统计学分析.结果 结直肠癌组织中KAI-1和nm23-H1的mRNA表达水平及蛋白表达阳性率均显著低于切端组织,差异有统计学意义(P＜0.01);淋巴结转移者KAI-1、nm23-H1的mRNA表达水平及蛋白表达阳性率均显著低于不伴淋巴结转移者,且二者会随着浸润深度及Dukes分期的增加而表达下降,差异有统计学意义(P＜0.01).结直肠癌组织中KAI-1 mRNA的表达均与nm23-H1的表达呈正相关(rs值分别为0.583和0.327,P＜0.05).结论 KAI-1和nm23-H1低表达均与结直肠癌的侵袭转移有关,联合检测这两项指标有助于指导临床治疗和预测肿瘤进展.     

人重组蛋白nm23-H1突变体原核表达纯化与鉴定

目的:构建nm23-H1的S120G,S120G-P96S及$44A突变体原核表达载体,并在大肠杆菌中表达及纯化.方法:通过PCR方法扩增突变型nm23-H1目的片段,利用基因重组技术构建pET28a-nm23-H1突变型原核表达载体,并进行酶切和测序鉴定,鉴定正确克隆转化BL21(DE3)溶源菌,进行蛋白表达及可溶性分析,同时采用NI-NTA镍柱亲和层析法进行纯化,应用Western blot方法对纯化后蛋白进行鉴定检测.结果:通过酶切和测序鉴定,pET28a-nm23-H1突变型原核表达载体序列正确,编码框正确.转化溶源菌后能够表达目的蛋白,蛋白表达量高;其中,S44A为可溶性表达,S120G以可溶性表达为主,少部分为包涵体表达,而S120G-P96S则大部分为包涵体表达;Western blot检测结果提示3个突变型nm23-H1蛋白分子量均为20 kD,与预计值相符.结论:成功构建nm23-H1的S120G,S120G-P96S及S44A突变体原核表达载体,S120G和S44A蛋白可以用于下一步实验研究,而S120G-P96S突变体则可能不适于下一步研究.     

转移抑制基因NM23-H1在非小细胞肺癌中的表达及临床意义

目的探讨肿瘤转移抑制基因(nm23-H1)mRNA在非小细胞肺癌(NSCLC)组织中的表达及其与NSCLC临床病理特征间的关系。方法采用SYBR GreenⅠ实时荧光定量反转录聚合酶链反应(real-time qRT-PCR)方法检测48例NSCLC癌组织、10例癌旁正常肺组织以及10例良性疾病肺组织中nm23-H1 mRNA的表达水平。结果 nm23-H1 mRNA在NSCLC组的表达水平为(0.599±0.566),明显低于癌旁组的(1.232±0.328)及良性疾病肺组的(1.443±0.427)(P<0.01);NSCLC组中NM23-H1的低表达与肿瘤病理类型、癌细胞分化程度、淋巴结转移和临床分期有关(P<0.05),而与患者年龄、性别以及吸烟情况无关(P均>0.05)。结论 NSCLC组织中nm23-H1低表达,其表达量降低与NSCLC的侵袭、转移和预后有关。     

nm23-H1基因表达与胃癌生物学行为的关系

目的 :探讨nm2 3 H1基因表达与胃癌生物学行为的关系。方法 :应用原位杂交 (ISH)及免疫组织化学技术 ,检测nm2 3 H1在 2 7例胃癌及相应的胃正常粘膜组织中mRNA和蛋白的表达。结果 :nm2 3 H1mRNA及蛋白在胃癌及相应的正常组织中的表达无显著性差异 (P >0 .0 5 )。在有淋巴结转移的胃癌中nm2 3 H1mRNA表达显著低于无淋巴结转移组(P <0 .0 1) ;nm2 3 H1蛋白在有淋巴结转移的胃癌中表达阳性率为 2 6 .8% ,显著低于在无淋巴结转移的胃癌中表达阳性率83 % (P <0 .0 5 )。nm2 3 H1mRNA及蛋白在有浆膜浸润 (T3、T4 )胃癌中的表达显著低于无浆膜浸润 (T1、T2 )的胃癌 (P <0 .0 5 )。结论 :nm2 3 H1基因表达与胃癌浸润及淋巴结转移有关     

胆囊癌组织中MMP-9和nm23-H1的表达与浸润转移的关系

目的探讨胆囊癌组织中MMP-9和nm23-H1的表达水平,了解胆囊癌组织中MMP-9和nm23-H1表达的相关性及其与胆囊癌浸润转移的关系。方法采用免疫组织化学法（PV-9000）检测60便胆囊癌（44例浸润转移组,16例无浸润转移组）MMP-9和nm23-H1的表达。结果有浸润转移的44例胆囊癌标本中,MMP-9和nm23-H1表达的阳性率分别为72．7％（32／44）和27．3％（12／44）;无浸润转移的16例胆囊癌标本中,MMP-9和nm23-H1表达的阳性率分别为37．5％（6／16）,和68．8％（11／16）。MMP-9的表达与胆囊癌浸润转移倾向呈正相关性（P〈0．05）,rim23-H1的表达与胆囊癌的浸润转移倾向呈负相关性（P〈0．01）,由此提示MMP-9与nm23-H1的表达呈负相关性（P〈0．01）。结论MMP-9及nm23-H1的表达可能作为胆囊癌预后及转移潜能判断的指标。     

nm23-H1基因抑制口腔癌细胞的侵袭转移行为机制的实验研究

[目的]将nm23-H1导入口腔癌BcaCD885细胞株,观察nm23-H1对BcaCD885细胞株侵袭转移能力的影响,并对相关机制进行分析。[方法]制备高纯度的nm23-H1真核表达质粒,并用阳离子脂质体介导的转染技术,完成转染方法的建立。检测转染前后的NDPKA的表达并观察转染前后细胞的侵袭转移行为能力的变化。[结果]将nm23-H1转染口腔癌细胞,获得了稳定表达,发现BcaCD885细胞株nm23-H1基因的转染前后表达水平有明显差异,实验组和对照组的侵袭细胞相对数目分别为41.1％±1.2％和64.5％±6.3％,趋化运动细胞相对数目为50.0％±6.3％和81.0％±3.9％,实验组的粘附能力也显著降低。[结论]nm23-H1对BcaCD885细胞的侵袭转移能力具有显著抑制作用。