免疫球蛋白重链基因重排检测在急性淋巴细胞白血病微小残留病中的应用

近30年来,随着化疗方案的改进,儿童急性淋巴细胞白血病(acute lymploblastic leukemia,ALL)的初治缓解率已达95%以上,但仍然有大约20%～30%的ALL缓解患儿复发。近十年研究表明,其复发的主要根源是体内仍残留有一定数量的白血病细胞,又称微小残留病变(minimal residual disease,     

急性早幼粒细胞白血病融合基因荧光定量动态检测的临床意义

目的利用逆转录荧光实时定量聚合酶链反应(RQ-PCR)检测急性早幼粒细胞白血病(APL)PML-RARα融合基因的方法,并观察其敏感度。方法建立荧光染料SYBR-Green1RQ-PCR技术,同时检测56例APL融合基因PML-RARα的表达水平,并且与传统巢式PCR方法进行敏感度比较。结果 RQ-PCR的灵敏度均可达到50拷贝,稍低于巢式PCR,但RQ-PCR定量准确,不易污染。分别取103和107拷贝的PML-RARα质粒以及患者cDNA同时作8次平行扩增,批内变异系数分别为7.31%、8.26%和5.02%,表明方法稳定。不同APL患者PML-RARα表达水平有较大差异,初诊患者PML-RARα/GAPDH比值介于0.018～0.799,中位值为0.070。结论RQ-PCR可以准确检测微小残留病(MRD)融合基因表达水平;监测融合基因表达可以有效观察治疗效果。     

PCR技术在儿童ALL微小残留病中的检测及临床意义

目的：探讨ＰＣＲ检测ＡＬＬ－ＭＲＤ的重要性及临床意义。方法：运用ＰＣＲ技术，以ＩｇＨ和ＴｅＲγ基因重排作为标志，检测了４０例急性淋巴细胞白血病（ＡＡＬ）微小残留病（ＭＲＤ）。结果：７例初治未缓，１２例部分缓解（ＰＲ），１３例完全缓解（ＣＲ）的ＡＬＬ患儿ＭＲＤ检测阳性为另８例（１例ＰＲ、７例ＣＲ）ＭＲＤ阴性。发现ＣＲ时间赵长，ＭＲＤ阳性率越低，反之，ＣＲ时间越短，ＭＲＤ阳性率越高，结论：ＭＲＤ何作为     

急性白血病受体基因重排的研究

目的：探讨急性白血病微小残留病（ＭＲＤ）与化疗效应差异及受体基因重排,在急性非淋巴细胞白血病（ＡＮＬＬ）中序列交叉现象及意义。方法：应用聚合酶链反应技术对免疫球蛋白（ＩｇＨ）及Ｔ细胞受体（ＴＣＲγ）基因重排进行定量测量。结果：４５例急性淋巴细胞白血病（ＡＬＬ）中阳性率８４．４％（３８／４５）,完全缓解（ＣＲ）后１８０ｄ检测,阳性率仍５５．６％（２５／４５）,２０例ＡＮＬＬ中５例检测到ＩｇＨ受体基因     

急性B淋巴细胞白血病患者检测微小残留病的临床意义

采用多参数流式细胞仪对50例成人B淋巴细胞白血病(B-ALL)患者缓解后的微小残留病(M RD)进行检测,结果显示,B-ALL完全缓解组和正常对照组骨髓M RD分别为(5.9462±4.8964)%和(0.5845±0.2014)%,二者比较有显著性差异(P<0.01);B-ALL持续缓解与复发者的骨髓M RD分别为(4.1436±1.6125)%和(42.3514±20.6451)%,二者比较有显著性差异(P<0.01)。诱导缓解至治疗3个月时M RD阳性患者复发率高,预后不良。提示对B-ALL患者用流式细胞术进行缓解后M RD检测,有利于其复发预测及早期个体化治疗选择。     

急性髓性白血病免疫球蛋白重链基因和T细胞受体γ基因重排的检测意义

免疫球蛋白重链基因(IgH)和T细胞受体(TCR)基因重排常被认为是淋巴细胞的克隆标志。但是，近年来的研究表明，急性髓性白血病(AML)细胞亦可出现IgH和TCR基因重排。为此，我们采集51例AML患者骨髓，利用PCR方法检测IgH及TCRγ基因重排，并初步探讨其临床意义。     

荧光原位杂交技术在白血病微小残留病灶检测中的应用

血液系统恶性疾病及实体肿瘤的现代化疗和造血干细胞移植治疗,使得患者获得较彻底的治疗。微小残留病（minimal residual disease,MRD）,是影响治疗效果的一个重要临床问题。在目前判断标准确定的MRD范围内,常规骨髓细胞形态学及细胞遗传学方法,不能敏感地检测MRD,难以客观地对病情转归进行科学预测,使治疗存在较大的盲目性。     

应用半重叠TCRγ引物扩增TCRγ基因重排检测淋巴细胞白血病的研究

采用更加敏感的半重叠式T细胞受体（TCR）γ链特异性引物的多聚酶链反应（PCR）法,对28例急性淋巴细胞白血病（ALL）初治、完全缓解（CR）及骨髓移植（BMT）患儿的骨髓标本进行检测,用消化煮沸及酚抽提法分别对所有骨髓标本进行DNA提取,将PCR结果进行比较。结果表明,消化煮沸法用于微量标本的DNA提取优于酚抽提法。28例ALL患儿中16例检出TCRγ特异性条带,其中微小残留病（MRD）组18例;阳性检出12例,其中免疫分型标记为B细胞型的4例（25.0%）,免疫标记为T细胞型者全部出现TCRγ阳性条带。表明TCRγ基因重排并非克隆性T细胞增生所特有,部分ALL患儿存在双克隆重排。     

聚合酶链反应联合Southern杂交检测急性非淋巴细胞白血病IgH重排基因

免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）重排，可作为Ｂ淋巴细胞白血病的基因标志，为进一步了解急性非淋巴细胞白血病（急非淋）ＩｇＨ重排情况，用聚合酶链反应（ＰＣＲ）联合地高辛标记ＪＨ探针Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交，检测４１例急非淋病人ＩｇＨＣＤＲ－Ⅲ区域。７例（１７．１％）ＰＣＲ扩增阳性，此７例阳性病例均经Ｓｏｕｔｈｅｒｎ杂交证实，本实验的灵敏度为１０－４～１０－５水平。１２例完全缓解病例中３例（２５．０％）重排阳性，此３例均于半年内临床复发。结果表明，ＩｇＨ重排并不局限于Ｂ淋巴系白血病，也可发生于急非淋病人，其机制可能是，部分急非淋起源于较原始的多向造血祖细胞或除髓系白血病克隆外，尚存在亚克隆     

用RT—PCR法检测急性白血病患者MDR1基因表达

化疗是治疗急性白血病（Ａｃｕｔｅ Ｌｅｕｋｅｍｉａ ＡＬ）的主要手段。然而，由人ＭＤＲ１基因编码的Ｐｇｐ过表达引起的ＭＤＲ（Ｍｕｌｔｉｄｒｕｇ ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅ）往往导致化疗的失败。利用检测ＭＤＲ１ＭＲＮＡ的ＲＴ－ＰＣＲ法，对１４份正常骨髓标本、２９例ＡＬ患者３０份骨髓标本的ＭＤＲ１ＭＰＲＮＡ进行了检测。结果表明：化疗前、后ＡＬ患者的ＭＤＲ１ＭＲＮＡ阳性率分别为１９％和７５％（Ｐ〈０．０１）：     

胃淋巴增生性疾病IgH基因重排的检测及意义

目的 探讨免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因单克隆性重排的检测对胃ＭＡＬＴ淋巴瘤的诊断及鉴别诊断价值。方法 应用半巢式聚合酶链反应技术检测石蜡包埋的３１例胃ＭＡＬＴ淋巴瘤、２６例淋巴细胞性胃炎及１１例对照标本免疫球蛋白重锭基因重排的克隆性。引物选用互补于ＩｇＨ基因Ｖ区及Ｊ区保守序更的Ｆｒ２,Ｆｒ３。结果 （１）用Ｆｒ３为引物扩增,７４．２％的胃ＭＡＬＴ淋巴瘤获得单克隆性重条带;联合Ｆｒ２扩增,可使其检出     

PCR在大肠杆菌ST1b基因扩增及其基因检测上的应用

作者应用聚合酶链反应(PCR)成功地扩增了产肠毒性大肠杆菌ST1b基因,在ST1b产量、活性和纯度上均满足了基因重组的要求。并利用PCR技术建立了一种新型基因探针标记方法(基因扩增标记法),所制备的ST1b基因探针经相关菌菌落杂交试验证实具有良好的特异性和敏感性。通过对180株婴幼儿腹泻大肠杆菌分离株、52株仔猪腹泻大肠杆菌分离株和28株大肠杆菌标准菌株的基因诊断以及96株K99—ST1b基因重组转化菌的基因检测,菌落杂交阳性率分别为11/180、2/52、2/28和5/96。     

登革病毒1型和2型国内分离株NSI基因的扩增和克隆

登革病毒为单链正股ＲＮＡ病毒，其非结构蛋白ＮＳ１在病毒免疫反应中起重要作用。我们在ＮＳ１基因序列设计了一对通用引物，扩增序列长度的４１３ｂｐ。应用逆转录－－聚全酶链反应成功地扩增了ＤＶ１－４型部分基因长段，采用该引物增国内分离株ＤＶ１和ＤＶ２同样出现一条特异扩增带，回收该ＤＮＡ片段，并将ＤＶ１和ＤＶ２ＮＳ１基因部分片段分别克隆到ＰＵＣ１９质粒载体中。     

免疫球蛋白重链基因重排对多发性骨髓瘤的研究及应用价值

为探讨免疫球蛋白重链（IgH）基因重排在浆细胞增殖性疾病中的应用价值，用聚合酶链反应（PCR）技术以10例正常人骨髓标本为对照，对57例多发性骨髓瘤（MM）、11例未定性单克隆丙种球蛋白病（MGUS）、10例反应性浆细胞增多症进行了IgH基因重排的研究。MM的外周血和骨髓的IgH基因重排检出率分别为56．9％及84.4％。外周血IgH基因重排的分析显示Ⅱ、Ⅲ期患者检出率高于Ⅰ期。经化疗后缓解的病例其骨髓标本，仍可检出重排带。MGUS及反应性浆细胞增多症均未能测出IgH基因重排。本结果表明：IgH基因重排对MM的诊断、鉴别诊断及指导治疗有重要意义。     

巢式聚合酶链反应检测慢性粒细胞白血病bcr／abl融合基因

目的 探讨Ph染色体和bcr/abl融合基因在慢性粒细胞白血病（CGL）的发病机制、诊断、治疗、预后判断的价值。方法 对46例CGL患者作巢式逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测bcr/abl融合基因,同时对其中28例作细胞遗传学检查。结果 46例CGL患者中,44例bcr/abl融合基因阳性,阳性率为95.7%;28例CGL患者作细胞遗传学检查。26例Ph染色体阳性,阳性率为92.9%;2例Ph染色体阴性的CGL患者,用RT-PCR检测出ber/abl融合基因。结论 巢式RT-PCR是一种快速、敏感而准确的检测方法,可以为部分Ph染色体阴性的CGL患者提供分子生物学的诊断依据。     

选择性扩增法检测乙肝病毒前c区终止变异及其优点

本文建立一种简单而灵敏度高的选择性聚合酶链反应检测乙型肝炎病毒前Ｃ区终止变异，在４７例慢性乙型肝炎中检出前Ｃ区终止变异４１例，在慢性肝炎，肝硬化和重症肝炎中的检出率分别为８２％，１００％和１００％，在ｅ抗原阳性和ｅ抗体阳性中的检出率分别为７８％和９０％，结果提示，我国慢性乙型肝炎存在很高的前Ｃ区终止变异株感染度，即使是ｅ抗原阳性的慢性乙型肝炎。     

Principles of the Polymerase Chain Reaction in Haematology

The polymerase chain reaction (PCR) is an automated process that specifically amplifies selected DNA sequences that are usually chosen to reflect the presence of genes, or parts of genes, in the sample material. Since many genetic alterations resulting in the onset of disease are now detectable using PCR, it can be used as both a diagnostic and prognostic tool. Genetic changes can occur in DNA due to mutation, deletion, inversion or chromosomal translocation. As a consequence, genes become either non functional or are aberrantly expressed. Research in recent years has now associated many defined genetic abnormalities with specific diseases. Therefore detection and surveillance of such lesions has led to disease diagnosis and subsequent monitoring of disease progression, for example, during and after administration of therapeutic regimens. The major effect of PCR in this area is that genetically abnormal cells can be detected within a normal cell population at a far lower incidence level than any other existing technology. Moreover, PCR can be used to identify naturally existing genetic polymorphisms that can be used as personal identifiers, or tags, for a given individual. Where these polymorphisms occur within a genetically modified region resulting in disease, identification of the polymorphism within families can be used as a predictor of disease carrier status or likelihood of inheritance of the disease.     

Frequency and DNA sequence of tal-1 rearrangement in children with T-cell acute lymphoblastic leukemia

Summary Using nested polymerase chain reaction (PCR) a gene rearrangement named tal-1 deletion was found in five of 56 leukemic bone marrow samples from children with T-cell acute lymphoblastic leukemia (ALL). The DNA sequences of the PCR fragments consisted of the known conserved germline sequences in addition to short DNA insertions at the breakpoint region, which were different in each patient. Moreover, one patient was examined at diagnosis and at relapse 11 months later, revealing identical DNA sequences at the rearrangement site. The recombination site of the tal rearrangement therefore may be used as a genetic marker for detecting minimal residual disease in about 10% of T-cell ALL in childhood.Supported by theKind-Philipp-Stiftung, theForschungshilfe Station Peiper, the Parents' Initiative Gie\en and aStüssgen-Schmidt-Stipendium.