缬沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的调节作用

目的：探讨缬沙坦对血管紧张素Ⅱ（angiontensinⅡ,AngⅡ）诱导的大鼠心脏成纤维细胞（cardiac fibroblasts,CFs）增殖的调节作用,并探讨其新的作用机制.方法：建立新生大鼠心脏成纤维细胞系;用不同浓度的缬沙坦（10-5、10-6、10-7 mol/L）对AngⅡ诱导CFs增殖干预,应用四氮唑盐试验（MTT）和3H-TdR掺入法检测其对心脏成纤维细胞的增值作用.结果：在一定范围内,缬沙坦以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFs的增殖（P＜0.01）.结论：缬沙坦能降低AngⅡ诱导的大鼠CFs的增值作用,是抗心肌纤维化发生的有效药物.     

辛伐他汀对血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响

目的　探讨辛伐他汀 (Simvastatin ,Sim)对血管升压素 (AVP)诱导的新生SD大鼠心脏成纤维细胞 (CFs)增殖的影响 ,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法　采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFs,以3H 胸腺嘧啶核苷 (3H TdR)掺入法测定DNA合成、四氮唑盐 (MTT)比色法测定细胞数目 ,分别观察不同浓度Sim对AVP诱导CFs增殖的作用及甲羟戊酸 (Meval onate,MVA)干预的影响。结果　①CFs(2 0 0个细胞 )的3H TdR掺入率随着Sim干预浓度的增加而降低 ,其中 1 0 - 6mol/LSim和 1 0 - 5mol/LSim组的3H TdR掺入率分别为 (1 1 75± 2 0 2 6 6 )、(771± 1 6 4 86 )cpm ,明显低于对照组 (1 95 5± 3 72 45 )cpm(P <0 0 1 ) ;②MTT比色法A490 值随Sim浓度的增加而降低 ,其中 1 0 - 6、1 0 - 5mol/LSim组的A490 值分别为 0 2 1 5± 0 0 4 1和 0 1 6 3± 0 0 1 8,均较对照组A490值 0 3 93± 0 0 4 8显著降低 (P <0 0 1 ) ;③ 1 0 - 5mol/LSim +1 0 - 3mol/LMVA组的3H TdR掺入率、MTT比色法A490 值分别为 (1 995±3 5 3 83 )cpm和 0 41 8± 0 0 4 5 ,均显著高于 1 0 - 5mol/LSim组 (P <0 0 1 )。结论　辛伐他汀可抑制AVP诱导的CFsDNA的合成和细胞数目增加 ,提示Sim可抑制CFs增殖 ,其机制可能通过甲     

苦参碱对血管紧张素Ⅱ诱导新生大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 :研究苦参碱 (matrine)对血管紧张素Ⅱ (AngⅡ )诱导新生大鼠心肌成纤维细胞 (cardialfibroblasts,CFb)增殖和胶原合成的影响 ,探讨其抑制心肌纤维化的机制。方法 :建立AngⅡ诱导新生大鼠CFb纤维化模型 ,采用MTT法检测Mat对CFb增殖的影响 ;羟脯氨酸测定检测CFB胶原合成量 ;RT PCR检测Mat作用下CFb的Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP 13)、组织金属白酶抑制因子 1(TIMP 1)、TGFβ 1的基因表达情况。结果 :①在一定范围内 ,苦参碱以浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFb的增殖和胶原合成 (P <0 .0 1) ,②苦参碱可以降低Ⅰ型胶原和TGFβ 1基因mRNA表达 ,③苦参碱可以提高MMP 13基因mRNA表达。结论 :苦参碱通过抑制AngⅡ诱导的CFb增殖和胶原合成增加 ,从而发挥有效的抗心肌纤维化作用     

盐酸尼卡地平对血管紧张素Ⅱ诱导成年大鼠心脏成纤维细胞增殖和PYK2表达的影响

目的研究盐酸尼卡地平对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的成年大鼠心脏成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖和粘附斑激酶新成员PYK2合成的影响,探讨盐酸尼卡地平抑制心肌纤维化的机制.方法建立AngⅡ诱导成年大鼠纤维化模型,采用MTT法检测盐酸尼卡地平对CFs增殖的影响,免疫组化法检测CFs纤维连接蛋白量的变化,RT-PCR法和Western blot法分别检测PYK2 mRNA和蛋白的改变.结果盐酸尼卡地平呈浓度依赖性方式抑制AngⅡ诱导CFs的增殖和纤维连接蛋白的合成,并可降低PYK2 mRNA和蛋白的表达.结论盐酸尼卡地平的抗心肌纤维化作用的作用机制之一可能是通过抑制PYK2的表达实现的.     

血管紧张素Ⅱ2型受体抑制成纤维细胞增殖和纤维连接蛋白分泌

目的研究血管紧张素Ⅱ２型受体（ＡＴ２）对１型受体（ＡＴ１）介导的细胞增殖和纤维连接蛋白分泌的影响。方法分别从ＡＴ２受体基因缺失和正常基因型的１６天孕龄胎鼠培养皮肤成纤维细胞，观察两种成纤维细胞在血管紧张素Ⅱ（１０－８ｍｏｌ／Ｌ）刺激下细胞增殖和产生纤维连接蛋白的情况。结果在血管紧张素Ⅱ刺激下，ＡＴ２受体缺失组的成纤维细胞（０４６２±００２６）增殖能力明显强于正常组成纤维细胞（０３８９±００２１，Ｐ＜００１），纤维连接蛋白基因及蛋白质表达与正常组成纤维细胞比较显著增加，（３４１±４１）％、（１６２±２３）％（Ｐ＜００１）。结论ＡＴ２受体对ＡＴ１受体介导的细胞增殖和分泌纤维连接蛋白有一定的抑制作用     

大黄素对血管紧张素Ⅱ刺激人肾成纤维细胞增殖、胶原表达的抑制效应研究

目的：研究大黄素对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）刺激人肾成纤维细胞（KFB）增殖、胶原表达等的抑制效应。方法：用^H-TdR掺入法，流式细胞仪及免疫组化化学技术观察了AngⅡ1对KFB增殖，细胞周期及I型胶原表达的影响以及大黄素对AngⅡ作用于KFB的保护效应。结果：①AngⅡ10^-10mol/L至10^-6mol/L增加KFB^3H-TdR掺入率，第1、3天呈计量依赖关系（r1=0.709,P＜0．01；r3=0.806,P＜0．01）；不同浓度的大黄素（30－100μg/ml）第1、3和5抑制了AngⅡ10^-6mol/L诱导的KFB^3H-TdR掺入率，呈剂量依赖性特点。②AngⅡ在10^-6mol/L明显促进KFBG1向S期转化（P＜0．01）；大黄素在100μg/ml抑制了KFBG1向S期转化（P＜0．01）。③AngⅡ在10^-6mol/L增加了KFBI型胶原表达（P＜0．05），大黄素明显降低了AngⅡ诱导的I型胶原表达（P＜0．05）。结论：大黄素可抑制AngⅡ诱导的KFB增殖，I型胶原表达，在预防肾间质纤维化可能起重要作用。     

血管紧张素Ⅱ对肾成纤维细胞增殖及分泌白细胞介素—6的影响

目的 研究血管紧张素（Ang)Ⅱ对人肾成纤维细胞（KFB）增殖及分泌白细胞介素（IL－6）的影响，为完善Ang Ⅱ致肾纤维化机理提供新实验依据。方法 分离培养人胎肾成纤维细胞，经鉴定后分别采用MTT法和放射免疫分析法（RIA）检测AngⅡ对KFB增殖及分泌IL－6的影响。结果 10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于KFB后48及72小时，可明显促进细胞增殖；无AngⅡ刺激时，体外培养的正常人KFB可分泌微量的IL－6，且呈时间依赖性，10^-7-10^-6mol/L Ang Ⅱ作用于细胞6小时，即可迅速而显著地刺激细胞分泌IL－6，10^-6mol/L AngⅡ作用24－48小时，均可显著增加细胞IL－6的分泌。结论 不同浓度的Ang Ⅱ（10^-7-10^-6mol/L)作用于人KFB后，可促进细胞增殖，提高细胞对IL－6的分泌量。推测这可能是在各种肾脏疾病进展时，AngⅡ 参与肾小管间质病变、促进肾纤维化的机制之一。     

血管紧张素1-7对血管紧张素Ⅱ诱导的SD大鼠心室成纤维细胞的影响

目的 在血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,AngⅡ)存在情况下,探讨血管紧张素1-7(angiotensin1-7,Ang1-7)对SD大鼠心室成纤维细胞的影响.方法 采用新生1～3d的SD乳鼠,用胰蛋白酶和Ⅱ型胶原酶消化心室,采用差速贴壁法获取成纤维细胞,将细胞完全随机化分组为对照组(不予处理)、AngⅡ组、Ang1-7组、AngⅡ+Ang1-7组(先用Ang1-7预处理30 min,再加入AngⅡ处理).采用免疫荧光鉴定细胞,CCK-8检测细胞增殖,Western blot检测细胞Rac1、Rad、gp91 phox(Nox2)、P65、结缔组织生长因子(connective tissue growth factor,CTGF)蛋白的表达,实时荧光定量PCR测定Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白(Col Ⅰ、ColⅢ)和纤维连接蛋白(fibronectin) mRNA的表达.结果 AngⅡ能够促进SD大鼠心室成纤维细胞增殖,Ang1-7能减弱AngⅡ的促增殖作用(P＜0.05);与对照组比较,AngⅡ组Rac1、Nox2、P65、CTGF表达增加,Rad表达下降,Col Ⅰ、ColⅢ、fibronectin转录增加(P＜0.05);与AngⅡ组比较,AngⅡ+Ang1-7组Rac1、Nox2、P65、CTGF表达减少,Rad表达升高,Col Ⅰ、ColⅢ、fibronectin转录下降(P ＜0.05);Ang1-7组上述各项指标与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 AngⅡ存在时,Ang1-7对心室成纤维细胞具有保护作用.Ang1-7通过调节Rac1、Rad及下游蛋白的表达,能够抑制成纤维细胞合成细胞外基质.     

红景天苷对血管紧张素Ⅱ诱导的血管外皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:观察红景天苷对血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ,ANG-Ⅱ)诱导的大鼠血管成纤维细胞(vascular adventitial fibroblasts,VAF)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法:采用细胞贴壁法培养SD大鼠胸主动脉AF,分为对照组,终浓度0.1μmol·L-1ANG-Ⅱ组,浓度为10μmol·L-1红景天苷组,浓度为20μmol·L-1红景天苷组,ANG-Ⅱ联用浓度为40μmol·L-1红景天苷组,浓度为80μmol·L-1红景天苷组,均作用24 h。MTT法检测细胞增殖活性,ELISA法测定细胞培养上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量。结果:1与对照组比较,ANG-Ⅱ组能显著刺激VAF增殖(P<0.01);40μmol·L-1和80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较,能够显著抑制VAF增殖(P<0.05)。2与对照组比较,ANG-Ⅱ组能显著升高VAF培养上清液OD值(P<0.01);浓度为80μmol·L-1的红景天苷组与ANG-Ⅱ组比较,能显著降低VAF培养上清液中OD值(P<0.05)。结论:红景天苷能够通过抑制VAF增殖和Ⅰ型胶原蛋白表达,发挥抗血管重塑作用。     

大蒜素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用

目的 观察大蒜素对血管紧张素Ⅱ诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用。方法 采用培养的兔血管平滑肌细胞，应用^3H～TdR掺入法，观察在血管紧张素Ⅱ促进VSMC增殖过程中，大蒜素对血管平滑肌细胞DNA合成的影响及其时间效应。结果 血管紧张素Ⅱ可促进处于静止状态的兔血管平滑肌细胞DNA的合成，36h时细胞DNA的合成达到高峰。大蒜素对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖有明显的抑制作用，并呈现出明显的浓度依赖关系，随着大蒜素表度的升高其对血管平滑肌细胞增殖的抑制作用也逐渐增加，在24h时，10．00g／L的大蒜素对血管平滑肌细胞增殖的抑制率为13．46％。结论 大蒜素可抑制血管紧张素Ⅱ诱导兔血管平滑肌细胞的增殖，并存在一定的量效依赖关系及时间反应性。     

芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原分泌的影响

目的：观察芝麻素含药血清对血管紧张素Ⅱ（ Ang Ⅱ）诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌的影响,探讨其可能机制。方法应用血清药理学方法制备大鼠含药血清,采用复合酶消化和差速贴壁法原代培养心肌成纤维细胞,MTT法测定芝麻素对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响, ELISA法测定Ⅰ、Ⅲ型胶原含量与转化生长因子β1（ TGF－β1）水平,比色法测定细胞总抗氧化能力（ T－AOC）及丙二醛（ MDA）含量,Western blot法测定Smad3活化水平。结果芝麻素含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖及胶原分泌（ P＜0.05,P＜0.01）,降低TGF－β1含量及Smad3活化水平（P＜0.05,P＜0.01）。此外,芝麻素含药血清可明显提高成纤维细胞抗氧化能力,减少脂质过氧化产物MDA生成（ P＜0.05,P＜0.01）。对照血清对上述各项指标均无明显影响。结论芝麻素含药血清可明显抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖与胶原分泌,其机制可能与改善氧化应激状态、调节TGF－β1／Smad信号通路有关。     

小檗碱抑制血管紧张素Ⅱ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的作用及机制研究

目的研究小檗碱(Ber)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞(CFB)增殖和胶原合成的影响,并探讨其作用机制。方法采用酶消化法和差速贴壁法获得纯化的CFB,应用MTT法测定CFB增殖、羟脯氨酸法测定胶原蛋白含量、化学比色法测定NO含量和NOS活力、ELISA法测定TGF-β1含量。结果小檗碱在1.25~10 mg/L浓度范围内可明显抑制AngⅡ诱导的CFB增殖和胶原蛋白合成增加,同时可升高NO含量和NOS活力、降低TGF-β1含量。结论小檗碱可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖和胶原蛋白合成的作用,对抑制心肌纤维化,改善心室重构有积极意义,其作用机制与促进心肌成纤维细胞分泌NO、减少TGF-β1含量有关。     

辛伐他汀对大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

目的探讨辛伐他汀(simvastatin,Sim)对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的抑制作用,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,流式细胞分析技术(FCM)检测细胞周期,分别观察不同浓度Sim对AVP诱导CFs增殖的作用。结果(1)随着Sim浓度的增高,CFsMTT比色法D490值呈明显的递减趋势,其中1×10-6 和1×10-5 mol/LSim组的D490值分别为0.215±0.041和0.163±0.018,均较对照组D490值(0.393±0.048)显著降低(P<0.01);(2)FCM细胞周期分析表明,CFs的S期细胞百分率和细胞增殖指数随Sim刺激浓度的增加而呈递减趋势,G0/G1期细胞百分率呈递增趋势,其中1×10-6 和1×10-5 mol/LSim组与对照组1×10-7 mol/LAVP比较,差异显著(P<0.01)。结论Sim可抑制AVP诱导的CFs增殖,其作用可能与影响CFs细胞周期有关。     

白藜芦醇抑制血管紧张素Ⅱ诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的实验研究

目的:观察白藜芦醇对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞(CFs)胶原合成的影响,并探索可能分子机制。方法:提取新生大鼠CFs,采用免疫荧光法检测CFs纤维粘连蛋白(fibronectin)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达以鉴定CFs;用100nM AngⅡ或100nM AngⅡ加白藜芦醇(20μM或50μM)干预后,采用MTT法检测细胞增殖变化;采用Realtime-PCR检测各干预组CFs细胞I型胶原(Collagen I)、III型胶原(Collagen III)及TGF-β1的mRNA表达水平;Western Blotting法检测各干预组CFs、Collagen I、Collagen III及TGF-β1的蛋白表达变化。结果:AngⅡ干预可显著促进CFs的增殖,而白藜芦醇20μM和50μM均可呈时间依赖性抑制AngⅡ诱导的CFs增殖;AngⅡ可以促进CFs、Collagen I、Collagen III及TGF-β1的mRNA及蛋白表达水平(P<0.05);而当加入白藜芦醇后,AngⅡ所诱导的上述分子的表达无论在mRNA水平还是蛋白水平均被明显抑制(P<0.05)。结论:白藜芦醇可以抑制AngⅡ诱导的CFs增殖及胶原合成,下调TGF-β1表达可能是白藜芦醇抑制CFs胶原合成的关键机制。     

RhoA／Rho激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ刺激心肌成纤维细胞增殖和胶原合成中的作用

【目的】探讨RhoMRho激酶信号通路在血管紧张素Ⅱ（angiotensinⅡ，AngⅡ）刺激心肌成纤维细胞（cadiac fibroblasts，CFBs）增殖和胶原合成中的作用。【方法】采用胰酶消化、差速贴壁法培养新生SD大鼠CFBs,并用AngⅡ诱导CFBs增殖和胶原合成。采用四氮唑盐比色法测定细胞增殖，羟脯氨酸法测定CFBs胶原含量．RT-PCR检测RhoA/Rho激酶mRNA的表达，Western blot检测肌球蛋白结合亚基磷酸化（phosphorylation of myosin—binding subunit，MBS-P）表达作为Rho激酶功能活化的标志。【结果】AngⅡ（10-Tmol／L）刺激48h可诱导新生SD大鼠CFBs的Rho激酶活化（P〈0．01），上调RhoA、Rho激酶mRNA表达（P〈0．05，P〈0．05）；Rho激酶特异性抑制剂HYDROXYFASUDIL（h4413）对AngⅡ刺激的CFBs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用（P〈0．05，P〈0．05）。【结论】RhoMRho激酶信通路可能在调控AngⅡ刺激CFBs增殖和胶原合成中发挥重要作用。     

异丙酚抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制研究

目的 探讨异丙酚抑制血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌成纤维细胞增殖的机制.方法 使用4-羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)中含有1％(w/v)胰蛋白酶、0.5 mol/L乙二胺四乙酸(EDTA)和0.1％胶原酶的酶混合物,将切碎的心室心肌连续消化,将分离的细胞混合物在培养箱中预铺板1 h,以分离成纤维细胞.将培养细胞分为...     

罗格列酮对血管紧张素Ⅱ诱导的大鼠主动脉外膜成纤维细胞迁移的影响

目的:探讨PPARγ激动剂罗格列酮(ROSI)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的大鼠主动脉外膜成纤维细胞(AFs)迁移的影响.方法:采用组织贴块法原代培养AFs并传代.取第5代纯化细胞用于实验,分为空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ 0.1 μmol/L ROSI组、AngⅡ 1.0 μmol/L ROSI组、AngⅡ 10 μmol/L ROSI组,采用Transwell Chamber测试细胞迁移.另取AFs分为4组:空白对照组、AngⅡ组、AngⅡ 10 μmol/L ROSI组和AngⅡ 10 μmol/L ROSI GW9662组,用Western blotting检测基质金属蛋白酶2(MMP-2)蛋白的表达.另取AFs同上分为4组,采用明胶酶谱法检测MMP-2活性.结果:AngⅡ能促进AFs的迁移,ROSI可呈剂量依赖地抑制AFs的迁移(P＜0.05).ROSI能够降低AFs MMP-2蛋白的表达及MMP-2的活性.结论:ROSI可抑制AngⅡ诱导的大鼠AFs的迁移,其机制可能与抑制 MMP-2的表达及活性有关.