重组人促红细胞生成素对L5脊神经切断大鼠痛阈及脊髓TNF-α和IL-1β表达的影响

目的 观察重组人促红细胞生成素(rhEPO)对L5脊神经切断大鼠机械和热痛阈及脊髓TNF-α和IL-1β表达的影响.方法 SD雄性大鼠50只随机分为五组:脊神经损伤rhEPO1 000、3 000、5 000 U/kg组(R1、R2、R3组)和生理盐水组(N组)及假手术组(C组),每组10只.术前1 d给药,连续7 d.测定术前当天及术后3、7、14 d大鼠的机械性缩足反射阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)及术后14 d各组大鼠L5脊髓肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)的水平.结果 L5脊神经损伤术后大鼠术侧MWT降低、TWL缩短、脊髓TNF-α和IL-1β的表达增高(P<0.01).与N组比较,R1组术后各时间点的MWT和TWL无明显改变;R2和R3组MWT增高、TWL延长(P<0.05);脊髓TNF-α、IL-1β水平降低(P<0.01).结论 腹腔注射rhEPO 3 000或5 000U/kg能缓解L5脊神经切断大鼠的机械和热痛敏,抑制脊髓TNF-α和IL-1β的表达.     

骨髓间质干细胞经静脉移植对大鼠脊髓损伤后TNF-α、IL-1β mRNA表达的影响

目的研究大鼠骨髓间质干细胞(MSCs)经静脉移植对脊髓损伤(SCI)后肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法运用改良Allen法制备大鼠脊髓外伤性截瘫模型,假手术组6只,损伤组84只随机分为对照组和rMSCs移植组。对照组和rMSCs移植组、假手术组于损伤后10min经尾静脉分别注射PBS1ml和rMSCs单细胞PBS悬液1ml。移植后3h、6h、12h、24h、3d、7d、14d,应用RT-PCR方法检测损伤大鼠脊髓TNF-α、IL-1βmRNA表达变化情况。结果对照组和rMSCs移植组损伤脊髓TNF-α、IL-1βmRNA表达较假手术组有明显增加(P0.05);rMSCs移植组与对照组比较,TNF-α、IL-1βmRNA表达受到明显抑制(P0.05)。结论 rMSCs静脉移植后能改变脊髓损伤区的微环境,使损伤脊髓局部的TNF-α、IL-1β表达程度降低。这可能是减少脊髓继发性损伤,促进损伤大鼠运动功能恢复的机制之一。     

肿瘤坏死因子α在完全弗氏佐剂致痛大鼠脊髓的表达

目的 观察肿瘤坏死因子α(TNF-α)在完全弗氏佐剂(CFA)致痛大鼠脊髓的表达.方法 SD大鼠56只,随机分为实验组(48只)和对照组(生理盐水组,8只).实验组左足底皮下注射CFA.疼痛模型建立后1 h、3 h、1 d、3 d、7 d、14 d取大鼠胸、腰段脊髓,腰段与坐骨神经相连,用免疫组化和免疫荧光方法检测TNF-α表达.结果 大鼠足底注射CFA后3 h,同侧TNF-α表达较对侧和对照组增加(P<0.05);注射后3 d,TNF-α表达最高;注射后14 d TNF-α表达与对照组接近.TNF-α主要表达在神经元细胞.结论 TNF-α在CFA致痛大鼠脊髓后角的表达主要在炎性痛早期,并具有节段性,抑制TNF-α上调有可能成为临床治疗炎性痛早期的新方法.     

盲肠结扎穿孔脓毒症大鼠肠黏膜通透性改变与TNF-α表达水平的关系

目的采用盲肠结扎穿孔法建立大鼠脓毒症模型,探讨其肠黏膜通透性改变与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平的关系。方法选取48只健康雄性SD大鼠,按照随机数字表分为假手术组(n=24,仅行单纯剖腹手术)与CLP组(n=24,采用盲肠结扎穿孔法制作)。记录两组在术后6 h、12 h、24 h、48 h四个时间点(每个时间点6只)的血清二胺氧化酶(DAO)、TNF-α表达水平并行HE染色观察回肠组织病理改变情况。结果假手术组大鼠腹腔内小肠肠管无明显充血水肿等炎性表现,CLP组术后12 h回肠黏膜即开始出现局部炎性反应,至术后48 h时有明显的肠黏膜损伤性改变。假手术组大鼠在术后6 h、12 h、24 h、48 h时血清TNF-α及DAO表达水平之间的差异均无统计学意义(均P 0.05),CLP组上述时间点的血清TNF-α及DAO表达水平均高于假手术组,差异均有统计学意义(均P 0.05)。结论大鼠在盲肠结扎穿孔致脓毒症状态下可出现血清早期促炎因子TNF-α表达水平的升高,同时伴有血清DAO的变化及回肠黏膜病理改变,TNF-α等促炎因子释放引发的炎症反应可能与肠黏膜通透性改变有关。     

腹腔注射右美托咪定对糖尿病神经病理性疼痛大鼠脊髓胶质细胞活化的影响

目的 探讨腹腔注射右美托咪定(dexmedetomidine,Dex)对糖尿病神经病理性疼痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠脊髓胶质细胞活化及炎症因子表达的影响. 方法 健康清洁级雄性SD大鼠32只,体重180～200 g,采用随机数字表法大鼠分为4组(每组8只):对照组(C组)、DNP组、Dex组和α2受体拮抗剂组(YOH组).采用链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)注射法建立大鼠DNP模型.从STZ注射28 d开始:Dex组连续7d腹腔注射Dex 50 μg/kg;YOH组连续7d腹腔注射育亨宾0.1 mg/kg,之后30 min腹腔注射Dex 50 μg/kg.于注射STZ后29～35 d测定各组大鼠机械缩足反射阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT).于35 d测定MWT后处死大鼠,采用免疫荧光双标法测定各组大鼠脊髓内小胶质细胞和星形胶质细胞的活化情况,采用ELISA法检测各组大鼠脊髓内TNF-α和IL-1的含量. 结果 与C组比较,DNP组、Dex组、YOH组3组大鼠均体重下降、血糖升高(P＜0.05);DNP组、Dex组和YOH组3组大鼠组间比较,体重和血糖差异无统计学意义(P＞0.05).与C组比较,DNP组和YOH组术后各时点MWT均降低(P＜0.05);与DNP组比较,Dex组术后各时点MWT均升高(P＜0.05).与C组比较,DNP组和YOH组大鼠脊髓内小胶质细胞活化率、TNF-α和IL-1的含量均升高(P＜0.05);与DNP组比较,Dex组大鼠脊髓内小胶质细胞活化率、TNF-α和IL-1的含量均降低(P＜0.05);各组大鼠组间比较,脊髓内星形胶质细胞活化率差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 Dex能够缓解DNP大鼠的痛觉过敏,其机制可能与抑制小胶质细胞活化,从而减轻脊髓内炎症反应有关.     

L-丝氨酸对大鼠神经细胞凋亡与内源性神经干细胞增生的影响

目的 观察大鼠急性脊髓损伤(SCI)后L-丝氨酸(L-Ser)抑制神经细胞凋亡与促进内源性神经干细胞(eNSCs)增殖的作用. 方法 健康SD成年雄性大鼠100只,随机分为5组(n=20):假手术组(只行椎板切除,不损伤脊髓)、单纯损伤组(制备SCI模型后腹腔注射生理盐水)、L-Ser治疗组(制备SCI模型后腹腔注射L-Ser)、D-环丝氨酸(DCS)治疗组(制备SCI模型后腹腔注射DCS)和DCS拮抗组(制备SCI模型后腹腔注射L-Ser和DCS).1、3、5、7d观察并记录各组大鼠斜板试验的斜坡角度和BBB运动评分,观察脊髓前角神经细胞数、检测细胞凋亡和Brdu和Nestin双标阳性细胞的表达. 结果 术后3d开始,L-Ser治疗组的斜坡角度和BBB运动评分均大于单纯损伤组、DCS治疗组和DCS拮抗组,差异有统计学意义(P＜0.05),且随着治疗时间的增加,斜坡角度呈现递增趋势.L-Ser治疗组的脊髓前角神经细胞数和Brdu/Nestin阳性细胞数明显多于单纯损伤组、DCS治疗组和DCS拮抗组,而脊髓前角神经凋亡细胞数明显少于其他3组,差异均有统计学意义(P＜0.05).DCS治疗组、DCS拮抗组和单纯损伤组间的斜坡角度、BBB运动评分、脊髓前角神经细胞数、凋亡细胞数、Brdu/Nestin阳性细胞数比较差异均无统计学意义(P＞0.05). 结论 L-Ser能抑制SCI大鼠脊髓组织中神经细胞的凋亡,促进SCI大鼠脊髓组织eNSCs增殖.     

甲泼尼龙预干预脊髓缺血再灌注损伤对热休克蛋白27和肿瘤坏死因子α表达的影响

目的 研究甲泼尼龙(MP)预处理脊髓缺血再灌注损伤(SCⅡ)对热休克蛋白27(HSP27)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的影响.方法 健康纯种成年雄性SD大鼠150只随机分成三组(n=50):对照组只暴露腹主动脉,不做模型;SCⅡ组夹闭腹土动脉30 min后松开,冉灌注3 h建立SCⅡ模型,然后处死大鼠,取腰段,脊髓标本;MP组于建立SCⅡ模型前30 min尾部静脉注射MP(30 mg/kg).通过HE染色观察损伤节段脊髓病删形态学变化,用免疫组织化学染色方法观察脊髓组织HSP27和TNF-α,的表达,并对大鼠后肢运动功能进行评分.结果 对照绀:神经元细胞轮廓清晰,极性存在,核圆,核仁清楚,尼氏体呈网状均匀排列于细胞核周围,胞浆均匀深染,组织结构完整清楚,无中性粒细胞浸润,无出血、水肿等异常现象;SCⅡ组:神经元细胞肿胀,数目减少,极性变钝,核仁轻度萎缩,尼氏体旱颗粒状,淡染,组织巾有中性粒细胞浸润;MP组:部分神经元细胞轻度水肿,极性稍变钝,核仁尚清,绀织中术见中性粒细胞浸润.SCⅡ组脊髓组织内HSP27及TNF-α大量表达,与对照绀对比差异有统计学意义(P<0.05).MP组脊髓细胞内TNF-α表达明显降低,而HSP27表达更显著, 者分别与SCⅡ组对比差异均有统计学意义(P<0.05).人鼠SCⅡ后肢功能评分降低,MP组大鼠后肢运动功能评分较SCⅡ组明显提高,差异有统计学意义(P<0.05).结论 MP预处理可降低大鼠SCⅡ中TNF-α的表达,增加HSP27的表达,并能提高大鼠后肢运动功能评分,预防性应用MP能减轻SCⅡ,保护脊髓神终功能.     

环孢霉素A对大鼠脊髓损伤早期环氧化酶-2与肿瘤坏死因子α表达的影响

目的:观察环孢霉素A(CsA)对大鼠脊髓损伤(SCI)早期环氧化酶-2(Cox-2)与肿瘤坏死因子α(TNF-α)表达的影响,探讨CsA对大鼠SCI的作用。方法:180只大鼠随机分成对照组、损伤组和损伤后CsA治疗组(治疗组),每组60只。用25g.cm致伤损伤组和治疗组大鼠T8~T11脊髓,对照组不损伤脊髓。治疗组于术后1h予尾静脉注射CsA(2.5mg/kg),之后每隔12h给药1次,对照组和损伤组在相同时间点尾静脉注射相同体积生理盐水。损伤组和治疗组于术后2h、6h、12h、24h、48h和72h处死动物取损伤段脊髓标本,对照组在相应时间点取相应节段脊髓标本,切片后分别行HE染色观察脊髓组织损伤情况、免疫组织化学EnVision法检测TNF-α、免疫组织化学SP法检测Cox-2,并对TNF-α和Cox-2进行定量分析。结果:对照组各时间点脊髓无出血、水肿等变化。损伤组和治疗组伤后2h、6h脊髓灰质可见水肿、出血,但无坏死,周围白质无明显改变;12h、24h脊髓灰质出现广泛灶性出血及出血后形成囊腔,神经元肿胀,部分细胞核浓缩,染色增强,白质见少量红细胞渗出,髓鞘轻度肿胀;48h、72h脊髓灰质中出现神经元固缩、坏死、溶解,细胞体积变小,有大量小胶质细胞增生和中性粒细胞浸润,白质中可见较多红细胞渗出,髓鞘肿胀和大量空泡,周围有炎性细胞浸润和胶质细胞增生;治疗组各时间点的病理改变均较损伤组轻。对照组大鼠脊髓Cox-2呈可疑阳性表达;损伤组和治疗组伤后2h Cox-2即有表达,6h达到高峰,之后逐渐下降;损伤组在伤后72h Cox-2表达仍较对照组高(P<0.05),而治疗组到伤后48h即恢复到对照组水平(P>0.05),治疗组各时间点Cox-2表达均较损伤组低(P<0.05);对照组大鼠脊髓TNF-α呈可疑阳性或弱阳性表达;损伤组和治疗组伤后2h即有TNF-α表达,12h达到高峰,之后逐渐下降;损伤组在伤后72h TNF-α表达仍较对照组高(P<0.05),而治疗组在伤后72h即恢复到对照组水平(P>0.05),治疗组各时间点TNF-α表达均较损伤组低(P<0.05)。结论:CsA能显著降低大鼠SCI后早期损伤脊髓组织中Cox-2和TNF-α的表达,从而减轻脊髓继发性损伤。     

右美托咪定对脓毒症大鼠脑组织炎性反应的影响

目的 评价右美托咪定对脓毒症大鼠脑组织炎性反应的影响.方法 健康雄性SD大鼠72只,10周龄,体重250 ～ 280 g,采用随机数字表法,将其分为4组(n=18):对照组(C组)、脓毒症组(LPS组)、注射用水组(DW组)和右美托咪定组(DEX组).LPS组、DW组和DEX组腹腔注射LPS5mg/kg(溶于1 ml生理盐水中)制备大鼠脓毒症模型;C组腹腔注射生理盐水1ml.DW组侧脑室注射注射用水20μl,DEX组侧脑室注射右美托咪定3μg/kg(溶于20μl注射用水中).分别于开始给药后1、2和6h时处死6只大鼠,取海马组织,采用ELISA法测定TNF-α和IL-6的含量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA的表达.结果 与C组比较,LPS组开始给药后各时点海马组织IL-6和TNF-α的含量升高(P＜0.05);与LPS组比较,DW组开始给药后各时点海马组织IL-6和TNF-α的含量差异无统计学意义(P＞0.05),TLR4mRNA表达上调(P＜0.05);与DW组比较,DEX组开始给药后各时点海马组织IL-6和TNF-α的含量降低,开始给药后2和6h时海马组织TLR4 mRNA表达下调(P＜0.05).结论 右美托咪定可减轻脓毒症大鼠脑组织炎性反应,可能与下调TLR4 mRNA的表达有关.     

TNF-α拮抗剂(Etanercept)治疗脊髓损伤作用机制的实验研究

目的探讨TNF-α拮抗剂Etanercept(依那西普)对继发性脊髓损伤的治疗作用和可能机制。方法建立大鼠脊髓挫伤模型,损伤后1 h对大鼠行腹腔注射5 mg/kg Etanercept或生理盐水(损伤对照组);假手术组(20只大鼠)仅行椎板切除术而无脊髓损伤,1 h后给予腹腔注射1 ml生理盐水。结果在脊髓损伤急性期(12 h、1 d、3 d),Etanercept治疗组TNF-α的蛋白表达强度明显弱于损伤对照组。与对照组相比,Etanercept治疗组TNFR1的表达在损伤后6、12 h均下降,TNFR2仅在损伤后6 h下降。损伤对照组大鼠在脊髓损伤后后肢运动功能明显受限,而Etanercept治疗组大鼠在脊髓损伤后2、4、8周,后肢BBB评分显著升高。结论 Etanercept可能通过抑制TNF-α/TNFR通路,减轻了脱髓鞘变性,促进了运动功能的恢复。     

盐酸戊乙奎醚预先给药对大鼠内毒素性急性肺损伤时缺氧诱导因子-1α表达的影响

目的 评价盐酸戊乙奎醚预先给药对大鼠内毒素性急性肺损伤时缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)表达的影响.方法 健康成年雌性SD大鼠120只,体重180 ～ 220 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为3组(n=40):对照组(C组)、急性肺损伤组(ALI组)和盐酸戊乙奎醚预先给药组(P组).采用腹腔注射内毒素5 mg/kg制备大鼠内毒素性急性肺损伤模型.C组腹腔注射等量生理盐水,P组于注射内毒素前30 min时腹腔注射盐酸戊乙奎醚2 mg/kg.于注射内毒素后2、4、8和24 h时各组随机取8只大鼠处死取肺,采用RT-PCR法检测肺组织HIF-1α mRNA的表达.于注射内毒素后6h时随机取8只大鼠处死取肺,测定湿干重比(W/D比),用ELISA法检测肺组织IL-6的含量,光镜下观察肺组织病理学结果.结果 与C组比较,ALI组和P组注射内毒素后6h时W/D比、IL-6含量、各时点HIF-1α表达水平升高(P＜0.05);与ALI组比较,P组注射内毒素后6h时W/D比、IL-6含量、各时点HIF-1α表达水平降低(P＜0.05).P组肺组织病理学损伤程度较ALI组减轻.结论 盐酸戊乙奎醚预先给药通过下调肺组织HIF-1α表达,抑制炎性反应,从而减轻大鼠内毒素性急性肺损伤.     

Toll样受体3在糖尿病模型大鼠脊髓中的表达

目的 研究Toll样受体3(TLR3)在糖尿病模型大鼠脊髓中的表达,探讨其与糖尿病神经病理性疼痛的关系.方法 50只SD大鼠,其中40只大鼠一次性腹腔注射链脲佐菌素(STZ)65 mg/kg建立糖尿病大鼠模型,C组腹腔注射相同剂量的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液.1周后断尾取血测血糖,空腹血糖＞16.7 mmol/L为糖尿病模型制备成功.分别测定大鼠制模后2周(D2组)、4周(D4组)、6周(D6组)、8周(D8组)机械痛阈(MWT)和热痛阈(TWL).采用RT-PCR法测定大鼠L4～6脊髓TLR3表达和TNF-α水平.结果 与C组比较,D2、D4、D6、D8组大鼠MWT明显降低(P＜0.05),脊髓TLR3表达、TNF-α水平明显升高(P＜0.05);与D2组比较,D4、D6、D8组大鼠MWT明显降低(P＜0.05),TLR3表达、TNF-α水平明显升高(P＜0.05).与C组和D2组比较,D4、D6、D8组大鼠TWL明显降低(P＜0.05).结论 糖尿病大鼠脊髓TLR3表达出现上调,并可能通过促使TNF-α释放诱发神经病理性疼痛.     

甲基强的松龙对大鼠脊髓损伤后神经细胞凋亡的影响及其机理

目的研究甲基强的松龙(MP)对大鼠横断性脊髓损伤(SCI)后神经细胞凋亡的影响及其作用机理.方法60只成年Wistar大鼠随机分成正常对照组、脊髓损伤组和MP治疗组,每组20只,MP治疗组在横断T10脊髓组织后30min经尾静脉给予MP治疗,损伤组和对照组未予任何治疗.MP治疗组和脊髓损伤组大鼠于脊髓损伤后8h、24h、3d和1周取材,采用透射电镜、TUNEL染色观察细胞凋亡情况,采用免疫组织化学染色观察Fas、半胱氨酸蛋白酶(caspase)-8和caspase-3在SCI前后的变化情况,采用改良Tarlov评分方法观察大鼠后肢运动功能.结果SCI后24h大鼠后肢运动功能逐渐恢复,MP治疗组大鼠的后肢运动功能恢复优于损伤组,7d后尤其明显.TUNEL染色和电镜检查证实SCI后8h即有凋亡细胞出现,其中既有神经元也有胶质细胞3d凋亡细胞数达到高峰;7d仍有凋亡细胞存在,但已明显减少;各时间点治疗组凋亡细胞数量明显少于损伤组(P＜0.05).治疗组和损伤组在SCI后8h可以检测到少量的Fas和caspase-8阳性神经元及胶质细胞,Fas和caspase-8的表达在SCI后3d达到高峰,7d表达下降,各时间点治疗组的Fas和caspase-8灰度值明显大于损伤组,二者有显著性差异(P＜0.05).治疗组和损伤组caspase-3的表达在SCI后8h均逐渐增加(与对照组相比),7d达到高峰,治疗组灰度值大于损伤组,但二者无显著性差异.结论MP能抑制大鼠脊髓横断性脊髓损伤后的神经细胞凋亡,但不能推迟细胞凋亡出现的高峰时间;MP抑制细胞凋亡的途径可能通过非特异性抑制Fas和caspase-8的表达来实现.     

盐酸戊乙奎醚预先给药对新生大鼠内毒素性急性肺损伤时NF-κB活性的影响

目的 探讨盐酸戊乙奎醚预先给药对新生大鼠内毒索性急性肺损伤时NF-kB活性的影响.方法 健康新生Wistar大鼠30只,雌雄不拘,日龄7 d,体重18～21 g,随机分为3组(n=10):对照组(C组)、急性肺损伤组(ALI组)和盐酸戊乙奎醚预先给药组(P组).采用腹腔注射内毒素3 mg/kg的方法制备急性肺损伤模型,P组腹腔注射盐酸戊乙奎醚0.5 mg/kg,30 min后制备模型,C组腹腔注射等容量生理盐水.于腹腔注射内毒素4 h时处死大鼠取肺,称重后计算肺湿,干重比,电镜下观察肺组织病理学结果,采用免疫组织化学法检测NF-kB p65的表达水平,采用酶联免疫吸附法测定TNF-α、IL-1 β及IL-10的含量.结果 与C组比较,ALI 组和P组肺湿/干重比、TNF-α、IL-1β、IL-10含量及NF-KB p65表达水平升高(P＜0.05);与ALI 组比较,P组肺湿/干重比、TNF-α、IL-1β、IL-10含量及NF-kBp65表达水平降低(P＜0.05).病理学结果显示:P组肺组织损伤程度较ALI组明显减轻.结论 盐酸戊乙奎醚预先给药可通过抑制肺组织NF-kB活化,降低炎性反应,减轻新生大鼠内毒素性急性肺损伤.     

腺苷酸活化蛋白激酶对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及可能机制

目的探讨腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的影响及可能机制。方法将48只健康雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组,每组12只。模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,AMPK抑制剂组大鼠建模前腹腔注射Compound C 20 mg/kg,生理盐水组建模前给予等量生理盐水。于建模后6、12、24和48 h用Basso、Beattie、Bresnahan(BBB)评分法评估大鼠神经运动功能,末次评估完成后处死大鼠并取脊髓组织标本,用HE染色法检测大鼠脊髓组织病理变化,TUNEL法检测大鼠脊髓组织细胞凋亡情况,蛋白质印迹法检测大鼠脊髓组织中AMPK、p-AMPK、NF-κB、IκBα和p-IκBα蛋白表达,ELISA法检测大鼠脊髓组织中白细胞介素-1β(IL-1β)、IL-6和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)浓度。结果建模后6、12、24和48 h,模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组BBB评分均低于假手术组,而AMPK抑制剂组BBB评分高于模型组和生理盐水组,差异均有统计学意义(P 0.05)。假手术组脊髓组织结构清晰完整,未见神经元凋亡;模型组和生理盐水组大鼠脊髓组织出现神经元变性和坏死、炎性细胞浸润,可见大量神经元凋亡;AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织病理改变减轻,神经元凋亡减少。模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织中p-AMPK、NF-κB和p-IκBα蛋白相对表达量均高于假手术组,AMPK和IκBα蛋白相对表达量均低于假手术组,差异均有统计学意义(P 0.05);AMPK抑制剂组p-AMPK、NF-κB和p-IκBα蛋白相对表达量与模型组和生理盐水组相比均降低,差异均有统计学意义(P 0.05),AMPK和IκBα蛋白相对表达量均升高,差异均有统计学意义(P 0.05)。模型组、生理盐水组和AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6和TNF-α浓度均高于假手术组,AMPK抑制剂组大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6和TNF-α浓度与模型组和生理盐水组相比均降低,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论 AMPK可能参与大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制可能与NF-κB通路介导的炎性反应有关;抑制AMPK活性可减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤、保护神经元。     

PAAF与ASPAAF诱导的肠损伤比较的实验研究

目的 探讨胰腺炎相关性腹水(PAAF)与急性化脓性腹膜炎相关性腹水(ASPAAF)诱导大鼠肠损伤的作用及其可能机理.方法 以PAAF和ASPAAF分别诱导的SD大鼠肠损伤模型为研究对象,将48只SD大鼠随机均分为3组. 对照组腹腔内注射生理盐水8 ml/只; PAAF组腹腔内注射PAAF 8 ml/只, ASPAAF组腹腔内注射ASPAAF 8 ml/只. 分别于注射后6 h 和12 h分批处死大鼠,每时间点8只. 测定血清内毒素和TNF-α水平,同时测定小肠组织中Na -K -ATP酶活性及TNF-α水平; 于光镜下观察肠黏膜损伤情况并作等级比较.结果 注射后6 h 和12 h, PAAF组和ASPAAF组血清内毒素和TNF-α水平, 小肠组织中TNF-α水平以及肠黏膜损伤程度均较对照组增高(P＜0.05),而Na -K -ATP酶活性则显著降低(P＜0.05); ASPAAF组血清内毒素和TNF-α水平,小肠组织中TNF-α水平以及肠黏膜损伤程度又均较PAAF组增高(P＜0.05),Na -K -ATP酶活性则显著降低(P＜0.05).结论 PAAF及ASPAAF均能引起大鼠肠损伤,且ASPAAF引起的损伤更为严重.     

抗TNF—α治疗对重症急性胰腺炎肺损伤NF—κBB信号通路的影响

目的 探讨抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)治疗对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺泡巨噬细胞(AM)细胞核因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 SD大鼠随机分为对照组、SAP组、抗TNF-α抗体治疗组.每组再分为术后1,3,6,12 h 4个时相组,每时相6只.逆行性胰胆管注射5 %牛磺酸钠建立SAP大鼠模型.从支气管肺泡灌洗液(BALF)获取AM,检测AM分泌TNF-α水平,并检测BALF中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平.以RT-PCR法测定AM TNF-αmRNA的表达.行肺组织病理学检查及免疫组化检查NF-κB的表达.结果 对照组肺组织较少有NF-κB活化的AM,SAP各组肺组织均可见NF-κB活化,且随时间进展NF-κB由细胞质逐渐进入细胞核.TNF-α抗体治疗组仍有少量NF-κB活化.ANP大鼠肺损伤随病情进展而加重.肺组织MPO及BALF蛋白含量随时间延长而升高,12 h达最高值,分别为(10.78±0.58) U/g和 (2 011.0±105.5)μg/mL.AM分泌TNF-α水平也逐渐升高,至6h达高峰[(1 624.2±149.2) pg/mL],12 h回落.TNF-αmRNA 的表达与TNF-α的变化趋势相似.SAP大鼠上述各组指标与正常对照组相比均有统计学差异(P＜ 0.05).TNF-α抗体治疗组各指标仍显著高于正常对照组(P＜0.05),但低于SAP组(P＜0.05).AM分泌TNF-α活性与MPO及BALF蛋白含量呈正相关(r=0.65, 0.76, P＜0.01).结论 抗TNF-α治疗可抑制SAP大鼠的TNF-α对AM NF-κB活化的反馈激活作用,并可直接减少TNF-α,进而减轻肺损伤.     

抗TNF-α治疗对重症急性胰腺炎肺损伤NF-κB信号通路的影响

目的 探讨抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)治疗对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺泡巨噬细胞(AM)细胞核因子κB(NF-κB)信号通路的影响.方法 SD大鼠随机分为对照组、SAP组、抗TNF-α抗体治疗组.每组再分为术后1,3,6,12 h 4个时相组,每时相6只.逆行性胰胆管注射5 %牛磺酸钠建立SAP大鼠模型.从支气管肺泡灌洗液(BALF)获取AM,检测AM分泌TNF-α水平,并检测BALF中蛋白含量、肺组织髓过氧化物酶(MPO)水平.以RT-PCR法测定AM TNF-αmRNA的表达.行肺组织病理学检查及免疫组化检查NF-κB的表达.结果 对照组肺组织较少有NF-κB活化的AM,SAP各组肺组织均可见NF-κB活化,且随时间进展NF-κB由细胞质逐渐进入细胞核.TNF-α抗体治疗组仍有少量NF-κB活化.ANP大鼠肺损伤随病情进展而加重.肺组织MPO及BALF蛋白含量随时间延长而升高,12 h达最高值,分别为(10.78±0.58) U/g和 (2 011.0±105.5)μg/mL.AM分泌TNF-α水平也逐渐升高,至6h达高峰[(1 624.2±149.2) pg/mL],12 h回落.TNF-αmRNA 的表达与TNF-α的变化趋势相似.SAP大鼠上述各组指标与正常对照组相比均有统计学差异(P＜ 0.05).TNF-α抗体治疗组各指标仍显著高于正常对照组(P＜0.05),但低于SAP组(P＜0.05).AM分泌TNF-α活性与MPO及BALF蛋白含量呈正相关(r=0.65, 0.76, P＜0.01).结论 抗TNF-α治疗可抑制SAP大鼠的TNF-α对AM NF-κB活化的反馈激活作用,并可直接减少TNF-α,进而减轻肺损伤.     

氢气对内毒素血症大鼠心肌损伤的影响

目的 探讨氢气对内毒素血症大鼠心肌损伤的影响.方法 清洁级健康雄性SD大鼠48只,体重200 ～ 220 g,采用随机数字表法,将大鼠随机分为4组(n=12):正常对照组(C组)、氢气对照组(HC组)、内毒素血症组(E组)和氢气+内毒素血症组(LH组).E组和LH组腹腔注射脂多糖(LPS) 20 mg/kg建立内毒素血症模型,C组和HC组给予等容量生理盐水.HC组和LH组于给予LPS后立即开始吸入2％氢气6h,C组和E组吸入空气6h.采用ELISA法检测血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)浓度以及心肌组织TNF-α和IL-6的含量.采用Western blot法检测心肌组织磷酸化NF-kB抑制蛋白α(p-IκB-α)和磷酸化p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)(p-p38MAPK)的表达.结果 与C组比较,HC组血清cTnI浓度、心肌组织TNF-α、IL-6、p-IκB-α和p-p38 MAPK水平差异均无统计学意义(P＞0.05),E组及LH组血清cTnI浓度升高,心肌组织TNF-α、IL-6的含量、p-IκB-α和p-p38 MAPK表达升高(P＜0.05);与E组比较,LH组血清cTnI浓度降低,心肌组织TNF-α、IL-6的含量、p-IκB-α和p-p38MAPK表达降低(P＜0.05).结论 氢气可减轻内毒素血症大鼠心肌损伤,其机制与抑制p38MAPK及NF-κB促炎通路、减轻心肌组织炎性反应有关.     

骨髓间充质干细胞治疗大鼠重症急性胰腺炎的实验研究

目的:研究骨髓间充质干细胞(bmMSCs)在重症急性胰腺炎(SAP)大鼠模型治疗中的应用。方法:经胆管逆行注射牛磺胆酸钠诱导形成大鼠SAP模型。将大鼠随机分为5组:对照组、SAP组、SAP+bmMSCs(尾静脉)组、SAP+bmMSCs(腹腔)组和SAP+bmMSCs(尾静脉+腹腔)组,每组18只。在bmMSCs注射各组,诱导SAP后3 h分别通过尾静脉、腹膜内和尾静脉加腹膜内途径注射用DAPI标记的bmMSCs。分别在实验开始后的第24、48、72 h分别处死6只大鼠,并收集胰腺组织和血液,测定其中血清抗炎细胞因子(IL-10)和炎症细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-6)的水平。光学显微镜下观察胰腺的病理变化,同时在荧光显微镜下检测DAPI标记的体内bmMSCs分布。结果:与对照组相比,SAP组大鼠的胰腺组织有明显的出血、水肿、炎症和坏死。与SAP组相比,3种方式bmMSCs移植组胰腺的炎症、水肿、出血和坏死均明显减少(P0.05)。在3种方式bmMSCs移植组中,bmMSCs显著降低促炎细胞因子(TNF-α、IL-6和IL-1β)的水平,但是增加了SAP大鼠的抗炎细胞因子(IL-10)水平(P0.05)。在SAP+bmMSCs(尾静脉+腹腔)移植组中,TNF-α、IL-6和IL-1β水平进一步降低,IL-10水平进一步升高(P0.05);同时,在该组中观察到更多的bmMSCs存在。结论:与腹腔注射法相比,通过尾静脉+腹腔注射或尾静脉注射bmMSCs,可以观察到更多的bmMSCs存在于胰腺组织中,大鼠恢复的更好。