低氧诱导大鼠肺泡巨噬细胞产生TNF-α的机制

目的：研究低氧诱导肺泡巨噬细胞低氧诱导因子-1α(HIF-1α)的表达及HIF-1α对肺泡巨噬细胞产生肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法：应用HIF-1α诱骗法(HIF-1α decoy)抑制低氧(3％O2，5％CO2，92％N2)培养的肺泡巨噬细胞中HIF-1α的作用，并用免疫组织化学、Western blot、半定量RT-PCR、酶联免疫吸附法(ELISA)分别检测HIF-1α蛋白、mRNA的表达和TNF-α的产生。结果：HIF-1α在常氧对照组肺泡巨噬细胞核中表达呈阴性，在低氧组和HIF-1α decoy组表达呈阳性；低氧组和HIF-1α decoy组中HIF-1α蛋白的含量显著高于常氧对照组(P<0.05)。HIF-1α mRNA的含量在低氧组和HIF-1α decoy组明显高于常氧对照组(P<0.05)；培养的巨噬细胞上清液中TNF-α的含量在低氧组(115±17 ng／L)明显高于常氧对照组(69±13 ng／L，P<0.05)和HIF-1α decoy组(81±15 ng／L，P<0.05)。结论： 低氧可明显诱导肺泡巨噬细胞HIF-1α的表达和活性增强，后者能促进TNF-α的产生，提示在可导致肺部低氧的炎症性疾病如COPD中HIF-1α可能发挥重要作用。     

LPS致大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB促进TNF-α分泌

目的: 观察脂多糖（LPS）致大鼠肺泡巨噬细胞（AMs）中核因子NF-κB活性及其调控肿瘤坏死因子-α（TNF-α）分泌的作用。 方法: LPS作用大鼠AMs后，用电泳迁移率改变分析法（EMSA）测NF-κB活性；用特异的反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）后，Western blotting检测p65表达变化；ELISA法检测细胞上清中TNF-α的含量。 结果: 于LPS作用AMs后4 h，NF-κB活性达到峰值，24 h仍维持在高水平；作用后4 h上清中TNF-α的含量达到峰值。反义寡核苷酸阻断NF-κB亚基（p65）表达后，LPS致AMs上清中TNF-α的含量显著低于未阻断组（P<0.01）。结论: LPS致大鼠AMs中NF-κB正向调控TNF-α分泌。     

脂多糖诱导地鼠肺泡巨噬细胞中一氧化氮对TNF—α的调节作用

对地鼠肺进行灌洗,利用灌洗液分离纯化出肺泡巨噬细胞（ＡＭ）,并进行培养。脂多糖（ＬＰＳ）刺激后,分 别加入一氧化氮合酶（ＮＯＳ）抑制剂和一氧化氮（ＮＯ）供体,观察ＮＯ和肿瘤坏死因子（ＴＮＦ－α）的变化,探讨ＮＯ 对ＴＮＦ－α的作用关系。结果显示：ＬＰＳ刺激ＡＭ使ＮＯ和ＴＮＦ－α含量均增加（Ｐ＜０．０１）,特异性ｉＮＯＳ抑制剂使活化 的ＡＭ分泌产生ＴＮＦ－α上调,ＮＯ供体可显著抑制ＴＮＦ－α的释放。不同的ＮＯ抑制剂和ＮＯ供体使ＮＯ和ＴＮＦ－α含 量变化不同。提示 ＮＯ和 ＴＮＦ－α是 ＡＭ分泌的炎症细胞因子, ＮＯ对 ＴＮＦ－α存在着调节作用。     

p38蛋白激酶对大鼠肺泡巨噬细胞活化机制的调控

目的:探讨p38蛋白激酶对LPS诱导大鼠肺泡巨噬细胞激活机制的作用。方法:提取细胞核蛋白,采用Western印迹分析p38蛋白激酶水平。用放射免疫法检测细胞上清TNF-α、IL-8的含量。结果:LPS显著增加肺泡巨噬细胞TNF-α、IL-8的合成,呈剂量依赖性诱导p38的活化。特异性p38蛋白激酶抑制剂SB203580能显著降低LPS诱导的肺泡巨噬细胞核蛋白p38的含量及细胞上清TNF-α、IL-8水平。结论:LPS刺激肺泡巨噬细胞释放炎性细胞因子TNF-α、IL-8受p38蛋白激酶调控。     

罗红霉素对小鼠腹腔巨噬细胞产生TNF-α的影响

罗红霉素(Roxithromycin，Rox)是常用的抗生素。20世纪70年代,Itkin等在临床观察中发现红霉素等大环内酯类抗生素可能具有糖皮质激素相近的作用。近年来，发现以红霉素、罗红霉素、克拉霉素为代表的大环内酯类抗生素具有免疫调节和抗炎作用。一种新型大环内酯类抗生素——他克莫司(tacrolimus)，可作为免疫抑制药物，其免疫抑制作用比环抱菌素A(CyA)强数十倍，对排斥反应有预防和治疗作用．临床应用于器官移植和自身免疫性疾病。     

蓝玉簪颗粒抑制脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞TNF-α产生及相关机制研究

目的:探讨蓝玉簪颗粒对脂多糖(LPS)诱导大鼠肺泡巨噬细胞(AM)内TNFα-表达及可能作用机制。方法:分离纯化AM,应用ELISA法检测蓝玉簪颗粒对LPS诱导的大鼠AM培养上清中的TNFα-水平的影响,应用Western blot方法检测大鼠AM内TNFα-及pERK蛋白表达水平,同时应用ERK拮抗剂(PD98059)观察AM内TNFα-蛋白表达。结果:蓝玉簪颗粒可剂量依赖的降低由于LPS刺激导致的AM培养上清内TNFα-含量升高;蓝玉簪(100 mg/L)颗粒可显著降低由于LPS刺激导致的AM细胞内pERK及TNFα-蛋白表达升高;ERK特异性抑制剂(PD98059 30 mol/L)及蓝玉簪颗粒干预,蓝玉簪颗粒+PD98059干预后,我们发现与LPS刺激组相比,大鼠AM中TNFα-表达显著降低。结论:蓝玉簪颗粒可以抑制LPS诱导AM TNFα-表达,其作用的机制之一可能与蓝玉簪抑制细胞外信号转导通路有关。     

玉米花粉多糖对大鼠肺泡巨噬细胞的激活作用

目的：探讨玉米花粉多糖对肺泡巨噬细胞的激活作用。方法：用２５０、５００、１０００μｇ／ｍＬ的玉米花粉多糖体外诱导培养大鼠肺泡巨噬细胞７２ｈ,用全自动生化分析仪测定肺泡巨噬细胞内乳酸脱氢酶与酸性磷酸酶活性,用放射免疫分析法测定肺泡巨噬细胞内肿瘤坏死因子的含量。结果：３种浓度的玉米花粉多糖均能非常显著地提高体外培养的大鼠肺泡巨噬细胞内乳酸脱氢酶和酸性磷酸酶的活性,并能非常显著地诱导肺泡巨噬细胞表达肿瘤坏死子因子。结论：玉米花粉多糖对肺泡巨噬细胞具有激活作用。     

免疫荧光法检测脂多糖诱导大鼠肺泡巨噬细胞NF-κB的活化

人们一直关注脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)等细菌产物如何激活炎性细胞,并促进炎性细胞因子表达。目前已经明确,编码TNFα、IL1β、IL6和IL8的基因,是由核转录因子κB(nuclearfactorκB,NFκB)控制表达的。NFκB具有强大的基因调控能力,在调控与急性肺损伤(ALI)急性呼吸窘迫综合征(ARDS)有关的细胞因子、黏附分子及其他炎性介质的转录方面,起着核心作用。NFκB的过度激活,导致过度强烈的炎性反应,引起肺或其他脏器的急性损伤。LPS正是通过激活NFκB,最终触发全身性炎性反应,从而导致ALIARDS的发生〔1〕。本研究通过体…     

ox-LDL诱导巨噬细胞TNF-α的时序表达

目的 :细胞因子在动脉粥样硬化发生发展过程中扮演重要角色。本课题旨在研究氧化型低密度脂蛋白 (ox -LDL)致巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子α(Tumornecrosisfactor,TNF -α)的表达时序 ,以探讨TNF -α可能在动脉粥样硬化发生过程中的作用。方法 :人巨噬细胞株 2 8SC(由ATCC提供 )。用含有 10 0mg/L青霉素、10 0mg/L链霉素和 10 %胎牛血清的RPMI 16 4 0培养基于37℃ ,5 %的CO2 中培养。在培养基中加入终浓度为 15 0mg/L的ox-LDL ,37℃共育后 ,分别于 0h、3h、6h、12h、2 4h、36h收集细胞 ,分别为对照组、ox -LDL 3、ox -LDL 6、ox …     

启动子区域甲基化状态对THP-1细胞肿瘤坏死因子α分泌的影响

目的: 探讨肿瘤坏死因子α( TNF-α )基因启动子区域散在CpG双核苷酸结构甲基化状态对蛋白分泌和基因表达的影响。方法: 检测人单核细胞系THP-1细胞在脂多糖(LPS)刺激状态下,不同时点TNF-α的表达和其基因启动子区域的甲基化状态。采用ELISA法测定细胞培养液上清TNF-α水平;采用重亚硫酸盐转化基因测序法测定DNA甲基化状态。结果: 受到LPS刺激后,THP-1细胞迅速产生 TNF-α ,在4 h达到高峰后快速下降。 TNF-α 基因启动子-344 bp到转录起始位点(TSS)区域内,存在11个散在CpG双核苷酸结构。未受到LPS刺激时均处于甲基化状态;刺激4 h后,有4个处于甲基化状态;刺激8 h后,有9个处于甲基化状态。未刺激与刺激4 h之间,刺激4 h与刺激8 h之间,甲基化率比较均有显著差异(P＜0.01,P<0.05)。结论: 未受到LPS刺激时,THP-1细胞 TNF-α 基因启动子区域甲基化水平较高;LPS刺激后,其该区域甲基化水平降低。该变化与TNF-α表达分泌相关。     

CCK-8抑制LPS诱导大鼠肺间质巨噬细胞TNF-α转录及NF-κB活性

目的:观察硫酸化八肽胆囊收缩素(CCK-8)对体外脂多糖(LPS)诱导大鼠肺间质巨噬细胞(PIMs)TNF-α基因表达的影响,探讨核因子κB(NF-κB)是否参与这一过程,以揭示CCK-8抗炎作用的信号转导机制。方法:分离大鼠肺PIMs,经LPS、CCK-8、CCK受体拮抗剂丙谷胺及溶剂单独或联合应用孵育3h,用RT-PCR技术检测细胞TNF-αmRNA的表达,孵育1h,用电泳迁移率改变分析方法检测NF-κB活性,孵育30min,用Westernblot技术检测胞浆IκBα蛋白表达情况。结果:CCK-8(10^-8-10^-6mol·L^-1)明显降低了LPS诱导的TNF-αmRNA表达及NF-κB活性,增加了胞浆中IκBα蛋白水平,呈剂量依赖性,并可被丙谷胺所拮抗。结论:对LPS激活的肺PIMs,CCK-8通过抑制NF-κB活性而抑制其TNF-αmRNA表达,该作用由CCK受体介导,并与CCK-8减少IκBα蛋白降解有关,此为CCK-8抗炎作用的机制之一。     

Human eosinophil peroxidase enhances tumor necrosis factor and hydrogen peroxide release by human monocyte-derived macrophages

Inhibition of growth or eradication of experimentally induced tumors has been shown to be accompanied by infiltration of eosinophils and macrophages into the tumor mass. Since macrophages are important mediators of host antitumor activity, the possibility arises that a collaboration may exist between these two cell types in the control of tumor growth. In this study, we report the effect of eosinophil peroxidase (EPO), a basic protein contained in eosinophils that binds to several cell types including macrophages, on tumor necrosis factor (TNF) production and hydrogen peroxide release by human monocyte-derived macrophages. After incubation with EPO, the macrophages produced large amounts of TNF and displayed an enhanced phorbol 12-myristate 13-acetate-triggered hydrogen peroxide release. These effects were accompanied by an increased cell protein content and by morphologic changes leading the large, round macrophages of the control cultures to become elongated, pear-like or spindle shaped cells after treatment with EPO. The stimulatory effect of EPO on hydrogen peroxide release was insensitive to addition of exogenous catalase, a H₂O₂-degrading enzyme, suggesting that an extracellular catalytic activity of EPO was not involved. In addition, myelo-peroxidase, the homologous peroxidase of neutrophils with a catalytic activity similar to that of EPO, was ineffective. The EPO-induced effects differed in several aspects from the effects of lipopolysaccaride and interferon-γ, two well-known macrophage activators. These findings provide supportive evidence for a functional interrelationship between eosinophils and macrophages that may be physiologically relevant in the tumoricidal activity of macrophages.     

高糖及高胰岛素对肺泡巨噬细胞吞噬功能和超微结构的影响

目的和方法:选用正常大鼠肺泡巨噬细胞(AM),在高糖及高糖+高胰岛素环境下培养,用卡介苗(BCG)、干扰素α－2b(IFNα－2b)或两者联合活化,检测其贴壁率、四唑氮兰(NBT)还原功能、NO和TNF-α释放量并观察其超微结构改变。结果:高糖及高糖+高胰岛素环境下活化AM贴壁延迟(P＜0.01),NBT还原功能明显被抑制(P＜0.01);BCG和IFNα-2b+BCG活化AM时,其NO和TNFα释放量均明显低于对照组(P＜0.01);IFNα-2b活化AM时,其NO和TNF-α释放量与对照组无明显差别(P＞0.05);细胞表面伪足减少、变短,胞质内高尔基氏体、粗面内质网减少。结论:在短期内高糖及高糖+高胰岛素环境均抑制AM吞噬功能及改变超微结构,从而使糖尿病个体易发生肺部感染。     

异搏定和肿瘤坏死因子α协同抗肿瘤作用的实验研究

目的:研究异搏定和肿瘤坏死因子α(TNFα)对肝癌的协同作用。方法:利用人肝癌HepG₂体外培养及裸鼠皮下移植模型,在异搏定、肿瘤坏死因子以及异搏定和肿瘤坏死因子同时存在的条件下,观察肿瘤细胞增殖及肿瘤组织生长状况、c-myc表达肿瘤组织的细胞增殖核抗原(PCNA)检验以及肿瘤组织微血管密度(MVD)的比较。结果:在异搏定以及异搏定和TNFα同时存在的条件下,HepG₂的增殖及移植肿瘤的生长受到明显抑制;c-myc的表达、PCNA的表达以及MVD明显降低。结论:钙通道阻滞剂可抑制肿瘤的增殖与生长;异搏定与TNFα有显著的协同抗肿瘤作用。     

Tumor necrosis factor: Recent advances

Summary Tumor necrosis factor is a protein secreted by activated monocytes. In addition to its known cytotoxic or cytostatic effect on some tumor cells, recently it was discovered to have multiple effects on normal cells. These effects include modulation of cell growth and function, production of growth factors, and induction of surface antigens. In this article we review some of the advances which were made since the gene for tumor necrosis factor was cloned.Abbreviations CFU-GM Granulocyte-macrophage colonyforming unit - CSF Colony-stimulating factor - IL-1 Interleukin 1 - LT Lymphotoxin - TNF Tumor necrosis factor Supported in part by National Institutes of Health Grants CA 26038, CA 32737, CA 33936, and CA 30512, the Dr. Murray Geisler Memorial Leukemia Fund and the Louis Fagin Leukemia Research Foundation. Dr. Reinhold Munker is a Fellow of the Deutsche Forschungsgemeinschaft (Mu677/1-1). Dr. H. Phillip Koeffler is a member of the Jonsson Comprehensive Cancer Center, and holds a Career Development Award from the National Institutes of Health     

类风湿关节炎患者血清sTNF—R、TNF—α的变化

目的为探讨类风湿关节炎 (RA)与可溶性肿瘤坏死因子受体 (s TNF- R)、TNF- α、TNF- α/ s TNF- R比值的关系。方法应用双抗体夹心 EL ISA法检测了活动期 RA(2 8例 ) ,稳定期 RA (12例 )及健康人 (30例 )血清中 s TNF- R 、s TNF- R 、TNF-α的水平。结果活动期 RA患者血清 s TNF- R 、s TNF- R 、TNF-α水平明显高于健康人及稳定期 RA组 ,P均 <0 .0 1。稳定期 RA患者血清 s TNF- R 、s TNF- R 、TNF-α水平亦明显高于健康人 ,P<0 .0 1。在 RA患者中 ,血清 s TNF- R 、s TNF- R 水平与 ESR、CRP、Ritchie index呈显著正相关 ,与类风湿因子 (RF)水平无相关性。RA患者治疗 3个月后 s TNF- R 、s TNF- R 及 TNF- α/ s TNF R比值显著下降。结论 RA患者血清 s TNF- R 、s TNFR- 水平显著增高 ,且与疾病活动度呈正相关。测定血清 s TNF- R 、s TNF- R 、TNF- α/ s TNF- R水平可作为 RA诊断 ,监测疾病活动、治疗及判断预后的一项有意义的实验室指标