日本刺参酸性粘多糖、皂苷和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的保护作用

目的研究日本刺参酸性粘多糖、皂苷和胶原多肽对血管内皮细胞的保护作用。方法采用ox-LDL建立体外培养的人脐静脉血管内皮细胞株(ECV304)损伤模型。MTT法测定血管内皮细胞的增殖活性;硝酸还原酶法测定血管内皮细胞一氧化氮合酶(NOS)活力和NO释放量;TBA法测定细胞内MDA含量;DNA-Ladder法检测血管内皮细胞的凋亡。结果不同浓度的酸性粘多糖、胶原蛋白多肽和低浓度的皂苷能明显抑制ox-LDL对血管内皮细胞的损伤,促进血管内皮细胞增殖(P<0.05,P<0.01);降低细胞内MDA含量(P<0.05,P<0.01);拮抗ox-LDL引起的血管内皮细胞凋亡。酸性粘多糖和胶原蛋白多肽还能明显促进血管内皮细胞NO释放量(P<0.05,P<0.01),提高细胞NOS活力(P<0.05,P<0.01)。结论日本刺参酸性粘多糖、皂苷和胶原蛋白多肽对血管内皮细胞的脂质过氧化物损伤均具有明显的保护作用。     

2种海参胶原蛋白多肽对血管内皮细胞保护作用的比较研究

目的 观察革皮氏海参和北极刺参胶原蛋白多肽对氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)损伤的血管内皮细胞的保护作用,探讨其保护内皮细胞的作用机制。方法 采用ox-LDL处理血管内皮细胞(ECV304)建立氧化应激损伤模型,以MTT法测定ECV304的增殖活性,硫代巴比妥酸法测定细胞内的丙二醛(MDA)含量,比色法测定一氧化氮合酶(NOS)活力和一氧化氮(NO)释放量,Hoechst33258染色法检测细胞的凋亡,Western blotting法检测caspase-3蛋白的表达。结果 经2种海参胶原蛋白多肽预处理后,ECV304细胞的增殖率显著升高 (P<0.05,P<0.01),细胞凋亡比率和MDA含量显著降低(P<0.05,P<0.01),细胞NOS活力和NO释放量均显著提高 (P<0.05,P<0.01),凋亡蛋白caspase-3的表达量显著降低。结论 2种海参胶原蛋白多肽均能有效保护脂质过氧化物损伤的血管内皮细胞,其中北极刺参胶原蛋白多肽在抑制细胞凋亡和提高NOS活性方面效果更突出,可能与其氨基酸组成有关。     

D-聚甘酯对血管内皮细胞损伤的保护作用

目的 用 H_2O_2(200μmol·L~(-1))诱导人脐静脉内皮细胞株ECV304氧化损伤,研究D-聚甘酯(DPS)对血管内皮细胞损伤的保护作用。方法 噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活性,采用试剂盒测定细胞内脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量、培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和超氧化物歧化酶(SOD)活性。同时采用流式细胞仪检测损伤后细胞内Ca~(2+)含量,并观察DPS对H_2O_2导致的内皮细胞内钙离子浓度的影响和细胞凋亡的作用。结果DPS 0.1,1,10μg·L~(-1)对损伤后ECV304具有促进增殖作用。DPS 0.1,1μg·L~(-1)使细胞培养液中SOD水平升高并降低细胞内MDA含量,4个剂量的DPS均能使细胞培养液中LDH释放减少。流式细胞术检测结果显示DPS能降低H_2O_2导致的细胞内Ca~(2+)含量的升高,并抑制细胞凋亡。结论 DPS具有保护H_2O_2致血管内皮细胞损伤的作用,其机理可能与其抗脂质过氧化作用,降低损伤后细胞内Ca~(2+)含量并抑制细胞凋亡有关。     

马来酸桂哌齐特治疗老年高血压并突发性耳聋

目的观察马来酸桂哌齐特治疗老年高血压并突发性耳聋的疗效及对血清超氧化物歧化酶（SOD）和脂质过氧化反应产物丙二醛（MDA）的影响。方法63例老年高血压并突聋患者随机分为2组,常规治疗组32例,常规治疗加马来酸桂哌齐特组31例,分别与治疗前后检查患者听功能及测定血清SOD和MDA,并与30例健康人做对照。结果常规治疗加马来酸桂哌齐特组与常规治疗组比较总有效率明显升高（P〈0.05）;SOD明显升高（P〈0.05）,MDA明显降低（P〈0.05）。结论在常规治疗的基础上加用马来酸桂哌齐特治疗,疗效优于常规疗法,且安全,无明显不良反应。     

桂哌齐特注射液治疗急性脑梗死66例

目的:观察桂哌齐特注射液治疗急性脑梗死的疗效。方法:急性脑梗死129例,分为桂哌齐特组及对照组。桂哌齐特组66例,给予桂哌齐特:320 mg加入氯化钠注射液500 mL,iv,gtt,qd×21 d;对照组63 例,给予复方丹参注射液30 mL加入氯化钠注射液500 mL中,iv,gtt,qd×21 d。治疗前、治疗后对2组病人进行神经功能缺损程度评分,并进行疗效比较。结果:桂哌齐特组总有效率91％,对照组81％;与对照组疗效比较经Ridit分析,差异有非常显著意义(P<0．01)。结论:桂哌齐特注射液治疗急性脑梗死安全有效,且疗效优于复方丹参。     

法舒地尔对心力衰竭大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度的影响

目的:观察法舒地尔对压力负荷心力衰竭大鼠血流动力学和心肌细胞内钙离子浓度([Ca~(2+)]_i)的影响。方法:雌性Wistar。大鼠升主动脉缩窄术制备心力衰竭模型,术后20 wk,模型大鼠随机分为心力衰竭模型组,法舒地尔小、中、大剂量组(1,5,20 mg·kg~(-1)),硝苯地平组(10 mg·kg~(-1))5组(n=10),另有假手术组10只。连续给药4 wk。应用Nikon 4多导生理记录仪测定血流动力学指标,用Fura-2荧光法测定[Ca~(2+)]_i。结果:心力衰竭组与假手术组比,左室舒张末压(LVDEP)明显增高,而左室舒张压(LVSP)和左心室压力上升／下降最大速率(±dp／dt_(max))明显减低(P<0．01);左室重量／体重明显增加(P<0．01);心肌细胞[Ca~(2+)]_i显著增高(P< 0．01)。与心力衰竭模型组比,法舒地尔大剂量比小剂量更明显地降低LVDEP,升高LVSP和±dp／dt_(max)(P< 0．05);降低左室重量／体重(P<0．01);但心肌细胞[Ca~(2+)]_i。变化无明显差异(P>0．05);硝苯地平组LVDEP明显增加(p<0．01),-dp／dt_(max)明显下降(P<0．05),心肌细胞[Ca~(2+)]_i。明显降低(P<0．01)。结论:法舒地尔大剂量比小剂量更明显地缓解心力衰竭的症状,但同时心肌细胞[Ca~(2+)]_i无明显变化。     

马来酸桂哌齐特治疗老年高血压并突发性耳聋

目的观察马来酸桂哌齐特治疗老年高血压并突发性耳聋的疗效及对血清超氧化物歧化酶（SOD）和脂质过氧化反应产物丙二醛（MDA）的影响。方法63例老年高血压并突发性耳聋患者随机分为两组,常规治疗组32例,常规治疗加马来酸桂哌齐特组31例,分别与治疗前后检查患者听功能及测定血清SOD和MDA,并与30名健康者做对照。结果常规治疗加马来酸桂哌齐特组与常规治疗组比较总有效率明显升高（P〈0.05）;SOD明显升高（P〈0.05）,MDA明显降低（P〈0.05）。结论在常规治疗的基础上加用马来酸桂哌齐特治疗,疗效优于常规疗法,且安全,无明显不良反应。     

茶多酚对高糖时内皮细胞产生活性氧和TGF-β1的影响

目的探讨高糖对内皮细胞产生活性氧和转化生长因子岛(TGF-β1)的影响,以及茶多酚的干预作用。方法培养人脐静脉血管内皮细胞(ECV304),分为正常对照组、高糖组、茶多酚组和茶多酚干预组。培养0、12、36h后,用分光光度比色法测定细胞上清液超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量,用RT-PCR法测定细胞内TGF-β1 mRNA的变化。结果高糖导致内皮细胞SOD活性下降和MDA含量升高,上调TGF-β1 mRNA表达,其变化随时间延长更为明显。茶多酚干预可拮抗高糖时内皮细胞的上述改变。结论茶多酚有抑制高糖对内皮细胞的损伤作用。     

脂多糖对离体大鼠胰腺腺泡细胞钙稳态的影响

目的:研究脂多糖(LPS)对胰腺腺泡细胞钙稳态的影响,及胞浆内钙超载时钙离子的来源,以探讨LPS致胰腺腺泡细胞损伤的机制。方法:胶原酶法分离胰腺腺泡细胞,Fluo-3/AM负载后,在无钙或含生理钙离子浓度的培养液中加入不同浓度LPS,采用激光共聚焦显微镜观察单个胰腺腺泡细胞[Ca~(2+)]_i。另外采用MTT法检测LPS作用的不同时间点胰腺腺泡细胞的活性。结果:LPS可致胰腺腺泡细胞损伤、细胞内[Ca~(2+)]_i显著升高,且呈浓度依赖性(P<0.05):在含1mmol/L依他酸的培养液中,LPS致腺泡细胞损伤程度明显减轻(P<0.05)、仅引起胰腺腺泡细胞[Ca~(2+)]_i缓慢、微弱的升高,而再次恢复培养液中Ca~(2+)至生理浓度,引发快速、幅度更高而持久的[Ca~(2+)]_i变化。腺泡细胞内[Ca~(2+)]_i的变化明显先于腺泡细胞的损伤。结论:LPS导致胰腺腺泡细胞内钙超载,主要源于胞外Ca~(2+)内流。钙超载作为早期的病理事件参与腺泡细胞损伤的发生,钙稳态失衡是LPS致胰腺细胞损伤的主要因素之一。     

扇贝裙边糖胺聚糖对过氧化氢损伤的内皮细胞释放血管活性物质的影响

目的:观察扇贝裙边糖胺聚糖(SS-GAG)对过氧化氢(H2O2)损伤的血管内皮细胞产生血管活性物质的影响。方法:用体外培养的人脐静脉内皮细胞株ECV304建立H2O2诱导的内皮细胞损伤模型组、不同浓度的SS-GAG组以及正常对照组,用放射免疫法测定培养液中6-酮-前列腺素F1a(6-keto-PGF1a)、血栓素B2(TXB2)、内皮素(ET)的含量;用硝酸还原酶法测定一氧化氮(NO)的含量。结果:与模型组比较,不同浓度的SS-GAG组均可使血管舒张因子6-keto-PGF1a、NO含量明显增加;缩血管因子TXB2、ET含量明显减少(P<0.05,P<0.01)。结论:SS-GAG可能通过增加舒血管因子、降低缩血管因子的分泌来减轻H2O2对内皮细胞的氧化损伤。     

依托咪酯对神经元缺氧损伤的保护及其作用机制

目的观察依托咪酯对大鼠海马神经元缺氧损伤的保护作用及其机制。方法用原代培养的新生大鼠海马神经细胞建立缺氧模型,用MTT法测定神经元存活率。采用激光扫描共聚焦显微镜动态监测单个海马神经元[Ca2+]i随缺氧或加入谷氨酸、KC l前后的实时变化。结果依托咪酯在1.2~4.8 mg.L-1范围内,可剂量依赖性地降低神经元缺氧损伤时的细胞死亡率(P<0.05)。0.3~4.8 mg.L-1依托咪酯能抑制缺氧及50 mmol.L-1KC l引起的[Ca2+]i升高(P<0.05),仅在4.8 mg.L-1时才抑制1 mmo.lL-1谷氨酸所致的[Ca2+]i升高(P<0.01)。结论依托咪酯对离体大鼠海马神经元缺氧性损伤具有保护作用,其机制可能与依托咪酯抑制缺氧引起[Ca2+]i异常升高有关。     

金丝桃苷对新生大鼠神经细胞缺氧/再给氧损伤的保护作用及其机制

目的探讨金丝桃苷(hyperin,Hyp)对新生大鼠脑细胞缺氧/再给氧损伤的保护作用及其机制。方法将分离的新生大鼠脑细胞缺氧30min或缺氧30min后再给氧40min造成细胞缺氧或再给氧损伤模型,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙二醛(MDA)和一氧化氮(NO)水平的变化,用Fura2-AM方法测定脑细胞内游离钙离子浓度([Ca2+]i)的变化。结果脑细胞缺氧时,细胞培养上清液中LDH从(62.0±13.0)U·L-1(Sham组)增高到(116.0±16.6)U·L-1(Control组,P<0.01),再给氧时,LDH和MDA分别从(45.6±9.2)U·L-1和(9.1±0.9)μmol·L-1(Sham组)增高到(106.0±17.4)U·L-1和(16.4±2.7)μmol·L-1(Control组,P<0.01)。Hyp在1.0～16.0μmol·L-1范围内,明显地抑制缺氧及再给氧损伤诱导的上述LDH和NO增高,并呈一定的浓度依赖性。1.0～16.0μmol·L-1的Hyp不仅可明显地抑制缺氧诱导的细胞培养上清液中NO和脑细胞内[Ca2+]i的增高(P<0.05或P<0.01),也可明显地抑制再给氧时NO和脑细胞内[Ca2+]i的升高(P<0.05或P<0.01),16.0μmol·L-1的Hyp可将再给氧时NO和[Ca2+]i分别从(34.4±6.3)μmol·L-1和(640±94)nmol·L-1(Control组)降至(25.0±5.1)μmol·L-1(P<0.05)和(331±56)nmol·L-1(P<0.01)。结论Hyp对神经细胞缺氧/再给氧损伤保护作用可能与抑制NO的释放、钙超载及自由基脂质过氧化有关。     

丹酚酸B镁抑制ATP和KCl诱导大鼠主动脉平滑肌细胞内钙的升高

目的研究丹酚酸B镁(M agnesium lithosperm ate B,MLB)对去内皮离体血管舒缩反应以及对血管平滑肌细胞内游离钙浓度[Ca2+]i的影响。方法去内皮大鼠胸主动脉血管环等张收缩实验和采用钙离子荧光指示剂F luo-3,运用F-4500阳离子测定系统动态检测胸主动脉平滑肌细胞[Ca2+]i。结果血管舒缩实验显示,无钙或常钙条件下MLB对血管基础张力均无作用。MLB 50~200μmol.L-1预给药组抑制无钙条件下苯肾上腺素(PE)1μmol.L-1诱导的血管收缩以及常钙条件下KC l 60 mmol.L-1诱导的血管收缩,并呈浓度相关性。而钙离子通道阻滞剂维拉帕米(Ver)10μmol.L-1则完全阻断KC l诱导的血管收缩。在复钙实验中观察到,MLB 50~200μmol.L-1不仅抑制PE 1μmol.L-1诱导的内钙依赖性血管收缩,而且对复钙后外钙依赖性的血管收缩也有抑制作用。细胞内钙测定实验表明,MLB预孵育的AVSMCs静息态[Ca2+]i没有变化。无钙条件下,MLB 50、100和200μmol.L-1抑制ATP20μmol.L-1诱导内钙释放引起的[Ca2+]i升高,抑制率分别为17.4%、32.4%和61.1%,显示较好的浓度相关性。AVSMCs于常钙条件下用Thapsigargin耗竭钙库后,KCl 60 mmol.L-1诱发外钙内流,引起[Ca2+]i升高,10μmol.L-1的Ver则能完全阻断这种外钙内流。在MLB预给药组,KCl诱导的[Ca2+]i升高降低,抑制率分别为20.0%、32.8%和52.6%。结论MLB能够抑制PE、高K+和复Ca2+诱导的血管收缩,并能抑制ATP和KCl诱导的血管平滑肌细胞内钙的升高,提示MLB对血管平滑肌细胞内钙的影响可能与抑制细胞内钙释放和电压依赖性钙通道有关。     

山茶花总黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的研究山茶花总黄酮(TFC)对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法按pu lsinelli方法制成全脑缺血模型,大鼠全脑缺血30 m in后再灌注40 m in。记录脑缺血前、缺血30 m in及再灌注40 m in后的脑电图(EEG),取脑组织,采用荧光指示剂Fura-2定量测定大鼠前脑皮层组织细胞内游离钙离子浓度,测定超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、乳酸脱氢酶(LDH)、一氧化氮合酶(NOS)活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)含量。结果TFC可促进缺血后EEG波幅的恢复,降低缺血再灌后细胞内游离钙离子浓度的升高,抑制SOD、GSH-Px和LDH活力的下降,降低NOS的活力和脑组织中MDA、NO的含量。结论TFC对脑缺血再灌注损伤有保护作用,其机制可能与其抗自由基、抑制钙超载和NO生成有关。     

灵芝多糖肽对ECV304细胞氧化损伤的保护作用

目的研究灵芝多糖肽对ECV304氧化损伤的保护作用。方法培养ECV304细胞,以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂损伤细胞,造成氧化损伤模型,培养液中加入不同浓度灵芝多糖(12.5、25、50、100mg.L-1),以MTT法测细胞存活率;以光镜、电镜检测细胞形态学改变及线粒体损伤;用AnnexinV/PI双标记细胞,流式细胞检测细胞凋亡的百分率。结果灵芝多糖(12.5、25、50、100mg.L-1)可减少叔丁基氢过氧化物对ECV304的氧化损伤,MTT检测灵芝多糖给药组,ECV304细胞存活率增加。光镜下可见细胞损伤减少,电镜可见灵芝多糖(50mg.L-1,温育24h)减轻细胞器如线粒体氧化损伤,减少细胞凋亡。细胞流式检测表明:对照组、给药组、损伤组总凋亡百分率分别2.24%±0.43%、24%±6.4%(P<0.01)、82.1%±7.9%。结论灵芝多糖肽(GLPP)对ECV304细胞氧化损伤具有保护作用。     

哮喘豚鼠气道平滑肌细胞内钙释放通道的变化

目的检测哮喘豚鼠气道平滑肌细胞(ASMCs)内钙释放通道功能的改变,探讨与支气管哮喘的关系,同时,寻找传代培养ASMCs的方法。方法以Flou-3/AM为细胞内钙离子示踪剂,观察ASMCs在工具药作用下细胞内钙离子浓度([Ca2+]i)的改变。结果①在ASMCs外无钙情况下,不同浓度ryanodine(5×10-5,10-4,2×10-4mol·L-1)作用于原代培养正常与哮喘ASMCs,[Ca2+]i迅速升高,哮喘组明显高于正常组(P<0·01)。10-4mol·L-1的组织胺(hista-mine)作用于原代培养的正常组与哮喘组ASMCs,[Ca2+]i升高无差异(P>0·05)。②传代培养哮喘ASMCs在10-4、2×10-4mol·L-1ryanodine作用下,[Ca2+]i迅速升高,与原代细胞比较无差异(P>0·05)。在浓度为5×10-5mol·L-1时,原代明显高于传代(P<0.01)。哮喘组传代ASMCs对10-4mol·L-1的histamine反应不明显。结论哮喘豚鼠ASMCs内钙释放通道(RyRs)功能升高,特定条件下,哮喘传代细胞仍然保持原代细胞内钙释放通道的特性。