RT-PCR对SARS患者粪便SARS冠状病毒RNA的连续测定及其临床意义

目的采用RT-PCR方法,观察SARS冠状病毒(SARS-associatedcoronavirus,SARS-CoV)在SARS患者粪便中的排出状况。方法以2003年5月16日至23日在本院住院的46例临床确诊SARS患者为研究对象,连续留取粪便标本共103份,提取RNA后采用14对SARS-CoV特异性引物,对每份标本同时进行7次套式RT-PCR扩增,只要有1次RT-PCR结果阳性即判定该标本为阳性。结果在46例患者中,有17例(37.0%)患者的粪便SARS-CoV套式RT-PCR扩增结果为阴性,29例(63.0%)为阳性。粪便SARS-CoVRT-PCR结果阳性时SARS患者的病程为(31.76±10.78)d(12～64d),其中最长1例为64d,系2次连续留取的粪便标本均为阳性、每次标本用2个不同引物RT-PCR扩增结果均为阳性。结论SARS-CoV在患者粪便中排出的时间可长达发病后64d,平均32d,对SARS患者恢复期的消毒隔离应该予以足够的重视。     

SARS病毒病原学特征

一、SARS-CoV的生物学地位 冠状病毒在全世界分布非常广泛，为不分段的单股正链RNA（＋ssRNA）病毒，多为球形，有包膜及刺突。由于电镜下发现病毒包膜上镶嵌的刺突基底窄形状类似皇冠，故命名为冠状病毒。最早于1937年在鸡身上发现，称为禽传染性支气管炎病毒（avian infectious bronchitis virus，avian IBV）。后陆续发现人冠状病毒229E（human coronavirus 229E，HCoV-229E）、狗冠状病毒（canine coronavirus，CCoV）、猫传染性腹膜炎病毒（feline infectious peritonitis virus，FIPV）、猪传染性腹膜炎病毒（transmissible gastroenterifis virus，TGEV）、     

SARS病毒研究取得重大进展

日前 ,新的研究报告显示 ,SARS病毒是一种崭新的冠状病毒 ,而非某种已知冠状病毒的近期变种。SARS病毒基因组研究表明在不同国家发生的SARS病毒没有显著的变异。美国和加拿大研究人员研究明确证实该病毒有冠状病毒的典型特征 ,同时该病毒还有别于以往经过测序的所有冠状病毒。与其他冠状病毒相比 ,未发现编码rep、S、E、M或N蛋白的基因发生任何明显的主要基因重排或出现任何大范围插入或缺失的情况。与一些其他的冠状病毒一样 ,SARS病毒有多个处于S和E基因之间以及处于M和N基因之间的小型非结构ORFs。SARS病毒是一种在物种进化…     

荧光RT—PCR快速检测禽流感病毒H5亚型的研究

本研究根据禽流感病毒H5亚型的RNA4节段，设计、合成多对引物、探针，并通过筛选获得灵敏度、特异性好的组合，在此基础上对荧光RT-PCR反应体系中的各组分进行优化，并建立对各种禽类样品中病毒核酸的提取方法。通过对阳性鸡胚尿囊液及人工攻毒的SPF鸡、肉鸡、肉鸭的各脏器进行检测，并与传统鸡胚病毒分离进行对比，显示该方法与传统鸡胚病毒分离灵敏度接近，但检测时间由原来的21天缩短为4小时。     

小分子药物抑制SARS病毒的体外实验研究

目的:为探索SARS的治疗药物，实验观察合成的13种小分子药物抑制SARS冠状病毒的效果。方法:采用微孔塑料板病变法及MTT法，通过观察细胞病变(CPE)及OD值测定结果，判定药效。结果:13种小分子药物中3、4，7和8号药物在接种SARS病毒后20h内对SARS冠状病毒有抑制作用；9号药物在接种病毒后30h内药效显；接种SARS病毒36h后，SARS病毒繁殖迅速，48h后全部发生细胞病变，微孔板病变法与MTT法结果一致。结论:13种药物中有5种药物在24h内对SARS冠状病毒有一定的抑制作用，30h后所有药物细胞孔开始出现病变，48h后细胞全部病变、死亡，表明合成的13种小的药物均不能有效地抑制SARS病毒的繁殖。     

美CDC证实SARS病毒来源于华南野生动物

继WHO专家与加拿大专家在成功破译SRAS致病病毒——冠状病毒的基因密码以后,美国疾病控制和预防中心今天宣布:他们已经成功证实这种冠状病毒的来源不是任何一种家畜以及家禽,而是来源于一种或几种相信是生长于华南地区的野生动物。     

SARS病原学研究

中国疾病预防控制中心病毒预防控制所副所长梁国栋报告 :在SARS病毒的组织培养方面 ,他们从SARS病人的咽拭子中可以分离出 4个不同的冠状病毒株。它可在Vero E6细胞和RD细胞中繁殖 ,同时在接种 3～ 4天后产生明显典型而且稳定的CPE(细胞病变效应 )。经过有对照的血清学EIA法的分析 ,认为SARS病人的血清学与冠状病毒是相对应的。在此基础上 ,CDC病毒研究所与北京贝尔生物工程有限公司已联合完成了酶免测定SARS病毒抗体IgM/IgG试剂盒。但是 ,抗体诊断有一定的滞后性 ,特别是IgG ;IgM一般是很好的早期诊断指标 ,但在SARS病人…     

一株感染普通棉耳狨猴的呼吸道病毒的 RT-PCR鉴定

目的：鉴定一株在普通棉耳狨猴（Callithrix Jacchus)群体中引起急性呼吸道感染并引起大批狨猴死亡的病毒。方法：根据几种可能的呼吸道病毒的保守基因序列设计合成引物，用RT－PCR方法对分离到的病毒进行鉴定。结果：唯有仙台病毒的引物能够扩增出PCR产物，且与预期扩增片段大小一致。结论：本次狨猴群体中流行的病原体是一株仙台病毒（sendai virus)。     

SARS诊断研究进展

<正> 1 概况 传染性非典型性肺炎(简称“非典”),又称严重急性呼吸道综合征(Severe Acute Respiratory Syn-drome,SARS),是由一种新型冠状病毒(SARS—CoV)引起的,通过飞沫、粪便和尿液等多种途径传播,传染性很强的、高病死率的急性疾病。临床起病急,以发热(>380C)为首发症状,干咳、无上呼吸道     

美科学家对SARS病毒的病原学研究

在不同成胶条件下利用铝酸钠溶液和硝酸制备了拟薄水铝石，研究了pH值、成胶温度、铝酸钠浓度及成胶时间的影响，结果表明不同的成胶条件对产物的物性有较大影响，在合适的成胶条件下，可以制得纯净的拟薄水铝石沉淀；在一定的范围内可通过调节实验参数等来控制拟薄水铝石物化性质如堆密度、比表面积、孔容积、孔径等。     

1036例SARS病毒抗体分析

目的:了解各类人群的SARS病毒抗体的检出情况及SARS患者抗体产生的规律.方法:用酶联免疫吸附试验(ELISA)对各类人群的血清进行SARS病毒抗体的检测.结果:SARS病毒抗体阳性率分别是:SARS患者103/234;SARS疑似病例和有发热症状的其他病例10/127;正常体检人群1/90;其他疾病2/80;医院工作人员29/505.结论:SARS病毒IgM抗体消失较早,是近期感染的标志,IgG持续时间较长是近期或曾经感染的标志.医院的SARS感染率远高于正常人群,且可能存在隐性感染.     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定。结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段.方法对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒.提取样品RNA,用巢式PCR外侧下游引物进行反转录,以反转录产物为模板,进行巢式第1次、第2次PCR.PCR产物克隆到pMD18-T载体后进行测序鉴定.结果被检样品扩增出特异片段,经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒.Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异.结论反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列,证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法.     

SARS相关冠状病毒的研究进展

冠状病毒和与SARS相关的冠状病毒：第一个冠状病毒是1937年从鸡身上分离出来的。由于在电子显微镜下其形态呈现日冕状或皇冠状而得名。此后至少有15种不同的冠状病毒被发现。根据目前所知，冠状病毒科只感染脊椎动物，与人和动物许多疾病相关。引起人类疾病的冠状病毒主要表现为呼吸道和消化道感染。冠状病毒感染非常普遍，虽然人冠状病毒感染可解释30％的普通感冒，但它们极少导致下呼吸道疾病，也从未造成SARS这么严重的后果。     

SARS相关病毒基因组序列的研究

严重急性呼吸道综合征(severe acute respiratory syndrome，SARS)是由SARS相关病毒(SARS—CoV)引起的一种新的烈性呼吸道传染病。SARS—CoV是一种新的冠状病毒，基因组结构符合典型的冠状病毒特征，编码基因从5′端起分别为：RNA依赖的RNA聚合酶、突起蛋白、包膜蛋白、膜蛋白，3′端为核衣壳蛋白。对14株SARS—CoV的4个变异点分析，可将14株病毒分成两个基因型，即第9404、19084、22222、27827位的T：T：T：T／C：G：C：C两型。对SARS—CoV的基因组的全面了解不仅为疾病的发病机理研究提供主要线索，而且将为SARS的诊断、预防和治疗提供帮助。     

抗腮腺炎病毒抗体Fab段基因的克隆及重组表达载体的构建

目的　构建抗腮腺炎病毒抗体Fab段基因重组表达载体。方法　从腮腺炎患者和腮腺炎抗体IgG阳性正常人群的淋巴细胞中提取总RNA ,逆转录成cDNA。用相应的引物进行PCR ,扩增出轻链和重链Fd段基因 ,经酶切后分别和噬粒载体pComb3连接 ,再经电穿孔转化大肠杆菌XL1 blue菌株 ,将轻链和重链Fd基因先后克隆入pComb3中。结果　从分离出的淋巴细胞中共提取高质量RNA约 1 1 0 μg ,经逆转录、PCR ,分别扩增出约 70 0bp大小的κ、λ和Fd基因。PCR产物和载体经纯化、双酶切后进行连接 ,在 2 5kv,2 0 0Ω ,2 5 μF的条件下电转化 ,最终转化率为 :2 4 8× 1 0 7。随机挑取电转化后的 1 0个菌落 ,经PCR鉴定 ,共有 5个克隆同时含有轻链和重链Fd基因 ,抗体Fab的重组率为 5 0 %。结论　获得的抗体Fab重组表达载体是高效、实用的 ,为下一步构建抗腮腺炎病毒噬菌体抗体库打下基础     

利用寡核苷酸膜芯片检测SARS病毒

目的：建立寡核苷酸膜芯片技术检测SARS病毒。方法：以SARS冠状病毒RNA聚合酶基因(P基因)作为目的基因．参考WHO公布的特异性引物序列,将SARSRNA进行P基因克隆。以地高辛标记的引物,扩增质粒DNA,在P基因上设计11条寡核苷酸探针,点于尼龙膜,制备膜芯片,与地高辛标记的PCR产物杂交显色。结果：以此特异性引物成功地扩增出了440bp的基因片段;以T载体成功的克隆了此基因;克隆的P基因为靶序列,与膜芯片杂交显示,能与probe1,probe2,probe4,probe6,probe8,probe96条正义链特异性探针稳定杂交,其中Drobe1,probe4,probe9杂交效果最好,作为最后选择的探针。结论：膜芯片技术能快速敏感地鉴定出标本中的SARS病毒RNA。     

反转录巢式PCR方法检测SARS冠状病毒

目的 探索SARS冠状病毒早期诊断的有效手段。方法 对临床病例样品采用反转录巢式PCR方法鉴定SARS冠状病毒。提取样品RNA，用巢式PCR外侧下游引物进行反转录，以反转录产物为模板，进行巢式第一次、第二次PCR。PCR产物克隆到pMDl8-T载体后进行测序鉴定。结果 被检样品扩增出特异片段，经测序验证确实来自SARS相关冠状病毒。Blast比较结果与SARS冠状病毒多伦多株相应片段只有一个碱基的差异。结论 反转录巢式PCR方法验证在非典型肺炎患者标本中存在SARS相关冠状病毒的序列，证实该法不失为一种检测SARS冠状病毒的快速、简便、易行的方法。     

SARS病毒及其流行特征

2002年11月,广东省佛山市首发一起家族聚集传染性非典型肺炎事件,自此以后全球共有32个国家和地区发现了类似病例,世界卫生组织(WHO)于2003年3月12日发出疫情警报,将其称为严重急性呼吸综合征(Severe Acute Respira-tory Syndrom,SARS)。WHO在2003年7月11日公布的资料显示全球共发现8437名SARS病例,其中死亡813人。中国是疫情最严重的国家,有26个省市、自治区、直辖市共发现了5327名SARS病例,死亡348人,北京市和广东省的病例数最多。截至到7月19日,北京市共发现确诊SARS病例2521人,死亡192人。     

SARS病毒蛋白保守性分析

目的：寻找和确定SARS病毒中高保守的蛋白,以指导针对这些高保守蛋白为药物靶的药物分子设计。方法：采用比较基因组的方法和PSI-Blast搜索方法分别探讨SARS病毒不同蛋白在冠状病毒属内部及在正链RNA病毒内的保守情况。结果：确定了SARS非结构蛋白,特别是RdRp、Hel、nsP12、nsP13等蛋白在冠状病毒属内部表现很高的序列相似性,同时它们在正链RNA病毒范围内呈现不同程度的保守性。结论：主要参与病毒的复制、转录及后处理过程的非结构蛋白RdRp、Hel、nsP12、nsP13的高保守性,表明与病毒扩增相关的基因调控机制的保守是病毒进化的重要特征;同时这些非结构蛋白的高保守性及功能重要性表明它们更适合作为有效的药物靶分子。