鼻咽上皮癌变过程中端粒酶活性和端粒酶RNA的表达

目的 研究二亚硝基哌嗪（DNP）诱发大鼠鼻咽癌变过程中端料酶的表达规律。方法 以DNP诱导大鼠鼻咽癌：用PCR-ELISA和Nested RT-PCR检测DNP诱导大鼠鼻咽癌变不同阶段端粒酶活性和端料酶RNA的表达,同时作病理形态学检测。结果 DNP诱导大鼠鼻咽癌变过程中,端粒酶活性不断升高,端粒酶的变化与鼻咽癌变呈正相关,而且端粒酶中RNA表达先于端粒酶的表达。在大鼠鼻咽上皮细胞异型增生阶段即出现端粒酶的激活和端粒酶RNA的表达。结论 化学致癌物DNP诱导细胞癌变端粒酶的激活,且端粒酶的扩活和端粒酶RNA的表达是鼻咽上皮癌变的早发事件,与鼻咽癌的发生、发展有关。     

应用端粒酶原位杂交技术检测大肠癌端粒酶活性

笔者利用国产端粒酶原位杂交检测试剂盒在大肠癌组织的石蜡切片中检测端粒酶活性 ,获得满意结果。现将应用该方法的体会简要介绍如下。1　材料与方法1.1　观察对象　手术切除的新鲜大肠癌组织 2 0例 ,对离体组织立即液氮冷冻 ,- 80℃冰箱保存。标本分为 2份 ,1份在做 5 μｍ厚连续冷冻切片 ;另 1份经 10 %中性福尔马林或4 %多聚甲醛固定 ,石蜡包埋 ,做 5 μｍ厚石蜡切片。1.2　试剂　 (1)端粒酶原位杂交检测试剂盒为武汉博士德公司产品 ,购自天津ＴＢＤ公司 ,编号ＭＫ115 9。端粒酶逆转录成分 (ＴＥＲＴ )来源于人基因ＴＥＲＴ ＮＭ 0 0 32 …     

星形细胞肿瘤中端粒酶与PTEN的表达及相关性

目的：研究星形细胞肿瘤中的端粒酶活性和PTEN表达,探讨其在星形细胞肿瘤发生发展过程中的相关性,方法：收集手术切除经病理证实的星形细胞肿瘤110例,8例正常脑组织作对照。用端粒酶原位杂交检测盒检测组织标本端粒酶活性,用LSAB法检测PTEN表达。结果：星形细胞肿瘤端粒酶活性和PTEN的阳性检出率分别为50％（55／110）和39．1％（43／110）,且随着肿瘤恶性程度的增加,端粒酶活性程度升高（P＜0．01）,端粒酶活性与PTEN表达有相关性（P＜0．01）,结论：端粒酶活性与星形细胞肿瘤的分化程度有关,提示端粒酶活性可能是星形细胞肿瘤恶性程度的重要标记物,PTEN蛋白可能对端粒酶的活性有调节作用。     

骨巨细胞瘤组织中端粒酶活性的原位检测及意义

目的:探讨骨巨细胞瘤(GCT)石蜡切片中端粒酶活性检测的可行性以及端粒酶在GCT生物学特性中的意义。方法:采用针对人端粒酶hTERT寡核苷酸探针序列, 对27例GCT石蜡标本进行原位杂交, 检测端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA的表达情况。结果:27例GCT中8例hTERTmRNA表达阳性, 石蜡切片中基质细胞、部分多核巨细胞hTERTmRNA表达阳性。结论:采用原位杂交技术检测GCT石蜡切片中hTERT表达, 证实GCT中可能存在肿瘤性巨细胞。     

端粒酶hTR和hTRT在肿瘤中的表达及意义

目的 :探讨端粒酶hTR、hTRT基因表达在人肿瘤中的意义 ,并与 p5 3蛋白改变相比较 ,评估其对肿瘤临床诊断的价值。方法 :用原位杂交及免疫组化技术检测了 115例恶性肿瘤、6 0例良性及癌前病变中hTR和hTRT的表达 ,并与 p5 3基因蛋白改变相比较。结果 :hTR、hTRT在人恶性肿瘤中的平均检出率分别为 81%、83%。在转移性癌中两者均为 10 0 %的阳性率 ,而在慢性肝炎伴肝硬化中hTR、hTRT分别可见 5 0 %、6 0 %的弱阳性表达 ,其他良性病变及癌前病变均为阴性。p5 3蛋白在人恶性肿瘤中的平均阳性率为 4 9 6 % :在良性病变及癌前病变均为阴性。结论 :恶性肿瘤中hTR和hTRT明显高于 p5 3的检出率 ,且在良恶性病变中的表达差异有显著性 (P <0 0 5 ) ,并提示端粒酶hTR、hTRT与癌的生物学行为有密切关系 ,端粒酶基因hTR、hTRT的原位杂交检测可以作为一个比 p5 3更好的肿瘤诊断的新标记物。     

端粒酶RNA基因在白细胞中表达的研究

用RT－PCR的方法钓取端粒酶RNA（hTR）基因的cDNA，将hTR基因克隆到逆转录病毒载体（pLNCX）构建哺乳动物细胞表达质粒，然后经脂质体介导转染人体正常的外周血白细胞中表达。结果表明端粒酶RNA基因的表达，不能激活或重建白细胞的端粒酶活性，流式细胞技术分析结果显示，外源hTR基因的表达不能延长白细胞的寿命，反而抑制白细胞的增殖并促进其凋亡，这可能是因为外源hTR基因的表达一定程度上阻碍了细胞内端粒酶RNA同端粒酶催化亚基的结合，同时也阻碍了端粒酶RNA模板区与端粒DNA之间的结合，从而影响端粒酶活性，抑制了细胞的增殖。     

卵巢肿瘤组织中端粒酶活性的表达

目的分析端粒酶活性在卵巢肿瘤中的表达,探讨端粒酶活性作为卵巢肿瘤诊断肿瘤标记物的意义。方法取冰冻肿瘤组织,采用端粒重复序列扩增法（Telomeric Repeat Amplication Protocol）,结合银染,共测定了27例卵巢癌、5例良性卵巢肿瘤、22例卵巢癌癌旁组织以及12例正常卵巢组织中端粒酶活性,并分析其与组织分级、FIGO分期、病理类型以及有无转移的关系。PCR产物以采用聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,以出现特征性的6-bp间隔的特征性阶梯状条带为阳性。出现〉100bp的条带为强阳性,出现〈99bp的条带为中低阳性。结果本实验共对66份标本进行了检测,12例正常卵巢组织中,仅有2例表达端粒酶活性;5例卵巢良性肿瘤中,1例表达端粒酶弱阳性。27例卵巢恶性肿瘤标本中,有23例表达端粒酶活性（其中强阳性16例）;在检测的22例卵巢上皮癌的癌旁组织中,有12例表达端粒酶弱阳性。卵巢恶性肿瘤的端粒酶活性表达阳性率显著高于卵巢良性肿瘤（P=0.0090）和正常卵巢（P=0.0000）。Ⅰ-Ⅱ期患者端粒酶活性阳性率71%,Ⅲ-Ⅳ期患者端粒酶活性阳性率90%（P=0.269）。而强阳性率Ⅲ-Ⅳ期明显高于Ⅰ-Ⅱ期（P=0.009）。在肿瘤类型和组织学分级中,端粒酶阳性表达率均没有显著差异。结论在卵巢恶性肿瘤组织中端粒酶活性有较高的表达率;早期和晚期卵巢肿瘤组织中端粒酶活性阳性率没有明显差异,但晚期卵巢肿瘤组织中的端粒酶活性程度较高;端粒酶活性有可能作为早期诊断卵巢肿瘤的标记物之一,并可以作为卵巢肿瘤判断预后的指标。     

大肠癌中端粒长度与DCC基因mRNA表达的研究

目的 分析端粒长度及DCC基因mRNA表达在大肠癌及腺瘤发生发展中的作用。方法 采用Sourthern印迹杂交及RT-PCR技术,分别检测46例大肠腺瘤及62例大肠癌组织中的端粒限制性片段（TRF）长度及DCCmRNA表达状态并观察它们与肿瘤临床病理的关系。结果 在大肠癌及大肠腺瘤中,TRF长度较正常组织明显缩短,其缩短者占53.2%和41.3%,而延长者仅占6.5%和4.4%,结肠癌的TRF长度也较直肠癌的TRF长度明显缩短,DCCmRNA表达缺失率在大肠癌及大肠腺瘤中则分别达62.9%和34.8%,显著高于正常组织（1.6%);同时,大肠癌患者的平均TRF长度还随患者年龄的增长而缩短,DCCmRNA表达缺失率则随肿瘤的分化程度下降及临床阶段的进展而升高,但DCCmRNA表达缺失与TRF长度缩短在大肠癌中未表现出明显的相关性。结论 端粒缩短与DCCmRNA表达缺失与TRF长度缩短在大肠癌中未表现出明显的相关性。结论 端粒缩短与DCCmRNA表达缺失可能是大肠腺瘤恶变及大肠癌形成过程中较具特征表现的生物学异常行为。     

白血病细胞中端粒酶抑制因子Pinx1的表达与端粒酶活性关系的研究

目的：研究端粒酶抑制因子Pinx1在急性白血病细胞中的表达和在急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中的表达改变，分析其表达与端粒酶逆转录酶hTERT表达的关系，以了解白血病细胞中Pinx1对端粒酶的作用及可能机制。方法:荧光定量RT-PCR检测30例急性白血病细胞中Pinx1与hTERT mRNA的表达，进一步在ATRA诱导的急性早幼粒白血病细胞株细胞NB4分化过程中检测Pinx1及hTERT mRNA表达，分析两者之间的相关性。结果:Pinx1在急性白血病细胞中的表达（0.00312，5.42×10-4-0.024）明显高于正常人骨髓单个核细胞（7.89×10-4，0-0.00863，P＜0.01），与hTERT的表达呈正相关（r=0.296,P＜0.05）。Pinx1表达随NB4细胞分化逐渐下降，与hTERT呈正相关（r=0.900,P＜0.05） 。结论：Pinx1虽然为端粒酶活性的抑制因子，但在白血病细胞中与端粒酶活性的调控方向一致，提示Pinx1的表达改变可能是继发于hTERT的一种负反馈反应，目的是保持端粒酶活性的稳定，具体机制尚待进一步研究。     

肺癌穿刺标本中端粒酶催化基团mRNA表达的临床意义

目的：研究肺癌与正常肺组织穿刺标本中端粒酶催化基团mRNA表达与肿瘤分期与分级关系,探讨其在肺癌早期诊断中的临床意义。方法：采用原位杂交技术检测肺癌与正常肺组织穿刺标本中端粒酶催化基团mRNA表达。结果：30例肺癌穿刺标本中28例端粒酶催化基团mRNA表达阳性,阳性率93.3%;对照组30例中端粒酶催化基团mRNA表达阳性1例,阳性率3.3%。表达与肿瘤分期与分级无关。结论：肺癌穿刺标本中端粒酶催化基团mRNA在肺癌中有异常阳性表达,但其表达与肿瘤分期与分级无关。     

Increased expression of miRNA-182 in colorectal carcinoma: an independent and tissue-specific prognostic factor

Increasing evidence has revealed that miRNAs play a pivotal role in multiple processes of carcinogenesis, and are being explored as diagnostic, prognostic and predictive biomarker. In this study, we investigated the status of miR-182 expression in colorectal carcinoma (CRC) by in situ hybridization and its underlying clinicopathologic significance for patients with CRC. We found that 79/138 (57.25%) CRCs had high-level expression of miR-182, while 17/67 (25.37%) normal mucosa tissues had high-level expression of miR-182. The expression level of miR-182 was remarkably up-regulated in CRC tissues compared with non-neoplastic normal tissues (P < 0.001). The over-expression of miR-182 in cancer parenchyma cells in CRC were strongly correlated with T-stage (P = 0.020), lymph node metastasis (P = 0.003), distant metastasis (P = 0.002), and Dukes’ stage (P = 0.005) in patients with CRC. Patients with high-level expression of miR-182 had short overall survival time than those with low-level expression of miR-182 (P < 0.001). Univariate and multivariate survival analyses further showed that miR-182 expression was a potential unfavorable prognostic factor for CRC, suggesting a potential application of miR-182 in prognosis prediction and therapeutic application in CRC.     

E-cadherin在结直肠癌中的表达及其与侵袭转移的关系

目的：探讨E-cadherin在结直肠癌（colorectal carcinoma,CRC）中的表达及其与侵袭转移的关系。方法：采用免疫组织化学SABC法及原位杂交技术检测E-cadherin mRNA和蛋白在大肠正常黏膜、大肠腺瘤和CRC组织中的表达。结果： E-cadherin的mRNA和蛋白在CRC中的阳性率显著低于正常黏膜组织和腺瘤（P＜0.01）;随着CRC分化的降低和Dukes分期的增加,E-cadherin表达阳性率降低;E-cadherin的阳性率在有淋巴结和远处器官转移的CRC中均显著低于未转移组（P＜0.01,P＜0.05）。结论：E-cadherin表达减少或缺失在CRC的侵袭转移过程中发挥重要的作用。     

大肠癌中PTTG的表达及意义

目的探讨垂体肿瘤转化基因(pituitary tumor transforming gene,PTTG)在大肠癌中的表达及其与大肠癌临床病理特征的关系。方法采用免疫组化MaxVision两步法对63例大肠癌组织及距癌灶3 cm以外的癌旁组织、距癌灶10 cm以外的正常组织中PTTG进行检测。结果PTTG在癌组织中表达的阳性率明显高于癌旁和非癌组织(P0.01、P0.01);并在不同年龄组(60岁和≥60岁)、不同组织学分级(高分化和中、低分化)、有或无淋巴结转移及肿瘤不同浸润深度(肌层和浆膜层)病例中表达差异有显著性(P0.05,P0.01,P0.05,P0.01)。结论PTTG在大肠癌的发生、发展中起重要作用;可以作为临床判断大肠癌生物学行为有用的分子生物学指标。     

Localization of CEA messenger RNA by in situ hybridization in normal colonic mucosa and colorectal adenocarcinomas.

Carcinoembryonic antigen (CEA) mRNA expression was studied in 14 cases of normal colorectal mucosa and colonic adenocarcinomas using in situ hybridization with a 32P-labelled cDNA probe to the unique 3'-untranslated region of CEA. This approach has the advantage that the target mRNA remains in the cell of origin, whereas there is considerable ambiguity in immunocytochemistry data for CEA because the protein is secreted. Furthermore, the specific cDNA probe overcomes potential problems of immunological cross-reactivity with other members of the CEA family. The results demonstrated that abundant, heterogeneously distributed CEA mRNA was present in colorectal adenocarcinomas, with the highest levels in cells lining glandular structures. Parallel immunohistochemistry with anti-CEA monoclonal antibody A5B7 showed that the regions of tumours with the highest levels of CEA mRNA also had the highest CEA protein levels, suggesting that the heterogeneous distribution reflects CEA expression rather than differential secretion of the protein. In the normal colonic mucosa, CEA mRNA expression was observed in surface epithelial cells and goblet cells of the upper crypts, with very low hybridization in the mid crypt and at the base. This crypt-surface distribution was identical to that observed for CEA protein. In situ hybridization therefore confirms that high levels of CEA mRNA are expressed in differentiated surface epithelial cells of the normal colon.     

p73在大肠癌组织中的表达及其意义

  目的 探讨 p73 表达与大肠癌生物学行为、预后的关系。 方法 研究对象为 60 例术前未经放疗、化疗的大肠癌患者的癌组织标本及其中 23 例患者的癌旁组织标本。60例患者中高分化腺癌 21 例，中分化 22 例，低分化 17 例；侵及浆膜者 36 例；有淋巴结转移者 21 例。应用原位杂交技术检测 p73 mRNA 的表达，应用免疫组织化学法检测 p73蛋白的表达，利用 Smartscape 图像分析系统进行定量分析，结果以平均灰度值表示，平均灰度值低示表达量高。 结果 p73 mRNA及p73蛋白平均灰度值在大肠癌组织分别为0.549 ± 0.080 及 0.481 ± 0.091，在癌旁组织中分别为 0.703 ± 0.081 和 0.701 ±0.068，二者在癌组织中的表达量均高于癌旁组织（P < 0.05）。将患者按肿瘤分化程度、是否侵及浆膜及有无淋巴结转移分组，p73 mRNA及p73 蛋白平均灰度值在低中分化组分别为 0.463 ± 0.082和0.472 ± 0.099，高分化组分别为 0.549 ± 0.088 及0.535 ± 0.0584；在侵及浆膜组分别为 0.517 ± 0.106 和0.528 ± 0.100，未侵及浆膜组分别为 0.602 ± 0.079 和0.560 ± 0.058；在淋巴结转移组分别为 0.513 ± 0.083 及 0.462 ± 0.105，无淋巴结转移组分别为0.607 ± 0.083 及 0.595 ± 0.080。各组间 p73 mRNA及 p73 蛋白平均灰度值的差异均有统计学意义（P < 0.05）。 结论 p73 在大肠癌组织中的表达增强，并与肿瘤的生物学行为相关，可作为判断大肠癌进展和预后的指标。     

结直肠原发性腺鳞癌的临床病理观察

目的 探讨结直肠原发性腺鳞癌的临床病理学特征、组织发生、生物学行为和人类乳头状瘤病毒(HPV)在其发病中的作用.方法 应用光镜、免疫组化标记及HPV原位杂交技术对5例发生于结肠的腺鳞癌进行临床组织病理学分析,并复习相关文献.结果 患者男3例,女2例,平均51岁.肿瘤位于结肠肝曲、脾曲、横结肠和乙状结肠距肛门12 cm及14 cm处.主要症状为便血、腹痛、腹泻和消瘦.4例患者分别死于术后12、21、22和33个月,1例术后3个月生存.镜下癌组织有腺癌和鳞癌成分共同组成,可见两种成分的移行.鳞癌细胞表达CK5/6、34βE12和p63,而腺癌细胞均阴性表达.腺癌细胞均表达CDX-2,鳞癌细胞弱阳性或阴性表达,二者均不表达TTF-1.原位杂交显示HPV6/11和HPV16/18均阴性.结论 结直肠原发性腺鳞癌是肠道恶性肿瘤的罕见类型,组织起源尚无定论,临床预后较单纯腺癌差.HPV6/11和HPV16/18感染与结直肠腺鳞癌的发生关系还难以明确.     

结直肠癌中ZHX2蛋白表达的检测及其临床病理意义

目的检测结直肠癌中ZHX2蛋白的表达情况,探讨ZHX2与结直肠癌的关系。方法利用免疫组化法分别检测73例结直肠癌组织及其对应的癌旁正常组织中的ZHX2蛋白的表达情况。结果 73例结直肠癌组织中ZHX2蛋白的阳性率为82.2%(60/73),癌旁正常组织中ZHX2蛋白的阳性率为94.5%(69/73),差异具有统计学意义(P<0.05)。在结直肠癌组织中,ZHX2蛋白的阳性表达与肿瘤的发生部位及分化程度有关(P<0.05),与性别、年龄、肿瘤大小、浸润深度、淋巴结转移及Dukes分期无关(P>0.05)。ZHX2(+)组患者的生存时间长于ZHX2(-)组(P<0.05)。结论 ZHX2作为一种转录抑制因子,可能参与结直肠癌的发生与演进,并有助于患者预后的判断。