p21^WAF1、Survivin与肿瘤

半个世纪以来恶性肿瘤呈明显增加趋势。肿瘤的病因和发展机制尚未明确。从分子生物学角度看，细胞癌变是多因素、多阶段、多基因变异的结果。p21^WAF1是细胞周期蛋白依赖激酶抑制剂中cip／kip家族中成员。Survivin是凋亡抑制基因家族中成员。     

WAF1基因研究进展

WAF1(wild-type p53 activated fragment-1,WAF1)是细胞周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin-dependent kinase inhibitor, CDI)家族中最早被发现的成员,是细胞周期调控的主要分子之一,通过作用细胞周期的G1-S检测点(check point)使细胞周期停止在G1期[1,2],并诱导细胞凋亡.近年研究显示,WAF1在调控宫颈癌、乳腺癌细胞时,不引起细胞 凋亡.因此称为肿瘤调控基因更为合适.这一基因的调控十分复杂,除p53基因依赖途径和非p53基因依赖途径外,可 能还有其它的调控途径.WAF1在细胞周期的不同时期表达、在细胞内不同部位的表达具有各自的机理和生物效应. 尤其在大肠和乳腺肿瘤分子调控中起关键作用[3].     

Cyclin D1与p21WAF1在鼻咽癌中的表达

目的 探讨鼻咽上皮癌变过程中周期蛋白Cyclin D1与抑癌基因p21 (wild- type p53 activated fragment 1,p21 WAF1)蛋白的表达及其意义.方法 应用免疫组化方法检测47例鼻咽癌组织、21例癌旁上皮组织和14例正常鼻咽粘膜中Cyclin D1与p21WAF1蛋白表达.结果 从鼻咽正常粘膜、癌旁粘膜上皮组织到癌组织,Cyclin D1表达阳性率逐渐增加,并且差异有显著意义(均为P ＜0.05).p21WAF1蛋白在以上组织中阳性率较高,且各组间差异无显著性.结论 Cyclin D1、p21WAF1蛋白与鼻咽部上皮细胞恶性增生密切相关,p21WAF1蛋白表达可能与细胞周期调控的反馈机制有关.     

p21WAF1/CIP1在肺癌中的表达

p21WAF1（wildtype p53-activated fragment 1）是目前已知的细胞周期蛋白与细胞周期蛋白依赖性激酶复合物的广泛抑制剂，它通过依赖和非依赖p53途径，对细胞内信号和细胞外信号均能作出反应，参与细胞生长、发育、分化、衰老及DNA损伤修复等多种功能的调节。我们通过对肺癌组织与非癌肺组织中p21WAF1／CIP1蛋白的检测，观察其在肺癌发生发展中的作用。     

乳腺癌细胞中p53、C-erbB-2、p21WAF1和 CDK4的表达及临床意义

目的:探讨乳腺癌组织中p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4的表达及临床意义.方法:采用免疫组化SP法检测120例乳腺癌组织石腊切片上p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4的表达.结果:p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4阳性表达率分别为53.3%、63.3%、58.3%、41.6%;阳性产物主要位于细胞核中,p53、C-erbB-2的表达与肿瘤组织分级(P＜0.05)、淋巴结转移(P＜0.01)显著相关,p21WAF1的表达与淋巴结转移(P＜0.01)显著相关,无淋巴结转移组明显高于有淋巴结转移组;与组织分级及PR、ER表达无显著相关.CDK4阳性表达与肿瘤组织分级(P＜0.05)、淋巴结转移(P＜0.01)显著相关,与PR、ER无相关.结论:p53、C-erbB-2、p21WAF1和CDK4与乳腺癌的发生发展密切相关,可作为判断肿瘤浸润转移、指导治疗和估计预后的参考指标.特别是p53的表达水平及淋巴结转移可能是判断乳腺癌的术后生存的独立有效指标,而综合应用上述指标可能更有助于预后的判断.     

结直肠癌虚实辨证与p21WAF1、p21H—ras蛋白表达相关性研究

目的:探讨结直肠癌患者肿瘤组织p21WAF1、p21H-ras表达与中医虚实辨证的相关性.方法:将45例结直肠癌患者按照中医辨证标准分为虚证组,实证组,虚实央杂证3组,应用免疫组化方法检测结直肠癌组织蛋白p21WAF1、p21H-ras表达,比较组之间的差异.结果:结直肠癌虚证组p21WAF1阳性表达水平显著低于实证及虚实夹杂证组(P=0.025),差别有统计学意义;p21H-ras阳性表达水平在虚证,实证及虚实夹杂证组三组内差异无显著性(P=0.800).结论:p21WAF1阳性表达与结直肠癌中医病证虚实有关,p21WAF1表达低可能是结直肠癌虚证辨证分型的客观物质基础之一.     

p53、p16、p21WAF1、c-erbB-2在星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤分化和预后的关系

目的分析p53、p16、p21WAF1、c-erbB-2在星形细胞瘤中的表达及其与肿瘤分化和预后的关系.方法应用免疫组化LSAB法对42例星形细胞瘤中p53、p16、p21WAF1、c-erbB-2的表达进行观察,对其中25例有随访资料的肿瘤患者存活因素进行分析.结果p53的表达与肿瘤分化和预后密切相关(P<0.01),高表达者预后差.p16、p21WAF1在分化好的星形细胞瘤中表达较强,预后较好;c-erbB-2在分化差的星形细胞瘤中表达较强,预后差.结论p53能客观反映肿瘤的增殖速度、分化和恶性程度,可以作为判断肿瘤预后有价值的参考指标.星形细胞瘤也存在p21WAF1、p16、c-erbB?2基因异常,对分析肿瘤的形成和判断预后有一定价值.     

骨肉瘤p73、p21WAF1/CIP1蛋白的表达及临床病理分析

目的检测p73蛋白、p21WAF1/CIP1蛋白在骨肉瘤的表达并探讨二者在骨肉瘤发生发展中的作用.方法利用免疫组织化学和图像分析的方法检测和分析58例骨肉瘤中p73蛋白、p21WAF1/CIP1蛋白的表达.结果 (1)58例骨肉瘤中p73蛋白、p21WAF1/CIP1蛋白的表达明显高于正常骨组织(P<0.01);(2)二者的过表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径及病理类型无关,而与有无侵袭转移和组织分化程度有关,差异具有显著性(P<0.05);(3)根据临床Enneking分期,Ⅰ与ⅡA期病例p73、p21WAF1/CIP1蛋白的表达差异无显著性,但明显低于ⅡB期,差异具有显著性(P<0.05);(4)骨肉瘤中p73和p21WAF1/CIP1蛋白的表达呈显著正相关(P<0.05).结论骨肉瘤组织中p73、p21WAF1/CIP1蛋白呈高表达,且与组织的增殖状态和恶性程度相关联;p73基因在一定程度上可能会诱导p21WAF1/CIP1蛋白的表达.     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系3AO细胞周期分布及细胞周期蛋白激酶抑制因子p21/WAF1表达的影响

目的观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞系3AO细胞周期分布及细胞周期蛋白激酶抑制因子P21/ WAF1表达的影响。方法采用流式细胞仪技术测定地塞米松(Dex)作用3AO细胞后其细胞周期分布,免疫印迹分析的方法检测Dex对p21／WAF1表达的影响。结果Dex处理后3AO细胞在G_0/G_1期停滞,且这种作用随处理时间延长而更趋明显；同时Dex能够以浓度和时间依赖性方式诱导p21／WAF1表达,这种作用通过GR来介导。结论在GC诱导的抑制细胞增殖的过程中,p21/WAF1的表达增加。     

乳腺癌中p21WAF1的表达

目的:探讨乳腺癌中p21WAF1的表达与细胞增殖活性及预后的关系。方法:采用免疫组化法检测p21WAF1在58例无淋巴结转移的乳腺癌中的表达,采用流式细胞术分析DNA含量。结果:在乳腺癌中p21WAF1的阳性率为43%,阳性反应产物见于瘤细胞核,p53阳性者的p21WAF1阳性表达率(54%)高于p53阴性者(35%),p21WAF1的表达与SPF(S期细胞比例)和患者预后无关。结论:乳腺癌中p21WAF1的表达不能作为判断肿瘤细胞增殖活性和患者预后的独立标志物。     

细胞凋亡与p21关系的研究进展

细胞凋亡又称程序性细胞死亡,是由基因控制的细胞自主有序性死亡。近年来研究表明,细胞凋亡对肿瘤及多种增生性疾病有重要治疗意义。细胞数目的稳态需要增殖和凋亡二者作用的平衡,而二者的作用均依赖于细胞周期。p21(CIP1/WAF1,p21)作为细胞周期负性调控因子,与细胞凋亡密切相关,现就近些年来细胞凋亡和p21关系的研究做一综述。     

p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1、p53在结肠癌的表达

目的探讨p21WAF1/CIP1、细胞周期素D1(cyclin D1)及p53在结肠癌的表达及三个基因产物间的相关性.方法应用原位杂交技术及免疫组织化学技术检测p21WAF1/CIP1、cyclin D1的mRNA及p53蛋白在结肠癌中的表达.结果 p21WAF1/CIP1 mRNA在癌组织的表达率为84.13%,明显高于癌旁组织61.90%(P<0.05).cyclin D1 mRNA在癌组织表达率为63.49%,明显高于癌旁组织44.44%(P<0.05).p53蛋白在结肠癌的阳性表达率为38.09%,p53过表达组p21WAF1/CIP1 mRNA表达较p53阴性组为低,二者存在显著差异(P<0.05),p53过表达组cyclin D1 mRNA表达较p53阴性组为高,差异具有显著性(P<0.05).p21WAF1/CIP1 mRNA与cyclin D1 mRNA表达存在相关性(P<0.05).结论 p21WAF1/CIP1、cyclin D1、p53的异常表达及它们之间可能存在的相互作用,可能在结肠癌的癌变过程中发挥重要作用.     

地塞米松抑制卵巢癌HO-8910细胞增殖机制的研究

目的 探讨地塞米松（dexamethasone,Dex)抑制人卵巢癌HO－8910细胞增殖的可能机制。方法 采用细胞计数法检测细胞增殖、流式细胞术测定细胞周期，同位素掺入半定量RT－PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果 Dex诱导HO－8910细胞发生G0／G1期停滞，使p21/WAF1 mRNA表达上调；糖皮质激素受体拮抗剂RU486可逆转细胞增殖和p21/WAF1表达的变化。结论 Dex对HO－8910细胞增殖的抑制可能与诱导p21/WAF1表达有关。     

宫颈癌中p21WAF1和CyclinD1的表达与预后

目的 探讨p21WAF1和CyclinD1在宫颈癌发生、发展、预后中的意义。方法 采用免疫组化SP法检测41例宫颈癌,17例宫颈上皮内瘤样病变(CIN)和10例正常宫颈组织中p21WAF1和CyclinD1的表达,及它们与病理组织分级、临床分期、转移和生存时间的相关性。结果 宫颈癌组织中CyclinD1的阳性表达率明显高于CIN组和正常对照组(均为P<0.05),但与肿瘤分级、临床分期、转移无显著相关性(均为P>0.05),CyclineD1阳性表达的宫颈癌患者的中位生存期明显小于阴性表达者(均为,P<0.05)。宫颈癌组织p21WAF1阳性表达率则明显低于CIN组和正常对照组(P<0.05),p21WAF1与肿瘤分级有明显相关性(P<0.05)。结论 CyclinD1高表达,p21WAF1低表达与宫颈癌的发生、发展密切相关。CyclinD1表达可作为判断宫颈癌患者预后的指标。     

乙型肝炎病毒X蛋白和p14ARF依赖性、非依赖性途径对肝癌细胞生长的影响

目的 探讨乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)是否通过p14ARF途径影响肝癌细胞生长及其作用机制.方法 将HBx及p14ARF单转染及共转染含野生型p53但不表达p14ARF脚的肝癌细胞株HepG2.实验分为pcDNA3、pcDNA3HBx、pcDNA3p14ARF、pcDNA3HBx+pcDNA3p14ARF4组.通过流式细胞仪比较各转染组HepG2细胞凋亡、细胞周期的变化情况.用含p53结合位点p21WAF1胴启动子荧光素酶活性检测和Western blotting观察各转染组细胞p14ARF、MDM2、p53、p21WAF1蛋白表达水平的变化.结果 HBx及p14ARF脚单转染及共转染含野生型p53但无p14\ARF表达的HepG2细胞,单转染HBx及p14ARF组其细胞凋亡率(14.11%、13.72%)、G0/G1期阻滞细胞数(63.62%、61.75%)、p21WAF1启动子荧光素酶活性(1.25±0.05、1.09±o.06)及p53、p21 WAF1蛋白的表达较对照组(10.66%、57.42%、0.77±0.03)明显升高,而共转染组与单转染p14ARF组相比其p14ARF蛋白表达及上述各项指标(18.61%、66.74%、3.53±0.43)又进一步升高.结论 HBx通过依赖及非依赖p14ARF途径诱导p53表达从而导致激活p21WAF1,进而引起细胞周期G0/G1期的阻滞及细胞凋亡的增加.     

卵巢上皮性癌组织中P21WAF1和CDK1的表达

目的:检测P21WAF1和CDK1在卵巢上皮性癌中的表达,探讨卵巢上皮性癌的发生发展与细胞周期调节异常的关系.方法:应用免疫组织化学SP法检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性上皮性肿瘤组织、76例卵巢上皮性癌组织中P21WAF1、CDK1蛋白的表达.结果:P21WAF1、CDK1蛋白在卵巢上皮性癌中的阳性表达率分别为36.8%和92.1%,与正常卵巢组织和卵巢良性上皮性肿瘤组织相比,差异具有统计学意义(P<0.05).癌组织中P21WAF1蛋白的表达与FIGO分期有关(P<0.05),P21WAF1蛋白与CDK1蛋白表达成负相关(r=-0.282,P<0.05).结论:P21WAF1和CDK1在卵巢上皮性癌的发生发展中具有重要作用.P21WAF1蛋白可作为评价卵巢上皮性癌预后的指标.     

藤龙补中汤促结肠癌LS-174-T细胞衰老及其机制

目的：细胞衰老是重要的细胞内在抗癌机制,与肿瘤治疗效应机制密切相关。本研究观察中药复方藤龙补中汤对人结肠癌LS-174-T细胞衰老及相关信号转导的影响。方法：藤龙补中汤处理结肠癌细胞LS-174-T,显微镜观察细胞形态,衰老相关β-半乳糖苷酶（senescence-associatedβ-galactosidase,SA-β-gal）染色检测SA-β-gal活性,流式细胞术检测细胞周期,Western blot法检测p21WAF1/CIP1、p53、p16基因的表达以及RB磷酸化水平。结果：藤龙补中汤作用后,LS-174-T细胞呈现典型大而扁平的衰老形态,SA-β-Gal染色阳性,细胞周期阻滞于G0/G1期。Western blot显示藤龙补中汤可促进LS-174-T细胞p21WAF1/CIP1、p16等基因的表达,对p53、RB等基因的表达无明显影响,可抑制RB磷酸化。结论：藤龙补中汤可促进LS-174-T细胞衰老,并可能与促进p21WAF1/CIP1、p16等基因的表达,以及抑制RB磷酸化相关。     

Survivin因子与食管癌预后的关系

<正>Survivin是一种结构独特的凋亡抑制因子,具有抑制细胞凋亡和调节细胞增殖的双重作用,在大多数肿瘤中有表达,但在成人终末分化组织一般不表达或低表达。Survivin参与细胞周期调控,与肿瘤的发生、发展和预后密切相关,也可作为肿瘤治疗的新靶点。本文对Survivin的生物学特性、生物学功能与食管癌预后的相关性及靶向治疗进行综述。1 Survivin的生物学特性及组织分布Survivin是凋亡抑制蛋白IAP家族成员之一。     

组蛋白乙酰化修饰对IEC-6恶性转化细胞细胞周期和p53、p21WAF1基因表达的调控

目的 分析和探讨IEC-6恶性转化细胞不同时期组蛋白乙酰化修饰对肿瘤发生相关基因表达的影响.方法 采用我们已建立的3个转化期(化学致癌剂MNNG和诱导剂PMA共同作用6、12、24次) 的IEC-6转化细胞进行培养,提取不同转化时期的IEC-6转化细胞的细胞核蛋白,采用免疫印迹检测H3乙酰化水平;并用ChIP及RT-PCR检测组蛋白H3乙酰化对p21WAF1表达的影响.结果 24次IEC-6恶性转化细胞组蛋白H3乙酰化水平高于6次IEC-6转化细胞,而组蛋白H3去乙酰化水平低于6次IEC-6转化细胞;同时发现p21WAF1的启动子区PCR产物减少.在6、12次IEC-6转化细胞中均有较弱的p53、p21WAF1表达;在24次IEC-6恶性转化细胞中仍可检测到较弱的p53表达,但p21WAF1表达缺如.结论 IEC-6恶性转化细胞过程中,组蛋白H3乙酰化水平增高,导致p21WAF1基因表达受抑,近而可能影响转化细胞的细胞周期.     

糖皮质激素对人卵巢癌细胞系HO-8910细胞周期的影响

目的:观察糖皮质激素对人卵巢癌细胞HO-8910细胞周期的影响,并初步探讨其作用机制。方法:将1×10-7mol/L地塞米松(dexamethasone,Dex)和1×10-6mol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486分别单用或合用处理HO-8910细胞,采用流式细胞术测定细胞周期,核素掺入半定量RT-PCR检测细胞周期蛋白激酶抑制剂p21/WAF1的表达水平。结果:Dex诱导HO-8910细胞发生G0/G1期停滞,并使p21/WAF1 mRNA表达上调;RU486可逆转Dex引起的p21/WAF1表达的变化。结论:p21/WAF1的表达上调可能参与糖皮质激素引起的HO-8910细胞G0/G1期停滞作用。