LHRHa靶向微泡造影剂的制备及体外寻靶实验

目的 制备人卵巢癌靶向超声造影剂,观察其体外寻靶能力。方法 采用生物素-链霉亲和素法制备促黄体生成素释放激素类似物(LHRHa)靶向脂质微泡,以免疫荧光染色验证LHRHa与脂质微泡的结合情况,并以普通脂质微泡作为对照,在倒置显微镜下观察LHRHa靶向脂质微泡对人卵巢癌A2780/DDP的体外寻靶能力。结果 LHRHa靶向脂质微泡免疫荧光阳性;体外寻靶实验显示LHRHa靶向脂质微泡能够与表面存在LHRH受体的A2780/DDP细胞特异性结合,而普通脂质微泡则不能结合。结论 利用生物素-链霉亲和素方法可成功制备LHRHa靶向脂质微泡造影剂,该靶向造影剂具有体外寻靶能力。     

携Gelsolin单抗靶向超声造影剂的制备及体外靶向实验

目的 制备一种以肿瘤淋巴转移相关特异性膜抗原蛋白——凝溶胶蛋白（Gelsolin）为靶点的纳米级高分子造影剂,并观察其体外寻靶及显影能力。方法 通过改良的双乳化法制备高分子PLGA-COOH造影剂,以碳二亚胺法将造影剂与Gelsolin单抗连接,制备出GSN-PLGA靶向超声造影剂。检测该造影剂的一般性质,评估Gelsolin单抗与造影剂表面连接情况,评价其体外寻靶能力并进行体外显影实验。结果 GSN-PLGA靶向超声造影剂平均粒径为（575.67±4.71）nm,表面电位（-11.46±1.19）mV,造影剂表面GSN单抗结合率达96.93%。体外摄取实验显示细胞表面高表达Gelsolin抗体的小鼠腹水型肝癌高淋巴转移细胞株（Hca-F细胞）可较多摄取GSN-PLGA靶向造影剂。体外显像实验显示靶向超声造影剂体外显影效果较好。结论 GSN-PLGA靶向超声造影剂可与高表达Gelsolin的Hca-F细胞特异性结合,且体外显影效果较好。     

靶向癌胚抗原载药纳米超声造影剂体外抑制卵巢癌细胞生长

目的 制备靶向癌胚抗原（CEA）载药相变型PLGA纳米粒（Ab-PTX-NPs）,探讨该纳米粒的体外寻靶及抑制肿瘤细胞生长的效能。方法 乳化溶剂挥发法联合碳二亚胺法制备靶向CEA载紫杉醇纳米粒（Ab-PTX-NPs）,采用马尔文粒径分析仪检测其粒径大小。采用高效液相色谱法检测紫杉醇包封率及载药量,恒温摇床透析法检测该纳米粒体外释药特征。激光共聚焦显微镜及流式细胞术观察该纳米粒体外寻靶情况,CCK-8试剂检测卵巢癌细胞存活率。结果 制备的Ab-PTX-NPs粒径为（397.70±99.95）nm,紫杉醇包封率及载药量分别为（67.26±4.15）%和（6.31±0.39）%。抗CEA单克隆抗体与纳米粒连接率为（92.74±5.75）%。共聚焦显微镜下观察到靶向组卵巢癌SKOV3细胞周围见较多造影剂黏附,流式细胞术测得靶向组细胞平均荧光强度明显高于其余各组（P<0.05）,CCK-8试剂法测得靶向组在24 h时,细胞存活率高于纯药组（P<0.05）,而低于无靶组（P<0.05）,当48 h时,靶向组与纯药组细胞存活率差异无统计学意义（P>0.05）。结论 成功制备靶向CEA载药相变型PLGA纳米粒,该纳米粒经低功率聚焦超声治疗仪（LIFU）致相变后可明显增强超声显影,且载药量高,释药快,靶向能力强。     

结合链霉亲和素的高分子造影剂的制备及其初步应用

目的 制备一种结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,并与生物素化抗体结合,考察其体外寻靶能力.方法 采用双乳化法制备高分子材料PLGA-COOH超声造影剂;并用碳二亚胺法将造影剂与亲和素耦联,制备出结合链霉亲和素的高分子超声造影剂.检测该造影剂一般特性;采用红外与免疫荧光检测亲和素与PLGA-COOH超声造影剂连接的情况.检测生物素-亲和素技术使该造影剂与生物素化抗体结合后其体外寻靶能力.结果 红外检测与免疫荧光检测显示亲和素被成功地连接在高分子造影剂上,并存在活性.体外寻靶实验显示,与生物素化单抗结合后的靶向高分子造影剂较多并牢固地聚集到肝癌细胞表面.结论 成功制备了结合链霉亲和素的高分子超声造影剂,该造影剂与生物素化抗体结合后于体外对肝癌细胞具有较强的亲和力.     

靶向超声造影在体定量评价大鼠移植后卵巢新生血管

目的 观察以抗苗勒管（AMH）激素靶向纳米泡（AMH-NB）为超声造影剂在体定量评价大鼠自体卵巢移植后新生血管密度的价值。方法 制备AMH-NB并检测其基本物理特性。建立大鼠自体卵巢移植模型，于术后第7天行靶向（AMH-NB）、非靶向（N-NB）及声诺维（SonoVue）超声造影，获得峰值强度（PI）和达峰时间（TTP）。以免疫组织化学法检测微血管密度（MVD），并对PI、TTP与MVD进行相关性分析。结果 所制备的AMH-NB粒径（622.67±33.65）nm，分布均匀，浓度（2.90±0.26）×10⁸/ml。AMH-NB超声造影显示卵巢PI为（7.93±0.65）dB，TTP为（42.53±1.74）s；N-NB造影PI为（6.14±0.44）dB，TTP为（54.35±1.73）s；声诺维造影PI为（4.15±0.83）dB，TTP为（28.71±1.18）s（P均<0.05）。免疫组织化学分析显示移植后卵巢微血管密度为（61.20±6.84）/HP，组织学分析AMH-NB可穿过血管内皮细胞间隙进入组织间隙并与AMH结合。AMH-NB造影所示PI、TTP与MVD呈高度相关（r=0.84、-0.84，P均<0.05）。结论 利用AMH-NB进行超声造影可实现定性、定量评价大鼠移植后卵巢新生血管。     

心肌特异性导向肽靶向诊疗造影剂增强心肌分子显影及其在大鼠体内的分布

目的 制备心肌特异性靶向肽（PCM）修饰的载药纳米诊疗探针,探讨其心肌靶向显影能力及其在大鼠体内的分布情况。方法 采用双乳化法及碳二亚胺法制备PCM靶向载卡维地洛纳米诊疗探针（PCM/C-PFPs）,检测其基本性质、大鼠体内显影及体内分布情况。结果 PCM/C-PFPs纳米探针呈球形,平均粒径为（415.00±6.24） nm,电位为（-20.27±1.55） mV;包封率为（78.23±3.45）%;C-PFPs与多肽PCM连接率为（98.98±1.02）%。加热至约60℃时,该探针发生明显相变,并产生大量微气泡。声诺维组和PCM/C-PFPs+低频聚焦超声（LIFU）组大鼠心脏超声显影效果明显,但声诺维组显影仅维持数分钟,而PCM/C-PFPs+LIFU组心脏超声信号可持续至1 h,且心脏显影的声强度高于其他各组（P均<0.05）。PCM/C-PFPs+LIFU组大鼠心脏切片中可见大量聚集的红色探针,明显多于C-PFPs+LIFU组和单纯PCM/C-PFPs组,且多于该组其他组织（肝、肾、肺、脾）。结论 本研究成功制备的心肌靶向诊疗造影剂,具有良好的靶向心脏超声显影和大鼠体内分布特性。     

声动力学治疗对MDA-MB-231细胞增殖及侵袭能力的影响

目的 探讨超声辐照血卟啉单甲醚和声诺维对乳腺癌细胞株MDA-MB-231增殖及侵袭能力的影响。方法 将对数生长期的MDA-MB-231细胞制成细胞悬液,加入HMME和SonoVue后用超声进行辐照。分3组：对照组,不接受治疗;辐照组1：输出声强0.3 W/cm²,辐照时间60 s;辐照组2：输出声强0.6 W/cm²,辐照时间30 s。采用MTS法绘制细胞生长曲线,平板克隆方法观察细胞形成克隆的能力,并用Transwell小室法检测细胞侵袭能力。结果 对照组的生长曲线陡直,而辐照组的曲线平缓。接种2周后对照组出现肉眼可见的细胞克隆,而辐照组未出现。结晶紫染色后观察,辐照组仅可见由少许细胞聚集成的细胞团。接种后24 h、48 h观察,对照组、辐照组1、辐照组2穿越小室的细胞数分别为42.00±13.52、3.52±1.26、2.75±0.96（P<0.05）及104.25±12.61、36.25±3.40、28.75±4.99（P<0.05）。对照组穿越小室的细胞数显著高于辐照组（P<0.05）。结论 超声辐照联合HMME及SonoVue能有效抑制MB-231细胞增殖,降低细胞形成克隆的能力,并显著降低细胞的侵袭能力。     

携抗P-selectin靶向超声造影剂犬体内超声分子成像

目的 制备携抗P-selectin靶向超声造影剂,探讨其评价心肌缺血再灌注损伤的超声分子成像效果。方法 采用“生物素-亲和素”桥接法制备携抗P-selectin靶向超声造影剂,建立犬心肌缺血再灌注模型,分别注入携抗P-selectin靶向超声造影剂（MBp）和空白超声造影剂（MBc）,行心肌声学造影检查,采图、存盘。应用DFY型超声图像定量分析诊断仪中的彩色编码技术对存储的图像进行脱机处理,观察MBp体内超声分子成像效果。结果 成功制备携抗P-selectin靶向超声造影剂及建立犬心肌缺血再灌注模型。彩色编码图像示MBp行心肌声学造影可见缺血再灌注区心肌显著增强;MBc于缺血再灌注区心肌造影无明显增强。结论 应用携抗P-selectin靶向超声造影剂行心肌声学造影检查能准确检测再灌注治疗后犬心肌缺血再灌注损伤。     

制备MRI双靶向分子示踪剂细胞黏附分子-微米级氧化铁颗粒及体外实验

目的 观察新型MRI双靶向分子示踪剂细胞黏附分子-微米级氧化铁颗粒（CAM-MPIO）与体外内皮细胞的结合能力。方法 制备单靶向分子示踪剂细胞间黏附分子（ICAM）-MPIO、血管细胞黏附分子（VCAM）-MPIO和双靶向分子示踪剂CAM-MPIO,将其与肿瘤坏死因子-α炎性激活的内皮细胞结合,采用普鲁士蓝染色法、免疫荧光法及MR检测其特异性结合能力。结果 普鲁士蓝染色结果显示CAM-MPIO组的蓝染铁颗粒分布较ICAM-MPIO组、VCAM-MPIO组明显增多。CAM-MPIO组细胞周围黄色荧光面积分别为ICAM-MPIO、VCAM-MPIO组的（2.00±0.31）倍和（2.46±0.45）倍。T2WI信号强度和T2值随靶向分子示踪剂浓度增高呈不同程度减低,且以CAM-MPIO组减低为著。结论 制备的双靶向分子示踪剂与内皮细胞结合能力优于单靶向分子示踪剂,有望用于早期影像学诊断放射性脑损伤。     

携带cRGD肽的靶向纳米粒超声造影剂的制备以及体外寻靶实验研究

目的 制备携带精-甘-天冬氨酸（cRGD）肽的聚乳酸/羟基乙酸（PLGA）纳米粒超声造影剂,观察其在体外对大鼠肝星状细胞（HSC）的靶向能力。方法 以PLGA-COOH和全氟新溴烷（PFOB）为原料,采用双步乳化法制备PLGA-PFOB纳米粒,采用光学显微镜、扫描电镜以及透射电镜观察其表面以及内部结构;采用马尔文粒径分析仪测量其粒径大小、分布以及表面电位;通过碳二亚胺法连接cRGD肽制备靶向纳米粒超声造影剂（cRGD-NPs）,用激光共聚焦显微镜以及流式细胞仪检测PLGA-PFOB纳米粒造影剂与cRGD肽的连接情况;在大鼠HSC中验证该造影剂的靶向性能。结果 所得样品为乳白色混悬液,纳米粒大小均匀,粒径分布较窄,平均粒径（255.3±66.8）nm,多分散指数为0.025,Zeta电位为（-16.4±5.1）mV;扫描电镜示纳米粒表面光滑规则、透射电镜示PLGA外壳里包裹液氮氟碳PFOB;共聚焦显微镜观察到连接FITC-cRGD显示为绿色,与显示红色的纳米粒共同融合成橙色,靶向纳米粒超声造影剂大量向大鼠HSC聚集并被其吞噬,红色荧光强度明显多于普通非靶向造影剂。结论 成功制备的携带cRGD肽的纳米粒超声造影剂,在体外实验中对大鼠HSC有较强的特异性亲和力。     

载血卟啉单甲醚高分子纳米粒用于光声显像引导下声动力治疗:实验研究

目的 制备一种载血卟啉单甲醚（HMME）的多功能分子探针,评估其体外光声成像及声动力治疗（SDT）效果。方法 采用双乳化法制备载HMME的聚乳酸-乙醇酸（PLGA）纳米粒（HMME@PLGA）,观察纳米粒的基本表征和体外增强光声显像情况,通过流式细胞仪检测人乳腺癌MDA-MB-231细胞与HMME@PLGA共孵育后在超声辐照下产生活性氧的能力,并在细胞水平验证其SDT效果。结果 所制备的HMME@PLGA纳米粒大小均一,形态规则,平均粒径为（333.67±17.50）nm,表面电位为（-10.57±1.98）mV,包封率为75.62%,载药量为2.90%,浓度为1 mg/ml的纳米粒与人乳腺癌MDA-MB-231细胞共孵育24 h的细胞存活率为87.21%。随浓度增加,纳米粒光声信号逐渐增强。经超声辐照,HMME@PLGA纳米粒能使人乳腺癌MDA-MB-231细胞产生大量活性氧,并产生明显细胞毒性作用,使细胞大量死亡,Calcein-AM/PI染色呈红色荧光;通过吖啶橙染色观测到细胞溶酶体结构消失。结论 本研究成功制备了包裹HMME的高分子纳米粒,可实现体外光声成像引导下的SDT。     

Co-delivery of paclitaxel and gemcitabine via a self-assembling nanoparticle for targeted treatment of breast cancer

Multi-functional nanoparticles can be used to improve the treatment index and reduce side effects of anti-tumor drugs. Herein, we developed a kind of multi-functional and highly biocompatible nanoparticle (NP) loaded with folic acid (FA), paclitaxel (PTX) and gemcitabine (GEM) via self-assembly to target cancer cells. The transmission electron microscopy (TEM) results showed that multi-functional FA targeting nanoparticles (MF-FA NPs) exhibited spherical morphology and favorable structural stability in aqueous solution. In addition, NPs (MF-FA NPs and MF NPs) exhibited comparable proliferation inhibition to breast cancer cell 4T1 compared with the pure drug. In in vivo antitumor studies, NPs showed an obviously enhanced anti-tumor efficacy compared with the pure drug. Furthermore, MF-FA NPs displayed higher tumor growth inhibition than MF NPs due to the specific targeting of FA to cancer cells. Consequently, the novel MF-FA NPs could be used as a potential chemotherapeutic formulation for breast cancer therapy.

Preparation of MF-FA nanoparticles and the release behavior of drugs in tumor cells.     

抗人小细胞肺癌单抗2F7（ab’）2的^99mTc放射免疫预定位显像初步研究

目的 提高抗人小细胞肺癌单抗片段2F7(ab’)2的放免显像效果。方法 应用生物素化单抗片段和^99mTc标记的SA二步法给药,在注射放射性标记物后2小时对荷瘤裸小鼠作前位静态显像。结果 二步法在2小时已见肿瘤部位放射性浓聚,4小时显像清楚。而直接法组和对照组无明显浓聚。结论 二步法预定位放免显像能缩短显像时间,有利于^99mTc短半衰期核素的应用。     

CD133-targeted paclitaxel delivery inhibits local tumor recurrence in a mouse model of breast cancer

Expression of the membrane protein CD133 marks a subset of cancer cells with drug resistant phenotype and enhanced tumor initiating ability in xenotransplantation assays. Because drug resistance and tumor relapse are significant problems, approaches to eliminate these cells are urgently needed. As a step towards achieving this goal, we developed polymeric nanoparticles targeting CD133 by conjugating an anti-CD133 monoclonal antibody to nanoparticles formulated using poly(D,L lactide-co-glycolide) polymer. Nanoparticles were loaded with paclitaxel, a microtubule-stabilizing anticancer agent, as well as with 6-coumarin, a fluorescent probe. CD133-targeted nanoparticles (CD133NPs) were efficiently internalized by Caco-2 cells, which abundantly express CD133 (> 9-fold higher uptake than non-targeted control nanoparticles). The effectiveness of CD133NPs in reducing tumor initiating cell (TIC) fraction was investigated using mammosphere formation and soft-agar colony formation assays. Free paclitaxel treatment was not effective in decreasing the TIC population relative to untreated control, whereas CD133NPs effectively decreased the number of mammospheres and colonies formed. In vivo studies in the MDA-MB-231 xenograft model showed that free paclitaxel was initially effective in inhibiting tumor growth but the tumors rebounded rapidly once the treatment was stopped. Tumor regrowth was significantly lower when paclitaxel was delivered through CD133NPs (tumor volume was 518.6 ± 228 vs. 1370.9 ± 295 mm³ for free paclitaxel at 63 days; P < 0.05). Our studies thus show that encapsulation of paclitaxel in CD133NPs results in a significant decrease in the TIC population and improved therapeutic efficacy compared to that with free paclitaxel treatment. These results indicate the potential of targeting anticancer therapeutics to CD133 + cells for reducing tumor recurrence.     

叶酸受体靶向液态氟碳纳米粒造影剂的制备及体外寻靶

目的 制备叶酸受体靶向的被脂质包裹的液态氟碳纳米粒造影剂,鉴定其基本性质,观察其体外靶向性能.方法 以氯仿将偶联叶酸的磷脂[DSPE-PEG(2000)]按照一定比例溶解在成膜材料中,用旋转蒸发仪去除有机溶剂成膜,加入磷酸盐缓冲液重新水合后,在悬液中逐滴加入适量液态氟碳,均质乳化后得到叶酸受体靶向的纳米粒造影剂.在人卵巢癌SKOV3细胞中验证该造影剂的靶向性能(靶向造影剂组),并与不带叶酸的普通造影剂组和游离叶酸干预组相比较.结果 叶酸受体靶向液态氟碳纳米粒造影剂外观与普通造影剂无明显差别.体外靶向实验发现此纳米粒造影剂聚集且牢固地黏附于SKOV3细胞,而普通造影剂组和游离叶酸干预组则未见明显特异性结合.结论 成功制备了偶联叶酸的被脂质包裹的液态氟碳纳米粒造影剂,该造影剂对高表达叶酸受体的SKOV3细胞具有较强的亲和力,有望成为卵巢癌靶向显影与治疗的理想分子探针.     

载硫化铋及阿霉素靶向相变型纳米粒多模态显像及联合治疗卵巢癌体外实验

目的 制备叶酸靶向载硫化铋(Bi2S3)与阿霉素(DOX)相变型纳米粒(FBS-PFP-PLGA@DOX),观察其基本性能、体外多模态显像及光热联合治疗体外卵巢癌的效果.方法 以双乳化法制备FBS-PFP-PLGA@DOX,检测其理化性质;观察其体外多模态显像;采用近红外激光辐照FBS-PFP-PLGA@DOX并实时记...     

Peptide-functionalized NaGdF4 nanoparticles for tumor-targeted magnetic resonance imaging and effective therapy

Metallic nanoparticles showed potent efficacy for diagnosis and therapy of cancer, but their clinical applications are limited by their poor tumor-targeting ability. Herein, peptide-functionalized 9 nm NaGdF₄ nanoparticles (termed as, NaGdF₄@bp-peptide NPs) have been synthesized through the Gd–phosphate coordination reaction of the spherical NaGdF₄ nanoparticles with phosphopeptides (sequence: KLAKLAKKLAKLAKG(p-S)GAKRGARSTA, p-S means phosphorylated serine) including a p32 protein binding motif incorporating a cell-penetrating function, and a proapoptotic domain. The NaGdF₄@bp-peptide NPs are ready to be efficiently internalized by cancer cells; they show a much higher cytotoxicity in MCF-7 breast cancer cells than the casein phosphopeptide (CPP) modified NaGdF₄ nanoparticles (termed as, NaGdF₄@CPP NPs). Using mouse-bearing MCF-7 breast cancer as a model system, the in vivo experimental results demonstrate that NaGdF₄@bp-peptide NPs have integration of T₁-weighted magnetic resonance imaging (MRI) contrast and tumor-targeting functionalities, and are able to suppress tumor growth without causing systemic toxicity.

NaGdF₄@bp-peptide nanoparticles have been used as a T₁-weighted MR contrast agent with active-tumor targeting and antitumor ability.     

靶向抗肿瘤纳米粒用于增强声动力/饥饿联合治疗

目的 制备一种载IR780及葡萄糖氧化酶(GOx)的多功能纳米粒,研究其主动靶向能力,并评估其体外光声成像及声动力(sonodynamic therapy, SDT)/饥饿联合治疗的效果。方法 通过双乳化法制备载有IR780及GOx的聚乳酸-羟基乙酸共聚物(poly (lactic-co-glycolic) acid, PLGA)纳米粒(IG@P 纳米粒) 。检测IG@P 纳米粒的理化特性,观察其体外光声成像的效果,并评估该纳米粒对肿瘤细胞的靶向能力及体外联合治疗效果。结果 制备的IG@P纳米粒呈大小均一的球形,平均粒径(248.1 ± 24.3) nm,且仍保留GOx的酶催化活性。实验结果表明IG@P纳米粒具有良好的光声成像及主动靶向效果。与单一治疗相比,SDT及饥饿治疗联合治疗可以更明显杀伤乳腺癌4T1细胞。且IR780的主动靶向作用,促进纳米粒在肿瘤细胞内的聚集,显著提高了SDT/饥饿治疗的治疗效果。结论 成功制备了具有肿瘤靶向作用的IG@P多功能纳米粒,可用于光声成像,并可增效SDT/饥饿联合治疗。