芍药甘草汤修复PM2.5暴露系统性红斑狼疮小鼠的作用机制研究

目的：建立PM_2.5暴露系统性红斑狼疮(SLE)小鼠模型,研究芍药甘草汤对PM_2.5致SLE小鼠病理损伤的治疗作用与机制。方法：40只C57BL/6雌性小鼠随机分为空白对照组、SLE组、SLE+PM_2.5组(模型组)及芍药甘草汤组。模型组通过PM_2.5全身暴露建立PM_2.5暴露SLE小鼠模型。治疗结束后ELISA法检测小鼠血清抗ds-DNA抗体含量和肺泡灌洗液中活性氧(ROS)含量;HE染色观察肾脏和肺组织病理形态学改变;Western Blot检测相关蛋白NF-κB p65、p-NF-κB p65、TLR4、COX-2的表达水平;16S rRNA基因分析小鼠肠道微生物的变化。结果：与模型组比较,芍药甘草汤治疗后脾脏指数和血清抗ds-DNA抗体水平显著降低(P<0.01);小鼠肾小球基底膜均匀、足突轻微融合;小鼠肺泡灌洗液中ROS含量降低(P<0.05);HE染色切片发现小鼠肺组织肺泡炎症细胞渗出减少,NF-κB p65、p-NF-κB p65、TLR4、COX-2...     

芪丹通脉片对ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块及NLRP3炎症小体的影响

目的 探讨芪丹通脉片是否可以通过抑制NLRP3炎症小体激活干预ApoE^-/-小鼠动脉粥样硬化易损斑块的形成。方法 将小鼠随机分为对照组、不稳定斑块组、益气组、活血组和复方组,每组12只。实验过程中对照组小鼠给予普通饲料饲养,其余组均给予高脂饲料喂养;同时益气组灌胃黄芪浸膏干粉溶剂(0.52 g生药/kg),活血组灌胃丹参浸膏干粉溶剂(1.31 g生药/kg),复方组灌胃芪丹通脉片浸膏干粉溶剂(2 g生药/kg),对照组和不稳定斑块组灌胃等体积生理盐水,均1次/d。连续灌胃14 d后,对各组小鼠进行右侧颈动脉外置管术,术后继续原来干预12周。干预结束后,麻醉小鼠,摘其眼球取血,ELISA法检测外周血中白细胞介素-1β(IL-1β)和白细胞介素-18(IL-18)水平;分离颈总动脉,采用HE染色及CD68、α-actin免疫荧光染色观察小鼠颈动脉斑块稳定情况;RT-PCR法检测斑块组织中NLRP3、Caspase-1 mRNA表达情况,Western blot法检测斑块组织中NLRP3、Caspase-1蛋白表达情况。结果 不稳定斑块组血清IL-1β及IL-18水平均...     

动脉粥样硬化不稳定斑块的研究及中医药治疗概述

动脉粥样硬化不稳定斑块与心脑血管疾病密切相关,如何稳定动脉粥样硬化不稳定斑块成为现代心脑血管疾病防治的热点。中药有多途径、多环节、多靶点、全方位治疗疾病且不良反应轻的特点,在稳定动脉粥样硬化不稳定斑块方面具有一定的疗效优势。     

麝香通心滴丸对稳定动脉粥样硬化斑块的机制研究

目的观察麝香通心滴丸稳定动脉粥样硬化（AS）斑块的作用机制。方法采用高脂饮食伴主动脉内膜球囊损伤复制家兔动脉粥样硬化斑块模型,药物（斑点蝰蛇毒、组胺）触发斑块破裂,观察麝香通心滴丸稳定易损斑块的作用机制。生化方法检测AS家兔的血脂及氧化应激水平;ELISA及实时荧光定量PCR（Real-Time RT-PCR）法检测麝香通心滴丸对AS家兔基质金属蛋白酶-2（MMP-2）、TIMP2以及相关炎症介质的蛋白含量和mRNA表达水平的影响;应用TUNEL法检测麝香通心滴丸对AS家兔斑块内细胞凋亡水平的影响。结论麝香通心滴丸稳定易损斑块作用的机制有,减轻AS氧化应激损伤,降低脂质过氧化;降低MMP2含量,升高TIMP2含量,减少AS斑块内的基质降解,调节基质代谢;减少斑块内巨噬细胞的数量,降低炎性因子的表达,减轻斑块内的炎症反应;减少斑块内细胞凋亡增加斑块稳定性。     

麻黄多糖对PM2.5联合卵白蛋白诱导哮喘小鼠血清代谢组学的研究

目的：基于代谢组学方法研究麻黄多糖ESP-B4对哮喘小鼠的血清内源性代谢物的影响。方法：SPF级BALB/c雌性小鼠随机分为3组，每组6只，分别为空白组、模型组、麻黄多糖高剂量组，采用PM_2.5联合卵白蛋白诱导小鼠哮喘模型。采用UPLC-Q/TOF-MS方法分析比较各组小鼠的血清代谢轮廓，并对血清样品进行PCA、OPLS-DA、PLS-DA和S-plot分析，筛选出差异代谢物及相关代谢通路。结果：代谢组学共确定了22个差异代谢物，通过MetPA分析确定8条可能相关代谢通路，根据影响值的大小得出，麻黄多糖ESP-B4可显著改善小鼠血清的甘油磷脂代谢和花生四烯酸代谢水平。结论：麻黄多糖ESP-B4可能通过调节甘油磷脂代谢过程和花生四烯酸代谢过程防治哮喘，这对深入探讨其作用机制研究具有重要意义。     

心脉康方调控TLR4/NLRP3焦亡通路抗动脉粥样硬化机制研究

目的：探讨心脉康方治疗动脉粥样硬化(AS)的可能分子作用机制。方法：将46只Apo E^-/-小鼠进行8周高脂饲料连续喂养复制小鼠动脉粥样硬化模型,10只C57BL/6小鼠同时使用普通饲料喂养,8周后取6只Apo E^-/-小鼠验证造模成功后,将剩余40只小鼠按随机数字表法分为模型组、阿托伐他汀组、心脉康方低剂量组、心脉康方高剂量组,每组10只。10只C57BL/6小鼠作为空白对照组。各药物干预组小鼠给予相应的药物干预,空白对照组和模型组小鼠给予生理盐水灌胃。12周后,采用苏木素-伊红(HE)和油红O染色观察主动脉组织病理学形态改变;采用ELISA法检测血清中ox-LDL、TNF-α、IL-1β、IL-6和IL-18的水平;采用全自动生化仪检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;采用q PCR检测主动脉组织中易损斑块稳定性指标(ICAM-1 m RNA、VCAM-1 m RNA、MMP-9 m RNA、MCP-1 m RNA)及细胞焦亡相关指标(IL-1β m RNA、...     

基于能量代谢探讨红景清肺方对PM2.5诱导小鼠肺损伤的保护作用

目的 探究红景清肺方对大气细颗粒物(particulate matter 2.5,PM_2.5)诱导小鼠肺损伤的保护作用及机制。方法 40只ICR雄性小鼠,随机分为空白对照组、PM_2.5模型组、中药等效组、中药二倍组。中药各组预给药7 d后,除空白对照组外,各组持续2 d给予0.02 mg·μL^-1浓度PM_2.5混悬液滴鼻制备小鼠肺损伤模型。末次染毒24 h后取肺组织样本,苏木素-伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肺组织形态学变化;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)和Na⁺-K⁺-ATP酶(Na⁺-K⁺-ATPase)、Ca²⁺-Mg²⁺-ATP酶(Ca²⁺-Mg²⁺-A...     

参莲提取物对PM2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用

观察中药参莲(SL)提取物对PM_2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用。建立PM_2.5染毒致RAW264.7细胞损伤模型。以细胞生长、细胞损伤标记物、氧化应激相关因子及炎性细胞因子为观察指标,评价SL提取物对PM_2.5染毒RAW264.7细胞损伤的保护作用。结果表明,PM_2.5 50 mg·L^-1作用4,24 h时可致细胞颗粒沉积,抑制细胞生长,可显著增加细胞上清中LDH,NO释放量及细胞内活性氧(ROS)水平。在SL提取物50,25,10 mg·L^-1干预作用下,RAW264.7细胞颗粒沉积减轻,细胞上清中LDH,NO,IL-1β,MCP-1释放量显著下降,SOD活性显著有所增加。表明SL提取物对PM_2.5染毒RAW264.7细胞损伤有明显保护作用,其作用可能与对细胞的直接保护作用、减少氧化应激及炎症损伤有关。     

金水宝片对PM2.5致大鼠肺损伤的保护作用及其机制研究

目的观察金水宝片对PM2.5致肺损伤大鼠的影响并对其机制进行研究。方法 SD雄性大鼠60只,随机分为对照组、模型组及金水宝片低、中、高剂量(0.225、0.450、0.900g/kg)组,每组12只。除对照组外,其余各组大鼠气管滴注PM2.5(10 mg/kg)混悬液染毒,隔天1次,一周3次,连续4周,制备大鼠肺损伤模型。染毒结束后,除对照组、模型组外,其余各组ig给予相应金水宝片药液,1次/d,连续14 d。观察各组大鼠一般状态;检查用力肺活量(FVC)、0.3秒用力呼出量(FEV0.3)、最大呼吸气流(PEF);ELISA法检测肺泡灌洗液(BALF)中白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、嗜酸性粒细胞(EOS)及肺脏匀浆中转化生长因子-β1(TGF-β1)的水平;HE染色观察肺组织病理学改变;Western blotting检测肺组织中蛋白激酶B(Akt)、磷酸化-蛋白激酶B(p-Akt)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)以及人α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与模型组比较,中、高剂量金水宝片均能提高肺损伤大鼠的FVC、FEV0.3、PEF、FEV0.3/FVC(P0.01),降低IL-6、TNF-α、EOS、TGF-β1水平(P0.05、0.01),显著改善大鼠肺组织病理学变化,降低大鼠肺脏中p-Akt、MMP-9、α-SMA表达(P0.05、0.01)。结论金水宝片对PM2.5导致大鼠肺损伤具有明显治疗作用,其作用机制可能与金水宝片通过PI3K/Akt信号通路减少炎症反应,延缓纤维化进展有关。     

温阳活血解毒方稳定ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块机制研究

【目的】 探讨温阳活血解毒方防治动脉粥样硬化（AS）不稳定斑块发生发展的可能作用机制。【方法】 以高脂饲料喂养 50 只 8 周龄雄性载脂蛋白 E 基因敲除（ApoE-/-）小鼠 13 周,复制动脉粥样硬化模型。将模型小鼠随机分为模型组、辛伐他汀组（2.6 mg·kg-1·d-1）和中药低、中、高剂量组（14.08、28.16、56.32 g·kg-1·d-1）,每组9只。分组后次日起各给药组开始灌胃给药,每日1次,连续灌胃给药13周;模型组灌胃等体积生理盐水。采用苏木素-伊红（HE）染色观察主动脉组织病理学变化;用干化学法在全自动生化仪上检测血清中总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）和高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）水平;分别采用蛋白免疫印迹（Western Blot）法和实时荧光定量聚合酶链式反应（RT-qPCR）法检测主动脉组织中小凹蛋白1（Caveolin-1）和磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2（p-ERK1/2）的蛋白及mRNA表达水平。【结果】 与模型组比较,中药高剂量组及辛伐他汀组小鼠主动脉胆固醇结晶明显减少,斑块明显趋于稳定,血清中TC、TG、LDL-C水平明显降低,HDL-C水平明显升高（均P＜0.01）,主动脉组织中Caveolin-1蛋白的表达量明显增加,p-ERK1/2蛋白的表达量明显降低（均P＜0.05）。与模型组比较,各给药组主动脉组织Caveolin-1 mRNA、p-ERK1/2 mRNA表达水平均无明显变化,差异无统计学意义（P＞0.05）。且与辛伐他汀组比较,中药高剂量组在稳定斑块、调节血脂水平、Caveolin-1蛋白表达水平方面无明显差异（P＞0.05）。【结论】 温阳活血解毒方可调节血脂水平,增加动脉粥样硬化斑块稳定性,其机制可能与上调Caveolin-1蛋白表达抑制ERK1/2信号通路的激活有关。     

UPLC-MS-MS同时测定中药活血益气方KLW中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量

目的:建立一种超高效液相色谱串联质谱分析方法,可同时测定中药活血益气方KLW中的三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的含量.方法:中药活血益气方KLW采用超声提取,离心取上清液过0.2μm微孔滤膜后测试,采用Waters ACQUITY BEH C18色谱柱(2.1 mm×50mm,1.7 μm),以甲醇和水溶液梯度洗脱,流速0.4 mL· min-,多反应监测测试方法(MRM)三七皂苷R1选择1 007.2/423.3 m/z;人参皂苷Rg1选择875.2/423.5 m/z;人参皂苷Rb1选择1183.3/487.3m/z定量.结果:三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1在0.05 ～2.0 mg·L-1呈现良好的线性关系(r ＞0.999),平均加样回收率(n=6)分别为97.7％,96.3％,97.1％.结论:方法简便、灵敏、快速、重复性好,适用于同时测定复杂复方KLW中3种皂苷类成分的含量,为该制剂的质量控制和临床药学研究提供了实用的检测方法.     

HPLC法测定林下山参制浆前后人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2含量的变化

目的分析林下山参制浆后人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2含量的变化情况。方法采用HPLC-UV法,Innoval ODS-2色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-水溶液进行梯度洗脱;柱温30℃;体积流量1.0 mL/min;进样体积20μL;检测波长203 nm。结果林下山参中6种人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2质量分数分别由制浆前的0.651、0.506、0.363、0.014、0.023、0.031 mg/g变化为制浆后的0.517、0.413、0.105、0.122、0.214、0.098 mg/g。人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2分别在2.5~100 mg/L具有良好的线性关系,r2均大于0.999 5;精密度、稳定性及重复性良好;平均加样回收率为95%~105%,RSD为1.25%~3.05%。结论林下山参中6种人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1、Rg_3、Rh_1、Rh_2的含量在制浆前、后发生变化。林下山参制浆后人参皂苷Re、Rg_1、Rb_1的含量降低,稀有人参皂苷Rg_3、Rh_1、Rh_2的含量分别增高8.7、9.3、3.2倍。基于HPLC最佳分离参数建立的6种人参皂苷成分同时分析的方法具有较好的准确性和可靠性,可为林下山参浆的质量评价提供科学依据。     

ELISA试剂盒定量检测中药材和中成药的黄曲霉毒素B1

为评价中药材和中成药的黄曲霉毒素Ｂ１（ＡＦＢ１）污染和程度,采用了ＥＬＩＳＡ试剂盒定量检测ＡＦＢ,对一批中药材和中成药进行检测,发现ＡＦＢ１检出率和含量很高。     

不同产地雄黄及其炮制品中二硫化二砷和可溶性砷含量比较

目的:比较研究不同产地雄黄及其炮制品中主成分As2S2及可溶性砷盐As2O3的含量差异。方法:采用2010年版《中国药典》雄黄项下的滴定法测定不同产地雄黄及其炮制品中As2S2的含量,采用AFS-230E型原子荧光光度计检测上述样品中可溶性砷盐As2O3含量。结果:不同产地的雄黄及其炮制品中As2S2,As2O3含量存在显著差异。雄黄炮制后,炮制品中As2S2含量均提高,As2O3含量均明显降低。除吉林和江苏2个产地的的雄黄及其炮制品中As2S2含量<90.0%,其余样品均符合药典规定;且雄黄炮制品中As2O3含量均能控制在1.7 mg.g-1以下。结论:研究结果可为指导雄黄临床合理用药提供参考依据。     

响应曲面法(RSM)优化人参皂苷Rh_4和Rk_3的制备工艺

目的以人参皂苷Rh_4(GRh_4)和Rk_3(GRk_3)的生成量作为考察指标,利用响应曲面法(RSM)优化GRh_4和GRk_3的制备工艺。方法利用HPLC测定GRh_4和GRk_3的量,以人参皂苷Rg1(GRg1)为底物,采用高温热裂解,对影响热裂解的酸浓度、反应温度及时间进行考察,运用RSM选择最优GRh_4和GRk_3的热裂解工艺条件。结果经HPLC测定,根据Design Expert 7.1.6软件预测经高温热裂解GRg1制备GRk_3和GRh_4的最佳工艺参数:甲酸浓度为0.02%,反应温度为116.4℃,反应时间为2.22 h;在此条件下GRk_3和GRh_4之和最大为123.56 mg,得率为61.78%。结论 RSM优化后的高温热裂解条件,适合大规模制备GRk_3和GRh_4。     

黄曲霉毒素B1免疫快速检测技术研究进展及其在中药中的应用

黄曲霉毒素B1(aflatoxin B1,AFB1)是由产毒真菌(如黄曲霉和寄生霉菌)产生的有毒次级代谢产物,具有致癌、致畸、致突变作用。研究表明AFB1广泛存在于农作物、食品、饲料甚至中药中,对人类健康造成了严重的安全隐患。建立一系列适用于不同基质中AFB1的多种快速检测技术,为预防和控制食品与药品的安全、保障人类健康方面具有重要意义。随着小分子免疫技术的不断提高,近年来各种检测形式的AFB1免疫快速技术被开发利用到现场快速检测领域,该文系统综述了我国现行有效的AFB1检测相关标准及近年来一些地区和国家等对中药材中黄曲霉毒素的限量标准情况,这些限量标准主要针对食品、饲料及一些易污染中药材中的黄曲霉毒素,而研究表明除了限量标准进行规定的中药材品种外也存在一些药用植物及其产品也有被黄曲霉毒素污染的情况。并对AFB1抗原抗体制备技术,以及基于抗原抗体特异性识别功能的快速检测方法包括酶联免疫吸附法、亲和色谱法、荧光免疫法、化学发光免疫法和新型免疫传感器法的开发及应用进行了归纳总结与对比。以期为中药规范化种植、中药集散贸易市场、药店医院、中药质量监管等方面形成快速、准确、灵敏的检测技术标准提供参考,确保中药的质量安全。     

氨基表面修饰磁性纳米粒子(MNP-NH_2)对黄酮类和有机酸类成分选择吸附研究

目的制备氨基表面修饰磁性纳米粒子(amino-modified Fe_3O_4 nanoparticles,MNP-NH_2)并将其作为吸附剂,研究其对黄酮类及有机酸类成分的吸附性能。方法制备MNP-NH_2磁性纳米粒子,扫描/透射电镜、傅里叶红外光谱仪及振动样品磁强计对其结构进行表征;通过研究对12种单体成分吸附性能探讨MNP-NH_2的吸附规律;将其应用到金银花药材中,研究超声时间、温度、离子强度及p H值对吸附能力的影响,采用L9(34)正交试验考察MNP-NH_2对金银花5种成分的洗脱条件,并研究其循环利用性能。结果制备的MNP-NH_2结构稳定、分布均匀,有良好的磁性;其吸附量与黄酮类、有机酸类化合物邻位酚羟基存在和个数有关;离子浓度和温度对吸附过程几乎无影响,p H值对不同类化合物的吸附过程影响较大,最佳吸附条件为30℃下超声40 min,洗脱条件为5 m L 20%冰乙酸溶液(甲醇-水60∶40)的洗脱液,超声40 min。结论 MNP-NH_2可用于对金银花中有效成分提取,对其中黄酮类成分保持较高的吸附率,同时MNP-NH_2的循环使用与再生性良好,为复杂中药及天然药物有效成分提取应用提供新的研究思路。     

RP-HPLC法测定保肝丸中三七皂苷R_1、人参皂苷Rg_1和Rb_1及野黄芩苷

目的建立RP-HPLC法测定保肝丸中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和野黄芩苷的量,对保肝丸的制剂质量提供保障。方法采用安捷伦Zorbax SB-C18(150 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-0.1%磷酸水溶液,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min;紫外检测波长为203 nm;柱温30℃;进样量为5μL。结果三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和野黄芩苷的最低检测质量浓度分别为0.287、0.126、0.182、0.305 mg/L,线性范围分别为4.427~141.668、6.055~193.750、3.255~104.167、5.729~183.333 mg/L。供试样品中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和野黄芩苷的平均回收率分别为101.76%、99.66%、99.43%、101.26%;精密度RSD分别为1.81%、1.79%、1.39%、1.51%;重复性试验RSD分别为1.71%、1.86%、0.97%、1.63%;稳定性试验RSD分别为1.62%、1.25%、1.10%、1.41%。供试样品每丸含三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和野黄芩苷的平均量分别为4.303、31.729、20.776、1.071μg。结论该方法简便、灵敏度高、重复性好、平均回收率高,是检测三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1和野黄芩苷质量浓度的可信方法。     

人参皂苷Rg1通过调控AMPK/NLRP3通路介导的细胞焦亡抑制大鼠肺纤维化研究

目的 探究人参皂苷Rg₁对大鼠肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)的影响及作用机制。方法 50只雄性SD大鼠随机分为对照组、模型组、人参皂苷Rg₁(72 mg/kg)组、腺苷酸活化蛋白激酶(adenosine monophosphate activated protein kinase,AMPK)激动剂(200 mg/kg)组、人参皂苷Rg₁(72 mg/kg)+AMPK抑制剂(20 mg/kg)组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠气管内注射博来霉素(5 mg/kg)构建大鼠PF模型。造模成功后2 d开始给药,连续给药28 d后检测大鼠肺功能指标;采用苏木素-伊红(HE)、Masson染色观察肺组织病理变化;采用免疫组化检测肺组织I型胶原(collagen I)和α-肌动球蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)表达;采用试剂盒测定肺组织羟脯氨酸(hydroxyproline,Hyp)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-...