舒郁胶囊对血管性抑郁模型大鼠脑组织5-HT1AR, D2R, α2AR及ApoE4表达的影响

目的： 观察舒郁胶囊对血管性抑郁模型大鼠脑组织5-羟色胺1A受体（5-HT_1AR）、多巴胺2受体（D₂R）、α肾上腺素2A受体（α_2AR）和载脂蛋白E₄（Apo E₄）表达的影响。 方法： 除正常组外其他各组大鼠分别im给予维生素D3（VD3）30万U·kg^-1,连续3 d,第4天起给予高脂饲养9周,继续高脂的同时给予慢性不可预见性温和应激刺激（CUMS）3周,建立大鼠血管性抑郁模型。舒郁胶囊低、中、高剂量组大鼠均ig给予舒郁胶囊533,1 066,2 132 mg·kg^-1,氟西汀组给予盐酸氟西汀1.3 mg·kg^-1,正常组及模型组大鼠ig等体积蒸馏水,各组均为1次/d,疗程共21 d。以敞箱实验,糖水偏嗜实验进行行为学评分,采用免疫组织化学法检测脑内5-HT_1AR,D₂R,α_2AR的含量变化,采用酶联免疫法测定Apo E₄的含量变化。 结果： 与正常组比较,模型组大鼠脑内的5-HT_1AR,D₂R,α_2AR受体和Apo E₄的含量表达显著增加（P<0.01）;舒郁胶囊低、中、高剂量组和氟西汀组与模型组比较均能降低大鼠脑内5-HT_1AR,D₂R,α_2AR受体及降低Apo E₄含量（P<0.05,P<0.01）,舒郁胶囊3剂量组和氟西汀组之间比较无明显差异。 结论： 舒郁胶囊可能具有抗血管性抑郁作用,其作用机制可能与降低大鼠脑内5-HT_1AR,D₂R,α_2AR及Apo E₄表达有关。     

龙牡桂枝汤及其拆方对注意缺陷多动障碍模型大鼠下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的:探讨龙牡桂枝汤及其拆方对注意缺陷多动障碍(ADHD)动物模型—自发性高血压大鼠(SHR)下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的调节作用,阐释复方配伍的科学内涵。方法:幼年雄性SHR大鼠随机分为生理盐水组,盐酸哌甲酯组(2 mg·kg~(-1)),龙牡桂枝汤组(30 g·kg~(-1)),桂枝加龙骨牡蛎汤组(21 g·kg~(-1)),甘麦大枣汤组(9.24 g·kg~(-1)),石菖蒲-远志组(4.62 g·kg~(-1)),分别予相应药物灌胃14 d,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测大鼠血清促肾上腺皮质激素释放激素(CRH),促肾上腺皮质激素(ACTH),皮质酮(CORT)的含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测下丘脑盐皮质激素受体(MR),糖皮质激素受体(GR),CRH及海马GR,MR mRNA的表达水平。结果:与生理盐水组比较,盐酸哌甲酯组、龙牡桂枝汤组大鼠血清CORT,ACTH,CRH水平,下丘脑GR,CRH及海马MR,GR mRNA的表达水平明显升高(P0.05,P0.01),其海马GR mRNA表达明显高于盐酸哌甲酯组(P0.01)。拆方研究显示:与生理盐水组比较,桂枝加龙骨牡蛎汤组和甘麦大枣汤组大鼠血清ACTH,CRH水平,下丘脑MR,GR,CRH及海马GR,MR mRNA的表达明显升高(P0.05,P0.01),桂枝加龙骨牡蛎汤组大鼠血清CORT水平明显升高(P0.01),石菖蒲-远志组大鼠血清ACTH水平明显升高(P0.05)。结论:龙牡桂枝汤治疗ADHD的作用机制与提高血清CORT,ACTH,CRH水平,增加下丘脑MR,GR,CRH及海马GR,MR mRNA的表达,从而调控HPA轴功能有关。各拆方药组对HPA轴功能的影响程度依次为桂枝加龙骨牡蛎汤甘麦大枣汤石菖蒲-远志。     

二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病大鼠β2AR/β-arrestin2信号通路的影响

目的:探讨二陈汤加味对慢性阻塞性肺疾病(COPD)大鼠模型β_2肾上腺素受体(β_2AR)/β-抑制蛋白2(β-arrestin2)信号通路的影响,以及血清、肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液中IL-17表达的影响。方法:将70只SD大鼠随机分为7组,即正常组、模型组、二陈汤加味高、中、低剂量(40,20,10 g·kg~(-1)·d~(-1))组、消咳喘组(5 g·kg~(-1)·d~(-1))、二陈汤组(5 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组10只。以烟熏与脂多糖(LPS)气管滴注并用的方法制备大鼠COPD大鼠模型。造模成功后,治疗组分别灌胃给药,正常及模型组则灌等量的生理盐水。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清、肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液中白细胞介素-17(IL-17)的含量;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测β_2AR的mRNA表达;采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织β_2AR的蛋白表达;采用免疫组化检测肺组织β_2AR,β-arrestin2的蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组肺组织中β_2AR的蛋白表达显著降低(P0.01);与模型组比较,肺组织中β_2AR的蛋白表达显著增加(P0.01),其中二陈汤加味中剂量组与其他各组均有差异(P0.05)。与正常组比较,模型组β_2AR mRNA表达显著降低(P0.01);与模型组比较,二陈汤加味高、中、低剂量组、消咳喘组、二陈汤组中β_2AR的mRNA表达均显著升高(P0.01)。其中二陈汤加味中剂量组与其他各给药组比较升高显著(P0.01)。与正常组比较,模型组血清中IL-17含量显著升高(P0.01),与模型组比较,各给药组血清中IL-17的含量均受到一定程度的抑制,其中二陈汤加味中剂量组受到的抑制程度尤为明显(P0.05)。结论:二陈汤加味可能通过升高β_2AR,β-arrestin2的表达,并以此降低IL-17的含量,来对抗COPD大鼠的炎症反应,并改善肺功能。     

龙牡桂枝汤对慢性应激状态下ADHD大鼠学习记忆及海马-HPA轴的影响

目的：观察龙牡桂枝汤对慢性应激状态下注意缺陷多动障碍（ADHD）模型大鼠学习记忆能力和海马-下丘脑-垂体-肾上腺轴（HPA轴）的影响。方法：32只ADHD模型动物幼年自发性高血压大鼠（SHR）随机分为空白组、慢性应激组、盐酸哌甲酯组和龙牡桂枝汤组,各8只。采用Morris水迷宫实验评价大鼠学习记忆能力,ELISA法检测血清促肾上腺皮质激素（ACTH）、皮质酮（CORT）、促肾上腺皮质释放激素（CRH）水平,RTPCR法检测下丘脑CRH、促肾上腺皮质激素释放激素受体1(CRHR1)、促肾上腺皮质释放激素结合蛋白（CRH-BP）及垂体CRHR1、CRH-BP mRNA表达水平,免疫组化法检测海马糖皮质激素受体（GR）、盐皮质激素受体（MR）蛋白表达水平。结果：与空白组比较,慢性应激组寻找平台的潜伏期显著延长（P<0.01）,在目标象限停留时间及穿越平台数显著减少（P<0.05）,血清CORT、CRH、ACTH水平显著升高（P<0.01,P<0.05）,下丘脑CRH、CRHR1、CRH-BP mRNA及垂体CRHR1、CRH-BP mRNA表达升高（P<0.05...     

龙牡桂枝汤对ADHD模型大鼠左右额叶-纹状体NET mRNA表达的影响

目的:观察龙牡桂枝汤对注意缺陷多动障碍(ADHD)模型动物-幼年自发性高血压大鼠(SHR)左右额叶-纹状体去甲肾上腺素转运体(NET)mRNA表达的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法:幼年雄性SHR大鼠随机分为龙牡桂枝汤高、中剂量组、盐酸哌甲酯对照组和生理盐水对照组,连续灌胃给药14天,采用Real-time PCR法检测各组大鼠左右脑前额叶皮质、纹状体NET mRNA表达水平。结果:在右前额叶皮质,龙牡桂枝汤高剂量组NET mRNA表达较其他实验组明显增加,而在左前额叶皮质各组差异不明显。在双侧纹状体,与生理盐水组相比,各用药组NET mRNA的表达显著增加,且龙牡桂枝汤高剂量组中剂量组盐酸哌甲酯组,差异具有统计学意义。结论:龙牡桂枝汤治疗ADHD的可能机制之一与其上调右脑前额叶皮质及双侧纹状体NET mRNA表达有关。     

基于β2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路的清肠化湿颗粒防治溃疡性结肠炎的作用机制

目的:观察清肠化湿颗粒对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠及人结肠癌上皮细胞株HT-29炎症模型β_2肾上腺素受体(β_2AR)/β-抑制蛋白2(β-arrestin2)/核转录因子-κB(NF-κB)信号通路的干预作用。方法:取8只大鼠作为空白组,其余大鼠采用三硝基苯磺酸(trinitro-benzene-sulfonic acid,TNBS)灌肠法复制UC大鼠模型;待模型建立成功后,随机分为模型组,柳氮磺胺吡啶(SASP,1.0 g·kg~(-1))组,清肠化湿颗粒低、中、高剂量(2.8,5.5,11.0 g·kg~(-1))组,每组8只,灌胃给药10 d,每日1次;酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)测定UC大鼠结肠组织中巨噬细胞移动抑制因子(MIF),基质金属蛋白酶-1(MMP-1),MMP-2,MMP-9,胰岛素样生长因子-1(IGF-1),超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),髓过氧化物酶(MPO),一氧化氮(NO),一氧化氮合成酶(iNOS),谷胱甘肽-过氧化物酶(GSH-Px);免疫组化法检测模型大鼠结肠黏膜β_2AR,β-arrestin2,NF-κB定位表达;采用肿瘤坏死因子与脂多糖诱导HT-29细胞炎症模型;噻唑蓝(MTT)比色法检测清肠化湿颗粒对细胞增殖的影响,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中β_2AR,β-arrestin2,NF-κB蛋白表达量。结果:造模后,模型组大鼠较空白组大鼠结肠黏膜的结肠损伤分数明显升高;与模型组比较,3个剂量的清肠化湿颗粒给药组结肠黏膜损伤明显下降(P0.05,P0.01),大鼠结肠组织IGF-1,SOD,GSH-Px含量与β_2AR,β-arrestin2表达明显上升,MIF,MMP-2,MMP-9,MDA,MPO,NO,iNOS含量及NF-κB表达明显下降(P0.05,P0.01)。结论:清肠化湿颗粒可缓解UC氧化应激反应及肠道炎症,其作用与激活β_2AR/β-arrestin2/NF-κB信号通路有关。     

白花丹醌对TGF-β1 刺激人肝星状细胞α-SMA表达的影响

目的:研究白花丹醌(plumbagin)对转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的体外培养人肝星状细胞HSC-LX2α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)mRNA和蛋白表达的影响。方法:体外培养HSC-LX2,随机设立空白组,TGF-β1刺激的模型组,TGF-β1+白花丹醌2.0μmol·L-1高剂量组,TGF-β1+白花丹醌1.5μmol·L-1中剂量组和TGF-β1+白花丹醌1.0μmol·L-1低剂量组,各药物与细胞孵育72 h后,采用RT-PCR检测各组HSC-LX2α-SMA mRNA的表达,采用免疫细胞化学方法(ICC)检测HSCLX2中α-SMA蛋白的表达。结果:与正常组比较,模型组α-SMA mRNA及蛋白表达明显升高(P0.01);与模型组比较,白花丹醌作用72 h后,高、中剂量组HSC-LX2细胞中α-SMA mRNA的表达明显降低(P0.01);免疫细胞化学结果显示白花丹醌高、中剂量组对HSC-LX2细胞α-SMA蛋白的表达有显著地抑制作用(P0.05),尤以高剂量组更明显(P0.01)。结论:白花丹醌能抑制HSC-LX2的活化和增殖,其机制之一可能是从mRNA水平和蛋白水平抑制α-SMA的表达,从而发挥其抗肝纤维化作用。     

黄芩苷对扩张型心肌病大鼠心室重构、心室肌细胞凋亡及β1-AR/PKA/CaMKⅡ信号通路的影响

目的:探讨黄芩苷对阿霉素(ADR)诱导扩张型心肌病大鼠心室重构、心室肌细胞凋亡及β_1肾上腺素受体(β_1-AR)/蛋白激酶A(PKA)/钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaMKⅡ)信号通路的影响。方法:雄性Wistar大鼠60只,随机分为正常组、模型组、黄芩苷低、中、高剂量组及卡维地洛组;模型组给予ADR 2 mg·kg~(-1)腹腔注射,黄芩苷组及卡维地洛组在模型组基础上分别给予黄芩苷(25,50,100 mg·kg~(-1)·d~(-1)),卡维地洛10 mg·kg~(-1)·d~(-1)灌胃,正常组给予等体积0.9%NaCl腹腔注射,1次/周,共3次;7周末各组大鼠行心脏超声检测心室变化及心功能指标;酶联免疫吸附法(ELISA)检测各组大鼠血清氨基末端脑钠肽前体(N-terminal pro-brain natriuretic peptide,NT-pro BNP),人基裂解素(human stromelysin-2,ST2)含量;采用原位末端转移酶标记法(TUNEL)染色观察各组大鼠心室肌细胞凋亡情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组大鼠心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠出现心室重构明显及心功能减弱(P0.05),血清NT-proBNP,ST2含量增多(P0.05),心室肌细胞凋亡数量增加(P0.05),心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达增多;与模型组比较,黄芩苷及卡维地洛组大鼠心室重构及心功能改善(P0.05),血清NT-pro BNP,ST2含量降低(P0.05),心室肌凋亡数量减少(P0.05),心室肌组织中β_1-AR,PKA及CaMKⅡ表达减少(P0.05)。结论:黄芩苷可有效改善ADR诱导的扩张型心肌病大鼠心室重构,减少心肌细胞凋亡,其机制可能与抑制心室肌细胞β-AR/PKA/CaMKⅡ信号通路表达有关。     

糖耐康对自发性2型糖尿病小鼠NE，α1-AT蛋白表达的影响

目的:观察中药糖耐康(Tangnaikang,TNK)对2型糖尿病(T2DM)的ob/ob小鼠中性粒细胞弹性蛋白酶(NE),α_1-抗胰蛋白酶(α_1-AT)蛋白表达的调节作用。方法:将32只雄性SPF级ob/ob小鼠按体质量随机分为模型组(生理盐水),TNK高剂量组(TNK溶液16.04 g·kg~(-1)),TNK中剂量组(TNK溶液8.02 g·kg~(-1))和TNK低剂量组(TNK溶液4.01 g·kg~(-1))。另取8只C57BL/6J小鼠作为正常组(生理盐水)。灌胃4周。每周记录小鼠一般状态和体质量和空腹血糖(FBG),第25天进行口服葡萄糖耐量(OGTT)实验,第27天进行胰岛素耐量(ITT)实验,灌胃结束后,取血清检测空腹胰岛素(Fins),NE,α_1-AT,取脂肪组织检测NE,α_1-AT,p-IRS1,葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组ob/ob小鼠体质量显著增大,糖脂代谢指标均呈糖尿病表现,血清和脂肪组织NE显著增加(P0.01),α_1-AT显著减少(P0.01)。与模型组比较,TNK高剂量组体质量,甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),低密度脂蛋白(LDL)指标均显著减少(P0.01),高密度脂蛋白(HDL)显著增加(P0.01),FBG,Fins,胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),曲线下面积(AUC)_(ogtt),AUC_(ITT)均显著减少(P0.01),血清和脂肪组织NE显著减少(P0.01),α_1-AT显著增加(P0.01),脂肪组织p-IRS1和GLUT4明显增加(P0.05)。结论:TNK能够降低ob/ob小鼠体质量,改善糖脂代谢,升高α_1-AT水平,降低NE水平,调节IRS1/GLUT4信号的关键位点,可能是其改善中性粒细胞介导的脂肪组织IR的作用机制之一。     

龙牡桂枝汤对ADHD模型大鼠左右额叶-纹状体α_(2A)-AR mRNA表达的影响

目的:观察龙牡桂枝汤对注意缺陷多动障碍(ADHD)模型动物—幼年自发性高血压大鼠(SHR)左右额叶-纹状体α2A肾上腺素受体(α2A-AR)mRNA表达的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法:幼年雄性SHR大鼠随机分为龙牡桂枝汤高、中剂量组、盐酸哌甲酯对照组和生理盐水对照组,连续灌胃给药14天,采用Real-time PCR法检测各组大鼠左右脑前额叶皮质、纹状体α2A-AR mRNA表达水平。结果:在右前额叶皮质、西药组及中药组大鼠的α2A-AR mRNA表达较生理盐水组显著减少,而在左前额叶皮质各组差异不明显。在右纹状体,与生理盐水组相比,盐酸哌甲酯组α2A-AR mRNA表达显著减少,而龙牡桂枝汤中剂量组和高剂量组α2A-AR mRNA表达显著增加;在左纹状体,盐酸哌甲酯组α2A-AR mRNA表达显著高于生理盐水组和龙牡桂枝汤中、高剂量组,而龙牡桂枝汤中、高剂量组与生理盐水组比较无显著性差异。结论:龙牡桂枝汤治疗ADHD的可能机制之一与其下调右脑前额叶皮质α2A-AR表达,上调右脑纹状体α2A-AR表达有关。     

左归丸调节β2AR介导的RANKL/OPG信号通路改善去卵巢大鼠骨量和显微结构水平

目的:探讨左归丸治疗绝经后骨质疏松症的分子机制之一是通过对β_2-肾上腺素能受体(β_2AR)介导的核转录因子-κB受体激活因子配体(RANKL)/骨保护素(OPG)信号通路的调节。方法:通过去卵巢法建立骨质疏松模型,将40只雌性SPF级SD大鼠随机分为模型组、假手术组、雌二醇(50μg·kg~(-1)·d~(-1))组、左归丸低、高剂量(2. 3,4. 6 g·kg~(-1))组。采用酶联免疫吸附实验检测血清骨转换标志物;显微CT对右侧股骨远端骨密度水平和骨小梁微结构进行测量和分析;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测胫骨和下丘脑组织中β_2AR,OPG,RANK mRNA和蛋白表达水平。结果:与模型组比较,左归丸可显著降低大鼠血清中Ⅰ型胶原交联羧基端肽(β-CTX)水平(P 0. 01),增加骨特异性碱性磷酸酶(BALP)水平(P 0. 01),减少卵巢摘除诱导引起的大鼠骨量丢失,改善股骨远端骨小梁显微结构水平。同时,左归丸高、低剂量组均能显著上调胫骨组织中OPG mRNA和蛋白表达(P 0. 01),下调下丘脑组织β_2AR mRNA和蛋白表达水平(P 0. 01),同时也能显著下调胫骨组织中RANKL mRNA和蛋白表达水平(P 0. 01)。结论:左归丸改善围绝经期综合症,增加骨量和改善骨小梁显微结构水平的分子机制可能与对β_2AR介导的RANKL/OPG信号通路的调节有关。     

葛根散对酒精性ED大鼠阴茎平滑肌组织结构NOS活力及α-SMA,Cx43,TGF-β1 mRNA和蛋白表达的影响

目的:探讨中药解酒方葛根散对酒精性勃起功能障碍(ED)大鼠阴茎平滑肌组织结构一氧化氮合酶(NOS)活力及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),缝隙连接蛋白基因43(Cx43),转化生长因子-β1(TGF-β1) m RNA和蛋白表达的影响,为临床应用葛根散治疗酒精性ED提供实验依据。方法:将SD大鼠随机分为5组,分别为正常组、模型组、葛根散低、中、高剂量组(5,10,20 g·kg~(-1));除正常组外,其他各组按照15 m L·kg~(-1)·d~(-1)给予乙醇干预30 min后给药。比色法检测酒精性ED大鼠阴茎平滑肌组织NOS活力;实时荧光定量聚合酶链式反应法(Real-time PCR),蛋白免疫印迹法(Western blot)检测酒精性ED大鼠阴茎平滑肌组织α-SMA,Cx43,TGF-β_1mRNA及蛋白表达的情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠阴茎平滑肌组织NOS活力,α-SMA,Cx43 m RNA及蛋白表达量显著下降(P 0. 05),TGF-β1m RNA及蛋白表达量显著上升(P 0. 05)。与模型组比较,葛根散低、中、高剂量组均可显著上调酒精性ED大鼠阴茎组织结构NOS活力及Cx43 m RNA及蛋白表达量(P 0. 05),同时可显著下调TGF-β_1mRNA及蛋白表达量(P 0. 05),葛根散中、高剂量组均可显著上调酒精性ED大鼠阴茎组织α-SMA m RNA及蛋白表达量(P 0. 05)。结论:葛根散对酒精性ED大鼠阴茎平滑肌组织结构有明显的保护作用,其具体机制可能与调节NOS活力及α-SMA,Cx43,TGF-β_1mRNA及蛋白表达量有关。     

葛根素对酒精性肝损伤大鼠肝组织TGF-β1和α-SMA表达的影响

目的：研究葛根素对酒精性肝损伤大鼠肝组织转化生长因子-β₁(TGF-β₁)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的调控作用，探讨葛根素对酒精性肝损伤的防治机制。方法：将75只SD大鼠随机分成5组：正常组10只、模型组20只(乙醇等混合液，2次/d)、阳性对照组15只(乙醇等混合液＋复方鳖甲软肝片，1 g·kg^-1·d^-1)、葛根素大剂量组15只(乙醇等混合液＋葛根素片1.5 g·kg^-1·d^-1 )、葛根素小剂量组15只(乙醇等混合液＋葛根素片0.75 g·kg^-1·d^-1 )，8周后抽取股静脉血并处死，观察肝脏组织病理变化，检测肝组织TGF-β₁和α-SMA的表达。结果：模型组大鼠肝组织病理变化和肝纤维化积分与其他各组相比都有显著性改变(P<0.05)；葛根素大、小剂量组肝组织TGF-β₁和α-SMA表达水平明显低于模型组(P<0.01)；且葛根素大剂量组α-SMA水平明显低于对照组(P<0.05)，小剂量组与模型组相比无显著性差异。结论：酒精性肝损伤大鼠肝脏组织TGF-β₁和α-SMA有不同程度的升高，葛根素对其有调控作用，葛根素对酒精性肝损伤有保护作用。     

黑逍遥散对Aβ25-35诱导AD大鼠模型脑组织和血清SOD,GSH-Px及MDA的影响

目的: 观察黑逍遥散对β淀粉样蛋白(Aβ_25-35)诱导阿尔芡海默病(AD)模型大鼠脑组织和血清超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)及丙二醛(MDA)的影响,探讨黑逍遥散防治AD的作用及其机制。 方法: 雄性SPF级SD大鼠110只,先按随机数字表挑选16只大鼠作为假手术组,其余大鼠手术7 d后进行水迷宫测试,将测试合格的大鼠再按照随机数字表法分为5组:模型组、阳性对照组、黑逍遥散高、中、低剂量组,每组14只。假手术组14只。采用Aβ_25-35海马区注射诱发大鼠脑内神经元损伤,复制大鼠AD模型;造模后7 d,黑逍遥散各组大鼠分别按低、中、高剂量(4.2,8.50,17.0 g·kg^-1·d^-1)ig给药,阳性对照组给予石杉碱甲片溶液0.02 mg·kg^-1·d ig,模型组、假手术组ig给予等容量双蒸水,每日上午1次,连续治疗28 d。末次给药后处死大鼠并采集血清和脑标本,比色法测大鼠血清和脑匀浆SOD,MDA,GSH-Px活性; 结果: 与假手术组比较,模型组大鼠血清和脑组织匀浆中的SOD,GSH-Px显著降低,MDA含量显著增高;与模型组比较,黑逍遥散能显著升高Aβ_25-35诱导AD模型大鼠血清和脑组织中SOD 与GSH-Px活性、降低MDA含量(P<0.05)。 结论: 黑逍遥散通过抗氧化作用起到保护AD 模型大鼠的作用。     

金丝桃苷对Aβ1-42介导的血脑屏障体外模型损伤的影响

目的:探讨金丝桃苷(hyperoside,Hyp)对淀粉样蛋白(Aβ_(1-42))介导的血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)体外模型损伤的影响。方法:本研究以Hyp干预纤维状Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞与原代星形胶质细胞(astrocytes,As)BBB体外共培养模型的损伤,通过检测各培养组荧光素钠的通透性,比较各组BBB渗透性的变化,评价Hyp对Aβ_(1-42)介导的BBB的通透性的影响;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测Hyp对Aβ_(1-42)介导的b End.3细胞损伤的细胞活力影响;再以蛋白免疫印迹法(Western blot)检测相关凋亡蛋白,初步探索其保护机制。结果:与模型组比较,Hyp低、中、高浓度组均能降低BBB的通透性(P0.05,P0.01);Hyp中、高浓度组能显著提高b End.3细胞活性(P0.05);Western blot结果显示,经Hyp预处理的组别中,Bax/Bcl-2,cleaved半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)/Caspase-3的及细胞色素-C(Cyt-C)的表达量均明显下降,且差异均具有统计学意义(P0.05)。结论:Hyp通过保护脑微血管内皮细胞抑制纤维状Aβ_(1-42)诱导的BBB通透性增加。     

高表达β1肾上腺素受体细胞膜色谱法靶向筛选夏天无中活性成分

目的:从夏天无中筛选与高表达β1肾上腺素受体(β1-AR)作用的活性成分,并考察其对β1-AR的抑制作用。方法:建立β1-AR细胞膜色谱与UPLC/MS联用分析方法筛选鉴别夏天无中的活性成分;用美托洛尔(10μmol·L-1),药根碱(1,5μmol·L-1)处理β1-AR/CHO-S 24 h,换异丙肾上腺素(50μmol·L-1)损伤细胞10 h后,ELISA法测定活性成分对β1-AR下游因子c AMP,PKA水平的影响,评价其对β1-AR的抑制作用。结果:药根碱是夏天无中作用于β1-AR的活性化合物;细胞实验结果表明,与ISO组相比,药根碱和美托洛尔对c AMP,PKA水平均有下调作用(P0.01)。结论:药根碱是夏天无中具有β1-AR抑制作用的活性化合物;建立的β1-AR/CMC-offline-HPLC/MS分析方法可快速有效筛选出作用靶点明确的活性成分,且筛选结果与生物效应相一致。     

安神定志灵对ADHD模型鼠前额叶皮质和纹状体多巴胺D1,D2受体表达的影响

目的:研究安神定志灵对注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)动物模型-自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)前额叶皮质、纹状体多巴胺受体D1,D2(DRD1,DRD2)表达的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法:30只SHR鼠随机分为5组(模型组、利他林组、安神定志灵高、中、低剂量组),每组6只,Wistar大鼠6只作为正常对照组。安神定志灵高、中、低剂量组分别按生药剂量34.1,17.1,8.5 g.kg-1 ig;利他林组以2.1 mg.kg-1利他林ig;模型组和正常对照组以10 mL.g-1生理盐水ig。实验2周后处死大鼠,取脑分别用RT-PCR和Western blot检测各组大鼠前额叶皮质、纹状体内DRD1,DRD2 mRNA和蛋白表达水平。结果:模型组与正常对照组比较,DRD1,DRD2 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.01);利他林组与模型组比较,DRD1,DRD2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01);安神定志灵中剂量组与模型组比较,DRD1,DRD2 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.01);安神定志灵低剂量组和高剂量组RD1,DRD2mRNA和蛋白表达水平高于空白模型组,但没有统计学差异。结论:安神定志灵可以上调SHR大鼠额叶皮质和纹状体中DRD1,DRD2 mRNA及蛋白的表达水平,说明安神定志灵在调控前额叶-纹状体通路的功能中发挥着重要的作用,而DRD1,DRD2参与了这一调节的过程,最终起到对ADHD的治疗作用。     

黄精丸对阿尔茨海默病大鼠大脑的抗氧化作用及Aβ1-42，APP蛋白表达的影响

目的:探讨黄精丸药方(Huangjingwan,HW)对阿尔茨海默病(AD)大鼠大脑的抗氧化作用及β-淀粉样多肽1-42(Aβ_(1-42)),淀粉样前体蛋白(APP)表达的影响。方法:SD大鼠随机分成正常组,假手术组,AD模型组,HW低、中、高剂量组(相当药丸剂量1,3,9 g·kg~(-1)·d~(-1)组)。给大鼠腹腔注射1. 25%D-半乳糖液(120 mg·kg~(-1)·d~(-1),连续6周)后,再右侧脑室一次性注射Aβ_(1-42)10μg,制作大鼠AD模型;造模2周后各药物组大鼠灌胃相应剂量试验药物,假手术组及AD模型组大鼠灌胃给生理盐水1 m L,每天1次。灌胃持续8周。采用跳台实验评价各大鼠的学习记忆能力;体质量10%的负荷游泳实验测试各大鼠的体能耐力变化;比色法检测各大鼠大脑组织超氧化物歧化酶(SOD),谷胱甘肽还原酶(GR),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)抗氧化酶系活性,谷胱甘肽(GSH)与丙二醛(MDA)含量变化;酶联免疫吸附测定(ELISA)检测各大鼠大脑组织白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α),Aβ_(1-42)与APP蛋白含量变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各大鼠大脑APP蛋白表达变化。结果:与正常组比较,AD模型组大鼠表现出明显的痴呆状态,少动易呆卧,学习反应时间延长,学习记忆错误次数显著增多,体能衰减明显,大脑内抗氧化酶(SOD,GR,GSH-Px)活性及抗炎因子GSH水平显著降低,炎症因子MDA,IL-1β,TNF-α水平显著升高,Aβ_(1-42)蛋白含量显著升高,APP蛋白含量显著下降(P 0. 01)。与AD模型组比较,HW低、中、高剂量均可改善AD大鼠的痴呆症状,提高学习记忆成绩,改善机体虚弱、提高体能,升高大脑内SOD,GR,GSH-Px活性及抗炎因子GSH水平,降低MDA,IL-1β,TNF-α水平,并能降低大脑内Aβ_(1-42)及升高APP蛋白水平(P 0. 05,P 0. 01);且1～9 g·kg~(-1)·d~(-1)剂量范围内的HW,随剂量增加,药效作用越明显。结论:HW有防治AD的功能,这一作用与HW可以增强脑内抗氧化系统功能、降低神经炎症反应、降低氧化应激引发的Aβ_(1-42)沉积、维持APP蛋白表达水平等有关。     

龙牡桂枝汤对ADHD模型大鼠左右额叶-纹状体去甲肾上腺素转运体蛋白表达的影响

目的观察龙牡桂枝汤对注意缺陷多动障碍(ADHD)模型动物—幼年自发性高血压大鼠(SHR)左右额叶-纹状体去甲肾上腺素转运体(NET)蛋白表达的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法采用幼年雄性SHR大鼠48只,随机分为龙牡桂枝汤高、中剂量组、盐酸哌甲酯对照组和生理盐水对照组,连续灌胃给药14天,采用Western-blot法检测各组大鼠左右脑前额叶皮质、纹状体NET蛋白表达水平。结果用药后,盐酸哌甲酯对照组、龙牡桂枝汤中、高剂量组大鼠右脑前额叶皮质和纹状体的NET蛋白表达增加,而各实验组大鼠左脑前额叶皮质和纹状体NET蛋白表达无明显变化。结论龙牡桂枝汤治疗ADHD的作用机制之一与其能上调右脑前额叶皮质、纹状体的NET蛋白表达有关。     

安神定志灵对ADHD模型大鼠纹状体多巴胺转运体表达的影响

目的:研究安神定志灵对注意缺陷多动障碍(attention deficit hyperactivity disorder,ADHD)动物模型-自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rat,SHR)纹状体多巴胺转运体(DAT)表达的影响,探讨该药治疗ADHD的作用机制。方法:30只SHR鼠随机分为5组(模型组、利他林组、安神定志灵高、中、低剂量组),每组6只,Wistar-Kyoto(WKY)大鼠6只作为正常对照组。安神定志灵高、中、低剂量组分别按生药剂量34.1,17.1,8.5 g.kg-1 ig;利他林组以2.1 mg.kg-1利他林ig;模型组和正常对照组以10 mL.kg-1生理盐水ig。连续给药2周后处死大鼠,取脑分别用RT-PCR和激光共聚焦显微镜检测各组大鼠纹状体多巴胺转运体(DAT)mRNA和蛋白表达水平。结果:大鼠纹状体中DAT的蛋白表达水平,组间存在差异(P<0.05),SHR模型组大鼠纹状体中DAT的蛋白表达与正常对照组比较显著增高(P<0.01);安神定志灵中、高剂量组DAT的蛋白表达显著低于模型组(P<0.01),利他林组DAT的蛋白表达显著低于模型组(P<0.05),安神定志灵低剂量组和模型组DAT蛋白表达相比无统计学意义。蛋白表达量从高到低依次为安神定志灵低剂量组、利他林组、安神定志灵中、高剂量组。结论:安神定志灵可以降低SHR大鼠纹状体中DAT mRNA及蛋白的表达水平,减少突触前神经元对DA的重摄取,增加突触间隙的DA浓度,改善了中枢DA的神经信号传导功能,起到对ADHD的治疗作用。