雌激素对帕金森病大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的保护作用

背景雌激素对中脑黑质多巴胺含量的影响在国内外已有报?雌激素的神经细胞保护作用还正处于研究中.目的观察雌激素对去卵巢大鼠中脑黑质多巴胺能神经元的作用,探讨雌激素对帕金森病防治的可能性.设计以实验动物为研究对象,随机对照的验证性研究.单位一所军医大学医院的全军神经外科研究所.材料实验于2003-10/2004-02在解放军第四军医大学西京医院全军神经外科研究所进行试验,选择一级健康雌性Wistar大鼠50只.干预50只大鼠随机分为5组,第1组为正常对照组,第2组为假手术组,第3,,5组为去卵巢组第3组术后给予10μg(2次/d)的苯甲酸雌二醇,第4组给予雌激素的同时给予雌激素受体拮抗剂三苯氧胺5μg(2次/d).第5组不给药物.每组10只.应用立体定向技术注射6-羟基多巴胺于大鼠中脑黑质,采用免疫组织化学的方法对黑质TH阳性神经元进行标记、记数.同时,对大鼠的行为学进行观测.主要观察指标①各组大鼠在阿朴吗啡诱导下的旋转圈数.②各组大鼠手术后30 d中脑黑质TH阳性神经元数量.结果正常对照组、假手术组与应用雌激素各组之间差异无显著性意义(P＞0.05).手术后苯甲酸雌二醇组与无药组之间差异有显著性意义(P＜0.05).应用雌激素同时应用三苯氧胺组与苯甲酸雌二醇组差异有显著性意义(P＜0.05);与无药组之间差异也存在显著性意义(P＜0.05).大鼠中脑黑质TH阳性神经元数目与其他对照组比较也有显著性意义(P＜0.05).结论雌激素对雌性大鼠中脑黑质多巴胺能神经元具有保护作用,除了经过雌激素受体途径以外,还有其他的作用机制.     

脂多糖诱发大鼠黑质多巴胺能神经元变性

目的：观察脂多糖(Lipopo1ysaccharide，LPS)对黑质多巴胺(DA)能神经元的毒性作用，探讨帕金森病(PD)发病机制。方法：脑立体定位注射LPS入大鼠脑黑质后，采用酪氨酸羟化酶(Tyrosine hydroxylase,TH)免疫组织化学染色，观察不同剂量LPS和5μgLPS注射后不同时间点黑质DA能神经元的损伤状况。结果：0．1—10μgLPS注射后14d，导致TH^ 细胞数下降分别为5％、15％、20％、45％、96％和99％；5μgLPS注射后与对照组相比，TH^ 细胞数3d后开始下降，14d明显减少，仅为5％，30d后基本消失。结论：LPS能诱导黑质DA能神经元变性．呈剂量和时间依赖性。     

褪黑素对多巴胺能神经元保护作用的研究

目的:观察褪黑素对体外培养的大鼠胚胎中脑多巴胺能神经元存活率的影响。方法:取孕龄14d大鼠胚胎中 脑多巴胺能神经元细胞体外培养,加入10-10～10-5M的褪黑素,24h后观察存活细胞数。结果在褪黑素浓度为 10-5～10-8M时,存活细胞数明显多于对照组,差异具有显著性。结论:褪黑素对多巴胺能神经元具有保护作用。     

帕金森病黑质多巴胺神经元的凋亡与其发病机制

目的：研究帕金森病黑质多巴胺神经元的死亡机制。方法：用四唑盐法及流式细胞仪观察囊泡单胺类转运体(Vesicular Monoamine Transporter，VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬细胞瘤(pheochromoeytoma cell，PC12)细胞凋亡的影响。结果：多巴胺浓度为0．15，0．30，0．45，0．60mmol／L时，PC12细胞生存率为(89．3&;#177;7．7)％．(62．9&;#177;4．3)％，(42．5&;#177;2．7)％，(37．6&;#177;3．7)％，与对照组100％比较0．30组差异有显著性意义(t=2．373-5．323，P&;lt;0．05)，0．45组与0．60组比较差异有显著性意义(t=4．673-5．323．P&;lt;0．01)，利血平协同多巴胺作用时，其生存率为(73．7&;#177;3．9)％．(49．8&;#177;2．1)％。(31．6&;#177;1．9)％，(20．1&;#177;1．7)％，与对照组100％比较，差异有显著性意义(t=3．043-5．673，P&;lt;0．05)。结论：VMAT功能抑制引发了多巴胺的内源性毒性，进而诱发多巴胺神经元的凋亡，可较好解释帕金森病的发病机制。     

高压氧对帕金森病大鼠多巴胺神经元保护作用的研究

目的探讨高压氧对帕金森病大鼠多巴胺神经元的保护作用。方法将68只雌性Sprague—Dawley大鼠随机分成5组：注射生理盐水高压氧处理组（A组，n=7）、全程高压氧处理模型组（B组，n=18）、未经高压氧处理模型组（C组，n=7）、造模后高压氧处理组（D组，n=18）、造模前高压氧处理组（E组，n=18）。在实验第1天至第7天给予A组、B组和E组大鼠高压氧治疗；而在实验第8天时，分别向B组、C组、D组及E组大鼠单侧脑黑质内定位注射6-羟基多巴胺以制作偏侧帕金森病大鼠模型，给予A组等量生理盐水定位注射。从实验第8天至结束，分别给予A组、B组及D组大鼠高压氧处理；并于造模后第9天，16天及21天每组各处死6只大鼠，取其纹状体用分光光度计测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH—Px）含量，选用免疫组织化学方法测定黑质区域内酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞数量及胶质纤维酸性蛋白（GFAP）的表达。结果与C组比较，B、D、E组大鼠病变侧纹状体内SOD及GSH—Px活性显著增高，MDA含量及GFAP表达明显降低，6-羟基多巴胺毁损黑质区残存的TH阳性细胞数目明显增加。结论高压氧治疗可以显著提高机体抗自由基损伤功能、减弱胶质细胞效应发挥，从而有效保护脑黑质区多巴胺（DA）能神经元功能。     

神经生长因子对多巴胺能神经元凋亡的保护作用

目的：观察6-羟基多巴(6-OHDA)诱导PC12细胞凋亡的作用，探讨神经生长因子(NGF)对PC12细胞凋亡的保护作用。方法：将6孔培养板中的PC12细胞分别加入不同浓度的6-OHDA(0，25，50，100，150和200μmol／L)；同样6-OHDA各组，每孔均加入终浓度为100μg／L的NGF。分别干预24h后终止培养，观察PC12细胞凋亡的程度。用Hoechst33258细胞核染色法、凋亡细胞的DNA裂解分析一琼脂糖凝胶电泳、TUNEL原位凋亡检测和计算机自动图像分析等方法进行凋亡检测。结果：6-OHDA50，100，150和200μmol／L均不同程度地诱导了PC12细胞凋亡，表现剂量效应。NGF对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用[NGF组比8KNG组：细胞核面积：(56.48&;#177;3.06）比（36．19&;#177;2.15)μm^2，光密度：0.38&;#177;0．03比0．53&;#177;0.3，t=2．36、3.07、P&;lt;0．05。结论：支持6-OHDA在体外能够诱导PC12细胞凋亡的观点，并且有剂量效应。NGF对6-OHDA诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

帕金森病黑质多巴胺神经元的凋亡与其发病机制

目的研究帕金森病黑质多巴胺神经元的死亡机制.方法用四唑盐法及流式细胞仪观察囊泡单胺类转运体(Vesicular Monoamine Transporter,VMAT)功能抑制对大鼠嗜铬细胞瘤(pheochromocytoma cell,PC12)细胞凋亡的影响.结果多巴胺浓度为0.15,0.30,0.45,0.60 mmol/L时,PC12细胞生存率为(89.3±7.7)%,(62.9±4.3)%,(42.5±2.7)%,(37.6±3.7)%,与对照组100%比较0.30组差异有显著性意义(t=2.373～5.323,P＜0.05),0.45组与0.60组比较差异有显著性意义(t=4.673～5.323,P＜0.01),利血平协同多巴胺作用时,其生存率为(73.7±3.9)%,(49.8±2.1)%,(31.6±1.9)%,(20.1±1.7)%,与对照组100%比较,差异有显著性意义(t=3.043～5.673,P＜0.05).结论VMAT功能抑制引发了多巴胺的内源性毒性,进而诱发多巴胺神经元的凋亡,可较好解释帕金森病的发病机制.     

重组α-突触核蛋白对 SD大鼠黑质多巴胺能神经元的作用

目的 研究重组人全长α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元的毒性作用. 方法 原核表达、鉴定α-突触核蛋白;雄性 SD大鼠 30只,随机分为α-突触核蛋白注射组、六羟多巴注射组及α-突触核蛋白和六羟多巴联合注射组.用立体定位的方法分别右侧黑质注射α-突触核蛋白,六羟多巴及α-突触核蛋白+六羟多巴,左侧黑质注射等量的生理盐水,测定大鼠纹状体多巴胺含量和黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数目. 结果 六羟多巴和α-突触核蛋白+六羟多巴注射使注射侧多巴胺分别减少到对照侧的 36.98%和 21.79%,多巴胺能神经元数减少到 30.81%和 28.05%.而α-突触核蛋白注射对纹状体多巴胺和黑质多巴胺能神经元数目无显著影响. 结论 没有发现重组α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元有明显的毒性作用.     

低剂量鱼藤酮持续灌胃处理致中脑多巴胺能神经元损伤

目的:探讨低剂量鱼藤酮持续灌胃致中脑多巴胺能神经元损伤的可能机制。方法:将50只老年雄性C57小鼠随机分为模型组和对照组各25只,2组均给予连续灌胃12周,模型组灌注0.01 mL/g鱼藤酮氯仿溶液,对照组灌注0.01 mL/g氯仿溶液。在灌胃前、灌胃6周、12周时对肠、胸段脊髓、中脑行α-突触核蛋白(α-Syn)、硫磺素S(ThS)、酪氨酸羟化酶(TH)等免疫组化染色。灌胃12周时采用透射电镜观察2组黑质神经元超微结构。结果:免疫组化染色提示灌胃6周时模型组小肠内、胸段脊髓处α-Syn的表达较对照组明显增加,且ThS表达比例增多,中脑处α-Syn及TH阳性细胞数无明显差异(P>0.05);灌胃12周时,模型组中脑α-Syn的表达较对照组明显增多,TH阳性细胞数较对照组减少(P=0.011)。灌胃12周后透射电镜显示模型组小鼠黑质部可见细胞膜、线粒体、内质网不规则肿胀,细胞核形态各异,部分神经元溶解坏死,数目减少,对照组未见明显改变。结论:持续鱼藤酮灌胃可能首先在小肠神经丛局部形成α-Syn多聚体,再通过类朊蛋白途径沿着神经传导通路播散至脑内而导致多巴胺神经元损伤。     

黑质内注射脂多糖对多巴胺能神经元和小胶质细胞活性的影响

目的：观察脂多糖（LPS）对黑质多巴胺能神经元的损毁作用以及对小胶质细胞活性的影响。方法：60只雌性SD大鼠随机分为正常组、1d组、1周组、2周组和2个月组各12只，除正常组外，其余各组采用立体定向技术向大鼠单侧黑质内注入LPS，于注药后1d、1周、2周和2个月时分别经腹腔注射阿朴吗啡诱发动物旋转行为为造模成功；按各组不同时间点观察大鼠黑质酪氨酸羟化酶（TH）阳性细胞数变化和小胶质细胞活化过程、纹状体和黑质部位多巴胺（DA）及其代谢产物含量及黑质变性神经元。结果：单侧黑质内注入LPS后的各组黑质TH＋细胞数分别较对侧减少12％～71．5％；其损伤侧纹状体和黑质DA及其代谢物含量降低28．2％～65．7％（均P〈0．05～0．01）；1周组Fluoro—jadeB染色可见染色阳性神经元；LPS注射的各组黑质均可见活化的小胶质细胞。结论：黑质注入LPS可诱导小胶质细胞活化和黑质多巴胺能神经元变性死亡。     

烟草成份保护多巴胺神经元作用的研究

目的：探讨烟草成份保护多巴胺神经元对抗6－羟基多巴胺（6－OHDA）的神经毒性作用。方法：采用大鼠脑内立体注射6－OHDA建立帕金森病模型，连续观察术前4周开始分别给予被动吸烟和腹腔注射尼古丁（每次0.1mg/kg或0.4mg/kg,bid，持续6周）对阿朴吗啡诱发的旋转行为，纹状体多巴胺（dopamine,DA)的含量和黑质酪氨酸羟化酶（Tyrosine Hydroxylase,TH）阳性神经细胞数目的影响。结果：被动吸烟和腹腔注射尼古丁的大鼠旋转行为明显减少，受损侧纹状体DA含量和黑质TH阳性神经元的数目较对照组增高（P＜0．01），高剂量尼古丁作为更为显著。结论：烟草成份可减轻6－OHDA对黑质DA神经元的损伤。     

帕金森病多巴胺神经元死亡的分子机制

帕金森病（PD）的主要病理变化是黑质多巴胺（DA）能神经元选择性变性。尽管对PD的发病机制已有大量研究，但DA能神经元死亡的确切机制还不清楚，可能遗传因素和环境因素在PD发病中均起作用。最近发现几种家族性PD与特殊基因突变有关，尽管散发性PD中无这些突变，但对家族性PD中几种基因突变的进一步明确却给研究散发性PD提供了线索。蛋白表达和折叠异常、蛋白降解功能障碍、线粒体功能异常、氧化应激、炎症反应、神经营养障碍等均可能参与PD的发病过程。     

同型半胱氨酸和褪黑素对离体帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元的影响

目的：观察同型半胱氨酸对离体帕金森病模型的影响及褪黑素的保护作用。 方法：实验于2003—09／2004—02在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科实验室完成。参考文献制备离体帕金森病大鼠模型，将2月龄健康SD雌性大鼠12只分成4组，6-羟多巴胺对照组及6-羟多巴胺＋褪黑素、6-羟多巴胺＋同型半胱氨酸对照组及6-羟多巴胺＋同型半胱氨酸组＋褪黑素组，每组3只。褪黑素组和对照组分别腹腔注射褪黑素（10mg／kg）或等量生理盐水，时间为3d，然后取脑片分别置于含6-羟多巴胺或6-羟多巴胺＋同型半胱氨酸的人工脑脊液中孵育2h。免疫组织化学方法观测各组大鼠黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞体及突起的变化。用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法、Claiborne法分别检测各组大鼠丙二醛、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶。 结果：每组实验动物均达到实验目的，全部进入结果分析。①酪氨酸羟化酶免疫组织化学结果：6-羟多巴胺对照组与6-羟多巴胺＋同型半胱氨酸对照组酪氨酸羟化酶阳性细胞数目减少。突起严重缺失，有突起的酪氨酸羟化酶阳性神经元占所有酪氨酸羟化酶阳性神经元的比例降低，并有无定型模糊的背景染色。而经过褪黑素干预的6-羟多巴胺＋褪黑素组与6-羟多巴胺＋同型半胱氨酸＋褪黑素组脑片的酪氨酸羟化酶阳性细胞数目相对较多，细胞膜较为完整，突起缺失相对较少，有突起的酪氨酸羟化酶阳性神经元占所有酪氢酸羟化酶阳性神经元的比例明显增多。差异有显著性（P〈0．01）。②丙二醛、超氧化物歧化酶、过氧化氧酶检测结果：6-羟多巴胺＋同型半胱氨酸对照组及6-羟多巴胺＋同型半胱氨酸组＋褪黑素组与6-羟多巴胺对照组及6-羟多巴胺＋褪黑素组相比丙二醛值高，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶值低，差异有显著性（P〈0．01）。6-羟多巴胺对照组与6-羟多巴胺＋褪黑素组比较丙二醛值高，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶值低，差异有显著性（P〈0．01）；6-羟多巴胺＋同型半胱氨酸对照组与6-羟多巴胺＋同型半胱氨酸＋褪黑素组比较丙二醛值高，超氧化物歧化酶、过氧化氢酶值低，差异有显著性（P〈0．01）。 结论：同型半胱氨酸加重离体帕金森病模型动物的多巴胺能神经元损伤，其机制可能与氧化应激反应有关。褪黑素能减轻同型半胱氨酸的氧化应激反应。     

外源性犬尿烯酸对黑质多巴胺能神经元损伤的保护性作用

背景：帕金森病治疗方法有多种，多巴胺替代疗法、外科靶点永久毁损、脑深部核团高频电刺激术、脑移植和基因治疗。这些外科及药物治疗都有一些不足及难以弥补的缺陷，国内外学者将多巴胺能神经元保护剂的研究和应用提到了重要位置。目的：观察评价预先应用谷氨酸受体拮抗剂犬尿烯酸对黑质多巴胺能神经元及神经传导纤维损伤的保护性作用。设计：采用随机对照单盲实验研究。地点和材料：研究地点为解放军总医院神经外科实验室；实验动物选取雌性SD大鼠(取自解放军总医院动物饲养室，40只，体质量210～240g，平均228g)。干预：雌性SD大鼠40只，随机分为4组，每组10只，应用江湾Ⅰ型C立体定向仪，在单侧黑质致密部及中脑被盖腹侧部，分别注射生理盐水，犬尿烯酸，犬尿烯酸加6-羟多巴胺，6-羟多巴胺。注射药物3d后，进行症状观察，2周后处死大鼠。切片HE染色观察黑质细胞的形态特点，冷冻切片免疫组化特殊染色观察TH阳性细胞及TH阳性纤维着色情况，实验数据分别采用方差分析以及秩和检验进行统计分析。主要观察指标：切片HE染色观察黑质细胞的形态特点，冷冻切片免疫组化特殊染色观察TH阳性细胞数及TH阳性纤维着色等级。结果：正常黑质细胞体形较大，富含黑色素颗粒，可见尼氏体。数据统计分析结果提示犬尿烯酸组与生理盐水组之间差异无显著性意义(P＞0．05)。实验组犬尿烯酸加6-羟多巴胺组与其他3组比较均差异有显著性意义(P＜0．01)。结论：外源性谷氨酸受体拮抗剂犬尿烯酸(kynurenic acid，KYNA)通过阻滞Glu受体能减轻6-羟多巴胺诱导的黑质多巴胺能神经元毒性损害。     

茶多酚对帕金森病模型小鼠多巴胺神经元保护作用的实验研究

目的探讨茶多酚对1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氢吡啶(MPTP)致帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元的保护作用。方法70只C57BL/6小鼠分为4组,A组为生理盐水(NS)+NS组,B组为NS+茶多酚(GTPs)组,C组(模型组)为NS+MPTP组,D组为GTPs+MPTP组,其中D组又分为D1组(10mg/kg)及D2(50mg/kg)组,在注射GTPs后0.5h腹腔注射MPTP3次,制作帕金森病模型。腹腔注射茶多酚后,应用高效液相色普-电化学分析法(HPLC-ECD)测定多巴胺及其代谢产物浓度。结果A组多巴胺及代谢产物含量最高,B组与A组无显著性差异,C组与A组比较有显著性差异(P<0.05),D组与C组相比浓度升高(P<0.05)。结论茶多酚对MPTP诱发的帕金森病模型小鼠黑质多巴胺神经元有保护作用。     

半胱胺通过抗氧化保护帕金森病模型小鼠多巴胺能神经元机制研究

目的观察半胱胺(CS)通过何种机制保护1-甲基-4-苯基1,2,3,6四氢吡啶(MPTP)所致C57BL小鼠多巴胺能神经元的退变。方法取78只SPF级C57BL小鼠,随机分为6组:对照组,MPTP组,CS 20mg/kg+MPTP组,CS 75mg/kg+MPTP组,MPTP+CS 20mg/kg,MPTP+CS 75mg/kg组。MPTP:20mg/kg 5d,CS 2次/d,皮下注射,共14天。反向高效液相色谱-电化学检测纹状体多巴胺的含量;免疫组织化学检测黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞,色谱法检测黑质氧化应激指标。结果 CS(20mg/kg)组抑制C57BL小鼠黑质细胞内的ROS、MDA,促进细胞内谷胱甘肽的合成,保护了多巴胺能神经元;CS(75mg/kg)组对黑质多巴胺浓度及多巴胺能神经元数目无改善作用。结论半胱胺抗氧化保护PD小鼠模型的多巴胺能神经元,保护作用与给药剂量密切相关。     

重组α-突触核蛋白对SD大鼠黑质多巴胺能神经元的作用

目的：研究重组人全长α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元的霉性作用。方法：原核表达、鉴定α-突触核蛋白；雄性SD大鼠30只，随机分为α-突触核蛋白注射组、六羟多巴注射组及α-突触核蛋白和六羟多巴联合注射组。用立体定位的方法分别右侧黑质注射α-突触核蛋白，六羟多巴及α-突触核蛋白 六羟多巴，左侧黑质注射等量的生理盐水，测定大鼠纹状体多巴胺含量和黑质酪氨酸羟化酶阳性神经元数目。结果：六羟多巴和α-突触核蛋白 六羟多巴注射使注射侧多巴胺分别减少到对照侧的36．98％和21．79％，多巴胺能神经元数减少到30．81％和28．05％。而α-突触核蛋白注射对纹状体多巴胺和黑质多巴胺能神经元数目无显著影响。结论：没有发现重组α-突触核蛋白对大鼠黑质多巴胺能神经元有明显的毒性作用。     

外源性超氧化物歧化酶对大鼠中脑多巴胺能神经元凋亡的保护作用研究

目的明确6-羟基多巴(6-OHDA)致多巴胺能神经元凋亡与氧化应激的关系,以及外源性超氧化物歧化酶(SOD)对多巴胺能神经元凋亡的保护作用.方法大鼠随机分组,检测大鼠的行为学变化、中脑活性氧水平,并观察大鼠中脑黑质部位TH阳性细胞和细胞凋亡的情况.结果6-OHDA注入黑质区后,活性氧升高至129.82±16.79(u/mgprot);外源性SOD有效降低活性氧水平,大鼠右侧中脑黑质区TH阳性细胞数明显增多,而凋亡细胞有所减少,大鼠的旋转圈数也明显降低.结论氧化应激在6-OHDA致大鼠中脑多巴胺能神经元凋亡的过程中,起一定的作用;而外源性SOD增强了对活性氧的灭活能力,减弱了6-OHDA的神经毒作用,提高了多巴胺能神经元的存活,改善了大鼠的旋转行为.     

神经干细胞诱导分化为多巴胺能神经元与胚胎中脑多巴胺能神经元移植治疗帕金森病效果比较

目的:目前对于体外诱导分化的多巴胺能神经元的生物学功能、体内存活状况,以及与胚胎中脑多巴胺能神经元移植治疗帕金森病大鼠的疗效比较方面尚缺乏深入的研究.观察神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元移植治疗帕金森病大鼠的作用,并与胚胎中脑多巴胺能神经元组织移植治疗帕金森病大鼠的疗效进行比较.方法:实验于2006-06/2007-09在中山大学附属第一医院完成.①实验材料:健康成年雄性SD大鼠及孕14～15 d的SD大鼠由中山大学动物实验中心提供,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准.②实验方法:在含表皮生长因子及碱性成纤维细胞生长因子的无血清培养液中培养胚胎大鼠中脑神经干细胞.经传代扩增后,在含白细胞介素1a、白细胞介素11、白血病抑制因子、胶质细胞源性神经营养因子的诱导分化液中向多巴胺能神经元分化,并进行免疫细胞化学鉴定和流式细胞仪检测.参考Sauer和Lee等方法制备帕金森病大鼠模型,并将造模成功大鼠随机分组,每组9只:分化细胞组向每一坐标点注入1×1011 L-1神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元;胚胎中脑组注入 1×1011 L -1胚胎中脑多巴胺能神经元;手术对照组注入DMEM/F12细胞培养液.③实验评估:移植术后10、20、40、60 d诱发大鼠不对称旋转行为以观察治疗效果,并对移植区进行酪氨酸羟化酶免疫组织化学检测以了解移植细胞体内存活的情况.结果:①大鼠神经干细胞球在诱导分化液中呈贴壁生长,球内细胞从球体中央逐渐向四周分化扩展出形态各异的细胞.免疫细胞化学染色显示,分化细胞中含有酪氨酸羟化酶染色阳性细胞.流式细胞仪检测诱导分化6 d的细胞中酪氨酸羟化酶染色阳性细胞的比率为(16.7±2.8)%.②移植后20 d分化细胞组大鼠的不对称旋转行为开始明显下降(P < 0.05).移植后40 d和60 d,分化细胞组大鼠的旋转圈数与胚胎中脑组比较差异不显著(P > 0.05).③分化细胞组和胚胎中脑组大鼠纹状体移植区有酪氨酸羟化酶染色阳性细胞,多数细胞位于移植针道边缘.结论:神经干细胞诱导分化的多巴胺能神经元与胚胎中脑多巴胺能神经元移植治疗帕金森病大鼠具有相同的疗效.     

同型半胱氨酸和褪黑素对离体帕金森病模型大鼠多巴胺能神经元的影响

目的:观察同型半胱氨酸对离体帕金森病模型的影响及褪黑素的保护作用。方法:实验于2003-09/2004-02在华中科技大学同济医学院附属协和医院神经内科实验室完成。参考文献制备离体帕金森病大鼠模型,将2月龄健康SD雌性大鼠12只分成4组,6-羟多巴胺对照组及6-羟多巴胺 褪黑素、6-羟多巴胺 同型半胱氨酸对照组及6-羟多巴胺 同型半胱氨酸组 褪黑素组,每组3只。褪黑素组和对照组分别腹腔注射褪黑素(10mg/kg)或等量生理盐水,时间为3d,然后取脑片分别置于含6-羟多巴胺或6-羟多巴胺 同型半胱氨酸的人工脑脊液中孵育2h。免疫组织化学方法观测各组大鼠黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞体及突起的变化。用硫代巴比妥酸法、黄嘌呤氧化酶法、Claiborne法分别检测各组大鼠丙二醛、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶。结果:每组实验动物均达到实验目的,全部进入结果分析。①酪氨酸羟化酶免疫组织化学结果:6-羟多巴胺对照组与6-羟多巴胺 同型半胱氨酸对照组酪氨酸羟化酶阳性细胞数目减少,突起严重缺失,有突起的酪氨酸羟化酶阳性神经元占所有酪氨酸羟化酶阳性神经元的比例降低,并有无定型模糊的背景染色。而经过褪黑素干预的6-羟多巴胺 褪黑素组与6-羟多巴胺 同型半胱氨酸 褪黑素组脑片的酪氨酸羟化酶阳性细胞数目相对较多,细胞膜较为完整,突起缺失相对较少,有突起的酪氨酸羟化酶阳性神经元占所有酪氨酸羟化酶阳性神经元的比例明显增多。差异有显著性(P<0.01)。②丙二醛、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶检测结果:6-羟多巴胺 同型半胱氨酸对照组及6-羟多巴胺 同型半胱氨酸组 褪黑素组与6-羟多巴胺对照组及6-羟多巴胺 褪黑素组相比丙二醛值高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶值低,差异有显著性(P<0.01)。6-羟多巴胺对照组与6-羟多巴胺 褪黑素组比较丙二醛值高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶值低,差异有显著性(P<0.01);6-羟多巴胺 同型半胱氨酸对照组与6-羟多巴胺 同型半胱氨酸 褪黑素组比较丙二醛值高,超氧化物歧化酶、过氧化氢酶值低,差异有显著性(P<0.01)。结论:同型半胱氨酸加重离体帕金森病模型动物的多巴胺能神经元损伤,其机制可能与氧化应激反应有关。褪黑素能减轻同型半胱氨酸的氧化应激反应。