本维莫德对HaCaT细胞增殖、炎症因子分泌及皮肤屏障因子产生的影响

【摘要】 目的 研究本维莫德对人角质形成细胞增殖、炎症细胞因子分泌、皮肤屏障蛋白合成以及信号转导与转录激活蛋白1（STAT1）磷酸化的影响。方法 体外培养HaCaT细胞,采用0.1 ~ 1 000 μmol/L本维莫德处理24 h,用CCK8法检测细胞增殖。部分HaCaT细胞分为6组,对照组仅加入DMEM培养基,刺激剂组加入10 μg/L肿瘤坏死因子α（TNF-α）和干扰素γ（IFN-γ）,本维莫德组加入10 μg/L TNF-α和IFN-γ以及终浓度为1 ~ 10或1 ~ 100 μmol/L本维莫德,AhR拮抗剂组加入10 μg/L TNF-α和IFN-γ、10或100 μmol/L本维莫德以及10 nmol/L StemRegenin1（SR1）,处理24 h后,酶联免疫吸附实验检测细胞培养上清液中白细胞介素（IL）-4、IL-10、IL-22和胸腺活化调节趋化因子（TARC）的水平,RT-PCR检测HaCaT细胞芳香烃受体（AhR）、细胞色素P450 1A（CYP1A1）、聚丝蛋白、内披蛋白、胸腺基质淋巴细胞生成素（TSLP）和TARC mRNA的表达水平,Western印迹法检测聚丝蛋白、内披蛋白、TSLP和STAT1及磷酸化STAT1（p-STAT1）的蛋白表达水平,免疫荧光检测本维莫德对HaCaT细胞中AhR核转位的影响。计量资料采用非配对Student t检验和单因素方差分析进行比较,Spearman检验分析各指标间的关系。结果 0.1、1、10、100、1 000 μmol/L本维莫德干预HaCaT细胞24 h后,细胞存活率分别为（90.2 ± 2.4）%、（85.4 ± 11.9）%、（52.8 ± 14.0）%、（39.4 ± 7.9）%、（27.5 ± 3.4）%,各组间差异有统计学意义（F = 162.5,P < 0.001）,50%抑制浓度为48.54 μmol/L。与刺激剂组相比,10和100 μmol/L本维莫德组HaCaT细胞分泌的IL-10水平上升（F = 16.110,P < 0.001）,但100 μmol/L组IL-22（F = 6.884,P < 0.001）和10、100 μmol/L组 TARC水平（F = 7.052,P < 0.001）显著下降。与刺激剂组相比,1 和10 μmol/L本维莫德组CYP1A1 mRNA表达（P = 0.004）和10 μmol/L本维莫德组FLG mRNA表达（P = 0.040）水平显著增高,而10 μmol/L组 TARC mRNA和10 μmol/L组TSLP mRNA表达显著降低（均P < 0.01）,而刺激剂组和本维莫德组间AhR mRNA的表达差异无统计学意义（P = 0.193）。与刺激剂组相比,10 μmol/L本维莫德组聚丝蛋白（P = 0.020）和1、10 μmol/L本维莫德组内披蛋白表达水平（P < 0.001）显著上升,而10 μmol/L TSLP蛋白表达水平显著下降（P < 0.001）,1和10 μmol/L本维莫德组p-STAT1蛋白表达水平显著下降（P < 0.001）。与100 μmol/L 本维莫德组相比,AhR拮抗剂组IL-10分泌水平显著下降（t = 4.794,P = 0.003）,TSLP mRNA的表达显著上升（t = 3.769,P = 0.005）;与10 μmol/L 本维莫德组相比,AhR拮抗剂组 IVL蛋白表达显著下降（t = 5.117,P = 0.002）,TSLP蛋白表达显著上升（t = 3.117,P = 0.043）, p-STAT1蛋白表达无明显变化（t = 1.400,P = 0.719）。免疫荧光染色显示对照组和1 μmol/L本维莫德组中AhR绿色荧光主要表达于HaCaT细胞胞质中,细胞核中基本无荧光表达;而在10 μmol/L和20 μmol/L本维莫德组HaCaT细胞的细胞质和细胞核均可见高密度绿色荧光。结论 本维莫德可通过活化AhR信号通路抑制HaCaT细胞增殖,调节炎症因子分泌,上调皮肤屏障相关因子的产生和抑制STAT1磷酸化。     

他克莫司对γ干扰素刺激HaCaT细胞分泌趋化因子CXCL9和CXCL10的影响及机制研究北大核心CSCD

目的 分析他克莫司对γ干扰素（IFN-γ）刺激下HaCaT细胞分泌CXCL9、CXCL10、p-JAK1、p-STAT1的影响,探讨他克莫司治疗白癜风的作用机制。方法 1、10、20、40、60、80、100、120 mg/L他克莫司预处理HaCaT细胞4 h后, 噻唑蓝法（MTT）检测细胞增殖。HaCaT细胞分为空白对照组, IFN-γ组（500 U/ml）,他克莫司组（20 mg/L）及他克莫司 ＋ IFN-γ组。他克莫司预处理HaCaT细胞4 h, IFN-γ刺激细胞12 h或48 h,实时荧光定量PCR检测细胞CXCL9、CXCL10 mRNA表达。Western 印迹法检测细胞CXCL9、CXCL10、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达。ELISA法检测细胞培养上清液CXCL9、CXCL10蛋白含量。结果 他克莫司对HaCaT细胞增殖无影响的最大浓度为20 mg/L（P＞0.05）。20 mg/L他克莫司预处理HaCaT细胞后,使IFN-γ刺激下HaCaT细胞表达CXCL9、CXCL10 mRNA分别由10 369.08 ± 7.99、290.02 ± 2.16降低至5 914.33 ± 4.59、114.96 ± 0.73（均P＜0.01）。CXCL9、CXCL10、p-JAK1、p-STAT1蛋白表达分别由8.47 ± 0.29、7.87 ± 0.17、4.20 ± 0.18、4.29 ± 0.11降低至7.36 ± 0.13、7.36 ± 0.09、2.60 ± 0.16、3.62 ± 0.19（均P＜0.01）。细胞培养上清液中CXCL9、CXCL10蛋白含量分别由1 213.36 ± 0.95、1 722.41 ± 2.57降低至426.45 ± 0.31、554.12 ± 0.56（均P＜0.01）。结论 他克莫司对IFN-γ刺激下HaCaT细胞分泌CXCL9、CXCL10、p-JAK1、p-STAT1具有抑制作用。     

雷公藤内酯醇对HaCaT细胞IFN-γ信号转导途径的影响

目的 研究雷公藤内酯醇对人角质形成细胞永生化株HaCaT细胞中IFN-γ信号转导途径的影响。方法 不同浓度雷公藤内酯醇（10-10 ～ 10-7 mol/L）预处理HaCaT细胞2 h后,用重组人IFN-γ（rhIFN-γ,500 U/mL）刺激诱导细胞,在不同的时间收集细胞,提取细胞总蛋白,免疫印迹法检测IFN-γ信号途径中IFN-γ受体α（IFN-γRα）、磷酸化Janus激酶2（pJAK2）、细胞因子信号转导抑制因子1（SOCS1）表达情况。结果 10-8 mol/L及10-7 mol/L雷公藤内酯醇可明显抑制HaCaT细胞中IFN-γ诱导的IFN-γRα蛋白表达（P < 0.05,P < 0.05）;10-9 mol/L及10-8 mol/L雷公藤内酯醇可明显抑制IFN-γ诱导的pJAK2蛋白表达（P < 0.05,P < 0.05）。雷公藤内酯醇对IFN-γRα表达及JAK2磷酸化的抑制作用呈剂量依赖性,其半数抑制浓度（IC50值）分别为1.37 × 10-8 mol/L和2.83 × 10-9 mol/L。10-10,10-9,10-8 mol/L的雷公藤内酯醇作用HaCaT细胞2 h后可明显上调IFN-γ诱导的SOCS1蛋白表达（P < 0.05,P < 0.01,P < 0.01）,其半数有效剂量（ED50值）为3.32 × 10-11 mol/L。结论 雷公藤内酯醇可分别通过抑制HaCaT细胞中IFN-γRα表达、JAK2磷酸化以及上调SOCS1表达,从不同时相的3个环节,共同抑制HaCaT细胞中STAT-1磷酸化,从而抑制IFN-γ信号所诱导的多种炎症相关基因转录。这种抑制作用可能是雷公藤治疗银屑病等IFN-γ依赖性炎症性皮肤病有效的重要机制之一。     

UVA辐射对HaCaT细胞分泌和表达趋化因子CXCL11/I-TAC的影响

目的 探讨UVA对IFN-γ和TNF-α诱导的HaCaT细胞分泌和表达CXCL11/I-TAC的影响。方法 用ELISA检测不同剂量UVA（2、4、8 J/cm2）照射后培养24 h的HaCaT细胞上清中CXCL11/I-TAC分泌水平。用实时荧光定量PCR检测CXCL11/I-TAC mRNA表达水平。结果 正常培养的HaCaT细胞仅分泌和表达微量的CXCL11/I-TAC蛋白或mRNA。当用10 μg/L的IFN-γ和TNF-α联合刺激后,HaCaT细胞分泌或表达的CXCL11/ I-TAC显著升高。UVA在2、4、8 J/cm2呈剂量依赖性抑制CXCL11/I-TAC的分泌或表达。结论 UVA照射抑制角质形成细胞分泌和表达CXCL11/I-TAC,从而在一定程度上降低了对Th1/Tc1细胞的趋化。     

白细胞介素22对人表皮角质形成细胞CC趋化因子配体27表达的影响

目的 研究白细胞介素22（IL-22）对人表皮角质形成细胞CC趋化因子配体27（CCL27）表达的影响及机制。方法 免疫组化法检测10例银屑病患者皮损及5例健康对照组皮肤中CCL27的表达。培养HaCaT细胞,分为8组：对照组用PBS处理,IL-22处理组分别用12.5、25、50、100、200 μg/L IL-22处理,信号通路阻断组先分别加入50 μmol/L AG490（JAK2/STAT3通路抑制剂）或PD98059（MAPK-ERK1/2通路抑制剂）阻断处理,2 h后各加入50 μg/L IL-22,继续于37 ℃、5% CO2孵箱中培养。孵育24 h 后,分别提取 HaCaT 细胞总蛋白并收集上清液,Western印迹、ELISA法分别检测CCL27表达。结果 免疫组化检测示,银屑病患者皮损中CCL27的表达水平明显高于正常人皮肤。Western 印迹显示,HaCaT细胞分别用12.5、25、50、100、200 μg/L IL-22处理后,CCL27相对表达量逐渐升高至0.491 ± 0.013、0.620 ± 0.019、0.623 ± 0.014、0.802 ± 0.052、1.138 ± 0.013,均较对照组（0.413 ± 0.013）升高（P＜0.01）;IL-22 + AG490组及IL-22 + PD98059组CCL27表达量分别为0.411 ± 0.019和0.280 ± 0.012,均低于50 μg/L IL-22组（均P＜0.01）。ELISA法检测显示,各组HaCaT细胞CCL27分泌水平变化趋势与Western印迹法检测结果一致。结论 IL-22可促进HaCaT 细胞CCL27表达,其机制可能与MAPK-ERK1/2和JAK2/STAT3通路有关。     

紫外线照射对HaCaT细胞IL-12和IFN-γ受体表达的影响

目的：观察紫外线（UV）照射对HaCaT细胞起源的IL-12、IFN-γ的影响，为进一步阐述光敏性皮炎的发病机制提供依据。方法：以UVA和UVB照射人永生化表皮细胞（HaCaT打细胞），应用免疫组化SP法观察UV照射后HaCaT细胞表面IL-12、IFN-γ受体的表达情况，并以阳性细胞百分比半定量IL-12、IFN-γ在HaCaT细胞中的表达；同时应用ELISA方法检测细胞培养液中IL-12、IFN-γ的含量。结果：静息状态下，HaCaT细胞低水平表达IL-12R、IFN-γR，上清液中IL-12、IFN-γ呈低水平表达或检测不出；UV照射HaCaT细胞后12h，细胞表面IL-12R、IFN-γR及上清液中的IL-12、IFN-γ与照射前无明显差异。结论：紫外线照射后角质形成细胞产生细胞因子致T细胞亚群失衡与光敏性皮炎的相关性，有待进一步探讨。     

熊果酸对干扰素γ刺激HaCaT细胞产生白细胞介素33的影响

目的：探讨熊果酸对干扰素γ（IFN?γ）刺激HaCaT细胞产生白细胞介素33（IL?33）的影响及其机制。方法不同浓度熊果酸（0、0.1、1、5、10、20、40、80μmol/L）分别刺激HaCaT细胞24、48、72 h,MTT法检测其对细胞增殖的影响。将HaCaT细胞与200μg/L IFN?γ共培养建成炎性细胞模型,再与10和15μmol/L熊果酸共培养,以IFN?γ诱导的HaCaT炎性细胞模型为对照,探讨熊果酸的抗炎作用,RT?PCR法检测IL?6和IL?33 mRNA的表达,Western印迹法检测IL?33、p?ERK1/2和ERK1/2蛋白的表达。结果 MTT法检测显示,5~20μmol/L熊果酸作用24 h对细胞活力影响不大,而40~80μmol/L熊果酸在各个时间点均可明显抑制HaCaT细胞增殖（P<0.05）,故后续实验采用10和15μmol/L浓度。HaCaT细胞经IFN?γ刺激后,IL?33 mRNA（0.812±0.036）、IL?6 mRNA（0.947±0.091）表达量和IL?33蛋白表达（1.317±0.119）均显著高于空白对照组（分别为0.412±0.021、0.595±0.030和0.147±0.036,均P<0.05）;而IFN?γ+10μmol/L熊果酸组（分别为0.447±0.042、0.437±0.099和0.923±0.058）和IFN?γ+15μmol/L熊果酸组（分别为0.438±0.028、0.350±0.075和0.564±0.113）又较IFN?γ组（分别为0.812±0.036、0.947±0.091和1.317±0.119）显著降低（均P<0.05）,且这两个熊果酸组IL?33 mRNA水平与空白对照组相比差异无统计学意义（P>0.05）,而IFN?γ+15μmol/L熊果酸组IL?33蛋白水平显著低于IFN?γ+10μmol/L熊果酸组（P<0.05）。HaCaT细胞分别经IFN?γ刺激5、60 min后,p?ERK1/2蛋白表达均明显高于空白对照组。IFN?γ+15μmol/L熊果酸5 min组和60 min组p?ERK1/2蛋白的相对表达量（0.458±0.053、0.302±0.054）分别低于IFN?γ5 min组（0.941±0.042）和60 min组（0.509±0.032）,差异均有统计学意义（P<0.05）,而总ERK1/2蛋白表达量不变。结论熊果酸能够降低IFN?γ刺激的HaCaT细胞IL?33的表达量,其机制可能与调节ERK信号通路相关蛋白的表达有关。     

肿瘤坏死因子-α、白介素-6和干扰素γ对HaCaT细胞表达CD68抗原的影响北大核心CSCD

目的研究肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-6（IL-6）和干扰素γ（IFN-γ）以及细菌脂多糖（LPs）对CD68抗原在角质形成细胞株HaCaT细胞中表达的影响。方法RPMI1640培养液培养的HaCaT细胞随机分成自然增殖孔（无刺激组）、IFN一1刺激孔（组）、TNF-α刺激孔（组）、LPS刺激孔（组）、IL-6刺激孔（组）。培养24h后收集细胞,采用流式细胞仪、免疫组化和RT-PCR方法检测TNF-α、IL-6、IFN-γ和LPS作用HaCaT细胞后CD68表达情况。结果与无刺激组比较,不同刺激因素可使HaCaT细胞CD68阳性细胞数增多,但以TNF-α和IL-6的作用较强（t值为3．60和3．93,P值均〈0．01）,IFN-γ和LPS的作用稍弱（t值为2．38和2．52,P值均〈0．05）。只有IL-6可以使HaCaT细胞CD68阳性细胞平均荧光强度增强（t值为8．34,P值〈0．01）。在IFN-γ和TNF-α、IL-6作用HaCaT细胞24h后均有CD68表达于胞质和胞膜,并且以TNF-α和IL-6作用较强。TNF-α和IL-6作用HaCaT细胞24h后可见CD68mRNA表达明显增强（t值为4．34和7．52,P值均〈0．01）,IFN-γ作用后出现较弱表达（t=2．81,P〈0．05）。结论在IL6、TNF-α、IFN-γ和LPS的作用下HaCaT细胞CD68表达增强。     

盐酸左西替利嗪对人毛乳头细胞生长影响的初步研究

【摘要】 目的 初步探讨不同浓度盐酸左西替利嗪对体外培养人毛乳头细胞（hDPC）生长的影响及机制。方法 将hDPC在含1、10、100、1 000、10 000 μg/L盐酸左西替利嗪的DMEM培养液中培养48 h,免疫荧光染色观察细胞的生长情况,MTT法检测细胞增殖活力,实时荧光定量PCR法检测环氧化酶2（COX?2）、前列腺素D2合酶（PTGDS）、前列腺素E2（PGE2）、前列腺素F2α（PGF2α）、G蛋白偶联受体44（GPR44）、蛋白激酶B（AKT）、糖原合成酶激酶3β（GSK3β）的mRNA表达水平;Western印迹法检测PTGDS蛋白水平。hDPC在含以上浓度盐酸左西替利嗪的DMEM培养液中培养24 h,酶联免疫吸附试验检测培养上清液中前列腺素D2（PGD2）和PGD2受体（PGD2R）的水平。以不加药物同等条件培养的hDPC为对照组。采用SPSS17.0软件进行单因素方差分析,组间两两比较使用LSD?t检验。结果 免疫荧光染色显示,100 μg/L组细胞生长良好,融合度超过90%。MTT法显示,不同浓度盐酸左西替利嗪组与对照组hDPC的增殖率差异有统计学意义（F = 42.22,P < 0.05）,100 μg/L组增殖率（115.80% ± 5.10%）高于对照组（100%,t = 28.26,P < 0.05）。不同浓度盐酸左西替利嗪组的COX?2、PGF2a、PTGDS、GPR44、AKT mRNA相对表达水平（以对照组表达为1）差异均有统计学意义（F值分别为1.97、3.66、2.17、2.66、7.32,P < 0.05）,PGE2、GSK3β表达差异无统计学意义（F值分别为0.87、1.19,P > 0.05）;100 μg/L组COX?2、PTGDS、GPR44 mRNA表达（0.84 ± 0.08、0.81 ± 0.10、0.85 ± 0.09）低于对照组（t值分别为1.97、2.17、2.66,均P < 0.05）,PGF2α、AKT的表达（1.96 ± 0.25、1.74 ± 0.32）高于对照组（t值分别为3.66、7.32,均P < 0.05）。不同浓度盐酸左西替利嗪组PTGDS、PGD2 、PGD2R水平差异均有统计学意义（P < 0.05）,100 μg/L组PTGDS、PGD2、PGD2R蛋白水平均低于对照组（P < 0.05）。结论 盐酸左西替利嗪可能通过抑制PGD2?GPR44通路,激活AKT信号通路,促进体外培养人毛乳头细胞的生长。     

尘螨变应原rDer p1诱导HaCaT细胞表达胸腺基质淋巴生成素的研究

【摘要】 目的 探讨尘螨变应原rDer p1在体外对角质形成细胞表达胸腺基质淋巴生成素（TSLP）的影响。 方法 体外培养人角质形成细胞株HaCaT细胞,予以0.1、1和10 mg/L尘螨变应原rDer p1与蛋白酶活化受体2（PAR2）特异性激动剂SLGIKV（500 μmol/L）和拮抗剂VKGILS（500 μmol/L）共培养,以无血清培养基为空白对照。用ELISA法和荧光定量PCR法检测各实验组和对照组TSLP蛋白及mRNA表达水平;通过激光共聚焦显微镜检测细胞内钙流变化分析rDer p1诱导HaCaT细胞产生TSLP和PAR2受体活化的关系。 结果 1 mg/L和10 mg/L rDer p1组培养12 h上清中TSLP水平分别为（155.5 ± 5.9） ng/L和（228.8 ± 28.7） ng/L,显著高于空白对照组（54.3 ± 13.9 ng/L,P < 0.01）,TSLP表达水平随rDer p1浓度增加而升高。SLGIKV组TSLP表达［（166.2 ± 8.8） ng/L］也显著高于空白对照组（P < 0.01）。10 mg/L rDer p1组和SLGIKV组TSLP mRNA相对表达量在8 h最高,分别为（3.28 ± 0.27）倍和（2.15 ± 0.26）倍,与4 h和24 h相比差异有统计学意义（P < 0.01）。SLGIKV可引起HaCaT细胞钙内流增加;10 mg/L rDer p1也可引起HaCaT细胞钙内流增加,经过PAR2受体特异性阻断剂VKGILS（500 μmol/L）处理后再给予rDer p1刺激,细胞内钙内流峰值明显降低。 结论 尘螨变应原rDer p1能够通过部分活化HaCaT细胞表面的PAR2受体诱导产生促炎细胞因子TSLP。     

TNF-α、IFN-γ诱导人角质形成细胞β防御素的表达

目的:检测TNF-α、IFN-γ诱导HaCaT细胞β-防御素的表达。方法:用TNF-α、IFN-γ、TNF-α加IFN-γ干预HaCaT细胞后,RT-RCR方法检测hBD-2 mRNA、hBD-3 mRNA的表达。结果:TNF-α干预组HaCaT细胞中hBD-2 mRNA、hBD-3 mRNA,IFN-γ干预组HaCaT细胞中hBD-3 mRNA表达增高(P0.05),干预12 h时的表达量高于干预24 h时的表达量;TNF-α与IFN-γ联合干预HaCaT细胞12 h时,hBD-2 mRNA、hBD-3 mRNA表达量最高。结论:TNF-α能刺激人角质形成细胞产生hBD-2和hRD-3,而IFN-γ仅能诱导产生hBD-3。     

小檗碱衍生物HB-13对角质形成细胞分泌IFN-γ的影响

目的研究小檗碱衍生物HB一13对人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）分泌γ干扰素（IFN叫）的影响,探讨HB-13的抗炎机制。方法采用四甲基偶氮唑蓝法确定HB-13作用于HaCaT细胞的安全浓度;细胞经P物质刺激后,加入不同浓度的HB-13分别孵育12、24、48h,应用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清液中IFN-γ的含量,应用实时荧光定量PCR法检测细胞内IFN-γmRNA表达情况。结果HB-13浓度为2．5、5、10μg／ml对HaCaT细胞毒性作用不显著,并可促进P物质诱导的IFN-γ的分泌。结论促进表皮细胞分泌IFN-γ可能是HB-13在皮肤局部发挥抗炎作用的机制之一。     

外源性胆绿素对中波紫外线诱导的HaCaT细胞光损伤的保护作用

目的 探讨外源性胆绿素对中波紫外线（UVB）照射的HaCaT细胞的保护作用及其机制。方法 将培养的HaCaT细胞分为对照组（不加胆绿素,不照射UVB）、UVB组（30 mJ/cm2 UVB照射）和100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组（分别于30 mJ/cm2 UVB照射前1 h加入相应浓度胆绿素）,处理完成后继续培养24 h,观察HaCaT细胞形态变化,CCK8法检测各实验组细胞生存率。Western 印迹检测抗氧化信号分子Nrf?2蛋白及光损伤信号分子基质金属蛋白酶1（MMP?1）和MMP?3蛋白表达。结果 CCK8法结果显示,UVB组HaCaT细胞活力低于对照组（P < 0.05）,在加入100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L 胆绿素预处理后,细胞生存率逐渐升高,与UVB组比较,差异有统计学意义（均P < 0.05）。Western印迹显示,UVB组MMP?1（1.150 ± 0.187）、MMP?3（0.979 ± 0.054）蛋白表达较对照组（0.116 ± 0.018、0.636 ± 0.035）升高（均P < 0.01）,而100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组MMP?1（0.825 ± 0.139、0.313 ± 0.047和0.286 ± 0.036）、MMP?3（0.888 ± 0.017、0.672 ± 0.042和0.569 ± 0.037）蛋白表达较UVB组降低（均P < 0.05）。UVB组Nrf?2蛋白（0.906 ± 0.034）较对照组（1.242 ± 0.141）表达降低（P < 0.05）,100 nmol/L、1 μmol/L、10 μmol/L胆绿素 + UVB组Nrf?2蛋白表达（1.556 ± 0.112、1.897 ± 0.234和2.035 ± 0.274）较UVB组升高（均P < 0.01）。结论 外源性胆绿素对UVB诱导的HaCaT细胞损伤起保护作用,该作用可能与Nrf?2抗氧化信号通路有关。     

0.1%二甲基亚砜促进δ-氨基酮戊酸诱导HaCaT细胞光动力学效应

目的 探讨0.1%二甲基亚砜（DMSO）对δ-氨基酮戊酸诱导HaCaT细胞光动力学效应的影响。方法 将HaCaT细胞分成实验组（0.1% DMSO）和对照组（未加DMSO）,加入2 mmol/L δ-氨基酮戊酸并于37 ℃避光孵育3 h。采用高效液相色谱荧光法（HPLC-FLD）检测胞内原卟啉Ⅸ（PpⅨ）水平,用激光共聚焦显微镜（LSCM）观察胞内PpⅨ荧光强度,同时检测细胞增殖（噻唑蓝法测定吸光度A值）与存活率;以632.8 nm波长激光照射HaCaT细胞后继续培养12 h,通过流式细胞仪检测细胞凋亡率与坏死率。结果 HPLC-FLD检测实验组和对照组HaCaT细胞质内PpⅨ水平分别为（0.57 ± 0.05） μg/L和（0.44 ± 0.04） μg/L（t = 2.79,P < 0.05）,LSCM观察实验组胞内荧光强度高于对照组,吸光度A值分别为0.54 ± 0.06、0.51 ± 0.07（t = 1.51,P > 0.05）,细胞存活率分别是（96.18 ± 2.25）%,（94.64 ± 2.40）%（χ2 = 1.84,P > 0.05）。照光后,实验组和对照组的细胞凋亡率分别为2.2%,1.5%（χ2 = 4.05,P < 0.05）,细胞坏死率分别为8.9%和0.1%（χ2 = 8.23,P < 0.05）。结论 0.1% DMSO可促进δ-氨基酮戊酸所致的HaCaT细胞光动力学效应。     

白芍总苷对角质形成细胞增生及ICAM-1表达的影响

目的：探讨白芍总苷（TGP）对人永生化角质形成细胞（HaCaT细胞）增生及分泌细胞间黏附分子（ICAM）-1的影响,探讨可能涉及的信号传导通路。方法用500 U/ml干扰素（IFN）-γ诱导HaCaT细胞,不同浓度TGP（0.5～312.5μg/ml）作用于HaCaT细胞。四甲基偶氮唑盐（MTT）法观察TGP对HaCaT细胞增生活性的影响。酶联免疫吸附试验（ELISA）及荧光免疫组化法检测HaCaT细胞表达ICAM-1的水平。结果 TGP在低浓度（0.5～25.0μg/ml）时对HaCaT细胞增生活性有促进作用,在高浓度（62.5～125.0μg/ml）时对HaCaT细胞增生活性呈抑制作用。0.5～25.0μg/ml TGP可显著降低HaCaT细胞表达ICAM-1的水平（P＜0.05,P＜0.01）。结论 TGP对IFN-γ上调HaCaT细胞分泌ICAM-1有显著的抑制作用,可能是TGP抗炎作用机制之一。     

茶多酚对白癜风患者CD8+T淋巴细胞分泌肿瘤坏死因子α、干扰素γ和白介素2受体影响

目的 检测CD8+T淋巴细胞分泌细胞因子及受体在白癜风患者外周血中的表达情况及意义,并探讨茶多酚对其表达的影响.方法 分离和培养12例进展期白癜风、12例稳定期患者和10例健康人外周血CD8+T淋巴细胞,与茶多酚100 mg/L共培养,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测茶多酚处理前后肿瘤坏死因子(TNF)-α、干扰素(IFN)-γ和白介素-2受体(IL-2R)的浓度.用t检验和方差分析检测不同组间及处理前后各因子水平的差异.结果 进展期白癜风组、稳定期白癜风组和健康对照组外周血CD8+T淋巴细胞分泌TNF-α的浓度依次降低,分别为(191.302±6.077) ng/L、(175.966±2.467) ng/L、(173.664±3.600) ng/L,IFN-γ的浓度依次升高,分别为(280.182±36.07) ng/L、(371.670±24.352)ng/L、(447.147±8.432)ng/L,IL-2R的浓度同样依次升高,分别为(8.375±0.161) μg/L、(8.845±0.161) μg/L、(9.345±0.125) μg/L.进展期白癜风组与稳定期白癜风组和健康对照组相比较,3种指标差异均有统计学意义(P＜ 0.05或0.01).经茶多酚处理2d后,进展期白癜风组、稳定期白癜风组和健康对照组TNF-α水平均明显降低至(164.797±1.784) ng/L、(166.150±3.576) ng/L、(155.028±5.759) ng/L,与处理前比较差异均有统计学意义(均P＜0.05);稳定期白癜风组IFN-γ浓度升高,而进展期白癜风组和健康对照组则有降低,各组IL-2R水平均有升高,但差异均无统计学意义(均P＞ 0.05).结论 白癜风患者外周血CD8+T淋巴细胞分泌的细胞因子及受体的变化可能与白癜风诱发或进展相关.茶多酚可能通过降低CD8+T淋巴细胞分泌TNF-α治疗白癜风.     

寻常性银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体和TNF-α受体mRNA表达的研究

目的 探讨寻常性银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体mRNA和TNF-α仅受体mRNA的表达及其在银屑病发病机制中的作用.方法 采集50例寻常性银屑病患者外周静脉血,分离单一核细胞后,以RT-PCR法检测其IFN-γ受体mRNA和TNF-α受体mRNA的表达,PASI评分法评估银屑病的严重程度.以24例正常人作对照.结果 50例银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体mRNA的表达均值为1.11±0.55,其中37例进行期患者为1.13±0.57,13例静止期患者为1.03±0.52,正常人对照组为0.72±0.17,银屑病患者显著高于正常人对照组(P=0.0034),进行期显著高于正常人对照组(P=0.008),而静止期与正常人对照组差异无统计学意义.正常人对照组和银屑病患者外周血单一核细胞TNF-α受体mRNA的表达水平差异无统计学意义.银屑病患者外周血单一核细胞IFN-γ受体mRNA表达水平与TNF-α受体mRNA表达水平及PASI值均无相关性.结论 IFN-γ受体mRNA在寻常性银屑病患者外周血单一核细胞中异常高表达,但与疾病的活动性无关.     

白介素22调控角质形成细胞表达角蛋白17的研究

目的:研究白介素(IL)-22对培养的人永生化角质形成细胞(HaCaT细胞)表达角蛋白(K)17的影响.方法:对体外培养的HaCaT细胞分别给予不同浓度的IL-22(0 ～ 100 μg/L)作用24 h,应用实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time PCR)检测K17mRNA 表达水平,以酶联免疫吸附测定技术(ELISA 法)、蛋白质免疫印记法(Western blot)及免疫荧光染色法检测K17 蛋白表达水平的变化.结果:HaCaT细胞经12.5、25.0、50.0、100.0 μg/L 的IL-22 作用后, 均出现不同程度的K17 表达.与空白对照组的HaCaT细胞相比,12.5 μg/L组的mRNA及蛋白表达无明显差异,而25.0、50.0、100.0 μg/L组的mRNA 及蛋白表达则明显上升(P ＜0.05),并且随着IL-22浓度增高,K17mRNA及蛋白表达量增多.免疫荧光染色图片显示,随着IL-22 浓度的增高,HaCaT细胞胞质中K17蛋白荧光染色增强.结论:IL-22可以剂量依赖方式诱导HaCaT细胞表达K17.     

安石榴苷对中波紫外线诱导HaCaT细胞光损伤的预防作用研究

目的 探讨安石榴苷对中波紫外线（UVB）诱导角质形成细胞损伤的保护机制。 方法 培养的HaCaT细胞分为空白对照组、安石榴苷组、UVB组、安石榴苷 + UVB组。噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖能力,Hoechst/碘化丙锭（PI）染色和流式细胞仪检测细胞凋亡,RT-PCR法测定金属基质蛋白酶1（MMP1）及其组织抑制因子1（TIMP1） mRNA表达水平,Western印迹检测丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）通路相关蛋白P38、JNK、ERK的磷酸化水平变化。 结果 MTT试验示,10 ～ 40 μmol/L安石榴苷对UVB诱导的HaCaT细胞损伤有较佳的预保护作用。UVB组HaCaT细胞强Hoechst和强PI双染细胞较空白对照组增多,安石榴苷 + UVB组较UVB组减少。流式细胞仪分析,UVB组凋亡细胞百分率（9.82% ± 0.11%）高于空白对照（1.24% ± 0.91%,P < 0.01）,而安石榴苷（10、20、40 μmol/L） + UVB组凋亡细胞百分率（分别为6.38% ± 0.14%、5.24% ± 0.17%、3.77% ± 0.11%）较UVB组低,差异有统计学意义（均P < 0.01）。UVB组MMP1 mRNA相对表达量（12.376 ± 0.602）高于空白对照组（1.007 ± 0.147,P < 0.01）,而TIMP1 mRNA相对表达量（0.103 ± 0.006）低于空白对照组（1.006 ± 0.139,P < 0.01）,安石榴苷组MMP1及TIMP1 mRNA与空白对照组比较,差异无统计学意义（均P > 0.05）。安石榴苷预处理的HaCaT细胞经30 mJ/cm2 UVB照射后MMP1 mRNA相对表达量较UVB组降低（均P < 0.01）,而TIMP1 mRNA较UVB组升高（均P < 0.01）。Western印迹示,经UVB照射后,HaCaT细胞p-ERK、p-JNK及p-p38表达升高（均P < 0.01）。安石榴苷组HaCaT细胞p-ERK、p-JNK及p-p38表达没有明显改变（P > 0.05）,而安石榴苷 + UVB组有不同程度下降（均P < 0.01）。 结论 安石榴苷对UVB引起HaCaT细胞损伤有一定的预防作用。     

磷酸二酯酶4抑制剂Hemay005对角质形成细胞炎性因子产生的影响

目的 为了探讨磷酸二酯酶4抑制剂Hemay005对体外培养的角质形成细胞株HaCaT细胞炎性因子产生的影响.方法 分别用重组人肿瘤坏死因子-α（rhTNF-α）、重组人干扰素-γ（rhIFN-γ）和312 nm窄波UVB诱导,采用MTT法检测Hemay005对HaCaT细胞增殖的影响,用ELISA法检测其对HaCaT细胞白细胞介素（IL）-8、sICAM-1和肿瘤坏死因子（TNF）-α产生的影响.结果 Hemay005对HaCaT细胞增殖及25 μg/L rhTNF-α诱导的IL-8产生无明显影响,但能剂量依赖性地抑制1 000 U/mL rhIFN-γ诱导的HaCaT细胞产生sICAM-1和124.2 mJ/cm2窄波UVB照射引起的HaCaT细胞产生TNF-α.结论 Hemay005可通过抑制角质形成细胞炎症因子的表达发挥抗炎作用.