创伤后肝细胞凋亡与坏死的检测及其意义

目的：探讨严重创伤后肝细胞凋亡及坏死在急性肝功能障碍发病机制中的作用。方法：复制多发性骨折合并休克的大鼠创伤模型，采用Annexin-V-Flous，碘化丙锭（propidium iodid,PI)双标法经流式细胞仪检测创伤后各时间点肝细胞凋亡与坏死的数量变化，结合光镜，电镜和电泳观察细胞凋亡与坏死，并与肝功能变化相比较。结果：创伤后早期肝细胞即发生凋亡和坏死，坏死肝细胞的数量进行性升高，与肝功能变化显著呈正相关，凋亡肝细胞在创伤后3h达高峰，部分凋亡肝细胞发生继发性坏死，其数量与肝功能变化显著正相关。结论：肝细胞坏死与凋亡是严重创伤后肝功能损害的重要原因，坏死肝细胞是肝功能损害的直接因素，凋亡肝细胞通过发生继发性坏死加重肝功能损害。     

创伤后肺内炎性细胞凋亡与继发性坏死的观察及意义

目的 探讨严重创伤后肺内炎性细胞凋亡与继发性坏死在急性肺损伤发病机制中的地位和作用。方法 复制大鼠多发骨折合并休克模型,采用Annexin-V和PI双标法经流式细胞仪检测创伤后肺泡灌洗液中凋亡与坏死炎性细胞的数量变化,测定细胞分类计数及肺通透指数并作比较。结果伤后动物肺泡灌洗液中巨噬细胞数量减少,而白细胞数量增加。伤后凋亡炎性细胞数量增加,于伤后3h达到高峰。部分凋亡炎性细胞发生继发性坏死,其数量进行性升高并与肺通透指数变化显著相关（r=0.90,P<0.01）。结论 严重创伤后肺泡内炎性细胞发生凋亡,可能因为继发性坏死致炎性内容物外泄而引发急性肺损伤。     

创伤后应激障碍大鼠海马和杏仁核中神经元凋亡及Caspase-9的表达及其意义

目的:探讨创伤后应激障碍(PTSD)大鼠海马和杏仁核神经元凋亡及Caspase-9表达水平的变化,阐明PTSD大鼠海马与杏仁核体积异常的原因。方法:将100只雄性Wistar大鼠随机分为对照组(20只)和PTSD组(80只),利用改良的单一连续应激(SPS&S)制作PTSD大鼠模型。采用Morris水迷宫实验和僵立行为实验检测大鼠行为学表现;TUNEL方法检测大鼠海马和杏仁核神经元凋亡阳性细胞率;流式细胞术(FCM)检测大鼠海马和杏仁核神经元凋亡率;Western blotting法检测大鼠海马和杏仁核中Caspase-9表达水平。结果:PTSD组大鼠逃避潜伏期(EL)和僵立行为百分比显著高于对照组(P<0.05);PTSD后1、4、7和14d大鼠海马和杏仁核TUNEL阳性细胞和凋亡率高于对照组(P<0.05),28d与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);PTSD后1、4、7和14d大鼠海马和杏仁核Caspase-9表达水平高于对照组(P<0.05),28d与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:PTSD大鼠海马和杏仁核神经元凋亡增加,Caspase-9表达水平上调,提示其凋亡可能是引起海马与杏仁核体积异常的原因之一。     

细胞凋亡和继发性坏死的Annexin法定量检测

目的　探讨分析凋亡与坏死淋巴瘤 (Raji)细胞的定量方法。方法　以 1.0 μm ol/ L 地塞米松(DEX)诱导 Raji细胞凋亡 ,用异硫氰酸荧光素标记的连接素 V(Annexin V)和碘化丙锭 (PI)分别与凋亡细胞膜上的磷脂酰丝氨酸和继发性坏死细胞内降解的 DNA结合 ,并以流式细胞术分析和分选标记细胞 ,用电镜和 DNA凝胶电泳对分选细胞及其 DNA进行鉴定。结果　 Annexin+细胞数随 DEX孵育时间的延长而增加 (r=0 .97) ;Annexin+/ PI- 与 Annexin+/ PI+细胞经电镜和 DNA梯形带确证具有凋亡与坏死细胞的特征 ;Annexin法可准确测定 10 5～ 10 6细胞中的标记细胞。结论　 Annexin法可快速、准确地定量混合细胞内的凋亡与坏死细胞数     

细胞凋亡的检测方法

自 1972年Ｋｅｒｒ首次提出细胞凋亡的概念以来 ,凋亡的研究迅速在生命科学领域扩展和深入。凋亡 (ａｐｏｐｔｏｓｉｓ)是指细胞在一定的生理或病理条件下 ,遵循自身的程序 ,由基因调控的主动的死亡过程[1 ] 。凋亡是不同于细胞坏死 (ｎｅｃｒｏｓｉｓ)的另一种细胞死亡的形式 ,二者在形态学、生化基础及发生学等方面有明显差异 ,详见表 1。本文对细胞凋亡的检测方法予以综述。表 1　细胞凋亡和坏死的区别项　别凋　亡坏　死诱导原因生理和病理病理基因调控　 +　 -细胞形态皱缩肿胀核染色质浓缩聚集核膜下成新月形染色质呈不规则移位胞浆浓…     

缺血性脑梗塞CT表现与梗塞后神经细胞凋亡及坏死的相关性

目的 探讨实验性缺血性脑梗塞早期CT表现与神经细胞损伤的相关性及与临床诊断、治疗、预后的关系。方法 将新西兰大白兔经颈总动脉注入PVA栓子栓塞大脑中动脉，在不同的时间点(2～36h)对免脑进行CT扫描，并取脑组织经：HE染色、Nissle染色、免疫组化(TUNEL法)进行观察。结果 CT分期Ⅰ期(脑梗塞后2～8h)，神经细胞首先出现缺血改变，随后细胞周围出现水肿：基底节周围及大脑皮质可见少量TUNEL阳性细胞。CT分期Ⅱ期(梗塞后12～18h)，以神经细胞溶解消失为主：基底节周嗣及大脑皮质可见较多TUNEL阳性细胞。CT分期Ⅲ期(梗塞后24～36h)，脑水肿改变十分显著，基底节呈明显的坏死区，神经细胞坏死，结构消失．大脑皮质可见大量TUNEL阳性细胞。神经元具有凋亡及坏死的双重形态学特征。结论 缺血性脑梗塞后神经细胞损伤形态上有水肿、凋亡及坏死等多样性，CT扫描显示缺血性脑梗塞的进展与实际病理变化有高度相关性。     

汤伤豚鼠痂下水肿液诱导肝细胞凋亡和坏死

OBJECTIVE: To understand the effects of subeschar tissue fluid (STF) on postburn damage of the hepatocytes. METHODS: In vitro cultured hepatocytes from normal guinea pigs were incubated with STF collected from guinea pigs with burn injury covering 30% total body surface area. Stained with Annexin-V-Fluos (A-V) and propidium iodide(PI), the hepatocytes were examined by flow cytometry for apoptosis and necrosis at both 12 and 24 h after incubation. The activities of alanine transaminase (ALT) and lactate dehydrogenase (LDH) in the culture medium were also assayed. RESULTS: Incubation with STF induced apoptosis and necrosis of the hepatocytes and elevated activities of ALT and LDH in the culture medium. CONCLUSION: STF induces apoptosis and necrosis of hepatocytes, which may play an important role in postburn organ damage.     

烫伤豚鼠痂下水肿液诱导肝细胞凋亡和坏死

目的 探讨烧伤痂下水肿液(STF)在诱导肝细胞凋亡和坏死中所起的作用。方法 建立Ⅲ°30%体表总面积(TBSA)烫伤的豚鼠模型并提取其STF,将STF与正常肝细胞共同孵育12、24h后检测细胞凋亡和坏死百分率,同时测定培养液中乳酸脱氢酶(LDH)和谷丙转氨酶(ALT)活性。结果STF刺激肝细胞12h即可诱导肝细胞凋亡与坏死,随着刺激时间延长,肝细胞凋亡及坏死率增加,且肝细胞培养液中 LDH和ALT的活性进一步增强。结论烧伤后STF可诱导肝细胞凋亡与坏死,在烧伤早期脏器损害中可能起重要作用。     

三氧化二砷通过诱导结肠癌LoVo细胞凋亡和坏死抑制其生长

目的 探讨三氧化二砷（As2O3)对结肠癌细胞系LoVo细胞生长的影响及可能机制。方法 通过肿瘤细胞记数,观察As2O3对LoVo细胞生长的影响。应用光镜、电镜、流式细胞仪以及生化分析仪,观察细胞形态学、凋亡细胞峰并测定培养上清液中乳酸脱氢酶（LDH）含量。结果 As2O3明显抑制LoVo细胞生长,并呈时间和剂量依赖关系（P＜0．05或P＜0．01）。光镜及电镜下可见典型的细胞凋亡和坏死形态表现。流式细胞仪分析显示：在G1期前出现亚二倍体的凋亡细胞峰。生化分析测定发现：As2O3浓度为2．0μmol/L时,培养上清液中LDH含量增加（P＜0．05或P＜0．01）。结论 As2O3通过诱导LoVo细胞凋亡和坏死抑制其生长。     

SARS病变组织细胞凋亡检测及其意义

目的检测SARS病变组织标本中的细胞凋亡情况和凋亡细胞类型,探讨细胞凋亡在SARS发病过程中的作用及可能机制。方法DNA片段原位末端检测和免疫组化碱性磷酸酶法单染和双染检测正常组织和SARS病变组织中的细胞凋亡以及白细胞分化相关抗原CD3、CD4、CD8、CD45RA、CD20、CD68的表达情况。结果与正常组织相比,SARS病人的脾脏、肺组织和淋巴结细胞凋亡明显增多,凋亡细胞包括肺泡上皮细胞、淋巴细胞和单核/巨噬细胞等;各病变组织内均有大量CD68 单核/巨噬细胞;病变肺组织基本没有CD45RA /CD20 B细胞和CD4 /CD8 T细胞浸润,淋巴结和脾脏的CD4 /CD8 T细胞、CD45RA /CD20 B细胞也明显减少,现存的具有上述抗原特性的T细胞和B细胞较少凋亡。结论(1)细胞凋亡现象在SARS病变组织中普遍存在,提示细胞凋亡在SARS发病过程中起一定作用;(2)病变组织内浸润的炎细胞主要为单核细胞,说明单核细胞可能在SARS发病中起重要作用;(3)淋巴结和脾脏的细胞凋亡现象和CD4 /CD8 T细胞及CD45RA /CD20 B细胞减少提示SARS病毒可能对免疫细胞有一定的杀伤效应。     

原代培养大鼠肝窦内皮细胞凋亡的检测及意义

目的检测原代分离培养肝窦内皮细胞(sinusoidal endothelial cells,SECs)的凋亡状况.方法用胶原酶灌注结合Percoll密度梯度离心加选择性贴壁的方法分离SEC;用光镜形态学、Ⅷ因子和CD14免疫细胞化学染色及RECA-1单抗间接免疫荧光法及SEM鉴定SEC;采用TEM及AnnexinV联合PI双染的方法检测SEC的凋亡.结果分离培养的SEC得率为(2.06±0.35)×107/只大鼠,活力≥92%,纯度达90%;光镜下细胞形态典型,Ⅷ因子染色阴性而CD14染色阳性,RECA-1单抗间接免疫荧光染色阳性,SEM下可见SEC表面具有典型的窗孔结构;即使在培养基中加入ECGF,TEM下仍可观察到SEC出现凋亡的典型形态特征,且随培养时间延长,凋亡率明显升高,培养12 h的SEC凋亡率与新鲜分离的相比,差异已具有显著性(F=53.11,P＜0.05).结论体外培养的SEC存在明显的自发凋亡,且这种凋亡呈生长因子抵抗性.     

缺血预处理对肝缺血再灌注时细胞凋亡及调控基因表达的影响

目的探讨缺血预处理对肝脏细胞凋亡的影响以及与调控基因bcl-2／bax蛋白表达的关系。方法将家兔分为假手术（SO）组、缺血再灌注（IK）组，缺血预处理（IP）组。后2组中再分为4个亚组（IR3h、12h、24h和48h组。IP3h、12h、24h和48h组）。缺血期均为60min。缺血预处理为缺血前采用5min缺血及5min再灌注的方法。分别于再灌注3、12、24和48h后处死动物采取肝脏标本，SO组于手术后24h采取肝标本。检测细胞凋亡及bcl-2／bax蛋白表达水平。结果IR组和IP组与SO组比较，细胞凋亡指数（AI）增加差异有显著性（P〈0.01）；IP组中IP3h、12h和24h较同时间段IR组细胞凋亡指数降低差异有显著性（P〈0.05）；bcl-2蛋白表达：IP组与IR组及SO组比较，增高差异有显著性（P〈0.05）；bax蛋白表达：IR组和IP组与SO组比较增加差异有显著性（P〈0.05）。结论缺血预处理可能通过激活bcl-2蛋白的表达，改变bcl-2／bax表达比例从而抑制肝细胞凋亡。     

内质网应激在软脂酸钠诱导的脂肪变性L02肝细胞凋亡中的作用

目的 观察内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）蛋白在软脂酸钠诱导的脂肪变性L02肝细胞凋亡过程中的改变,探讨ERS与脂变肝细胞凋亡的关系。方法用软脂酸钠（饱和脂肪酸）诱导建立L02肝细胞脂肪变性模型。将细胞分为正常对照组和实验组(软脂酸钠72 μmol/L)。MTT法筛选软脂酸...     

原代人胎胰岛细胞凋亡相关因子的检测及其意义

目的探讨TGFβ、P21ras、cfos与原代人胎胰岛细胞凋亡的关系。方法半定量RTPCR和免疫组化染色(SABC法)检测不同生长时期原代人胎胰岛细胞TGFβ、P21ras、cfos的表达,设原代人成纤维细胞为对照。结果P21ras在原代人胎胰岛细胞各期均弱表达,其中潜伏期、指数生长期显著弱于原代人成纤维细胞(P<0.01);cfos仅在原代人成纤维细胞、原代人胎胰岛细胞停滞期可检出;TGFβ1在原代人胎胰岛细胞停滞期表达最强,潜伏期其次,指数生长期最弱,但均强于原代人成纤维细胞。结论原代人胎胰岛细胞的增殖和凋亡可能是非P21ras依赖的;cfos蛋白的表达对原代人胎胰岛细胞凋亡启动可能是必须的;TGFβ1在原代人胎胰岛细胞增殖中可能发挥负性调节作用。     

氟美松对急性肝损伤大鼠肝细胞Fas/Fas配体表达和细胞凋亡的影响

目的 :观察内毒素急性肝损伤后肝细胞凋亡和Fas/Fas配体 (FasL)表达的变化 ,以及氟美松对其影响 ,探讨急性肝损伤早期作用机制 .方法 :采用免疫组化和原位杂交技术检测各时相点肝细胞Fas/FasL蛋白和mRNA的表达 ;应用原位末端标记技术对各时相点肝细胞凋亡进行检测 .结果 :内毒素急性肝损伤各时相点大鼠肝细胞Fas/FasL蛋白和mR NA的表达较对照组明显上调 (P <0 .0 5 ) ,且与肝细胞凋亡的增加相一致 ;氟美松可明显减轻炎症反应 ,抑制脂多糖 (LPS)诱导的肝细胞凋亡 ,并使肝细胞Fas/FasL蛋白和mRNA的表达明显下调 (P <0 .0 5 ) .结论 :肝细胞凋亡和Fas/FasL系统活化可能参与内毒素急性肝损伤早期的发病机制 ,而且加重早期肝损伤 ;氟美松可抑制Fas/FasL系统活化 ,阻断和调控凋亡 ,从而减轻肝组织损伤     

重症急性胰腺炎胰腺细胞凋亡的意义及精氨酸促凋亡机制的研究

目的探讨重症急性胰腺炎（SAP）胰腺细胞凋亡的意义及精氨酸促凋亡的作用机制。方法采用胰腺被膜下多点注射5%牛磺胆酸钠制作SAP大鼠模型,随机分为3组：假手术对照组、SAP组及精氨酸治疗组,分别于术后6和12h对各组行血清淀粉酶、血清一氧化氮（NO）含量检测、胰腺细胞凋亡TUNEL检测及胰腺组织病理学检查。结果诱发SAP6和12h,SAP组血清淀粉酶水平较对照组明显升高,而血清NO含量较对照组明显降低,治疗组血清淀粉酶水平较SAP组明显降低,血清NO含量较SAP组明显升高。术后6及12hSAP组镜下见少许凋亡细胞,而治疗组胰腺组织中见大量凋亡细胞,且其凋亡指数（AI）均较同时相点SAP组明显升高,同时胰腺组织病理损害程度明显减轻,病理学评分明显降低。胰腺细胞AI与血清NO含量呈正相关,与胰腺组织病理学评分呈负相关。结论SAP病程中胰腺细胞凋亡程度有利于减轻胰腺组织的病理损害,精氨酸可通过NO途径诱导SAP胰腺细胞凋亡,改善胰腺的病理损害。