脂质体介导转染bcl-2反义核酸进入HL60细胞的动力学模式和生物学效应

bcl- 2基因是重要的抗凋亡和耐药基因 ,在造血系统恶性肿瘤细胞中普遍高表达。利用 bcl- 2反义核酸有望抑制bcl- 2基因的表达 ,促进细胞凋亡 ,提高肿瘤对化疗的敏感性。　目的　应用阳离子脂质体介导或寡核苷酸直接转染技术 ,建立 HL6 0细胞摄入荧光素标记的 bcl- 2寡核苷酸的动力学模式 ,研究脂质体介导下 bcl- 2反义核酸对 HL6 0细胞的生物学效应 ,初步探讨脂质体的生物学作用。　方法　应用荧光素标记的寡核苷酸 ,凝胶电泳观察脂质体寡核苷酸复合物的形成 ,流式细胞仪测定细胞内的平均荧光强度和 bcl-2蛋白的表达 ,荧光显微镜观察细胞内荧光物质的分布 ,3H-Td R掺入法和 MTT法检测 HL6 0细胞的生长 ,RT- PCR法检测细胞内 bcl- 2 m RNA的表达水平。　结果　 (1)当脂质体与寡核苷酸的质量比合适时 ,两者可形成复合物。(2 )脂质体介导转染法显著提高 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入 ,当脂质体与寡核苷酸的质量比 (μg/ μg)为 2 .0 / 1时 ,细胞内相对平均荧光强度可达寡核苷酸直接转染时的 40倍 ,而且 HL6 0细胞对寡核苷酸的摄入与其浓度和作用时间有关 ,未标记的寡核苷酸竞争性抑制细胞对标记寡核苷酸的摄取。 (2 )细胞内的寡核苷酸可向胞外转运 ,脂质体介导转染后 ,胞内荧光强度衰减缓慢 ,t1 /2 约为 4h,     

脂质体介导hTERT反义寡核苷酸对HL60细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究经脂质体介导转染端粒酶逆转录酶(hTERT)反义寡核苷酸(ASODN)对HL-60细胞增殖、凋亡的影响.方法 运用四唑盐比色(MTT)法检测HL-60细胞的增殖、Annexin VFITC/PI双标记法细胞早期凋亡流式检测法检测HL-60细胞的凋亡.结果 hTERT ASODN组(终浓度10 μmol/L)、脂质体介导hTERT ASODN组(终浓度0.5 μmol/L)均能抑制HL60细胞增殖,诱导HL-60细胞凋亡,两组比较差异无显著性.各ASODN组对HL-60的抑制作用及诱导凋亡作用均弱于阿糖胞苷(终浓度10 μmol/L)(P<0.01).结论 脂质体的介导增强了hTERT AS0DN抑制HL-60细胞增殖及诱导凋亡的作用效果.脂质体介导hTERT ASODN有可能成为化疗外治疗急性白血病的有益补充.     

bcl-2和bax在三氧化二砷诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化

目的:探讨bcl-2和bax在三氧化二砷(arsenic trioxide,As₂O₃)诱导HL-60细胞凋亡过程中的变化。方法:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h,RT-PCR和Western-blot分别检测bcl-2和bax基因mRNA表达及相应的蛋白表达变化。结果:7.5μmol/L的As₂O₃作用HL-60细胞12、24 h后,bcl-2 mRNA相对表达分别为(65.02±4.69)%、(40.70±3.94)%,baxmRNA相对表达分别为(46.71±4.26)%、(95.65±5.57)%,Western-blot检测bcl-2蛋白相对表达分别为(56.34±6.45)%、(42.01±3.01)%,bax蛋白质表达分别是(50.65±4.50)%、(66.78±5.05)%,对照组与实验组差异均有统计学意义(P<0.01)。结论:As₂O₃诱导HL-60细胞凋亡过程中,下调bcl-2 mRNA和蛋白质表达,同时上调bax mRNA和蛋白质表达,可能是As₂O₃诱导细胞凋亡信号传导通路之一。     

紫杉醇诱导HL-60细胞凋亡对Bcl-2基因家族的影响

,而此凋亡可能与Bad的表达上调和Bcl-2基因表达下调有关,而与Bax和Bcl-xl的表达无关.     

反义hTERT在体外对HL-60细胞的抑制作用

[目的 ]探讨反义hTERT表达质粒是否能够抑制HL - 6 0细胞增殖能力及端粒酶活性。 [方法 ]通过脂质体法将反义hTERT表达质粒导入HL - 6 0细胞中 ;以G4 18进行筛选得到阳性克隆 ;以MTT法和体外集落形成实验检测反义hTERT表达质粒对HL - 6 0细胞增殖的抑制作用 ;以TRAP -PCRELISA法来研究反义hTERT对HL - 6 0细胞的端粒酶活性的抑制作用。 [结果 ]转染反义hTERT表达质粒组与空白对照及空质粒组相比 ,细胞增生速度明显较慢 ,克隆形成能力明显下降 (P <0 .0 1) ;反义hTERT对HL - 6 0细胞的端粒酶活性具有明显的抑制作用。 [结论 ]本研究构建的端粒酶反义hTERT表达质粒能够抑制HL - 6 0细胞的体外增殖能力及其端粒酶活性。     

足叶乙甙诱导HL-60细胞凋亡及其bcl-2基因表达

研究HL-60细胞在足叶乙甙（Vp16）诱导的细胞凋亡中bcl－2基因表达，以说明药物致调亡的分子机制。方法：采用细胞存活率，形态改变，DNA梯形片段分析和原位缺口标记法，分析药物引起的细胞凋亡，以细胞原位杂交和免疫组化分析bcl－2mRNA及其蛋白的表达水平。结果：Vp16有效地诱导HL60细胞凋亡，12h形成DNA缺口，16h出现DNA梯形片段，24h形成调亡小体，48hDNA完全降解；细胞凋亡时其bcl－2mRNA和蛋白水平都较处理前明显降低。结论:bcl－2基因表达的下调在Vp16诱导的HL-60细胞调亡中起一定作用。     

rhTNF-α联合bcl-2反义寡核苷酸对急性髓细胞白血病细胞株HL-60增殖与凋亡的作用

目的　探讨基因重组人类肿瘤坏死因子 α(rh TNF- α)和 bcl- 2反义寡核苷酸 (ASPO)对 HL- 6 0细胞增殖与凋亡的作用 ,进一步认识肿瘤坏死因子 α(TNF- α)和 bcl- 2两者调控肿瘤细胞凋亡的作用及相互联系。　方法　单独和联合应用 rh TNF- α和 bcl- 2 ASPO处理 HL- 6 0细胞 ,通过 MTT法检测 HL- 6 0细胞生长和存活特性变化 ;原位细胞凋亡检测和流式细胞技术检测细胞凋亡 ;应用 RT- PCR、免疫组织化学检测癌基因 bcl- 2表达的改变。　结果　 rh TNF- α和 bcl- 2 ASPO的联合应用明显增强对 HL- 6 0细胞的增殖抑制 ;细胞凋亡率明显升高 ;癌基因bcl- 2在 m RNA和蛋白表达明显下降。　结论　 TNF和 bcl- 2 ASPO在诱导 HL- 6 0细胞凋亡中可能存在协同作用 ,为血液肿瘤的联合治疗提供了新的途径     

人参皂苷Rh2对白血病HL-60细胞凋亡的诱导作用

目的探讨人参皂苷Rh2对人白血病HL-60细胞增殖和凋亡的影响。方法应用MTT法检测人参皂苷Rh2对HL-60细胞增殖的影响，采用DNA的片段化实验，观察人参皂苷Rh2对HL-60细胞凋亡的影响。结果G—Rh2能明显抑制HL-60细胞增殖，呈浓度依赖性关系；人参皂苷Rh2能明显诱导HL-60细胞凋亡，呈浓度和时间依赖效应，DNA的琼脂糖凝胶电泳分析可见凋亡特征性的DNA梯状图谱。结论G—Rh2主要通过有效抑制HL-60细胞增殖并诱导其凋亡从而发挥其抗白血病效应。     

尼莫地平对HL-60细胞凋亡的影响及其机制

目的研究尼莫地平(NMDP)对HL-60细胞的作用及其机制。方法取对数生长期HL-60细胞并调整细胞浓度为5×108/L,分为对照组和实验组,置24孔板培养,每孔加入HL-60细胞培养液1.5 mL,实验组各孔再加NMDP 0.01 g/L。分别培养0、8、16、24 h,通过倒置显微镜观察细胞的动态变化;采用Giemsa染色光学显微镜下观察细胞的形态学变化;琼脂糖凝胶电泳检测DNA的碎片;流式细胞仪检测DNA含量;细胞免疫组化方法检测细胞凋亡相关基因bcl-2、bax的蛋白表达。结果实验组细胞从培养8 h起,可见不同程度的变形、出泡,细胞和小泡仍保持膜的完整性,随着培养时间延长,出泡细胞增加,细胞体积变小,部分细胞裂解;对照组细胞一直无形态学变化。Giemsa染色可见实验组细胞核膜裂解,染色质呈紫红色或蓝紫色,分割成块状,浓缩、靠近核膜,呈边集现象,并有典型的凋亡小体形成;对照组细胞保持大小一致,胞内染色质呈紫红色或蓝紫色,分布均匀。DNA凝胶电泳显示,实验组在8、16、24 h出现典型的梯形带。实验组细胞的凋亡率随时间延长而增加,自8 h起与对照组差异有显著意义(t=15.06~20.75,P<0.01)。实验组Bcl-2蛋白表达下降,16、24 h与对照组比较差异有显著意义(t=3.66、5.62,P<0.05);Bax蛋白表达升高,与对照组比较,162、4 h有显著性差异(t=4.13、7.55,P<0.01)。Bcl-2/Bax蛋白表达比值逐渐下降,与对照组比较,8、16、24 h差异皆有显著性(t=5.32~7.76,P<0.05)。结论NMDP可诱导HL-60细胞凋亡。Bcl-2/Bax蛋白比值下降,可能是NMDP诱导HL-60细胞凋亡的机制之一。     

拓扑替康对HL-60细胞凋亡的影响

目的:探讨拓扑替康(TPT)对人髓系白血病细胞株HL-60细胞凋亡的影响.方法:取倍增期的HL-60细胞分组培养,实验组培养液中加入0.15 μmol/L的TPT,空白对照组继续常规培养.分组培养4 h、12 h后分别采用流式细胞仪Annexin V-FITC染色及TUNEL法检测细胞凋亡情况.结果:分组培养4 h后,实验组细胞凋亡率为(28.57±3.16)%,高于空白对照组的(3.12±0.38)%,差异具有统计学意义(t=13.85,P=0.000 2).分组培养12 h后,实验组TUNEL阳性细胞数达38.33%,高于空白对照组的2.67%(χ2=117.08,P<0.05).结论:拓扑替康具有诱导HL-60细胞凋亡的作用.     

C-myc小干扰RNA对HL-60细胞凋亡的影响

目的:研究c-myc小干扰RNA对白血病细胞凋亡的影响,探寻白血病基因治疗的新方法。方法:应用针对c-myc的小干扰RNA转染HL-60细胞48 h后,倒置显微镜下观察细胞形态学变化,琼脂糖凝胶电泳法检测DNA梯形带和流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测细胞凋亡。结果:c-myc小干扰RNA作用后,HL-60细胞生长受抑,可见细胞核固缩,胞桨内出现凋亡小体。阴性对照组和空白对照组没有明显变化。DNA电泳干扰组出现典型的梯状条形带,对照组未出现明显凋亡梯形带。流式细胞仪分析干扰组细胞凋亡率可达26.21±0.75%,明显高于阴性对照组的4.58±0.48%和空白对照组的3.76±0.30%。结论:c-myc小干扰RNA对HL-60细胞有明显的抑制作用,可抑制细胞增殖,导致细胞凋亡,有望成为白血病靶向基因治疗的新工具。     

凋亡相关基因survivin、bcl-2和bax的表达在维生素K2诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的探讨维生素K2(VK2)诱导急性早幼粒细胞白血病(AML)细胞株HL-60细胞凋亡的作用机制。方法采用透射电镜技术观察VK2处理后细胞结构变化;流式细胞术Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡;PI染色分析细胞周期变化;RT-PCR技术检测凋亡相关基因survivin、bc l-2和bax的表达。结果40μmol.L-1VK2作用HL-60细胞72 h后,电镜下可见典型细胞凋亡的形态改变;流式细胞术结果显示随着VK2浓度的增加和作用时间的延长细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度、时间依赖,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);同时S期细胞逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多(P<0.05),细胞被阻滞在G0/G1期;且随着VK2浓度的增加抗凋亡基因survivin、bc l-2表达明显下调(P<0.05),而促凋亡基因bax表达无显著差异(P>0.05)。结论VK2能诱导HL-60细胞发生凋亡,抗凋亡基因survivin和bc l-2 mRNA下调可能是VK2诱导HL-60细胞发生凋亡的机制之一。     

三七皂苷R1诱导HL-60细胞凋亡中survivin、bcl-2的表达

[目的]探讨三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞凋亡作用及其机制。[方法]光镜下观察三七皂苷R1作用下HL-60细胞形态,采用MTT比色法观察三七皂苷R1对人白血病细胞株HL-60细胞增殖的抑制作用。采用流式细胞术检测细胞凋亡改变,并以RT-PCR检测凋亡调节基因survivin、bcl-2mRNA的表达。[结果]三七皂苷R175-1200μg.ml-1可抑制人白血病细胞株HL-60细胞的生长,且呈时间和浓度依赖性。三七皂苷R1作用后人白血病细胞株HL-60细胞呈现凋亡特征,流式细胞术显示凋亡细胞比例升高,凋亡率随作用剂量的增高而升高。RT-PCR检测可见三七皂苷R1150μg/ml作用下survivin、bcl-2mRNA表达减少。[结论]三七皂苷R1能诱导人白血病细胞株HL-60细胞凋亡,其作用可能与凋亡调节基因survivin、bcl-2的下调有关。     

人端粒酶逆转录酶反义寡核苷酸联合顺铂对HL-60细胞增殖及凋亡的影响

目的:研究人端粒酶逆转录酶基因反义寡核苷酸(ASODN)联合顺铂(CDDP)对HL-60细胞的增殖抑制及凋亡诱导作用.方法:选用20 μmol/L ASODN和正义寡核苷酸(SODN)封闭HL-60细胞hTERT基因的表达,作用48 h后加用2.5 μmol/L,5 μmol/L CDDP,继续作用于HL-60细胞48 h;台盼蓝拒染法检测各组细胞的增殖抑制情况,姬姆萨染色后倒置显微镜观察凋亡细胞形态;分别采用流式细胞仪、TUNEL法检测细胞凋亡.结果:hTERT ASODN联合CDDP组HL-60细胞的增殖明显抑制,与hTERT SODN联合CDDP组、单用CDDP组比较差异有统计学意义(P<0.05);hTERT ASODN联合5 μmol/L CDDP与hTERT ASODN联合2.5 μmol/L CDDP比较差异有统计学意义(P<0.05);而SODN联合CDDP与单用CDDP比较,差异无统计学意义(P>0.05).姬姆萨染色后,hTERT ASODN联合CDDP组可见大量凋亡小体,而单用CDDP组仅见少量凋亡小体.流式结果与TUNEL结果一致:hTERT ASODN联合CDDP组对HL-60细胞具有明显诱导凋亡作用,同其余各组比较差异有统计学意义(P<0.05);而SODN联合CDDP组与单用CDDP组比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论: hTERT ASODN联合低浓度CDDP能明显抑制HL-60细胞的增殖,并提高细胞凋亡率.     

HL-60细胞分化与凋亡关系的初步研究

目的探讨HL-60细胞分化与凋亡的初步关系,指导白血病的联合化疗.方法NBT还原试验检测细胞分化、流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡及bcl-2、c-myc蛋白的表达,观察分别经ATRA、TPA诱导分化的HL-60细胞对VP-16的凋亡反应.结果与对照组相比,经ATRA、TPA分化的HL-60细胞bcl-2、c-myc蛋白表达都明显降低(P＜0.05),其中以TPA下调c-myc蛋白的幅度最大(76%);对VP-16的诱导反应,经TPA分化的HL-60细胞凋亡率明显减少(P＜0.05),而经ATRA分化的细胞凋亡率则无明显变化(P＞0.05).结论HL-60细胞对VP-16的凋亡诱导反应与bcl-2、c-myc蛋白的下调表达程度有关;分化诱导剂ATRA与低剂量的VP-16联合应用可望改善AML的化疗效果,并且以后者先用效果更好.     

bcl-2反义寡核苷酸对白血病细胞药物敏感性的影响

目的 探讨bcl-2基因反义寡核苷酸(ASODN)对白血病细胞药物敏感性的影响。方法 MTT法测bcl-2 ASODN对U937细胞足叶乙甙(VPl6)敏感性，计算细胞存活率，绘制剂量-效应曲线，直线回归求半数致死量IC50；DNA电泳、AO／EB荧光染色测定细胞凋亡率。结果 VP16与bcl-2 ASODN联合作用比单独用VP16或VP16与SODN细胞存活率显著减少。bcl-2 ASODN作用后VP16对U937细胞的IC50由7．93μoml／L降至2．67μoml／L。与单独VP16作用组相比，bcl-2 ASODN与VP16联合作用后梯状DNA片段明显增加，细胞凋亡率增高。结论 bcl-2 ASODN能促进VP16诱导的白血病细胞凋亡，提高白血病细胞对VP16的敏感性。bcl-2反义寡核苷酸在克服化疗药物耐药性方面，具有良好的应用前景。     

反义bcl─2RNA促进HL─60细胞的凋亡

目的：分析反义ｂｃｌ－２对ＨＬ－６０细胞凋亡的作用，为进一步研究凋亡机制打基础．方法：我们用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ将插有反义ｂｃｌ－２基因片段的重组逆转病毒载体ｐＤＯＲ－ＡＢ转染ＨＬ－６０细胞，用核酸打点杂交方法检测转染效果和载体表达效果，用流式细胞仪检测ｂｃｌ－２的改变及细胞周期的变化，用光镜和电镜观察转染细胞的形态学改变，并用转染的细胞对足叶乙甙敏感性的变化间接证明反义ｂｃｌ－２的作用．结果：ｐＤＯＲ－ＡＢ转入ＨＬ－６０细胞并表达ｂｃｌ－２反义ＲＮＡ；细胞内Ｂｃｌ－２蛋白含量明显下降；细胞周期分析可见凋亡峰；电镜下可见凋亡细胞；ＤＮＡ凝胶电泳出现梯状电泳带．结论：反义ｂｃｌ－２瞬时表达可促进ＨＬ－６０细胞的凋亡，ｂｃｌ－２在ＨＬ－６０细胞凋亡的调节中起重要作用     

bcl-2硫代反义寡核苷酸对U937细胞药物敏感性及细胞凋亡的影响

目的　 bcl- 2是调控细胞死亡的重要基因之— ,它编码的蛋白质通过阻止细胞凋亡而延长细胞存活。多血液系统的恶性肿瘤都有 bcl- 2表达异常。肿瘤细胞 bcl- 2高表达与其化疗耐药性有关。实验采用针对 bcl- 2 m RNA阅读框起始部位的 18碱基硫代反义寡核苷酸 (ASODN)作用于较高表达bcl- 2的 U937细胞 ,探讨 bcl- 2 ASODN U937细胞药物敏感性及细胞凋亡的影响。　方法　 MTT比色法检测 bcl- 2硫代寡核苷酸及与 VP16联合应用对 U937细胞的毒性作用 ;半定量 RT- PCR检测 bcl- 2 m RNA表达情况 ;免疫细胞化学染色和流式细胞仪检测 bcl…