甲嘎松汤对肝损伤的保护作用研究

目的:研究藏药甲嘎松汤对整体动物急慢性肝损伤模型及体外L02细胞氧化应激损伤模型的保护作用,并进行初步机制研究。方法:制备5种小鼠急性肝损伤模型、1种大鼠慢性肝损伤模型,观察甲嘎松汤对动物血清AST、ALT活性及四氯化碳致小鼠急性肝损伤的肝组织中CAT、GSH活性;采用RT-PCR技术,测定慢性酒精性肝损伤肝脏缺氧诱导因子-1 mRNA的表达。先给予Nrf2激活剂t-BHQ干预12h,再给予甲嘎松汤的含药血清作用12h后,利用终浓度为100mU/ml的葡萄糖氧化酶(Glucose Oxi-dase,GO)诱导人肝细胞L02氧化应激损伤模型,检测细胞培养上清液中AST、ALT活性;四甲基氮唑(MTT)比色法检测细胞活力。结果:在6种肝损伤动物中均可见甲嘎松汤在0.66g/kg剂量下的AST、ALT活性比模型组显著降低;显著升高四氯化碳引起的小鼠急性肝损伤模型中抗氧化酶CAT、抗氧化剂GSH活性;在一定程度上降低模型组HIF-1α因子mRNA表达,但与模型组比较无统计学差异。在细胞模型中,20%甲嘎松汤含药血清组与t-BHQ组均能于不同时间点显著升高细胞活力;显著降低AST,ALT活性;与t-BHQ组比较,20%甲嘎松汤含药血清+t-BHQ组于不同时间点上述指标有明显改善,并且对单用t-BHQ作用8小时后表现出的肝细胞活力降低有改善作用。结论:甲嘎松汤有一定的保肝作用,与Nrf2激活剂t-BHQ有协同效应,能纠正Nrf2持续激活导致的细胞损伤,说明甲嘎松汤保肝作用可能与维持Nrf2在细胞内的动态平衡有关。     

三味干姜散对慢性肝损伤大鼠Nrf2、Bach1表达的影响

目的 研究三味干姜散对慢性肝损伤大鼠核因子NF-E2相关因子（Nrf2）、BTB-CNC同源体1（Bach1）表达的影响,初步探讨三味干姜散调节机体氧化应激抗肝损伤的作用机制。方法 以四氯化碳（CCl4）诱导慢性肝损伤大鼠模型,灌胃给予三味干姜散（660 mg·kg-1）6周,测定大鼠肝脏、脾脏和胸腺指数;苏木精-伊红（HE）染色法观察肝脏病理变化;检测血清谷丙转氨酶（ALT）、谷草转氨酶（AST）,肝组织匀浆中丙二醛（MDA）含量和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性;Western-Blot法测检Nrf2、Bach1、细胞核内与胞浆蛋白、血红素氧合酶1（HO-1）总蛋白;实时RT-PCR法检测Nrf2、Bach1和HO-1 mRNA水平。结果 三味干姜散能改善CCL4所致肝损伤的病理表现,降低血清ALT、AST水平和肝组织匀浆MDA水平,提升GSH-PX活性（P＜0.01,P＜0.05）;提高Nrf2核转位率与核Nrf2/Bach1比值,提高Nrf2的蛋白及mRNA的表达,降低Bach1蛋白及mRNA的表达,并使HO-1 mRNA及总蛋白水平提高（P＜0.01）。结论 三味干姜散可通过改变Nrf2核转位率与核Nrf2/Bach1比值调控Nrf2与Bach1在肝细胞中的表达,促进机体氧化应激的调节与抗肝损伤。     

甲嘎松汤HPLC特征指纹图谱

目的: 建立甲嘎松汤的HPLC特征指纹图谱。 方法: 选择6-姜辣素和去氢二异丁香酚为对照成分,采用HPLC测定,色谱条件为Platisil ODS色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相乙腈-甲醇-0.3%磷酸水梯度洗脱,检测波长274 nm,柱温25 ℃,流速1.0 mL·min^-1,进样量10 μL。利用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"2004年A版分析10批甲嘎松汤样品的HPLC指纹图谱。 结果: 共获得15个共有峰,指认了其中2个共有峰分别为6-姜辣素和去氢二异丁香酚。10批样品的指纹图谱相似度均>0.9,表明相关性较好,所含化学成分基本一致。 结论: 该法操作简便、灵敏度高、准确可靠,为甲嘎松汤的质量评价提供科学依据。     

甲嘎松汤提取工艺的正交设计法优选

目的建立同时测定甲嘎松汤中两种成分含量的高效液相色谱法,采用正交设计法优选甲嘎松汤中有效成分的提取工艺。方法以6-姜辣素和去氢二异丁香酚的总含量为指标,采用正交实验,对提取时间、乙醇体积分数及乙醇用量进行考察,优化提取条件。结果最佳提取工艺条件为加30倍90%的乙醇,超声30 min。结论该提取工艺合理,有效成分提取效率较高。     

葛根芩连汤及配伍调控Nrf2/NQO1信号通路抑制溃疡性结肠炎大鼠氧化应激损伤

目的 探讨葛根芩连汤治疗溃疡性结肠炎（UC）大鼠的可能机制,同时讨论缺少药味对葛根芩连汤疗效的影响。方法 采用自由饮用5%葡聚糖硫酸钠盐水溶液诱导UC大鼠模型,雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、西药组（柳氮磺吡啶肠溶片,350 mg·kg^-1）、葛根芩连汤全方组（17 g·kg^-1）、全方去甘草组（17 g·kg^-1）、全方去葛根组（17 g·kg^-1）、葛根甘草组（17 g·kg^-1）和黄芩黄连组（17 g·kg^-1）。用1,1-二苯基-2-苦肼基（DPPH）、2,2-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二铵盐（ABTS）和荧光漂白后恢复技术（FRAP）法评估葛根芩连汤及其不同配伍组体外抗氧化活性;通过比较大鼠体质量变化和记录结肠长度、观察结肠剖面和苏木素-伊红（HE）染色病理组织切片评估给药治疗后各组大鼠结肠组织损伤程度;比色法测定大鼠血清中髓过氧化物酶（MPO）、脂质过氧化物（LPO）、丙二醛（MDA）、总超氧化物歧化酶（T-SOD）、过氧化氢酶（CAT）和还原型谷胱甘肽（GSH）水平变化;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）和蛋白免疫印迹法（Western blot）分别检测结肠组织中核因子E₂相关因子2（Nrf2）、醌氧化还原酶1（NQO1）和血红素氧合酶-1（HO-1） mRNA和蛋白表达的变化。结果 与正常组比较,模型组大鼠结肠黏膜组织坏死,炎症浸润,血清中过氧化物MPO、LPO和MDA含量显著上升（P<0.01）,抗氧化酶T-SOD、CAT和GSH活性显著下降（P<0.01）,Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA表达均呈下降趋势,Nrf2蛋白表达显著下降（P<0.01）,NQO1和HO-1蛋白表达呈下降趋势;与模型组比较,葛根芩连汤及配伍组能改善UC大鼠结肠组织病理损伤和形态结构,显著降低大鼠血清中过氧化物MPO、LPO和MDA水平（P<0.05）,提高无葛根组抗氧化酶T-SOD,无甘草组、黄芩黄连组CAT和GSH（P<0.01）活性,增加结肠组织中Nrf2、NQO1和HO-1 mRNA和蛋白的相对表达,全方组差异明显（P<0.05）。结论 葛根芩连汤对UC大鼠病理损伤具有恢复作用,其机制可能与激活Nrf2信号通路、抑制氧化应激反应有关。葛根芩连汤组方中缺少君药葛根或仅有臣药黄芩和黄连对其治疗UC有较大影响。研究结果可为中药复方临床合理应用及复方配伍机制研究做出有益探索。     

黄芩汤通过Nrf2信号通路对Caco-2细胞抗氧化应激作用的机制

目的：以Caco-2细胞为载体,结合基因干扰(RNAi)技术,通过体外实验进一步验证黄芩汤基于核因子E2相关因子2(Nrf2)通路发挥的抗氧化应激作用。方法：将处于对数生长期的Caco-2细胞,经siRNA转染,构建siRNA Caco-2细胞;将正常Caco-2细胞和siRNA Caco-2细胞与不同浓度的黄芩汤共同孵育后,提取RNA和蛋白,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)技术检测血红素氧合酶-1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)、谷胱甘肽巯基转移酶(GST)、接头蛋白Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)及Nrf2 mRNA和蛋白的表达;同时,采用比色法和探针法检测各组细胞中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的活力及丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)的表达水平。结果：与空白组比较,仅有黄芩汤400 mg·L^-1组与萝卜硫素(SFN)组可降低正常Caco-2细胞内ROS、MDA含量(P<0.01);而黄芩汤各剂量组与SFN组细胞内SOD与GSH-Px...     

基于p62/Keap1/Nrf2信号通路探讨香砂愈疡汤对胃溃疡大鼠氧化损伤的保护作用

目的:探讨香砂愈疡汤对乙酸诱导胃溃疡模型大鼠的保护作用并探讨其作用机制,为临床用药提供实验依据.方法:将60只SPF级Wistar大鼠随机分成6组:空白组,模型组,香砂愈疡汤高、中、低剂量组,奥美拉唑组.通过乙酸诱导制作胃溃疡大鼠模型,香砂愈疡汤高、中、低剂量组分别灌胃28,14,7 g·kg-1香砂愈疡汤溶液,奥美拉...     

电针调控PI3K/Nrf2/HO-1通路对T2DM大鼠肾脏保护作用的研究

摘要：目的:观察电针对糖尿病大鼠肾脏磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素氧合酶-1(HO-1)通路的影响,探讨其对肾脏的保护机制。方法:将18只雄性Wistar大鼠随机分为空白组、模型组和电针组,每组6只。本研究采用2%链脲佐菌素溶液(35 mg/kg)注射于腹腔并饲以高糖高脂饲料构建2型糖尿病大鼠模型。电针组取双侧“胃脘下俞”“脾俞”“足三里”“三阴交”干预,于同侧“足三里”“胃脘下俞”给予电针刺激,1次/d,连续6周。于造模前、电针前后测量空腹血糖(FBG);酶比色法检测血清丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)及尿素(UREA)含量;荧光免疫法检测血清活性氧(ROS)含量;HE染色观察肾脏形态学变化;蛋白免疫印迹法检测肾脏PI3K、蛋白激酶B(Akt)、Nrf2和HO-1蛋白表达情况。结果:干预前,与空白组比较,模型组、电针组大鼠FBG均升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。干预6周后,与空白组比较,模型组大鼠血清FBG、MDA、ROS及UREA水平均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01),血清SOD含量、肾脏PI3K、Akt、Nrf2及HO-1蛋白表达均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,电针组大鼠血清FBG、MDA、ROS及UREA水平均显著降低,差异具有统计学意义(P<0.01);血清SOD含量、肾脏PI3K、Akt、Nrf2及HO-1蛋白表达均显著升高,差异具有统计学意义(P<0.01)。HE染色显示模型组较空白组病理改变明显,电针组整体情况优于模型组。结论:电针可明显降低2型糖尿病大鼠氧化应激水平并缓解大鼠肾脏内部形态的病理性改变,对肾脏的保护机制或与激活PI3K/Nrf2/HO-1通路相关。     

藏红花素调控Nrf2/HO-1通路改善血管性认知障碍大鼠学习记忆能力实验研究

目的:探讨藏红花素对血管性认知障碍(VCI)大鼠学习记忆能力的影响及机制。方法:通过反复夹闭双侧颈总动脉建立VCI大鼠模型,假手术组暴露双侧颈总动脉但不夹闭; 将VCI模型大鼠随机分为模型组、藏红花素低剂量组(10 mg/kg)、藏红花素中剂量组(20 mg/kg)、藏红花素高剂量组(40 mg/kg)和多奈哌齐组(0.5 mg/kg)。连续给药4周后,评测大鼠学习能力和记忆能力,观察海马体CA1区病理性变化和神经元凋亡状况; 检测海马体CA1区氧化应激指标和炎症因子水平,Western blot法检测核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)、核因子-κB(NF-κB)蛋白表达。结果:藏红花素或多奈哌齐治疗4周可提高VCI大鼠学习能力和记忆能力,改善海马体CA1区病变和神经元凋亡状况,提高超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活力,降低丙二醛(MDA)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)水平,上调Nrf2、HO-1表达,下调NF-κB表达(P<0.05)。上述指标除GSH-Px活力和MDA、IL-1β水平外,藏红花素对其他指标的作用均表现出剂量依赖性; 除GSH-Px活力、IL-1β水平外,藏红花素高剂量对其他指标的作用优于多奈哌齐(P<0.05)。结论:藏红花素可能通过激活Nrf2/HO-1通路降低海马体氧化应激损伤,对VCI大鼠学习记忆能力有改善作用。     

寿胎丸通过调控Nrf2信号通路减轻人绒毛膜滋养层细胞的氧化损伤治疗复发性流产

目的 研究寿胎丸含药血清通过核因子E₂相关因子2（Nrf2）信号通路对过氧化氢（H₂O₂）损伤的人绒毛膜滋养层细胞（HTR-8/Svneo）的保护作用,并阐明其可能的机制。方法 细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测不同浓度的H₂O₂溶液（25、50、100、200、400 μmol·L^-1）对HTR-8/Svneo增殖的抑制作用,CCK-8法筛选含药血清的最佳浓度。将细胞分为空白组、模型组、地屈孕酮组、寿胎丸组,CCK-8法检测含药血清对H₂O₂诱导的HTR-8/Svneo细胞增殖活力的影响,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测各组细胞内活性氧（ROS）含量;蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核Nrf2、血红素加氧酶-1（HO-1）、醌氧化还原酶1（NQO1）、胱天蛋白酶-3（Caspase-3）、B细胞淋巴瘤-2（Bcl-2）蛋白表达;细胞免疫荧光检测Nrf2、Bcl-2的表达;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测Nrf2、Caspase-3、Bcl-2相关X蛋白（Bax）mRNA的表达。结果 CCK-8法筛选H₂O₂最佳造模浓度为50 μmol·L^-1,含药血清的最佳体积分数为10%。与空白组比较,模型组细胞的增殖活力显著降低（P<0.01）,细胞内ROS含量显著升高（P<0.01）,Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3、Bax蛋白表达显著上升（P<0.01）,Nrf2 mRNA表达显著降低（P<0.01）,Caspase-3、Bax mRNA的表达明显升高（P<0.05,P<0.01）;与模型组比较,寿胎丸组细胞的增殖活力显著上升（P<0.01）,细胞内ROS含量显著降低（P<0.01）,Nrf2、HO-1、NQO1、Bcl-2蛋白表达明显上升（P<0.05,P<0.01）,Caspase-3、Bax蛋白表达明显下降（P<0.05,P<0.01）,Nrf2 mRNA表达明显升高（P<0.05）,Caspase-3、Bax mRNA的表达明显降低（P<0.05,P<0.01）。结论 寿胎丸含药血清可以通过激活Nrf2信号通路来抑制H₂O₂诱导的细胞凋亡,对人绒毛膜滋养层细胞具有一定的保护作用。     

栝楼桂枝颗粒激活Nrf2信号通路减轻脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激损伤作用

目的:探讨栝楼桂枝颗粒对脑缺血再灌注损伤大鼠氧化应激的保护作用及分子机制。方法:建立大鼠脑缺血再灌注损伤模型,栝楼桂枝颗粒灌胃给药后,核磁共振成像(magnetic resonance imaging,MRI)检测大鼠脑梗死面积,化学荧光法测定脑组织活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,硫代巴比妥酸法(TBA)测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,水溶性四唑蓝法(WST)测定超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性,紫外法测定过氧化氢酶(catalase,CAT)和比色法测定谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)活力;蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量PCR法(Realtime PCR)分别检测脑组织中核转录因子-E2相关因子2(NF-E2-related factor 2,Nrf2),细胞质中血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1),醌氧化还原酶1[NAD(P)H:quinone oxidoreductase 1,NQO1]及Kelch样ECH联合蛋白1(Kelch-like ECHassociated protein1,Keap1)的蛋白表达和mRNA相对含量。结果:栝楼桂枝颗粒能够明显减小大鼠脑梗死面积,减少ROS和MDA的产生(P0.01),增加SOD,CAT和GSH-Px活力(P0.01)。此外,栝楼桂枝颗粒能够上调脑组织中Nrf2,HO-1,NQO1及Keap1的表达。结论:栝楼桂枝颗粒可能通过上调Nrf2信号通路,从而抑制脑缺血再灌注损伤引起的氧化应激反应。     

Nrf2参与MSCs调节大鼠梗死心肌氧化应激作用的实验研究

目的 探讨间充质干细胞（MSCs）移植对梗死心肌组织氧化应激反应的调节作用及其机制.方法 建立心肌梗死大鼠模型,利用随机数字表进行随机化分组,分为对照组（n=20）、MSC移植组（n=20）和MSC移植＋HO-1抑制剂组（n=20）.以密度梯度离心并贴壁培养获得骨髓源MSCs,于心肌梗死模型建立后经心肌局部多点注射MSCs悬液;细胞移植后不同时间点以测定血浆以及心肌梗死和梗死交界区组织超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷酰甘肽（GSH）和丙二醛（MDA）水平;Western Blot检测Nrf2和HO-1蛋白表达的变化.结果 细胞移植后8 h,3组大鼠梗死组织中SOD、GSH表达量开始下降,72 h时达到最低,以后逐渐开始回升,至两周时恢复接近心肌梗死前水平;同时,细胞移植后梗死组织中脂质氧化终产物MDA水平开始增高,3组均在72 h达到高峰（P〈0.05）,以后开始下降,至2周时降至梗死前水平.细胞移植后各时间点,与对照组比较,MSC移植组SOD和GSH含量下降幅度减小、恢复较快（P〈0.05）,且MDA含量减少（P〈0.05）.对照组梗死心肌组织中Nrf2及HO-1蛋白表达轻微升高,72 h时最显著;而MSC移植组中Nrf2和HO-1蛋白表达显著增高,且升高时间提前至细胞移植后24～72 h,且与对照组比较,细胞移植后24 h和72 h,Nrf2和HO-1表达水平均高于对照组（P〈0.05）;MSC移植＋HO-1抑制剂组与对照组比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 心肌梗死后移植MSCs可能通过促进局部Nrf2及其下游抗氧化酶靶基因HO-1蛋白表达而调节梗死心肌的氧化应激反应,进而减轻氧化应激诱导的心肌损伤.     

西洋参胶囊对手机频率电磁辐射大鼠肝脏组织氧化损伤及Nrf2蛋白表达的影响

目的观察西洋参胶囊对900 MHz手机频率电磁辐射大鼠肝脏组织氧化损伤和肝Nrf2蛋白表达的影响。方法40只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、水飞蓟宾组和西洋参组,每组10只。正常组不接受辐射,模型组、水飞蓟宾和西洋参组每天暴露于900 MHz手机频率辐射4 h,连续12天。水飞蓟宾组和西洋参组辐射同时分别灌服水飞蓟宾胶囊混悬液和西洋参胶囊混悬液（1 mL/200 g体重）,正常组和模型组每日灌服生理盐水。采用HE染色观察肝脏组织形态学变化,比色法检测大鼠肝组织MDA、SOD、GSH、GSH-PX含量,免疫组化法、Western blot 检测大鼠肝Nrf2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠肝细胞核缩小或部分消失,肝组织MDA含量及Nrf2蛋白表达升高（P〈0.05,P〈0.01）,SOD、GSH含量降低（P〈0.05）。与模型组比较,水飞蓟宾和西洋参组大鼠肝细胞核固缩均明显减轻,接近正常;水飞蓟宾组MDA含量及Nrf2蛋白表达降低（P〈0.05）,SOD、GSH、GSH-PX含量升高（P〈0.05）;西洋参组MDA含量及Nrf2蛋白表达降低（P〈0.05）,SOD、GSH含量显著性增加（P〈0.01,P〈0.05）。结论900 MHz手机频率电磁辐射可影响大鼠肝细胞Nrf2表达,致氧化损伤,引起肝细胞形态异常;水飞蓟宾和西洋参可促进肝细胞形态的修复,其机制可能与影响大鼠肝细胞Nrf2表达,减轻氧化损伤有关。     

小柴胡颗粒激活Nrf2通路抗TAA致大鼠急性肝损伤的机制探讨

目的:观察小柴胡颗粒对硫代乙酰胺(TAA)致大鼠急性肝损伤(ALI)的治疗作用,探讨核转录因子(NF)-E2相关因子2(Nrf2)抗氧化损伤通路在其中的作用。方法:SD大鼠随机分为空白组,模型组,小柴胡颗粒低、中、高剂量组(1,2,4 g·kg-1),大鼠给予250 mg·kg-1TAA腹腔注射2 d制备肝损伤模型,从第3天各组分别给予等量双蒸水和不同剂量小柴胡颗粒,灌胃2周。末次给药后24 h取材,肝组织行苏木素-伊红(HE)染色;比色法测定血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT),天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性及组织中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA)水平;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2通路相关mRNA表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2通路相关蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组ALT,AST,MDA水平显著增高,T-SOD活性明显降低(P 0. 05,P 0. 01),病理学呈现大片炎性浸润表现,肝脏组织Nrf2,Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1),醌氧化还原酶1(NQO1),血红素加氧酶-1(HO-1),谷氨酸半胱氨酸合成酶催化亚基(GCLC),谷氨酸半胱氨酸合成酶调节亚基(GCLM) mRNA及蛋白表达水平均明显下降(P 0. 05,P 0. 01);与模型组比较,小柴胡颗粒各剂量组ALT,AST,MDA水平均明显降低,T-SOD活性明显升高(P 0. 05,P 0. 01),病理结果示大鼠肝脏病变范围与严重程度均有不同程度改善,肝脏组织Nrf2,Keap1,NQO1,HO-1,GCLC,GCLM的mRNA及蛋白表达水平均明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:小柴胡颗粒可能通过上调Nrf2信号通路上下游分子的表达,对TAA致急性肝损伤大鼠起到治疗作用。     

小续命汤改善心肺复苏后大鼠神经功能及脑保护作用

[目的]研究小续命汤对心肺复苏后大鼠的脑保护作用及机制研究.[方法]将63只SPF级SD雄鼠按照随机数字表分为对照组(8只)和建模组(55只).建模大鼠使用经皮心外膜电刺激法建立大鼠心脏骤停模型,将建模成功大鼠进行心肺复苏,当大鼠恢复自主循环表示大鼠心肺复苏建模成功.将建模成功的大鼠随机分为5组,小续命汤高、中、低剂量...     

升清降糖合剂对氧化损伤胰岛β细胞Bcl-2、Bax、Akt表达的影响

目的:研究升清降糖合剂(SQ)对氧化损伤胰岛β细胞凋亡的保护作用,探讨其对凋亡蛋白Bcl-2和Bax、Akt蛋白表达的影响。方法:H2O2诱导胰岛细胞氧化损伤模型,流式细胞术测定胰岛细胞凋亡率,以荧光免疫法检测细胞凋亡蛋白Bcl-2和Bax的表达,免疫印迹测定细胞Akt磷酸化表达。结果:模型组细胞凋亡率增高,达(35.18±2.41)%,与正常组比较有差异(P<0.01),与SQ保护组比较有差异(P<0.01)。模型组细胞内Bax荧光表达较正常组增加(P<0.05);SQ保护组Bcl-2荧光表达上升,Bax荧光表达下降,与模型组比较,均有统计学差异(P<0.05)。对于胰岛细胞瘤株RINm5F,模型组磷酸化Akt蛋白表达减少,与正常组比较有统计学差异(P<0.05),与保护组比较有统计学差异(P<0.01);对于原代胰岛,模型组磷酸化Akt蛋白减少,与正常组比较有统计学差异(P<0.05),与保护组比较有统计学差异(P<0.05)。结论:升清降糖合剂可降低氧化损伤胰岛β细胞凋亡率,上调Bcl-2,抑制Bax蛋白表达,促进Akt磷酸化。升降糖合剂抗氧化和抗凋亡机制与调节凋亡蛋白Bcl-2和Bax及PI3K-Akt通路有关。     

基于Nrf2/HO-1信号通路探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠氧化应激反应的影响

目的:以氧化应激损伤为切入点探讨益气活血方对脑缺血损伤大鼠的保护作用。方法:将SD大鼠随机分为模型组,假手术组,尼莫地平组(20 mg·kg~(-1)),益气活血方高、中、低剂量组(2. 916,1. 458,0. 729 g·kg~(-1)),连续灌胃14 d后,采用结扎双侧颈总动脉法建立急性脑缺血损伤模型,透射电镜观察突触超微结构,生化法检测脑匀浆中总超氧化物歧化酶(T-SOD),丙二醛(MDA),乳酸脱氢酶(LDH),谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px),腺嘌呤核苷三磷酸(ATP)酶的水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)和实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)测定大鼠缺血区脑皮层血红素氧化酶-1(HO-1),核因子E2相关因子2(Nrf2)蛋白和m RNA表达。结果:透射电镜观察结果显示益气活血方对脑缺血损伤程度有明显改善作用。与假手术组比较,模型组大鼠脑匀浆MDA水平显著上升,T-SOD,GSH-Px水平显著降低(P 0. 01),LDH,Na+-K~+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶及ATP酶的活性均明显降低(P 0. 05,P 0. 01),脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量以及HO-1,Nrf2 m RNA表达显著降低(P 0. 01)。与模型组比较,益气活血方中、高剂量组可明显降低脑组织中MDA含量,升高T-SOD,GSH-Px的水平(P 0. 05,P 0. 01);益气活血方高剂量组可显著增加LDH,Na+-K+-ATP酶,Ca~(2+)-Mg~(2+)-ATP酶和总ATP酶活性(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方中、高剂量组大鼠脑组织中HO-1,Nrf2蛋白含量明显升高(P 0. 05,P 0. 01),益气活血方高剂量组HO-1,Nrf2 m RNA表达明显升高(P 0. 05,P 0. 01)。结论:益气活血方可能通过Nrf2/HO-1信号通路抑制氧化应激水平实现对脑缺血损伤的保护作用。     

穿山龙水提物调控Keap1/Nrf2通路抗CCl_4诱导小鼠急性肝损伤作用研究

目的:评价穿山龙水提物(AEDN)通过对Keap1/Nrf2信号通路的调控实现对CCl_4诱导小鼠急性肝损伤的保护作用。方法:穿山龙药材经水提取浓缩蒸干即为AEDN,采用紫外可见分光光度法测定提取物中多糖含量。雄性昆明小鼠经AEDN连续灌胃给药7 d后,腹腔注射0. 35%CCl_4橄榄油溶液诱导急性肝损伤,评价AEDN对CCl_4诱导急性肝损伤氧化应激相关指标的影响,并检测AEDN对Keap1/Nrf2信号通路的调控作用。结果:AEDN的提取率为9. 64%,其中多糖含量为(53. 03±0. 70)%。在CCl_4所致小鼠急性肝损伤中,AEDN能显著降低MDA的表达水平,使小鼠肝组织中的SOD、GSH和GSH-Px含量增多。此外,AEDN可显著上调SOD1、SOD2、Nrf2、GST、NQO1和HO-1的蛋白表达,降低Keap1的表达,显著下调iNOS mRNA的表达水平。结论:穿山龙水提物可通过调控Keap1/Nrf2氧化应激信号通路实现对CCl_4诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用。     

异常黑胆质成熟剂及清除剂对氧化应激诱导的淋巴细胞损伤及基因表达影响的比较研究

目的:以H2O2诱导淋巴细胞的氧化应激模型,观察研究异常黑胆质成熟剂及清除剂对活性氧诱导的细胞损伤和Bcl-2蛋白表达的作用效应的差异。方法:用"彗星实验"(SCGE)和MTT法观察异常黑胆质成熟剂及清除剂对氧化应激的淋巴细胞DNA损伤和细胞生长活性的影响;并采用western-blot研究淋巴细胞Bcl-2蛋白的表达。结果:异常黑胆质成熟剂对氧化应激诱导的淋巴细胞DNA和细胞损伤有保护性作用,而清除剂的作用明显不同;异常黑胆质成熟剂能上调Bcl-2蛋白的表达,而清除剂能下调该蛋白的表达,二者的作用相反。结论:异常黑胆质成熟剂及清除剂对氧化应激的淋巴细胞损伤以及细胞凋亡相关基因表达的作用明显不同。