蜂毒素基因重组腺病毒对人肝癌Hep3B细胞增殖抑制作用

采用现代分子生物学手段，将蜂毒素基因重组入复制缺陷型腺病毒骨架，并在蜂毒素基因上游插入特异性的甲胎蛋白启动子，构建成功携蜂毒素基因的重组腺病毒。体外实验证明，该重组腺病毒可特异性地杀伤分泌AFP的肝癌细胞。目的：观察携动物毒素基因重组腺病毒在体外对人肝癌细胞的杀伤作用。方法：用X－gal染色法测定腺病毒介导基因转染的效率；将携蜂毒素基因重组腺病毒转染人肝癌Hep3B细胞，采用细胞计数及MTT法测定转染后对Hep3B细胞的增殖抑制作用，并采用流式细胞术测定基因转染后对增殖的细胞核抗原（PCNA）的影响。结果：重组腺病毒对Hep3B细胞具有较高的转染效率；细胞计数及MTT实验证明携蜂毒素基因重组腺病毒转染后，人肝癌Hep3B细胞的增殖受到明显抑制，PCNA标记指数下降。结论：携蜂毒素基因重组腺病毒在体外可抑制肝癌细胞增殖，抑制PCNA的合成可能是其作用机理之一。     

藏族药翼首草不同药用部位UFLC指纹图谱比较

目的:建立藏族药翼首草不同药用部位的指纹图谱,并比较翼首草地上、地下部位指纹图谱的差异。方法:采用Agilent Proshell 120 SB-C18色谱柱(4.6 mm×100 mm,2.7μm),以乙腈-0.2%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长238 nm,柱温30℃。结果:建立了17个批次翼首草地上、地下部位的指纹图谱,地上部分共提取了15个色谱峰,其中6,7号峰为地下部分缺失峰,并结合对照品对其中的5个色谱峰进行了指认,分别为绿原酸、马钱苷、獐牙菜苷、吴茱萸苷、大花双参苷A。相似度结果表明,地下部分相似度较好,均0.9;地上部分第2,3,7,11,16,17批次相似度0.9,其他批次均0.9。结论:该方法稳定、可靠、重复性好,可用来控制翼首草的质量。     

蜂毒素基因重组腺病毒对人肝癌Hep3B细胞增殖抑制作用

采用现代分子生物学手段,将蜂毒素基因重组入复制缺陷型腺病毒骨架,并在蜂毒素基因上游插入特异性的甲胎蛋白启动子,构建成功携蜂毒素基因的重组腺病毒。体外实验证明,该重组腺病毒可特异性地杀伤分泌AFP的肝癌细胞。目的:观察携动物毒素基因重组腺病毒在体外对人肝癌细胞的杀伤作用。方法:用X-gal染色法测定腺病毒介导基因转染的效率;将携蜂毒素基因重组腺病毒转染人肝癌Hep3B细胞,采用细胞计数及MTT法测定转染后对Hep3B细胞的增殖抑制作用,并采用流式细胞术测定基因转染后对增殖细胞核抗原(PCNA)的影响。结果:重组腺病毒对Hep3B细胞具有较高的转染效率;细胞计数及MTT实验证明携蜂毒素基因重组腺病毒转染后,人肝癌Hep3B细胞的增殖受到明显抑制,PCNA标记指数下降。结论:携蜂毒素基因重组腺病毒在体外可抑制肝癌细胞增殖,抑制PCNA的合成可能是其作用机理之一。     

藏族药翼首草的HPLC指纹图谱分析

目的: 建立藏药翼首草的高效液相色谱指纹图谱,并对不同产地翼首草的指纹特征进行比较,为其质量评价提供新的方法. 方法: 采用HPLC 测定了10 批不同产地的翼首草样品.Boston Symmetrix色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相甲醇-0.1 mol·L^-1乙酸铵水溶液(81:19),流速0.8 mL·min^-1,检测波长210 nm,柱温30℃.并对不同产地样品的相似度进行了比较. 结果: 利用《药典会指纹图谱相似度评价系统(2004A版)》建立了翼首草药材的指纹图谱共有模式,标出了11个特征峰.10批样品的相似度均较高. 结论: 该方法具有较好的重复性、精密度、稳定性,可为翼首草的质量控制提供科学依据.     

胃肠安颗粒通过RUFY3抑制人胃癌MKN45细胞侵袭转移

目的:研究健脾复方胃肠安颗粒抑制人胃癌MKN45细胞侵袭转移的分子机制.方法:体外培养人胃癌MKN45细胞,采用细胞增殖与活性检测(CCK-8)检测不同质量浓度的胃肠安颗粒(600,900,1 200,1 500 mg·L-1)与人胃癌MKN45细胞共孵育24,48,72 h,对细胞增殖活力的影响;采用蛋白免疫印迹法(...     

翼首草总皂苷对体外培养的肿瘤细胞增殖的影响

目的探讨藏药翼首草总皂苷(CYS)对4种肿瘤细胞株的增殖抑制作用。方法用四甲基噻唑蓝(MTT)比色法,观察CYS对肿瘤细胞株SGC-7901、HepG2、AGS、MBA-MD-231增殖的影响。结果 CYS对4种肿瘤细胞的增殖均有不同程度的抑制作用,IC50分别为12.22,1.01,1.27和10.03μg/m l。结论 CYS具有抑制肿瘤细胞增殖的作用。     

中医药抑制肿瘤侵袭转移的IL-8-EMT调控机制研究进展

上皮间质转化(EMT)是肿瘤细胞侵袭与转移的关键步骤,现代研究发现白介素-8(IL-8)与EMT密切相关,其通过ERK、AKT、AKT1信号通路和IL-8/CXCR1信号轴参与EMT的进程。研究表明中医药能有效抑制肿瘤侵袭转移,近年来研究发现IL-8、EMT调控是中医药抑制肿瘤侵袭与转移的关键机制,中药干预不仅可以通过下调IL-8表达,而且还可以抑制甚至逆转EMT来抑制肿瘤的侵袭转移,更有研究证实中医药可以调控IL-8诱导下肿瘤EMT进程。     

不同浓度槲皮素对人肝癌细胞株Hep3B、Huh7细胞凋亡的影响

目的 观察不同浓度槲皮素对人肝癌细胞株Hep3B、Huh7凋亡的影响.方法 将人肝癌细胞株Hep3B、Huh7分别种植于96孔板中,每孔2×105个细胞,设6个复孔,放入37℃、5％CO2培养箱中培养至贴壁生长.加入不同浓度槲皮素(0、10、50、100 μM)干预,48h后用胰蛋白酶收集细胞,利用流式细胞仪分析不同浓度槲皮素干预下Hep3B、Huh7细胞周期分布情况.结果 槲皮素浓度为10、50、100 μM时,Hep3B和Huh7在Pre-G0期随浓度增加所占百分比升高,并且以100 μM时所占百分比最高(P＜0.01),而在不同浓度槲皮素干预下的G1期、S期和G2/M期时Hep3B和Huh7所占百分比显著降低(P＜0.01). 结论 槲皮素可诱导人肝癌细胞株Hep3B、Huh7的凋亡,并且以浓度为100μM时效果最好.     

从细胞上皮-间质转化角度探讨从痰论治胃癌侵袭转移

胃癌原发灶侵袭和转移是导致患者生存质量下降及短期内死亡的主要原因,如何更早期更及时防治胃癌侵袭转移是目前研究的重点。研究证实细胞上皮-间质转化（EMT）是肿瘤侵袭转移的重要前提。根据前期研究中运用金龙蛇制剂从痰论治胃癌结果,从细胞上皮-间质转化角度来探讨从痰论治胃癌侵袭转移将具有明确的现实意义。     

基于血清代谢组学的藏族药翼首草提取物治疗类风湿性关节炎的作用机制研究北大核心CSCD

该研究基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF/MS)探讨藏族药翼首草对完全弗氏佐剂诱发的佐剂性关节炎(AA)模型大鼠血清代谢组的影响。AA模型造模成功后,给药30 d,取大鼠血清,处理后采集UPLC-Q-TOF-MS谱,并用主成分分析(PCA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)的方法对其进行分析。结果显示,与对照组比较,模型组大鼠血清中12个生物标志物含量均显著升高(P<0.05),而其他9个生物标志物含量显著降低(P<0.05);翼首草提取物给药组可使上述21个中的19个生物标志物回调到一定范围;通路富集显示,这些标志物主要涉及缬氨酸、亮氨酸和异亮氨酸降解,花生四烯酸代谢,精氨酸和脯氨酸代谢,甘油磷脂代谢,初级胆汁酸生物合成,胆汁酸生物合成,色氨酸代谢,不饱和脂肪酸生物合成等8条代谢途经。结果表明翼首草提取物可以调节代谢紊乱,促进新陈代谢表型向正常水平回归,对佐剂性关节炎大鼠具有治疗作用,为翼首草治疗类风湿性关节炎的生物学基础研究提供了一定的科学依据。     

分光光度法测定藏药翼首草不同药用部位总皂苷的含量

目的:测定藏药翼首草不同药用部位总皂苷的含量,并比较其不同部位之间的差异.方法:以熊果酸为对照,用5％的香草醛-冰醋酸及高氯酸进行显色,在540 nm波长下运用紫外分光光度法对翼首草不同部位总皂苷含量进行测定.结果:在0.0582 ～0.2038 mg熊果酸的吸光度与含量线性关系良好(r=0.9991).平均回收率97.06％,RSD 1.93％.结论:翼首草地上部分总皂苷平均含量高达5％,结合目前藏医院用药情况及药理研究现状,在保护资源的前提下,同时又不影响其疗效的情况下,建议以地上部分为其入药部位.     

基于最大熵模型的藏药翼首草生态适宜性研究

研究翼首草的生态适宜性,为翼首草GAP种植选址和区域发展提供参考。通过中国数字标本馆、文献和实地考察等收集67个翼首草分布点,利用Maxent和GIS技术对翼首草进行适宜性分析。发现翼首草潜在分布区域主要分布在西藏东部、四川西部、青海南部、云南西北部、甘肃南部;对翼首草生长和分布贡献率大的主要生态因子为海拔(62%)、最暖季风降水量(14.4%)、降水量变异系数(7.2%)、最干季度平均温度(3.5%)、土壤导电率(3%)、阳离子交换总量(2.4%)、温度季节性变化标准差(2.2%)。应用Maxent模型对翼首草进行生态适宜性研究,其准确度高,可为翼首草野生抚育及GAP种植选址提供科学依据和参考。     

UPLC-PDA同时测定藏药翼首草环烯醚萜苷和酚酸类10个化学成分的含量

建立超高效液相色谱法(UPLC-PDA)同时测定藏药翼首草环烯醚萜和酚酸类10个化学成分的含量。采用Acquity UPLC~R BEH C_(18)(2.1 mm×100 mm,1.7μm)色谱柱,流动相0.2%磷酸水(A)-乙腈(B),梯度洗脱,检测波长237,325 nm,流速0.4 mL·min~(-1),柱温30℃,进样量1μL。研究结果表明UPLC-PDA法定量分析翼首草10个化学成分在考察的范围内线性关系良好(r≥0.999 7);加样回收率为96.30%~103.0%(n=9),RSD为0.72%~2.9%(n=9)。所建立UPLC方法简便、准确、重复性好,可同时测定藏药翼首草中10个化学成分的含量。     

牛樟芝提取物对人肝癌SMMC-7721细胞增殖的影响

目的:研究牛樟芝提取物(ANCA-E-D)抑制人肝癌细胞SMMC-7721增殖的作用,揭示其可能机制。方法:取对数生长期人肝癌细胞SMMC-7721,以6×104/m L接种于96孔板,每孔100μL,随机分为调零组、空白对照组、溶剂对照组以及20,40,60 mg·L-1ANCA-E-D药物组,每组设5个复孔,分别作用24,48,72 h,采用MTT比色法检测ANCA-E-D对SMMC-7721细胞增殖的影响;通过瑞氏染色观察以上浓度的ANCA-E-D对肝癌细胞SMMC-7721形态学的影响;通过流式细胞仪检测以上浓度的ANCA-E-D对SMMC-7721细胞周期和早期凋亡的影响。结果:MTT实验结果表明,20,40,60 mg·L-1的ANCA-E-D对人肝癌细胞SMMC-7721的增殖具有显著的抑制作用(P0.05),呈时间和剂量依赖性,其半数致死率(IC50)分别为31.21,24.12,21.48 mg·L-1;形态学观测结果提示,ANCA-E-D药物组的细胞核碎裂、凋亡小体形成;流式细胞仪检测发现,不同浓度的ANCA-E-D作用后,SMMC-7721细胞凋亡以晚期凋亡为主,并呈剂量依赖性。结论:ANCA-E-D可抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖,可能与其诱导SMMC-7721细胞凋亡有关。     

宽筋藤正丁醇部位的化学成分研究

目的研究宽筋藤(中华青牛胆Tinospora sinensis藤茎)的化学成分。方法利用硅胶、Sephadex LH-20等柱色谱和半制备HPLC等进行分离和纯化,根据波谱数据和理化性质对化合物的结构进行鉴定。结果从宽筋藤的正丁醇萃取部位中分离得到16个化合物,分别鉴定为紫丁香苷(1)、corchoionoside C(2)、3,4-二甲氧基苯基-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、肉桂醇-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、3,4,5-三甲氧基苯酚-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、benzyl-β-D-glucopyranoside(6)、丁香酸(7)、3,5-二甲氧基苯甲酸-4-O-β-D-葡萄糖苷(8)、1,4-dihydroxymethyl-2,5-dimethoxybenzene(9)、1-[2-(furan-2-yl)-2-oxoethyl]pyrrolidin-2-one(10)、cordysinin B(11)、lyciumide A(12)、酪氨酸(13)、环(亮氨酸-异亮氨酸)(14)、表丁香树脂醇(15)、(+)-syringaresinol-4′-O-β-D-glucopyra...     

派特灵对HeLa细胞增殖迁移能力及PI3K/Akt信号转导通路的影响

目的:探索派特灵对HeLa细胞增殖迁移侵袭能力及磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路相关蛋白的影响。方法:①将HeLa细胞分为空白组,派特灵组(3.906,2.604,1.953,1.563,1.302,1.116,0.977 g·L~(-1)),加药干预24 h,镜下观察细胞形态变化,并采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力,计算派特灵对HeLa细胞的半数抑制浓度(IC_(50))。②将HeLa细胞分为空白组,顺铂组(0.01 g·L~(-1)),派特灵高、中、低质量浓度组(2.974,1.487,0.991 g·~(-1)),采用细胞增殖与毒性检测(CCK-8)法检测派特灵对HeLa细胞增殖能力的影响,使用划痕实验检测细胞的迁移情况,采用侵袭实验(Transwell)检测细胞侵袭能力的变化。③增设抑制剂LY294002组(0.006 g·L~(-1)),采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测派特灵对PI3K,Akt,重组人B细胞淋巴瘤因子-xl(Bcl-xl),B细胞淋巴瘤/白血病相关d蛋白(Bad)表达的影响。结果:①与空白组比较,镜下观察显示,用药组细胞数目减少,细胞形态不完整;MTT比色法显示,派特灵对HeLa细胞增殖有显著抑制作用(P0.01),计算得出派特灵对HeLa细胞的IC_(50)为2.974 g·L~(-1)。②CCK-8法显示,与空白组比较,培养24,36,48 h,所有用药组均对HeLa细胞增殖有抑制作用(P0.01);与顺铂组比较,各时间点派特灵中、低质量浓度组对HeLa细胞增殖抑制作用减弱(P0.01);划痕实验显示,与空白组比较,各加药组均能抑制HeLa细胞的迁移能力(P0.01),派特灵高质量浓度组细胞迁移率低于顺铂组(P0.05);Transwell实验显示,与空白组比较,各加药组HeLa细胞穿膜数减少(P0.01),与顺铂组比较,派特灵中、低质量浓度组细胞穿膜数升高(P0.01)。③Western blot显示,与空白组比较,派特灵高、中、低剂量及LY294002组的PI3K,Bcl-xl,Akt表达量下降(P0.05,P0.01),Bad表达量增高(P0.01);与派特灵高质量浓度组比较,派特灵低质量浓度组的PI3K,Akt,Bcl-xl蛋白表达升高(P0.01),Bad表达降低(P0.01)。结论:派特灵能抑制HeLa细胞增殖迁移侵袭能力,符合一定量效和时效关系,可能与其影响PI3K/Akt信号通路相关蛋白表达有关。     

三叶木通正丁醇部位化学成分分离鉴定

目的:研究三叶木通藤茎正丁醇萃取物的化学成分。方法:取三叶木通的藤茎100 kg,采用75%乙醇加热回流提取3次,减压回收溶剂成浸膏。浸膏加适量的水混匀后,依次用二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取。正丁醇层萃取物经大孔树脂柱色谱,硅胶柱色谱,LH-20型羟丙基葡聚糖凝胶(Sephadex LH-20)柱色谱,ODS柱色谱和半制备高效液相色谱法进行分离纯化,并通过理化性质、质谱、核磁共振技术(1H和13C-NMR)和相关文献数据等对所得化合物进行结构鉴定。结果:从三叶木通正丁醇部位分离并鉴定出14个化合物,分别鉴定为木通皂苷B(1),木通皂苷C(2),皂苷PH(3),卵叶银莲花苷A(4),2α,3β,23-三羟基齐墩果烷-30-去甲基-12,19-双烯-28-O-β-D-吡喃木糖-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(5),akemisaponins D(6),akemisaponins E(7),积雪草苷(8),皂苷PJ1(9),scheffoleoside A(10),symplocosneolignan A(11),刺楸皂苷D(12),leonticin E(13),ciwujianoside A1(14)。结论:化合物1~4,11,13,14均为首次从该植物中分离得到,以上化合物的发现进一步丰富了三叶木通的化学成分组成,为综合开发和利用三叶木通植物资源提供前期的实验基础。     

青龙衣正丁醇部位化学成分研究

目的研究青龙衣醇提取物正丁醇部位的化学成分。方法采用常规硅胶柱、反相ODS及半制备高效液相色谱等进行分离制备,利用各种谱学技术鉴定化合物的结构。结果从青龙衣正丁醇萃取部位分离得到了8个化合物,分别鉴定为4-羟基-4-(3′-羟基苯酚)丁酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷乙酯(1)、4-羟基-4-(3′-羟基苯酚)丁酸-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷甲酯(2)、1,4,8-三羟基萘-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3)、1,4,8-三羟基-3-萘甲酸乙酯-1-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(4)、(4S)-4,5,8-三羟基-α-四氢萘酮-4-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(5)、(4S)-4,5,8-三羟基-α-四氢萘酮-5-O-β-D-[6′-O-(3″,4″,5″-三羟基苯甲酰基)]吡喃葡萄糖苷(6)、(4S)-4-羟基-α-四氢萘酮-4-O-β-D-(6′-O-4′′-羟基苯甲酰基)吡喃葡萄糖苷(7)、(4S)-4,5-二羟基-α-四氢萘酮-4-O-β-D-(6′-O-4′′-羟基苯甲酰基)吡喃葡萄糖苷(8)。结论化合物1、2为新化合物,分别命名为胡桃酚苷P和胡桃酚苷Q。     

柚寄生总黄酮的提取工艺优化及其体外抑制人肝癌细胞Hep3B作用的初步评价

目的:优选柚寄生总黄酮的提取工艺,并初步评价总黄酮体外抑制人肝癌细胞Hep3B的作用。方法:以芦丁为对照品测定柚寄生提取液的总黄酮含量,选取提取时间、提取温度、料液比及乙醇体积分数为影响因素,采用正交试验法优选柚寄生总黄酮的提取工艺条件,采用单因素试验考察提取次数;采用MTT法测定总黄酮对人肝癌细胞Hep3B的体外抑制作用。结果:优选的提取工艺为加30倍量60%乙醇于80℃提取2次,每次2 h;体外抗肿瘤活性试验结果表明,总黄酮质量浓度500 mg·L-1时对人肝癌细胞Hep3B的生长抑制率51.40%。结论:优选出的柚寄生总黄酮提取工艺条件稳定可行,柚寄生总黄酮有一定的体外抑制人肝癌细胞Hep3B的作用。     

Sensitization of Hep3B hepatoma Cells to Cisplatin and Doxorubicin by Corilagin

The anticancer action of gallotannins is a well‐developed topic. We have demonstrated the in vivo antitumour activity of corilagin on Hep3B hepatoma using the xenograft athymic nude mice model. Here, we further report the potential sensitization of Hep3B hepatoma cells to cisplatin and doxorubicin by corilagin. Our results showed that corilagin is able to enhance the cytotoxicity of both cisplatin and doxorubicin on the Hep3B hepatoma cells. We speculate the possible use of corilagin in combination with low dosages of the anticancer chemotherapeutic standard drugs like cisplatin and doxorubicin, with the aim of obtaining an increment in the anticancer effect. Copyright © 2013 John Wiley & Sons, Ltd.