rhG-CSF动员对供者血浆S1P浓度的影响

1-磷酸鞘氨醇（SIP）是具有广泛生物学效应的磷脂代谢产物，多种生长因子均能通过影响细胞鞘氨醇激酶（SphK）活性而调节SIP的生成，重组人粒细胞集落刺激因子（dIG—CSF）是一种广泛用于外周血造血干细胞动员的一种细胞因子。本研究主要了解rhG—CSF动员对供者血浆SIP含量的影响。分离供者rhG—CSF动员前和动员第5天外周血单个核细胞和血浆，用RT—PCR检测动员前后单个核细胞SphK mRNA表达情况，并应用γ-^32P-ATP掺入法和SphK酶促反应检测动员前后血浆SIP变化。结果表明，供者动员前后外周血单个核细胞均表达SphK mRNA；在rhG—CSF动员前后供者血浆中均含有SIP，且SIP浓度在rhG—CSF动员前和动员后第5天无明显变化（P〉0．05）。结论：rhG—CSF动员对供者血浆SIP含量无明显影响。     

中剂量rhG-CSF动员对供者外周血免疫细胞组成的影响

本研究观察12例健康供者在使用10μg/(kg·day)rhGCSF动员前后白细胞总数变化。应用外周血涂片瑞氏染色对白细胞进行形态学分类,使用流式细胞术分析动员前后外周血单个核细胞中T细胞、B细胞、NK细胞和单核细胞比例的变化。结果发现,动员前1天外周血白细胞计数中位数为6.25(4.7-7.8)×109/L,其中淋巴细胞中位数为2.07(1.63-3.1)×109/L,单核细胞中位数为0.163(0.078-0.414)×109/L;动员第5天外周血白细胞计数中位数为37.47(24-72.57)×109/L,其中淋巴细胞中位数为3.22(1.46-5.31)×109/L,单核细胞中位数为1.2(0.706-3.627)×109/L。供者外周血白细胞的增加为动员前的6.26±2.14倍(P<0.01),其中淋巴细胞的增加为动员前的1.45±0.76倍(P<0.05),单核细胞数增加为动员前的7.48±4.41倍(P<0.01)。流式细胞术分析发现,动员前CD3 T淋巴细胞占外周血单个核细胞(PBMNC)比例的中位数为46.96%[(32.36-57.45)%],动员后为40.94%[(25.31-48.9)%];动员前CD4 /CD8 淋巴细胞比例为1.27±0.46,动员后为1.36±0.51;动员前CD4 CD8 T淋巴细胞占PBMNC比例的中位数为0.41%[(0.16-1.51)%],动员后为0.49%[(0.09-2.0)%];动员前CD16 CD56 NK细胞占PBMNC比例的中位数为13.98%[(4.08-25.08)%],动员后为16.65%[(12.06-33.05)%];动员前CD3 CD16 CD56 NK-T细胞占PBMNC比例的中位数为2.75%[(0.37-6.38)%],动员后为3.13%[(0.46-5.95)%];动员前CD20 B淋巴细胞占PBMNC比例的中位数为9.28%[(5.97-16.33)%],动员后为9.94%[(7.36-20.41)%];动员前CD14 单核细胞占PBMNC比例的中位数为12.48%[(3.54-19.35)%],动员后为29.52%[(16.51-36.76)%]。动员后CD14 单核细胞在PBMNC中的比例比动员前增加2.87±1.51倍(P<0.05);动员前后T淋巴细胞、NK细胞、NK-T细胞、B淋巴细胞在PBMNC中的比例以及动员前后CD4 /CD8 淋巴细胞比均无显著变化(P>0.10)。结论:rhGCSF动员引起的单核细胞增加可能在异基因外周血造血干/祖细胞移植的相关事件中发挥着重要作用。     

rhG-CSF和rhSCF对正常猴外周血白细胞和CFU-GM数的影响

为了观察重组人干细胞因子 (rhSCF)和 (或 )粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)动员外周血干细胞的效果 ,本研究将 15只正常成年猕猴分成 3组 ,每天 1次 ,连续 14天分别皮下注射赋形剂、rhG CSF 10 μg/ (kg·d)和rhSCF5 0 μ/ (kg·d) +rhG CSF 10 μ/ (kg·d)。结果表明 ,单独给rhG CSF组的外周血白细胞数最高值在给药后第 7天出现 ,为给药前值的 4 11% ,其后很快下降。联合给药组外周血白细胞数最高值在第 9天出现 ,为给药前值的 5 38% ,第 7至第 9天的外周血白细胞数在 5 35 % - 5 38%之间。单独给药组外周血CFU GM最高值在给药后第 5天为给药前值的 937% ,联合给药组在第 9天为 1175 %。结论 :rhG CSF对外周血干 /祖细胞有明显的动员作用 ,rhSCF +rhG CSF联合动员的效果优于rhG CSF单用     

rhG-CSF对小鼠骨髓间充质干细胞的动员作用

为了研究rhG-CSF体内应用对小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）的动员作用,将30只小鼠随机分为2组：rhG-CSF组和对照组,分别给予皮下注射rhG-CSF80μg/（kg.d）和等量生理盐水,连续5天,在最后1次注射后分别于6,12和168小时取小鼠骨髓和外周血,以1×10^6单个核细胞（MNC）接种于12孔培养板14天,对形成的成纤维细胞集落（CFU-F）进行计数,用胰蛋白酶消化后应用流式细胞术测定表面抗原并进行成脂,成骨诱导。结果表明：rhG-CSF组骨髓形成的CFU-F数均较对照组明显增加（p〈0.01）。6小时取材较12小时,168小时取材形成的CFU-F数目多（p〈0.01）,12小时与168小时CFU-F差异无统计学意义。流式细胞术检测骨髓CFU-F显示CD34^-、CD133^-、CD90^＋、CD105^＋,骨髓CFU-F具有成脂、成骨分化的能力。rhG-CSF组6小时取材外周血具有类似骨髓的CFU-F,出现的频率为（0.50±0.11）×10^-6,与对照组比较差异有显著性（p〈0.05）。结论：rhG-CSF可使小鼠骨髓间充质干细胞增殖加速,但时间短暂,其高峰在rhG-CSF应用5天后的6小时内。rhG-CSF对小鼠间充质干细胞也有动员能力,但作用较弱。     

rhG-CSF对急性粒细胞白血病化疗后粒细胞缺乏患者NAP活性的影响

目的探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)对急性粒细胞白血病化疗患者的中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)活性的影响。方法收集36例使用rhG-CSF治疗的急性粒细胞白血病患者作为观察组,观测用药前后NAP活性的变化,另收集33例没有使用rhG-CSF治疗的急性粒细胞白血病患者作为对照组。结果观察组与对照组相比较,使用rhG-CSF治疗后NAP的活性明显增高,两者比较有显著性差异(P<0.05)。结论急性粒细胞白血病患者化疗后粒细胞缺乏应用rhG-CSF治疗后可增强外周血中NAP的活性。     

rhG-CSF对急性白血病化疗后中性粒细胞形态、功能、表型的影响

为了探讨急性白血病病人化疗后应用rhG-CSF对中性粒细胞形态、功能及表型变化的影响,采用油镜下观察细胞形态,过氧化氢释放法、琼脂糖测定法、免疫荧光技术和流式细胞术检测中性粒细胞的吞噬、趋化及氧化代谢功能;采用免疫荧光技术和流式细胞分析检测中性粒细胞表型.结果表明：应用rhG-CSF后,中性粒细胞胞浆内＂中毒＂颗粒数、空泡数和Dohle小体数增加;化疗后病人中性粒细胞吞噬、趋化及氧化代谢功能明显低于正常组,用rhG-CSF后功能均增强,基本接近正常组甚至超出;用rhG-CSF前中性粒细胞CD64、CD62L的表达明显高于正常对照组,用G-CSF后CD64表达上调,CD62L表达显著下调;CD16、CD32、CD14和CD11b则无明显改变.结论：急性白血病病人化疗后应用rhG-CSF可引起中性粒细胞形态、功能及表型出现变化,进一步增强机体的抗感染能力.     

1-磷酸鞘氨醇对葡萄糖代谢的调节及其机制

1-磷酸鞘氨醇(S1P)是一种有活性的脂质分子,作用广泛,在多种疾病中发挥作用,如肿瘤、心血管疾病、骨代谢、糖尿病等。研究报道,S1P可以促进胰岛素分泌从而降低血糖,本研究将从S1P促进胰岛素分泌的机制、S1P对胰岛素靶器官的调节以及糖尿病并发症影响方面阐述S1P的作用。     

护理干预对乳腺癌患者应用rhG-CSF致骨痛的作用

目的 探讨预见性护理干预对乳腺癌应用rhG-CSF化疗后致骨痛患者疼痛控制的效果。方法 选择2012年7月～2013年7月我院收治的82例乳腺癌rhG-CSF化疗后致骨痛的骨髓抑制患者作为研究对象,将所有患者按照随机分组原则分为预见性护理干预组与对照组各41例。所有患者均接受乳腺癌常规治疗与护理,预见性护理组患者由疼痛管理组施以预见性护理干预,与对照组护理结果进行比较。结果 两组患者实施护理前后的生活质量均有所提高,但组间比较,预见性护理组的疼痛缓解程度97.5%,明显优于对照组90.2%,患者心率稳定率、血压稳定率均高于对照组,生存质量评分（92.5±5.5）分,显著高于对照组（88.2±4.1）分,且上述指标差异有显著意义（P〈0.01）。结论 对应用rhG-CSF致骨痛的乳腺癌患者进行预见性护理,可以有效减少患者疼痛刺激,缓解不良情绪的发生,提高患者生存质量,增加患者对治疗的信心及与医务人员的配合,有效提高患者的治愈率。     

rhG-CSF对外周血T淋巴细胞影响的实验研究

临床实践表明 ,重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)动员的异基因外周血干细胞移植输入的成熟T淋巴细胞是骨髓移植的 10倍以上 ,但急性移植物抗宿主病 (aGVHD)的发生率和严重程度并未明显增加[1 4 ] ,aGVHD是由于成熟供体T淋巴细胞识别受体抗原被激活产生的免疫病理反应。我们对体内和体外应用G CSF后T淋巴细胞是否发生了数量和质量的改变进行了探讨。材料和方法1　G CSF动员后的供者外周血单个核细胞 (PBMNC)分离　标本来自 2 0 0 1年 1月至 12月 2 1名HLA配型相合的同胞健康供者 (男 10名 ,女 11名 ,年龄在 13～ 6 4岁 ,平均…     

rhG-CSF对健康供者的影响

目的 :探讨人重组粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)对健康供者的影响。方法 :1998年 1月至 2 0 0 3年6月年间 2 2例接受rhG CSF 10 μg·kg-1·d-1动员的健康供者 ,观察动员及分离过程的不良反应 ,检测动员前后血常规、CD3、CD4、CD8细胞比例 ;采集物进行单个核 (MNC)、CD3 4+细胞计数 ;所有供者随访至 2 0 0 3年 10月 3 0日。结果 :2 2例供者在rhG CSF动员过程中出现 1～ 2级 (按WHO急性毒副作用分级标准 )肌肉或骨痛 ( 4 5 5 % )、头痛( 2 2 7% )、食欲减退 ( 5 0 % )等副作用 ,无需终止动员。动员后白细胞较动员前显著升高 ,停止动员后 7d基本恢复至动员前水平。血红蛋白及血小板、CD3 +、CD4+、CD 8+和CD 4/CD8比值于动员前、动员第 4天及停止动员后 7d的变化无统计学意义。结论 :绝大多数健康供者可耐受rhG CSF剂量为 10 μg·kg-1·d-1的短程动员和PBSC采集过程 ;rhG CSF对健康供者的T淋巴细胞亚群分布无影响。     

rhG-CSF动员对异基因造血干细胞移植供者外周血CD4~+ T细胞S1P_1表达的影响

CD4+ T细胞主要通过其表面的S1P1受体与外界的第一信使1磷酸鞘氨醇(S1P)相互作用调节免疫功能。本研究旨在探讨重组人粒细胞集落刺激因子(rhG-CSF)动员对异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)供者外周血CD4+ T细胞S1P1表达的影响。17例allo-HSCT供者于rhG-CSF动员前及动员后第4天采集外周血,使用磁珠分选法纯化CD4+ T细胞,提取微量RNA,用实时定量PCR法检测S1P1的表达。结果显示,rhG-CSF动员前后CD4+ T细胞均表达S1P1,且动员后S1P1在CD4+ T细胞中的表达明显低于动员前。结论:rhG-CSF动员使allo-HSCT供者外周血CD4+ T细胞S1P1的表达明显下调。     

rhG-CSF动员对供者T细胞增殖和细胞毒的影响

为了解rhG-CSF动员对供者T细胞增殖和细胞毒的影响,在rhG-CSF动员前和动员后第5天抽取供者外周血分离单个核细胞(PBMNC),在PBMNC中加入CD3单克隆抗体和rhIL-2以激活T细胞,培养96小时后检测T细胞增殖率和细胞毒性,并进一步对动员前后激活的T细胞用流式细胞术检测Fas表达率,用RT-PCR检测穿孔素(perforin)和Fas配体(FasL)mRNA表达情况,应用放射免疫分析方法检测细胞的γ干扰素(IFN-γ)分泌情况。结果发现,供者外周血T细胞增殖能力在应用rhG-CSF后下降(68.5±15.1)%(P<0.05);动员后CD3单克隆抗体和rhIL-2激活后T细胞对K562细胞的细胞毒性均比动员前细胞有显著减弱(P<0.05);动员前后T细胞在激活后的Fas表达率无明显差异(P>0.10);动员前后T细胞在激活后均表达perforinmRNA,不表达FasLmRNA;动员前T细胞激活后分泌IFN-γ的能力明显高于动员后(P<0.01)。结论:rhG-CSF动员致使供者T细胞在CD3单克隆抗体与rhIL-2激活后的增殖率和细胞毒性下降。     

rhG-CSF对140例恶性肿瘤化放疗所致白细胞减少的临床疗效观察

为了观察rhG CSF对恶性肿瘤放化疗所致白细胞减少的疗效 ,对 14 0例恶性肿瘤放化疗所致粒细胞减少的患者用此国产rhG CSF(粒生素 )进行治疗。白细胞 <3.0× 10 9/L或中性粒细胞绝对计数 (ANC) <2 .0× 10 9/L时开始用粒生素 75 μg,皮下注射 ,每日 1次 ,待白细胞 >4 .0× 10 9/L或中性粒细胞绝对计数 >2 .5× 10 9/L时停药。结果表明 :粒生素能使放化疗所致粒细胞减少回升至正常范围 ,平均时间为 4 8天 ,有效率 96 .4 %。结论 :粒生素可以明显减轻放化疗过程中外周血白细胞下降程度 ,缩短白细胞恢复时间 ,且毒副反应轻、安全可靠 ,有利于放化疗的顺利进行。     

小分子RNA干扰鞘氨醇激酶1表达对APP/PS1小鼠海马细胞凋亡的影响

目的:观察腺病毒介导的鞘氨醇激酶1(sphk1)低表达对AD小鼠海马细胞凋亡的影响。方法:构建siRNA-Sphk1腺病毒载体,立体定位法将携带siRNA-Sphk1的腺病毒载体(siRNA-Sphk1组)或等量生理盐水(saline组)注射至APP/PS1双转基因AD模型鼠海马齿状回;30 d后,荧光显微镜下观察各组小鼠海马绿色荧光蛋白的表达,westen blot法观察海马Sphk1及caspase-3蛋白的表达,Tunel法观察海马齿状回细胞凋亡的情况。结果:siRNA-Sphk1组海马齿状回可见绿色荧光的表达,saline组无绿色荧光表达;siRNA-Sphk1组海马Sphk1蛋白的表达较saline组下降(P<0.05),caspase-3蛋白较saline组的表达升高(P<0.05);siRNA-sphk1组小鼠海马组织的细胞凋亡率较saline组和阴性对照组升高(P<0.05)。结论:成功构建siRNA-sphk1的重组腺病毒,移植后,可抑制AD小鼠海马Sphk1蛋白的表达,促进海马齿状回细胞的凋亡。     

重组人G-CSF对放化疗引起乳腺癌患者白细胞减少症的疗效观察

为了观察国产粒细胞集落刺激因子rhG-CSF(粒生素)在放化疗中对白细胞减少症的治疗作用，对100例经病理证实的乳腺癌根治术后患者，随机分为观察组和对照组各50例，两组病人均于术后2周始行1个周期CAF方案化疗，然后放疗。观察组在化疗中加用粒生素75微克／天，皮下注射，连用5-7天，在放疗过程中针对不同程度的白细胞减少再应用3-5天。对照组在放化疗中不用粒生素。比较两组病人白细胞和中性粒细胞绝对数的动态变化。结果表明，观察组患者白细胞及中性粒细胞的最低值均明显高于对照组，未见明显副作用。结论：粒生素对放化疗过程中白细胞减少的治疗效果确切，副作用不明显。     

Sphingosine modulation of cAMP levels and beating rate in rat heart

Sphingolipids, especially as elements of the sphingomyelin signal transduction cycle, are thought to play a significant role as second messengers and modulators of events in heart muscle cells. A possible modulatory role of sphingosine in signal transduction in the beta-adrenergic pathway in the heart was examined. Neonatal rat cardiomyocytes were incubated with sphingosine and/or other agents after which cAMP levels and contraction rates were measured. Heart rate in anaesthetized rats was also measured before and after sphingosine injection in the jugular vein. Sphingosine caused a decrease in basal cAMP levels and diminished isoproterenol-induced increase in cAMP levels. These changes were dose- and time-dependent and showed a significant negative effect on signal transmission in the beta-adrenergic pathway in cardiomyocytes. Increase in cAMP intracellular levels by forskolin, which activates adenylcyclase, was not inhibited by sphingosine. A phosphodiesterase inhibitor was used in all experiments in which cAMP was measured excluding effects on cAMP breakdown. It was also demonstrated that sphingosine caused reduction in the beating rate of cultured cardiomyocytes and a dose-dependent reduction in heart rate of anaesthetized rats. The sphingosine-induced inhibition of bradycardic response of anaesthetized rats reached a maximum about 5-10 min after the onset of sphingosine administration and returned to normal within 60 min. Sphingosine may modulate the signal transmission of the beta-adrenoceptor pathway upstream of adenylcyclase in rat cardiomyocytes. This may contribute to the sphingosine-induced decrease in heart rate of rats in vivo.     

洛伐他丁对心肌细胞外信号调节激酶信号传导水平及心脏营养素-1表达的影响

目的：探讨细胞外信号调节激酶（ERK）通路与甲基戊二酰辅酶A（HGM-CoA）还原酶抑制剂的关系。方法：体外培养的大鼠心肌细胞株H9c2（2-1）经洛伐他丁处理24h和5d,然后以免疫印迹杂交检测p-44ERK1、p-42ERK2和总ERK蛋白水平,同时检测心脏营养素-1蛋白水平的变化。结果：洛伐他丁处理24h后,ERK1、ERK2的磷酸化水平分别升高125%（P=0.041）和89%（P=0.034）;处理5d后检测ERK1、ERK2的磷酸化水平分别升高93%（P=0.021）和80%（P=0.046）。培养中的大鼠心肌细胞H9c2（2-1）经过洛伐他丁处理24h或5d后,作为重要炎性细胞因子的心脏营养素-1水平均显著增高,其中,处理24h后增高79.3%（P=0.004）,处理5d后增高34.8%（P=0.014）。选择性抑制ERK之后,洛伐他丁处理导致心脏营养素-1水平的变化显著减弱。结论：洛伐他丁除了具有已知的降脂作用外,亦可能参与心肌细胞炎性反应的调节机制。     

rhG-CSF动员健康供者CD34^＋细胞产率的影响因素分析

为探讨rhG—CSF动员健康供者年龄、性别等因素对采集物CD34^＋细胞产率的影响,分析61例健康供者外周血采集物CD34^＋细胞数量与自身特点的相关性,并进行多因素回归分析。以供者性别、年龄、身高、体重、体重指数（BMI）和采集时间作为研究参数,外周血采集物单核细胞计数、CD34^＋细胞占有核细胞百分比、CD34^＋细胞计数、CD34^＋细胞每公斤体重（供者）计数的均值作为研究变量。结果表明,供者年龄是影响CD34^＋细胞产率主要因素,呈中等负相关（-0．60〈r〈-0．45,P〈0．005）。偏相关分析排除身高、体重、BMI的影响,年龄仍和CD34^＋细胞产率呈中等负相关（-0．50〈r〈-0．35,P〈0．02）。BMI仅与CD34^＋细胞每公斤体重计数呈微弱负相关（r=-0．297,P〈0．05）,性别对CD34^＋细胞产率无明显影响,CD34^＋细胞计数的差别仅出现在男性和女性低龄组（年龄〈35岁）间,男性身高、体重、BMI为CD34^＋细胞计数增加的有利因素。供者采集时间为给药后第4天采集,70％供者CD34^＋细胞产率达峰值。结论：年龄应作为供者选择的首要因素,性别、身高、体重和BMI对CD34^＋细胞产率的影响是次要的。     

MODS患者单核细胞HLA-DR表达和干预因素的研究

目的观察MODS患者外周血单核细胞表面HLA-DR的表达;探讨胸腺肽治疗免疫抑制的有效性。方法用流式细胞技术检测正常人和重症感染、严重损伤患者外周血单核细胞表面HLA-DR抗原表达,MODS高危患者TP免疫刺激治疗。结果MODS单核细胞HLA-DR表达(23.7±8.40)%比正常对照组(71.4±10.1)%显著降低,高危组存活者经TP治疗后HLA-DR表达水平(54.8±8.84)%比治疗前(18.2±4.85)%明显提高。结论用单核细胞HLA-DR表达鉴别MODS免疫抑制并指导免疫刺激治疗是安全可靠的,且对评估预后有重要价值。