丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1导致肝窦内皮细胞功能障碍

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝窦内皮细胞(LSEC)沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及LSEC功能的影响。方法 HepG2细胞或表达HCV核心蛋白的HepG2细胞与LSEC共培养。应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR(RT-PCR)、Western印迹检测LSEC SIRT1活性、mRNA和蛋白的表达,以及LSEC脂联素受体2(AdipoR2)、内皮型一氧化氮合酶(eNOS)、第Ⅷ相关抗原(Von Willebrand factor,vWf)、分化抗原簇31(CD31)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)和CD14蛋白的表达。应用流式细胞仪检测细胞活性氧(ROS)水平,检测共培养上清液中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、脂联素、一氧化氮(NO)和内皮素-1(ET-1)的水平。计量资料采用t检验。结果与LSEC和HepG2细胞共培养组相比,LSEC和表达HCV核心蛋白HepG2细胞共培养组SIRT1活性(0.3±0.1比1.0±0.3,t=5.422,P0.01)、mRNA(0.4±0.1比1.0±0.2,t=6.573,P0.01)和蛋白(0.3±0.08比1.0±0.3,t=5.613,P0.01)水平下降;脂联素[(3.41±0.61)比(5.82±0.87)μg/mL,t=5.556,P0.01]分泌减少且AdipoR2蛋白(0.3±0.1比0.8±0.2,t=5.477,P0.01)表达下降;eNOS蛋白(0.4±0.1比0.9±0.3,t=3.873,P0.01)表达下降;vWf蛋白(0.8±0.3比0.4±0.1,t=3.098,P0.01)、CD31蛋白(0.9±0.2比0.3±0.1,t=6.573,P0.01)、VEGF蛋白(0.9±0.3比0.5±0.1,t=3.873,P0.01)表达增加;CD14蛋白(0.4±0.1比0.9±0.3,t=3.873,P0.01)表达下降。共培养上清液中NO和SOD水平下降,ET-1和MDA水平升高。结论 HCV核心蛋白下调SIRT1活性及表达,下调脂联素及受体表达,引起LSEC收缩和肝窦毛细血管化,增加氧化应激反应,导致肝窦微循环障碍。     

丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1导致肝星状细胞活化

目的研究丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白对肝星状细胞沉默信息调节因子1(SIRT1)表达及肝星状细胞活化的影响。方法 HepG2细胞或表达HCV核心蛋白的HepG2细胞与肝星状细胞(LX-2细胞)共培养。应用液体闪烁计数仪、实时荧光定量-PCR、Western印迹检测LX-2细胞SIRT1活性、mRNA及蛋白的表达。Western印迹检测LX-2细胞磷酸化AMP激活的蛋白激酶(p-AMPK)、脂联素受体2(AdipoR2)、转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白的表达。ELISA法检测共培养上清液中人Ⅳ胶原(ColⅣ)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)、透明质酸(HA)和人层黏连蛋白(LN)的水平。计量资料采用t检验。结果与LX-2细胞和HepG2细胞共培养组相比,LX-2细胞和表达HCV核心蛋白HepG2细胞共培养组SIRT1活性(0.4±0.1比1.0±0.2,t=6.573,P0.01)、mRNA(0.3±0.1比1.0±0.3,t=5.422,P0.01)和蛋白(0.4±0.1比0.8±0.2,t=4.382,P0.01)水平下降;p-AMPK(0.3±0.1比0.8±0.2,t=5.477,P0.01)和AdipoR2(0.4±0.1比0.8±0.2,t=4.382,P0.01)表达下降;TGF-β1(2.3±0.5比0.8±0.2,t=6.823,P0.01)表达增加;共培养上清液中ColⅣ、PⅢNP、HA和LN的水平增加。SIRT1激动剂白藜芦醇降低TGF-β1的表达。结论 HCV核心蛋白下调肝星状细胞SIRT1活性及表达,下调AdipoR2表达,上调TGF-βl表达,活化肝星状细胞。     

脂筏介导的内源性大麻素对HepG2细胞的作用及其机制

目的 研究内源性大麻素(AEA)以脂质为基础的信号途径对肝癌细胞株HepG2的作用机制,探讨AEA在肝癌发生和发展中的作用.方法 免疫荧光检测脂肪酸水解酶、大麻素受体(CB)1和CB2在胎肝细胞株L02和肝癌细胞株HepG2中的定位.以不同浓度的AEA及膜胆固醇耗竭剂甲基-β-环糊精(MCD)处理,分为AEA 10 μmol/L组、AEA 20 μmol/L组、AEA40 μmol/L组,MCD 10 mmol/L+AEA 10 μmol/L组、MCD 10 mmol/L+AEA 20 μmol/L组和MCD 10 mmol/L+AEA 40 μmol/L组,分别孵育L02细胞和HepG2细胞,流式细胞术碘化丙啶单染法检测细胞的坏死率.Western Blot检测L02和HepG2细胞中脂肪酸水解酶、CB1和CB2的蛋白表达及其下游信号通路磷酸化P38促分裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)和磷酸化c-Jun氨基端激酶(P-JNK)的表达变化.组间均数的比较采用独立样本t检验或单因素方差分析.结果 AEA可有效地导致肝癌细胞坏死,以浓度为AEA 40 μmol/L组达到最大效应,F=108.594,P<0.05,差异有统计学意义.MCD 10mmol/L预孵育后的HepG2细胞坏死率在AEA 10 μmol/L组、AEA 20 μmol/L组和AEA 40 μmol/L组分别为7.83%±2.13%,16.30%±0.94%,43.09%±5.10%,MCD处理前AEA 10 μmol/L组、AEA 20 μmol/L组、AEA 40 μmol/L组分别为13.64%±1.69%、20.28%±0.91%,52.71%±4.29%,处理前后比较,t值分别为3.702,5.274和3.503,P值均<0.05,差异均有统计学意义.同时,AEA能激活HepG2细胞中P38 MAPK和JNK,以AEA 40 μmol/L组作用明显,F值分别为11.908和26.054,P值均<0.05,差异均有统计学意义,MCD作用前p-P38 MAPK和p-JNK/β-肌动蛋白灰度值分别为1.63±0.06,1.60±0.31,MCD作用后p-P38 MAPK/β-肌动蛋白、p-JNK灰度值分别为1.14±0.01、1.17±0.29,作用前后相比,t值分别为2.801和12.829,P值均<0.05,差异均有统计学意义.结论 AEA可以有效地导致HepG2细胞坏死而对L02细胞无影响,AEA激活了HepG2细胞p-P38 MAPK和P-JNK相关信号传导途径,且此过程与脂筏有关.     

丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子2相关酶1-AMP激活蛋白激酶信号通路活性致肝细胞能量代谢紊乱

目的 探讨沉默信息调节因子2相关酶1 (SIRT1)-AMP激活的蛋白激酶(AMPK)信号通路在HCV核心蛋白所致肝细胞能量代谢紊乱中的作用.方法 pcDNA3.1-core重组质粒转染HepG2细胞,流式细胞仪测定表达HCV核心蛋白的HepG2细胞的活性氧(ROS),液体闪烁计数仪测定ATP/ADP比例和AMPK α2酶活性,比色法测定烟酰胺腺嘌呤二核苷酸氧化态与还原态之比(NAD+/NADH),荧光定量检测SIRT1酶活性,RT-PCR和Western印迹检测SIRT1、AMPK α2的表达.计量资料比较采用t检验.结果 Western印迹检测证实,HepG2细胞表达相对分子质量为22 000的HCV核心蛋白.与HepG2细胞相比,表达HCV核心蛋白的HepG2细胞ROS水平升高(1.0±0.1比4.0±0.5,t=14.411,P＜0.01);ATP/ADP比例无明显变化(8.2±2.2比9.3±2.8,t=0.757,P＞0.05);AMPK α2酶活性(0.8±0.2比0.2±0,t=7.345,P＜0.01)明显降低;NAD+/NADH比例明显降低(0.08±0.02比0.02±0,t=7.348,P＜0.01);SIRT1酶活性[(0.30±0.05) pmol·μg 1·min-1比(0.15±0.04) pmol·μtg-1·min-1,t=5.738,P＜0.01)]明显降低;SIRT1 mRNA(0.8±0.2比0.4±0.1,t=4.382,P＜0.01)和AMPK α2 mRNA(0.9±0.3比0.2±0,t=5.715,P＜0.01)表达明显降低;SIRT1蛋白(0.8±0.2比0.3±0,t=5.941,P＜0.01)和磷酸化AMPK蛋白(0.5±0.1比0.1±0,t=9.608,P＜0.01)水平明显降低.结论 HCV核心蛋白能下调SIRT1-AMPK信号通路活性,导致肝细胞能量代谢紊乱.     

大麻素受体2介导的N-花生四烯酸氨基乙醇对肝星状细胞增殖和活化的影响

目的 观察内源性大麻素N-花生四烯酸氨基乙醇(AEA)及大麻素受体(CBR)2对肝星状细胞(HSC)增殖活化的影响,以探讨内源性大麻素及其受体系统在肝纤维化发展中的作用.方法 采用免疫荧光观察血小板衍生生长因子(PDGF)刺激前后HSC中CBR1和CBR2的表达.Western blot、PCR法观察不同浓度AEA及CBR2拮抗剂AM630对PDGF刺激下HSC增殖及活化的影响,同时用四甲基偶氮唑盐、流式细胞仪分析AEA对HSC活力及凋亡的影响.结果 HSC中CBR2的表达较CBR1高(F=116.797,P<0.01),且PDGF刺激后CBR2的表达明显增强(F=7.878,P<0.05).AEA可剂量依赖地抑制HSC的增殖,在浓度为10,20、50μmol/L时抑制率分别为7.12%±0.34%、12.52%±0.78%、80.13%±1.57%,差异有统计学意义(F=533.41,P<0.01);但对HSC凋亡的影响不明显.同时AEA可抑制HSC的活化指标α-平滑肌肌动蛋白、转化生长因子β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原及基质金属蛋白酶抑制因子等的表达,但这种抑制作用在给予CBR2拮抗剂AM630后明显减弱,差异有统计学意义(P<0.05).结论 CBR2在AEA引起的HSC增殖及活化抑制中起关键作用,AEA和CBR2可望成为肝纤维治疗的新靶点.     

脂滴自噬在丙型肝炎病毒核心蛋白下调沉默信息调节因子1诱导小鼠肝脂肪变性中的作用

目的研究脂滴自噬在HCV核心蛋白下调沉默信息调节因子1(SIRT1)诱导小鼠肝脂肪变性中的作用。方法小鼠随机分为两组,每组10只。实验组小鼠尾静脉注射HCV core重组表达载体。对照组小鼠尾静脉注射磷酸盐缓冲溶液。1个月后处死小鼠。检测肝功能、脂联素、血清和肝内甘油三酰(TG)、肝脏组织病理学检查肝脂肪变性程度。蛋白质免疫法检测肝脏SIRT1蛋白、脂联素受体(AdipoR)蛋白以及脂滴自噬相关蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、脂肪分化相关蛋白(ADRP)、尾部作用蛋白(TIP-47)和P62蛋白的表达。计量资料采用t检验。结果与对照组相比,HCV组小鼠出现肝脂肪变性;肝脏TG含量明显增加[(80.9±20.1)比(45.8±10.5)μg/mg,t=4.964,P0.01];血清脂联素[(1.05±0.25)比(1.41±0.45)ng/mL,t=2.211,P0.05]水平下降;SIRT1蛋白水平(0.4±0.1比0.9±0.2,t=7.071,P0.01)和AdipoR2蛋白水平(0.4±0.1比0.8±0.2,t=5.656,P0.01)下降;LC3-Ⅱ蛋白(0.8±0.2比0.4±0.1,t=5.656,P0.01)、TIP-47蛋白(0.9±0.3比0.4±0.1,t=5.000,P0.01)和ADRP蛋白(0.8±0.3比0.4±0.1,t=4.000,P0.01)表达增加;而p62蛋白(0.7±0.2比0.8±0.3,t=0.877,P0.05)表达水平差异无统计学意义。结论 HCV核心蛋白下调SIRT1表达,下调脂联素及受体表达,引起不完全脂滴自噬导致肝脂肪变性。     

大麻素受体1和细胞外信号调节激酶在肝纤维化小鼠肝组织中的表达及意义

目的研究大麻素受体1(CB1)mRNA在肝纤维化形成过程中表达的变化,从基因转录水平探讨其与细胞外信号调节激酶(ERK)的关系。方法采用10%四氯化碳腹腔注射制备肝纤维化模型,分别于造模第2、4、6、8周留取小鼠的肝组织及血清。通过病理对肝组织进行形态学观察,荧光定量RT-PCR检测CB1 mRNA和ERK mRNA水平,生化法检测血清中ALT和AST的含量,放射免疫法检测血清中透明质酸(HA)的含量。结果与正常对照组相比,各模型组小鼠肝组织中CB1 mRNA和ERK mRNA含量显著升高(P<0.05),而且随造模时间的延长,CB1 mRNA和ERK mRNA含量亦逐渐增高,各组之间差异有统计学意义(P<0.05)。各模型组小鼠血清中ALT、AST及HA的水平随造模时间延长而不断升高,各组间差异具有统计学意义(P<0.05)。CB1 mRNA的含量不但与血清中ALT、AST、HA的含量呈显著正相关(r=0.741、0.763、0.769,P均<0.01),而且与肝组织中ERK mRNA含量也呈显著正相关(r=0.789,P均<0.01)。结论CB1可能通过激活ERK,以ERK通路诱导肝星状细胞(HSC)增殖,促进肝纤维化的形成。     

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征患者内源性大麻素系统合成及降解酶水平

目的 观察阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(OSA)患者内源性大麻素系统(ECS)合成及降解酶的变化.方法 对2009年7月至12月在山西医科大学第二医院睡眠中心就诊的患者行整夜多导睡眠监测(PSG),实时PCR法检测外周血单个核细胞上花生四烯酸乙醇胺(AEA)及2-花生四烯酸甘油(2-AG)的合成及降解酶水平,了解OSA病情严重程度对其的影响.结果 与正常对照组相比,OSA组ECS中两种酶N-酰基磷脂酰乙醇胺水解磷脂酶D(NAPE)、单酰基甘油脂肪酶(MAGL)的表达有差异(P＜0.05).MAGL与最长呼吸暂停时间(LA)、最低血氧饱和度(LSaO2)、微觉醒指数(MAI)存在相关(r值为0.34、-0.31和0.24,均P＜0.05).与单纯OSA组相比,合并高血压的OSA患者FAAH表达有差异(P＜0.05).结论 OSA可影响ECS合成酶及降解酶的表达,使内源性大麻素物质升高.

Abstract：

Objective To observe the differences of endogenous cannabinoid system(ECS) synthetic and catabolic enzyme levels between the obstructive sleep apnea syndrome(OSA)patients and the control subjects.Methods Patients with OSA confirmed by PSG in our Sleep Center were randomly recruited from July to December,2009.Peripheral blood was obtained to isolate mononuclear cells and the mRNA levels of anandamide(AEA)synthase N-acylphosphatidylethanolamine hydrolyzing phospholipase D (NAPE),fatty acid amide hydmlase(FAAH)and 2-arachidonoylg lycerol(2-AG)synthase diacylglycerol lipase(DAGL)and hydrolase monoacyiglycerol lipase(MAGL)were measured by real-time polymerase chain reaction.The association between the severity of OSA and the enzyme levels were explored.Results There Was a significant difference in beth the NAPE and MAGL levels between patients with OSA and the control subiects.The level of MAGL Was related to some indices of severity of OSA,including the longest apnea time,lowest blood oxygen saturation and the micro-arousal index(r=0.31,0.24,0.34,respectively.all P＜0.05).Compared with patients with OSA alone,patients with OSA complicated by hypertension showed a different level of FAAH(P＜0.05).Conclusion OSA altered the expression of the ECS synthetic and catabolic enzymes,leading to an increase in endogenous cannabinoid substances.     

大麻素受体1在慢性乙型肝炎肝纤维化发生和发展中的作用

Sato等[1]和Teixeira Clerc等[2]先后发现大麻素受体1(CB1R)在慢性肝病发展过程中起着独特作用.为深入研究CB1R在慢性乙型肝炎(CHB)肝纤维化发生、发展过程中的作用,我们用免疫组织化学染色法检测肝组织中CB1R表达情况,分析CB1R半定量评分与纤维化分期、血清转化生长因子(TGF)β1、ALT以及HBV DNA水平等指标的相关性,为今后以CB1R为靶点进行抗肝纤维化治疗提供依据.     

内源性大麻素受体1在肥胖大鼠胰腺表达的实验研究

高脂饲料喂养20周的SD肥胖大鼠呈胰岛素抵抗特征,免疫荧光双标记显示内源性大麻素受体1(CBIR)主要表达于胰岛p细胞,免疫组化和实时定量PCR结果显示,高脂喂养组胰腺CBIR蛋白(6 002.8±855.5 vs 3 712.8±769.6,P<0.01)及mRNA(对照组的16.7倍,P<0.05)表达均高于对照组,提示肥胖时胰岛D细胞CB11R表达量上调可能导致胰岛素抵抗.     

胰岛素抵抗和纤溶功能紊乱与急性冠状动脉综合征的相关性研究

目的探讨胰岛素抵抗(IR)、纤溶功能紊乱与急性冠状动脉综合征(ACS)患者冠状动脉病变严重程度的关系及对患者近期预后的预测价值。方法连续收集2008年2月至2009年7月在我院心内科住院并诊断ACS的患者165例,按IR指数(HOMA指数)水平分为两组,IR组(HOMA-IR>5)80例,非IR组(HOMA-IR≤5)85例,分析两组患者间纤溶功能指标、冠状动脉病变严重程度的差异,并观察纤溶功能紊乱及IR对接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的ACS患者近期(6个月内)预后的影响。结果与非IR组比较,IR组ACS患者组织纤溶酶原激活物(t-PA)水平较低[(8.56±2.39)μg/L比(11.06±2.12)μg/L,P<0.01],纤溶酶原激活物抑制物1(PAI-1)水平较高[(36.21±9.62)μg/L比(22.12±3.97)μg/L,P<0.01],并且冠状动脉病变的严重程度增加:多支病变[26例(32.5%)比13例(15.3%),P<0.05];B2/C型病变[29例(36.3%)比17例(20.0%),P<0.05];Gensini积分(55.63±14.24比44.11±11.42,P<0.01)。IR与PAI-1呈正相关(r=0.293,P<0.01);多因素Logistic回归分析显示,PAI-1及IR均是ACS患者近期预后的独立预测因子(P<0.05)。结论 ACS患者存在纤溶功能紊乱或IR时,冠状动脉病变更为严重,PAI-1水平及IR对ACS患者的近期预后有预测价值。     

叉头状转录因子O1对游离脂肪酸诱导的人肝癌细胞株HepG-2胰岛素抵抗和脂质堆积作用的研究

目的研究叉头状转录因子O1（FoxO1）对游离脂肪酸介导的人肝癌细胞株（HepG-2）胰岛素抵抗和脂质堆积的作用以及对固醇调节元件结合蛋白-1c（SREBP-1c）mRNA和蛋白表达的影响。方法将HepG-2细胞培养后用普通培养基培养为对照组,用含5．0×10μmol／L软脂酸的培养基诱导为软脂酸组,诱导后转染空白质粒为空白质粒组,诱导后转染FoxO1siRNA质粒载体为FoxO1siRNA载体组。运用实时定量聚合酶链反应（RT—PCR）方法检测FoxO1mRNA表达,噻唑蓝（M33＂）比色法检测细胞增殖,葡萄糖氧化酶法检测培养基中葡萄糖消耗量,油红O染色观察细胞脂质堆积;RT—PCR和Westernblot技术分别检测SREBP-1c mRNA表达量以及蛋白的表达量。各组间均值比较采用单因素方差分析,样本间比较采用t检验。结果软脂酸组较对照组细胞葡萄糖消耗量减少（1．174-0．56vsVS4．31±0．21,t=10．587,P〈0．01）、细胞中的脂质堆积增多、FoxO1mRNA升高（0．784-0．10vs0．51±0．12,t=3．629,P〈0．05）、SREBP-1cmRNA升高（0．71±0．17vs0．25±0．08,t=6．290,P〈0．05）、SREBP-1c蛋白升高（0．694-0．10vs0．41±0．07,t=4．797,P〈0．01）。转染FoxO1siRNA质粒载体后葡萄糖消耗量较软脂酸组增加（2．26±0．41vs1．17±0．56,t=3．144,P〈0．05）,FoxO1mRNA、SREBP-1cmRNA、SREBP-1c蛋白的表达较软脂酸组均减少且接近于对照组（分别为0．38±0．06vs0．784-0．10,t=7．164,P〈0．01;0．45±0．13vs0．71±0．17,t=2．479,P〈0．05;0．41±0．06vs0．694-0．10,t=4．797,P〈0．01）,细胞中的脂质堆积也较软脂酸组减少。结论抑制FoxO1的表达,可改善游离脂肪酸诱导的细胞胰岛素抵抗、减少肝脏细胞内脂肪变性,其机制可能是通过下调SREBP-1c的表达。     

沙格列汀联合二甲双胍对新诊断2型糖尿病患者的疗效及安全性

目的观察单用二甲双胍血糖控制不佳的新诊断2型糖尿病患者加用沙格列汀降糖的有效性及安全性。方法2011年11至2012年9月选取180例新诊断的2型糖尿病患者（均为单用二甲双胍12周而血糖尚不达标）,按随机数字表法分为沙格列汀联合治疗（90例）与阿卡波糖联合治疗（90例）,随访12周,观察各项血糖指标变化,并记录不良反应发生情况。组间比较采用t检验,定性资料组间比较采用疋。检验。结果治疗12周后,沙格列汀组与阿卡波糖组空腹血糖（FPG）、餐后2h血糖（2hPG）和糖化血红蛋白（HbAlC）较治疗前明显降低（t值分别为1．401、1．321、1．574、1．510、1．421、1．601,均P〈0．05）。沙格列汀组2hPG及HbAlC较阿卡波糖组下降幅度大（t值分别为－2．711、－2．600,均P〈0．05）,且HbAlc达标率（83．33％）高于阿卡波糖组（67．78％）（ｘ２=5．870,P〈0．05）。沙格列汀组与阿卡波糖组空腹胰岛素水平较治疗前升高{分别为（9．24±1．21）比（8．17±0．25）U／L,（8．62±1．20）比（8．15±0．24）U／L,t值分别为1．563、1．620,均P〈0．05};HOMA－IR指数较治疗前明显下降（分别为2．60±0．21比3．02±0．39,2．76±0．40比3．01±0．38,t值分别为1．431、1．459,均P〈0．05）;沙格列汀组空腹胰岛素水平及HOMA—IR指数的改善优于阿卡波糖组（t值分别为3．451、－3．359,均P〈0．05）;阿卡波糖组胃肠道副反应发生率高于沙格列汀组;沙格列汀组患者服药依从性优于阿卡波糖组（矿=8．760,P〈0．05）。结论沙格列汀与二甲双胍联用治疗新诊断的2型糖尿病患者降糖效果比较明显,不增加体重,低血糖发生风险及胃肠道反应低,患者依从性好。     

高脂高糖饮食诱导建立2型糖尿病小型猪模型

目的建立2型糖尿病小型猪模型,观察其血清中胰高血糖素样肽-1（GLP-1）的变化及其与血糖、胰岛素、C肽的关系。方法将20头4月龄中国实验用小型猪[雌雄各半,体重（16．9±1．1）kg]按数字表法随机分为两组：基础饲料组（CD组）和高脂高糖组（HFSD组）,每组10头,雌雄各半。其中CD组喂食基础饲料,HFSD组喂食高脂高糖饲料,用于制作2型糖尿病小型猪模型,以空腹血糖值≥7．0mmol／L为模型制作成功。分别于实验起始起第0、3、6个月末取2组动物隔夜空腹血,测定血糖、胰岛素、C肽以及血脂;取餐后2h血,测定GLP-1。两组间数据比较采用t检验,GLP-1与其他变量的关系检验用Pearson相关分析法。结果在第6个月末HFSD组体重为（74±11）kg,CD组为（44±4）kg,组问差异有统计学意义（t=7．93,P〈0．01）;在第6个月末HFSD组空腹血糖为（7．6±1．8）mmol／L,CD组为（4．4±0．7）mmol／L,2组差异有统计学意义（t：4．32,P〈0．01）,证实糖尿病动物模型成功建立。与CD组相比,在第6个月末HFSD组TG、TC均显著升高,差异均有统计学意义[分别为（0．83±0．29）、（0．56±0．18）mmol／L和（4．0±1．0）、（2．8±0．5）mmol／L,t=2．05、7．11,均P〈0．05]。HFSD组GLP一1降低趋势明显,其水平与空腹血糖呈负相关（r=-0．81,P〈0．01）,与c肽呈正相关（r=0．73,P〈0．01）,与胰岛素无明显相关趋势（r=0．19,P〉0．01）。结论高脂高糖6个月饲养可建立较为理想的2型糖尿病小型猪模型,其表现为体重增加、血糖升高并且血清TG、TC水平升高,GLP-1水平显著下降。     

不同体质指数的2型糖尿病患者血管性血友病因子水平和胰岛素抵抗的临床研究

目的了解不同体质指数（BMI）的2型糖尿病（T2DM）患者的血管性血友病闪子（vWF）水平以及胰岛素抵抗（IR）程度。方法依据BMI将134例T2DM患者分为正常体重组（50例）、超重组（50例）与肥胖组（34例）,分别测定血浆vWF水平,并评估、比较各组IR程度。结果肥胖组的vWF水平、HOMAIR高于正常体重组（P〈0．05）;各组间胰岛素作用指数（IAI）及定量胰岛素敏感性指数（QUICKI）有统计学差异（P〈0．05）;HOMAIR、IAI及QUICKI各指标间呈正相关。结论肥胖的T2DM患者血浆vWF水平升高、IR程度明最加重。     

妊娠期糖尿病胰岛素抵抗与铁蛋白和游离脂肪酸的相关性研究

目的探讨妊娠期糖尿病(GDM)孕妇胰岛素抵抗(IR)与铁蛋白(SF)和游离脂肪酸(FFA)的关系。方法 2011—2013年,按照随机原则选择在我院就诊的GDM孕妇71例为GDM组,正常孕妇50例为正常孕妇组,体检健康且未孕女性50例为正常非孕组。检测3组受试者血清SF、FFA、空腹血糖(FBG)及空腹胰岛素(Fins)水平,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果正常非孕组、正常孕妇组及GDM组血清SF水平分别为(119.57±22.04)μg/L、(197.81±46.32)μg/L、(388.79±91.67)μg/L,差异有统计学意义(F=57.543,P0.01);GDM组血清SF水平高于正常孕妇组和正常非孕组,正常孕妇组高于正常非孕组(P0.01)。正常非孕组、正常孕妇组及GDM组血清FFA水平分别为(0.43±0.18)mmol/L、(0.67±0.14)mmol/L、(1.03±0.21)mmol/L,差异有统计学意义(F=37.619,P0.01);GDM组血清FFA水平高于正常孕妇组和正常非孕组,正常孕妇组高于正常非孕组(P0.01)。正常非孕组、正常孕妇组及GDM组HOMA-IR分别为(1.83±0.45)、(2.92±0.87)、(3.94±1.02),差异有统计学意义(F=45.071,P0.01);GDM组HOMA-IR高于正常孕妇组和正常非孕组,正常孕妇组高于正常非孕组(P0.01)。Pearson相关分析结果显示,血清SF水平(r=0.832)、血清FFA水平(r=0.759)均与HOMA-IR呈正相关(P0.01);血清SF水平与血清FFA水平呈正相关(r=0.893,P0.01)。结论 GDM孕妇存在IR及高铁蛋白血症、高游离脂肪酸血症,IR程度与血清SF、FFA水平相关,在GDM的早期干预中应重视SF和FFA的调控。     

非糖尿病、非肥胖患者胰岛素敏感性与冠状动脉病变严重程度的相关性分析

目的:探讨非糖尿病、非肥胖患者胰岛素敏感性与冠状动脉疾病严重程度的相关性。方法:连续入选自2013年3月至2014年3月,因胸闷、胸痛症状入院接受冠状动脉造影的非糖尿病、非肥胖患者483例。根据稳态模型胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)定义胰岛素抵抗(IR)组(n=118)和胰岛素敏感组(n=365)。通过冠状动脉造影确定的病变血管数目和SYNTAX积分评价冠状动脉病变的广泛性和严重程度。结果:IR患者年龄偏小[(57.1±10.4)vs.(59.5±9.4)岁,P=0.02]、平均BMI水平高[(27.1±2.8)vs.(25.1±2.8),P=0.001]、高血压(72.9%vs.57.5%,P=0.03)和超质量(76.3%vs.50.7%,P=0.00)发生率高。IR患者冠状动脉无病变比例低(14.4%vs.23.3%,P=0.04),2支或以上血管病变比例高(50%vs.36.7%,P=0.01),平均SYNTAX积分[8(5,15)vs.7(2,12)]以及SYNTAX积分高分组(SYNTAX≥10)的比例增高,差异有统计学意义。在控制多种冠心病传统危险因素后,偏相关分析显示HOMA-IR与病变血管数目(r=0.23,P=0.00)、SYNTAX积分(r=0.20,P=0.01)、支架数目(r=0.17,P=0.02)呈正相关。结论:在非糖尿病、非肥胖患者,胰岛素敏感性下降与冠状动脉病变的广泛性和严重性密切相关,可以作为识别高危患者的工具;改善IR状态可以作为冠状动脉疾病治疗策略的新靶点。     

50例非心源性猝死患者心肺复苏后24小时内左室功能变化的临床研究

目的：研究心肺复苏后多器官功能障碍综合征（PR-MODS）患者在24h内左心室功能变化规律。方法：对急诊50例既往无心功能障碍的PRMODS患者，监测心肺复苏后12、24h左心室舒张末期容积（LVEDV）、收缩末期容积（LVESV）、射血分数（LVEF）和每搏输出量（SV）。将存活〉12h组与存活〈12h组比较。结果：存活〉12h组（36例）其LVEDV和LVESV高于正常值[（106．22±16．06）ml vs （70．0±20．0）ml，t=16．96，P〈0．01；（46．94±11．72）ml vs （24．0±10．0）ml，t=11．74，P〈0．01）]；且其12h内LVEDV和LVESV低于存活〈12h组（14例）[（112．58±16．06）ml vs（129．35±21．15）ml，t=3．03，P〈0．01；（51．56±14．12）ml vs （64．14±14．32）ml，t=2．82，P％0．01）]。存活〉12h组其LVEF和SV低于正常值[（48．78％±5．76％）vs 〉50％；（62．17±5．56）ml vs（71．3±9．97）ml ，t=7．74，P〈0．01）]；且12h内LVEF和SV高于存活〈12h组[（45．06％±6．62％）vs （39．43％±8．14％），t=2．53，P〈0．01；（56．31±7．10）ml vs（54．57±6．80）ml，t=0．78，P〈0．01）]。结论：PR-MODS患者左心功能均较正常低下，且存活时间与心脏损伤程度有关。     

胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血CD4+CD25+调节性T细胞的数量及其功能

目的 了解胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血CD4 +CD25+调节性T细胞(Treg)数量和功能的变化.方法 筛选40例HLA-A2+慢性丙型肝炎患者(其中20例合并胰岛素抵抗),流式细胞仪检测患者CD4+CD25+Treg细胞占外周血中CD4+T细胞的频率,液闪计数仪检测对HCV特异性CD8+T细胞增殖的抑制作用,ELISA法检测IFN-y水平.统计学处理采用t检验.结果 胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者外周血CD4 +CD25+ Treg细胞占CD4+T细胞的(9.5±1.9)％,明显低于慢性丙型肝炎患者的(11.2±2.2)％(t=2.615,P＜0.05).胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)≥4患者的CD4+CD25+ Treg细胞比例为(9.0±1.8)％,明显低于HOMA-IR＜4患者的(10.8±2.3)％(t=2.413,P＜0.05).胰岛素抵抗的慢性丙型肝炎患者CD4+CD25+ Treg细胞和去除Treg的外周血单个核细胞(PBMC)共培养上清液中IFN-y为(4 050±580) pg/mL,明显高于慢性丙型肝炎患者的(2 005±330)pg/mL(t=13.705,P＜0.01).HOMA-IR≥4患者IFN-y为(5 682±986)pg/mL,明显高于HOMA-IR＜4患者的(2 819±660) pg/mL(t=7.630,P＜0.01).结论 随着胰岛素抵抗程度加重,慢性丙型肝炎患者外周血CD4+ CD25+ Treg细胞频率减低,对HCV特异性CD8+T细胞增殖的抑制作用减弱.     

系统性红斑狼疮患者外周血干扰素α、白介素6和肿瘤坏死因子α水平

摘要： 目的 检测系统性红斑狼疮（SLE）患者血清中干扰素α（interferon α,IFN-α）、白介素6（interleukin 6,IL-6）和肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor α,TNF-α）的水平,探讨其在SLE中的作用.方法 采用酶联免疫吸附法检测SLE患者及正常对照者血清IFN-α、IL-6及TNF-α水平;分析其与SLE实验室指标及临床表现的相关性.结果 SLE患者外周血中IFN-α、IL-6水平显著高于正常对照组,差异均有统计学意义[（4.99±7.47）ng/L vs.（2.07±1.98）ng/L,（4.36±7.62）ng/L vs.（1.72±2.87）ng/L,均P〈0.05];其中活动期SLE患者IFN-α水平明显高于稳定期,差异有统计学意义[（9.79±12.04）ng/L vs.（3.13±3.47）ng/L,P〈0.05].SLE患者血红蛋白减低组血清IFN-α水平显著高于血红蛋白正常组,差异有统计学意义[（5.34±6.36）ng/L vs.（2.84±3.58）ng/L,P〈0.05];抗双链DNA抗体阳性患者血清IFN-α、IL-6水平明显高于阴性者,差异均有统计学意义[（7.35±8.12）ng/L vs.（4.22±8.11）ng/L,（10.26±12.76）ng/L vs.（2.37±1.61）ng/L,均P〈0.05].SLE患者血清IFN-α水平与TNF-α、SLE疾病活动指数积分、抗双链DNA抗体呈正相关（r=0.303,P〈0.05;r=0.427,P〈0.01;r=0.368,P〈0.05）,与血红蛋白水平呈负相关（r=-0.345,P〈0.05）;IL-6水平与血细胞沉降率、抗双链DNA抗体呈正相关（r=0.526,P〈0.01;r=0.437,P〈0.05）.SLE患者血清IFN-α水平在有血液系统受累患者中表达水平明显升高,差异有统计学意义（P〈0.05）;血清IL-6水平在伴有发热、关节炎或血液系统损害的患者中明显高于无上述临床表现的患者,差异具有统计学意义（P〈0.01或P〈0.05）.结论 SLE患者外周血细胞因子分泌存在异常,各细胞因子相互作用,共同参与疾病的发生与发展.