应用PCR技术检测斑点热群立克次体特异性DNA

作者对不明热患者血液,立克次体细胞培养物,疫区的微小牛蜱,野鼠脾脏等标本,应用Ｒｒ．１９０．７０ｐ和Ｒｒ．１９０．６０２ｎ引物对,进行ＰＣＲ扩增,检测斑点热群立克次体特异性ＤＮＡ。检测结果１．２０份不明热患者或疑似立克次体病患者血液标本,检出阳性结果的有７份（７／２０阳性）。２．２７份不明热患者或疑似立克次体病患者血液标本的细胞分离培养物,检出阳性结果的有１４份（１４／２７阳性）。３．７组微小牛蜱有２组检出阳性结果（２／７阳性）。４．４７组野鼠脾脏８组检出阳性（８／４７阳性）。     

黑龙江立克次体054株单克隆抗体对斑点热群立克次体抗原…

本文利用三株黑龙江立克次体０５４株（ＨＬＪ－０５４）单克隆抗体对四株斑点热群立克交体西伯利亚种（Ｒ．ｓ．）２４６株，清河株（ＪＨ－７４），立氏立克次体（Ｒ．ｒ．）Ｒ株及ＨＬＪ－０５４株进行了血清学分析，对其蛋白组成及单抗结合抗原特性等方面进行了研究，结果表明：ＪＨ－７４株与２４６株在上述三个方面完全一致，不同于ＨＬＪ－０５４及Ｒ．ｒ．Ｒ株；ＨＬＪ－０５４株与Ｒ．ｒ．Ｒ株与三株单抗血清学反应高度交叉     

四株斑点热群立克次体DNA同源性的初步研究

用缺口翻译法将斑点热群立克次体西伯利亚 246 株 DNA 和康氏 Simko株DNA标记~(32)P。分别与中国分离株黑龙江 054株和新疆精河株 DNA进行斑点杂交,以对国内两分离株基因组与北亚、康氏基因组同源性进行初步研究。结果显示,新疆精河株 DNA与西伯利亚246株DNA高度同源。与血清分类实验结果相吻合。黑龙江 054株DNA 与西伯利亚 246株 DNA和康氏 Simko 株 DNA的杂交阳性最低稀释度均低于阳性对照100倍以上。提示054株基因组与西伯利亚立克次体、康氏立克次体 Simko 株基因组存在较明显之差别。     

斑点热群立克次体新种——虎林—93株的分离和鉴定

本文用鸡胚卵黄囊培养法及实验动物感染法从黑龙江省虎林县境内采集的嗜群血蜱中分离到一株立克体次。命名为ＨＬ－９３株立克次体。经形态学及血清学试验证实为斑点热群立克次体。分别用微量免疫荧光法、十二烷基硫酸钠－聚丙烯胺凝胶不连续电泳法、单克隆抗体免疫酶斑点法、单克隆和多克隆抗体免疫印迹法、聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析法对该分离株进行鉴定并同已知国际标准株、国际及国内参考株进行比较。结果表明：Ｈ     

从病人血液分离的斑点热群立克次体H—5株的鉴定

目的1996年5～6月在黑龙江省绥芬河、东宁地区进行斑点热病的调查。方法采用micro-IF、病原分离及PCR／RFLP等方法。结果（l）发现被蜱叮咬后斑点热临床指征的疑似病人7例，其中血清检测有4例早期与恢复期血清抗SFG立克次体lgM、IgG抗体滴度≥4倍升高;（2）从病人血液分离到1株SFG立克次体H-5株，经鉴定显示该分离株和黑龙江省立克次体54株一致，和SFG各标准株有明显差异。结论该患者为SFG黑龙江立克次体感染，从病原学角度证实该立克次体对人具有致病性。     

微波微量免疫荧光检测斑点热立克次体方法的建立

目的　建立微波免疫荧光检测斑点热立克次体的方法。方法　通过微波促免疫荧光染色最佳时间、最佳火力的选择及微波免疫荧光方法与常规免疫荧光方法敏感性的比较。结果表明 :微波法反应速度快 ,只需 15min就可以观察结果 ,大大缩短了检测时间 ,提高了工作效率 ,并且两种方法在特异性上没有显著性差别。结论　我们认为微波免疫荧光方法是一种简便的、实用的快速检测立克次体的方法。     

斑点热群立克次体中国分离株HL-93和HLJ-054亲缘关系的研究

目的　通过斑点热群立克次体 (spottedfevergrouprickettsiae ,SFGR)rOmpA基因片段的序列分析对HL 93和HLJ 0 5 4的亲缘关系进行研究。方法　用PCR分段扩增rOmpA基因重复区后 1 9kb片段 ,PCR产物直接测序 ,用WinstarDNA分析软件包进行同源性比较、进化树分析及酶切位点的分析。　结果　HL 93株和HLJ 0 5 4株核苷酸及推定氨基酸的同源性均在 99%以上 ,在树形图上单独聚为一类。常用酶的酶切位点完全一致。结论　HL 93株和HLJ 0 5 4株为同一种SFGR ,建议均命名为黑龙江立克次体 ,但可能存在株间差异性。     

斑点热群立克次体分子生物学研究进展

<正> 斑点热群(Spotted Fever Group,SFG)立克次体是引起斑点热的病原体。该群立克次体是立克次体目中最复杂的一群。目前已定论并记载在《Bergey’s细菌学鉴定手册》第九版上的有8种,即:引起落矶山斑点热的立氏立克次体(Rickettsia rickettsii),引起北亚热的西伯利亚立克次体(R.sibiria),引起钮扣热的康氏立克次体(R.conorii),引起昆士兰斑点热的澳大利亚立克次体     

斑点热群立克次体新种──虎林－93株的分离和鉴定

本文用鸡胚卵黄囊培养法及实验动物感染法从黑龙江省虎林县境内采集的嗜群血蜱中分离到了一株立克次体。命名为ＨＬ－９３株立克次体。经形态学及血清学试验证实为斑点热群立克次体。分别用微量免疫荧光法、十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶不连续电泳法、单克隆抗体免疫酶斑点法、单克隆和多克隆抗体免疫印迹法、聚合酶链反应和限制性片段长度多态性分析法对该分离株进行鉴定并同已知国际标准株、国际及国内参考株进行比较。结果表明;ＨＬ－９３株立克次体无论在抗原性多肽上,还是在基因水平上在斑点热群立克次体中都是独特的。根据目前立克次体分类法,ＨＬ－９３株立克次体可以考虑是斑点热群立克次体的新种。     

吉林省桦甸市首次发现斑点热群立克次体的感染

我们对桦甸市人及不同动物进行斑点热群立克次体的血清流行病学调查 ,现将调查结果报告如下。调查对象及血清来源 :从桦甸市红石林业局三道沟林场采集林业工人血 10 5份 ,桦甸市红石镇农民血 10 0份 ,桦甸市城区服务人员血 10 0份 ,桦甸市城区中学生血 10 0份 ,小学生血 10 5份     

内蒙阿盟斑点热群立克次体Ha—91株的分离与鉴定

我们于1991年从内蒙阿盟亚东璃眼蜱分离到一株斑点热群(SFG)立克次体,命名为Ha-91株。免疫荧光法及蛋白免疫印迹分析表明Ha-91株立克次体与西伯利亚立克次体抗原性相近,但不完全相同;明显不同于其它种班点热群立克次体。这是首次证实亚东璃眼蜱为SFG立克次体的贮存宿主,也是首次从内蒙发现抗原性与西伯利亚立克次体不完全相同的SFG立克次体。     

斑点热群立克次体内蒙W-88蛛89102抗原的蛋白免疫印迹分析

蛋白免疫印迹试验表明从内蒙通辽病人旺某血标本分离的斑点热群立克次体W-88株与西伯利亚立克次体(232株及246株)的蛋白图谱完全相同,具有2个分子量为130KD及181KD的主要抗原性多肽及1个反应较弱的分子量为110KD的抗原性多肽,此与其它斑点热群立克次体不同。说明W-88株为西伯利亚立克次体。斑点热群立克次体中西伯利亚立克次体、立氏立克次体、康氏立克次体及派氏立克次体相互间抗原有较强的交叉反应。小蛛立克次体、澳大利亚立克次体与上述立克次体仅有微弱的交叉反应。说明斑点热群立克次体主要抗原分子有相同的决定簇。     

海南岛斑点热和斑疹伤寒立克次体抗体检测报告

斑点热群(Spotted Fever Group,SFG)立克次体感染在中国北部已经证实,最近在中国南部西双版纳也有报告。冯慧敏等 1986年在海南通什地区作过血清学调查,发现当地居民1.5％斑点热群立克次体抗体阳性。内田孝宏 1986年在日本四国地区自患者血液分离出一株斑点热群立克次体,经美国德克萨斯大学医学院鉴定为斑点热群中一个新种,命名为日本红     

PCR基因扩增技术在立克次体研究上的应用

自1910年Ricketts首先发现立克次体病的病原体至今,已有八十余年的历史。半个多世纪以来,人们对立克次体的形态结构、生物学特性、物质代谢和遗传变异等方面都作了广泛深入的研究。立克次体(除战壕热外)是专性细胞内寄生的微生物,它具有自身的酶系     

广东连平县存在新的蜱传斑点热立克次体

目的对采自广东省连平县的3种硬蜱进行蜱传斑点热立克次体检测分析。方法斑点热立克次体的ompA基因片段扩增并测定扩增片段的DNA序列。结果20只蜱分为17组,其中15组PCR检测阳性。对4个测序成功的标本进行聚类分析,证实其中3个序列单独聚为一类,与引起Flinders岛蜱传斑点热的弗诺立克次体(R.honei)、非洲蜱咬热的非洲立克次体(R.africa)、未定名斑点热的斯洛伐克立克次体(R.slovaca)以及西伯利亚立克次体BJ-90株等亲缘关系较近,另一序列与我国长白山地区检测到的JL-02具有较高的同源性。结论本研究提示该地区除了已证实的西伯利亚斑点热外,还存在新的蜱传斑点热。     

海南部分地区不明热患者斑点热立克次体血清学和病原学调查

斑点热是由斑点热群立克次体引起的蟀媒传染病。近年来调研资料表明,海南岛存在该病的自然疫源地[1,2]。由于该病多无特征性临床病征,临床上易误诊为不明原因发热。为了解海南岛斑点热的流行病学特征,探明“不明热”的病因,我们在lgu年4－8月间在海南琼中、三亚等收集了诊为不明原因发热的患者血液切份,应用R3UII：I？liP方法检测斑点群立克次体特异性核酸,结果报告如下。1材料与方法1．1标本的采集lop年4－8月间,在海南琼中大丰农场、新进农场及长征农场职工医院及三亚市人民医院收取诊为不明热的血液标本81份,液氮保存。1．2…     

斑点热群立克次体内蒙W-88株全细胞脂肪酸气相色谱-质谱联用系统的分析

本文报告用毛细管柱气相色谱-质谱联用系统,分析研究了斑点热群立克次体内蒙W-88株(人株)的全细胞脂肪酸。结果表明W-88株与国际标准株西伯利亚立克次体232株(人株)的脂肪酸气相色谱图和其主要色谱峰的质谱图基本一致,从而认为W-88株属于斑点热群中的西伯利亚立克次体(Rickettsia sibirica)。     

海南岛斑点热立克次体病的血清学和病原学调查研究

斑点热群（ＳＦＧ）立克次体是立克次体属中最复杂的一群,分布在世界各地。１９８６年日本内田孝宏在四国地区分离出一株日本红斑热立克次体［１］,为ＳＦＧ的一个新种,而海南岛的自然景观与四国相似,是否也有日本红斑热立克次体感染存在？我们于１９９０年在海南岛各...     

四川石渠县牦牛源蜱感染斑点热群立克次体分子流行病学调查

目的 了解四川省石渠县牦牛体表寄生蜱的种类及其斑点热群立克次体的感染情况。方法 采集牦牛体表的蜱,经形态学初步鉴定后,提取蜱总DNA,PCR扩增蜱16S rRNA基因及斑点热群立克次体ompA、ompB基因,并对扩得阳性产物进行测序和构建进化树分析,从而确定蜱及其携带斑点热群立克次体的种类。结果 在石渠县4个乡共采集到蜱818只,其中西藏革蜱占78.97%(646/818)、青海血蜱占21.03%(172/818)。在818只蜱中有408只扩得斑点热群立克次体ompA、ompB基因,总阳性率为49.8%。经比对分析, ompA基因总共得到4条序列(uncultured Rickettsia sp.shiqu1、R.raoultii.shiqu2、R.raoultii.shiqu3和R.raoultii.shiqu4),ompB基因也得到4条序列(uncultured Rickettsia sp.shiqu1、R.raoultii.shiqu2、R.raoultii.shiqu3和R.raoultii.shiqu4)。经遗传进化分析显示ompA基因的uncultured Rickettsia sp.shiqu1与我国青海未定种的Uncultured Rickettsia sp.(MG228270)亲缘关系最近;ompB基因的uncultured Rickettsia sp.shiqu1与韩国未定种的Rickettsia sp.(KC888953)和Candidatus Rickettsia longicornii(MG906675)亲缘关系最近;ompA和ompB基因的R.raoultii.shiqu2-4与对人有致病性的劳氏立克次体(R.raoultii)的亲缘关系最近。结论 首次在牦牛体表寄生的西藏革蜱中检出劳氏立克次体。石渠县存在西藏革蜱和青海血蜱,蜱传劳氏立克次体感染率较高并且具有感染人的风险。