日本血吸虫大陆株脂肪酸结合蛋白SjFABPc编码区基因的体外扩增及克隆

目的体外扩增日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白（SjFABPc）抗原的编码区基因序列,将其克隆到真核表达质位pcDNA3中,为进一步对其进行核酸疫苗研究奠定基础。方法特定寡核苷酸引物的设计与合成;异硫氰酸胍-酚-氯仿一步法分离日本血吸虫成虫RNA,RT－PCR扩增目的基因;分子克隆常规操作将扩增产物亚克隆至中间载体pUC18中,然后走向克隆到真核表达载体pcDNA3中。结果RT－PCR特异性扩增出SjFABPc编码区基因序列,其片段大小为440hp;经酶切、PCR鉴定表明所构建的质粒pUC－SjFABPc和pCD－SjFABPc中含有所扩增的基因序列。结论RT－PCR扩增的SjFABPc抗原编码区基因序列与预期长度相村合;成功地构建了含目的基因的真核表达质粒pCD－SjFABPc。从而,为进一步对其进行DNA免疫系列研究工作奠定了基础。     

重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白的动物免 …

目的 观察重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白（ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ）免疫动物所诱导的免疫保护效果。方法 用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ分别对昆明系小鼠、Ｗｉｓｔａｒ大鼠及绵羊进行３次免疫,于第３次免疫后２周,分别用４０、６００、及３００条尾蚴攻击,于后６￣８周剖杀小鼠和在鼠,１１周剖杀绵羊,观察各实验组的减虫率及绵羊 组织、粪例减卵率。结果 在小鼠试验中,以ＢＣＧ为佐剂进行皮内免疫获得３３．７％的减虫率,     

日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因在大肠杆菌的表达

目的　克隆并表达日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因以制备血吸虫疫苗候选分子。方法　利用 Ｐ Ｃ Ｒ 技术扩增日本血吸虫大陆株的ｃ Ｄ Ｎ Ａ 基因, 经 Ｂａｍ Ｈ Ｉ和 Ｅｃｏ Ｒ Ｉ双酶切后定向克隆于原核表达质粒 Ｐ Ｅ Ｇ Ｘ２ － Ｔ, 并在大肠杆菌进行表达研究。结果　获得目的基因克隆, 在大肠杆菌可诱导表达约４４ｋ Ｄ 的融合蛋白, 该重组抗原能被慢性血吸虫病人血清特异性识别。结论　成功地表达了一种血吸虫疫苗候选抗原, 为进一步研究打下基础。     

含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白（SjFABPc）基因DNA重组质粒 …

目的 观察裸ＤＮＡ重组质粒ｐＣＤ－ＳｊＦＡＢＰｃ在体外转染ＨｅｐＧ２细胞以及质粒ＤＮＡ免疫鼠肌组织中的表达,为进一步应用该质粒进行ＤＮＡ免疫实验奠定基础。方法 用脂质体介导ＤＮＡ转染法将ｐＣＤ－ＳｊＦＡＢＰｃ转染贴壁细胞ＨｅｐＧ２,Ｇ４１８加压筛选获得阳性克隆细胞并传代培养,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ及Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ鉴定目的基因在ＨｅｐＧ２细胞中的表达,将ｐＣＤ－ＳｊＦＡＢＰｃ质粒肌注免疫ＢＡＬＢ     

重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白的动物免疫试验

目的观察重组日本血吸虫中国大陆株脂肪酸结合蛋白（ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ）免疫动物所诱导的免疫保护效果。方法用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ分别对昆明系小鼠、Ｗｉｓｔａｒ大鼠及绵羊进行３次免疫,于第３次免疫后２周,分别用４０、６００、及３００条尾蚴攻击,于攻击后６～８周剖杀小鼠和大鼠,１１周剖杀绵羊,观察各实验组的减虫率及绵羊免疫组的组织、粪便减卵率。结果在小鼠试验中,以ＢＣＧ为佐剂进行皮内免疫获得３３． ７％的减虫率（Ｐ＜０．０５）,明显高于以 ＦＣＡ／ＦＩＡ为佐剂进行肌肉免疫所获得的减虫率４．７％（Ｐ＞０．０５）。用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ皮内免疫大鼠,获得的减虫率为３１．９％,但和对照组相比无显著性差异。用ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ皮内免疫绵羊,减虫率为５９．２％（Ｐ＜０．０１）,同时,自攻击后第６周至１１周,绵羊免疫组粪便中平均每克虫卵数（ＥＰＧ）分别比对照组减少２３．６％～６３．３％,第１１周解剖时,肝组织ＥＰＧ减少４４．９％,小肠ＥＰＧ减少６９．６％,大肠ＥＰＧ未见减少。结论ｒＳｊ１４ＦＡＢＰ能诱导抗日本血吸虫攻击感染的部分保护作用,值得作为抗日本血吸虫候选疫苗抗原进一步探讨。     

含日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(SjFABPc)基因DNA重组质粒pCD-SjFABPc在哺乳动物细胞中的表达

目的　观察裸DNA重组质粒pCD -SjFABPc在体外转染HepG2细胞以及质粒DNA免疫鼠肌组织中的表达 ,为进一步应用该质粒进行DNA免疫实验奠定基础。方法　用脂质体介导DNA转染法将pCD -SjFABPc转染贴壁细胞HepG2 ,G418加压筛选获得阳性克隆细胞并传代培养 ,SDS -PAGE及Western -blot鉴定目的基因在HepG2细胞中的表达 ;将pCD -SjFABPc质粒肌注免疫BALB/c小鼠 ,于 6 5d后取注射部位的肌组织约 0 3cm3 大小 ,经固定、包埋、切片 ,免疫酶组织化学染色 ,显微照相记录。结果　在被转染的HepG2细胞裂解样品中 ,呈现一分子量约 14kDa大小且能被感染兔血清特异识别的条带 ;免疫组化结果显示免疫组切片标本中有特异性阳性反应。结论　pCD -SjFABPc质粒能在HepG2细胞及小鼠肌细胞中表达目的蛋白     

血吸虫脂肪酸结合蛋白研究现状

脂肪酸结合蛋白在血吸虫脂代谢中具有重要作用。本文着重介绍了两种血吸虫脂肪酸结合蛋白的理化性质，免疫定位，分子生学及其作为双重疫苗的保护性免疫作用。     

日本血吸虫（中国大陆株）FABPc重组抗原高效融合表达,纯化及 …

目的 构建Ｓｊ－ＦＡＢＰｃ表达克隆,获得大量纯化ｒＳｊ－ＦＡＢＰｃ重组（日本血吸虫脂肪酸结合蛋白）抗原,了解其作为侯选疫苗抗原的潜能。方法 以ＰＣＲ法从Ｓｊ－ｃＤＮＡ库中扩增出目的基因片段后亚克隆入表达载体ｐＧＥＸ－６Ｐ－１进行融合表达,经Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ ＾ＴＭ ４Ｂ亲和层析柱和ＰｒｅＳｃｉｓｓｉｏｎ＾ＴＭ Ｐｒｏｔｅａｓｅ酶切后纯化出ｒＳｊ－ＦＡＢＰｃ,Ｗｅｓｔｅｒｎ     

血吸虫细胞质脂肪酸结合蛋白研究进展

本文概述了血吸虫细胞质脂肪酸结合蛋白(FABPc)的分子结构、生物学功能、分子生物学特性及其作为疫苗候选分子的免疫学特征与研究进展。     

日本血吸虫SjFABPc重组质粒裸DNA免疫小鼠的研究

目的：裸DNA重组质粒pCD-SjFABPc经肌肉注射、皮内途径免疫小鼠,观察其在小鼠体内所诱生的细胞及体液免疫应答。方法：碱裂解法大量制备重组质粒pCD-SjF加强免疫1次。分别于末次免疫后的第20、50、65天共3次用MTT法检测脾脏T淋巴细胞增殖与NK细胞活性,并用双夹心ELISA测定血清细胞因子IL－2、IFN－γ及IL－10含量;ELISA法测定免疫鼠血清IgG抗体。结果：MTT法3次动态测定NK细胞及脾淋巴细胞增殖,不同途径pCD-SjFABPc质粒免疫组均明显高于生理盐水（NS)极空质粒对照组（P＜0．05）。不同途径pCD-SjFABPc免疫组IL－2血清含量的平均值均显著高于NS与空质粒对照组（P＜0．01）;IFN－γ的值也均显著高于NS对照组（P＜0．01）,但与空质粒对照组的差异无显著性（P＞0．05）;不同途径pCD-SjFABPc免疫组IL－10值与NS极空质粒对照组的比较则差异无显著性（P＞0．05）。重组质粒免疫后20d、50d检测,抗体滴度无明显增高;65d检测,pCD-SjFABPc免疫组A值明显高于对照组（P＜0．01）。结论：重组质粒免疫后可诱导小鼠产生有效的细胞与体液免疫应答,且能诱导产生同样类型的细胞因子。     

血吸虫脂肪酸结合蛋白研究现状

脂肪酸结合蛋白在血吸虫脂代谢中具有重要作用。曼氏血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sm14)已被TDR列为优先用于动物试验的两种血吸虫疫苗之一。日本血吸虫脂肪酸结合蛋白作为疫苗的各项研究正在深入开展。本文着重介绍了两种血吸虫脂肪酸结合蛋白的理化性质、免疫定位、分子生物学及其作为双重疫苗的保护性免疫作用。     

血吸虫细胞质脂肪酸结合蛋白研究进展

本概述了血吸虫细胞质脂肪酸结合蛋白（ＦＡＢＰｃ）的分子结构、生物学功能、分子生物学特性及其作为疫苗候选分子的免疫学特征与研究进展。     

日本血吸虫大陆株泛蛋白缀合酶E(SjUCEE)基因的A-T克隆

目的　日本血吸虫中国大陆株泛蛋白缀合酶 E (ubiquitin- conjugating enzyme E ,Sj UCEE)的基因克隆和鉴定。方法　特定寡核苷酸引物 PCR扩增目的基因 ;应用分子克隆常规操作方法将扩增产物克隆至载体 pu Cm - T中。结果　 PCR特异性扩增出 Sj UCEE编码区基因序列 ,其片段大小为 75 7bp;经酶切、PCR及测序鉴定表明所构建的质粒 pu Cm - T/Sj UCEE中含有所扩增的基因序列。结论　 PCR扩增的 Sj U CEE抗原编码区基因序列与预期长度相符合 ,成功构建了含目的基因的原核质粒 pu Cm- T/Sj U CEE     

日本血吸虫(大陆株)卵壳蛋白编码基因的克隆和序列测定

目的：克隆和鉴定日本血吸虫虫卵卵壳蛋白（SjEP）编码基因，以寻找血吸虫新的候选疫苗和诊断分子。方法：设计合成引物，分别以日本血吸虫雌、雄成虫cDNA第一链为模板，用PCR法从中扩增出SjEP基因编码序列，将其克隆入pGEM-T载体，用双酶切、以质粒为模板进行PCR扩增和测序进行鉴定。结果：PCR法从雌虫cDNA中扩增出大小为624bp SjEP基因编码序列，重组质粒pGEM-SjEP经双酶切、以质粒为模板进行PCR扩增，均可获得一条与PCR产物一致的DNA片段，序列测定结果表明具有一个长度为624bp的完整开放阅读框，与日本血吸虫（菲律宾株）虫卵卵壳蛋白核苷酸序列有高度同源性（99．9％）。结论：本实验成功地克隆了SjEP编码基因，并进行了序列测定，为进一步研究提供了条件。     

血吸虫脂肪酸结合蛋白分子及其免疫保护性的研究进展

脂肪酸结合蛋白是血吸虫脂代谢过程中的必需载体 ,对血吸虫在脊椎动物宿主体内的发育起决定作用。关于该分子的生物学特性及其在疫苗方面的研究表明 ,脂肪酸结合蛋白能够在宿主体内诱导一定的免疫保护力。     

日本血吸虫大陆株卵黄铁蛋白基因重组及其真核表达

目的 构建日本血吸虫卵黄铁蛋白基因（SjYolFer)的真核表达重组质粒pLYolFer,转染Hela细胞进行表达,并对表达产物进行鉴定。方法 用PCR法从日本血吸虫大陆株成虫cDNA文库中扩增目的基因片段,经RNA班点杂交显示转录差异。然后定向克隆人表达载体pLXSN。转染重组体到Hela细胞中进行表达,并用SDS-PAGE和Westernblot分析表达产物。结果 PCR扩增产物大小约600bp左右,与雌虫RNA的杂交信号明显强于雄虫,获得重组质粒pLYolFer,特异性表达产物约为21ku,能被日本血吸虫感染兔血清及小鼠血清识别。结论 为进一步免疫原性实验奠定了基础。     

日本血吸虫脂肪酸结合蛋白基因在家蚕细胞及幼虫中的表达

目的： 在家蚕细胞和幼虫中表达日本血吸虫脂肪酸结合蛋白（ Ｓｊ１４） 基因。方法： 将该基因克隆于昆虫病毒转移载体ｐ Ｂａｃ Ｐ Ａ Ｋ Ｈｉｓ１ 中, 再与修饰的家蚕核型多角体病毒（ Ｂｍ Ｎ Ｐ Ｖ） 线性化 Ｄ Ｎ Ａ 共转染家蚕细胞,经体内重组得重组病毒 Ｂｍ Ｓｊ１４ , 再将 Ｂｍ Ｓｊ１４ 感染家蚕细胞和幼虫以表达 Ｓｊ１４ , 用 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 和间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ测定表达产物的抗原性。结果： Ｂｍ Ｓｊ１４ 感染家蚕细胞和幼虫后 Ｓｊ１４ 获得较高表达; 表达产物ｒ Ｓｊ１４ （ Ｈｉｓ） 为１８ｋ Ｄａ 的融合蛋白, 在家蚕细胞中的产量约为１００ μｇ／１ ×１０６ 细胞, 在培养上清中产量为３３ μｇ／ｍｌ; 在家蚕血淋巴中得量为４ ｍｇ／ｍｌ; 在家蚕幼虫组织的得量为４６ ｍｇ／ｇ 组织。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ 和间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 显示ｒ Ｓｊ１４ （ Ｈｉｓ） 具有较高抗原性。结论： Ｓｊ１４ 在家蚕细胞和幼虫中获得高效表达且表达产物具有较高抗原性。     

日本血吸虫大陆株粘蛋白样蛋白部分基因的克隆

目的构建日本血吸虫中国大陆株粘蛋白样蛋白(SjMLP)核酸疫苗。方法分子克隆常规操作将扩增产物 SjMLP 编码区基因序列克隆至载体 pUCm-T 中,然后亚克隆到真核表达载体 pcDNA3.1( )中。结果经酶切、PCR 及测序鉴定表明所构建的质粒 pUCm-T/SjMLP 和 pcDNA3.1( )/SjMLP 中含有所扩增的基因序列。结论成功地构建了含目的基因的真核表达质粒 pcDNA3.1( )/SjMLP,从而,为进一步对其进行 DNA 免疫系列研究工作奠定了基础。     

日本血吸虫脂肪酸结合蛋白DNA疫苗诱导小鼠保护性免疫力的研究

目的构建日本血吸虫脂肪酸结合蛋白(Sj14FABP)重组质粒,并观察其在小鼠体内诱导的抗日本血吸虫感染保护作用。方法RT-PCR特异性扩增Sj14FABP基因,将其克隆入真核表达载体pVIVO2,通过PCR、双酶切及测序鉴定。获得的重组质粒pVIVO2-Sj14FABP转染HepG2细胞,间接免疫荧光(IFA)检测蛋白表达;并免疫BALB/c小鼠,30d后攻击感染,感染后45天剖杀,计数检获成虫数和肝脏虫卵数。结果RT-PCR扩增出大小为440bp的Sj14FABP片段,重组质粒经PCR和双酶切后均获得目的片段,转染细胞IFA结果显示有较强荧光。重组质粒免疫小鼠后分别获得24.1%减虫率和27.2%减卵率。结论成功构建和表达重组质粒pVIVO2-Sj14FABP,该核酸疫苗能够诱导小鼠产生部分抗血吸虫感染的保护力。     

日本血吸虫大陆株副肌球蛋白部分基因克隆

目的 :克隆日本血吸虫大陆株副肌球蛋白部分基因。方法 :用 PCR方法根据已发表日本血吸虫菲律宾株副肌球蛋白基因部分核苷酸序列扩增大陆株副肌球蛋白基因。结果 :获得一日本血吸虫大陆株 72 0 bp基因克隆。结论 :经核苷酸序列分析证实 ,本克隆基因与菲律宾株基因核苷酸同源性为 99.0 3%。