大黄酸对系膜细胞葡萄糖摄入的影响及其机制

目的 研究大黄酸对系膜细胞葡萄糖摄入的影响,探讨大黄酸拮抗糖尿病肾脏代谢异常的可能机制。方法 选用体外培养的小鼠肾小球系膜细胞,葡萄糖摄入及其动力学的测定采用２－ｄｅｏｘｙ－［＾３Ｈ］－Ｄ－ｇｌｕｃｏｓｅ摄入法,葡萄糖转运蛋白１（ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｅｒ,１ＧＬＵＴ１）ｍＲＮＡ表达的检测采用Ｎｏｒｔｈｅｒｎｘ印迹,结果 大黄酸对正常培养条件下系膜细胞的葡萄糖摄入及动力学没有明显影响     

大黄酸对体外培养小鼠肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白1表达及葡萄糖摄入的影响

目的　研究大黄酸对系膜细胞葡萄糖转运蛋白１（ Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１） 及葡萄糖摄入的影响,探讨大黄酸拮抗 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 作用的可能机制。方法　选用体外培养的小鼠肾小球系膜细胞, Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ表达的检测 采用 Ｎｏｒｔｈｅｒｎ 印迹, 葡萄糖摄入的测定采用２ｄｅｏｘｙ〔３ Ｈ〕 Ｄｇｌｕｃｏｓｅ 摄入法。结果 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 显著增加系膜细胞 Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 的表达和葡萄糖摄入,大黄酸对正常培养条件下系膜细胞的葡萄糖摄入没有明显影响,但可以拮抗 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 增加系膜细胞 Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１ ｍ Ｒ Ｎ Ａ 表达与葡萄糖摄入的作用。结论　 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 介导系膜细胞葡萄糖代谢的改变以及细胞外基质合成的增加,大黄酸能明显抑制 Ｔ Ｇ Ｆβ１ 所引起的系膜细胞 Ｇ Ｌ Ｕ Ｔ１ 表达与葡萄糖摄入的异常增高。     

大黄酸对葡萄糖转运蛋白1基因转染系膜细胞功能的影响

目的通过观察大黄酸对葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因转染系膜细胞(MCGT1)功能的影响,探讨大黄酸治疗糖尿病肾病(DN)的作用机制.方法利用逆转录病毒载体建立GLUT1基因转染的大鼠系膜细胞,以β-半乳糖苷酶转染细胞(MCLacZ)为对照.用2-脱氧-3H-葡萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入,流式细胞仪分析细胞表型,3H-脯氨酸掺入和流式细胞仪分别检测细胞胶原和纤维连接蛋白(FN)的合成,采用比色法测定谷氨酰胺6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性,RT-PCR检测细胞胶原Ⅳ、FN和GFAT的表达.结果MCGT1的2-DG摄入率明显高于MCLacZ[(741±60.5)dpm*μgprot-1比(92.2±9)dpm*μgprot-1],同时表现出细胞大小、RNA/DNA和蛋白/DNA明显增加的细胞肥大表型,细胞外基质合成增加,MCGT1的3H-脯氨酸掺入量明显高于MCLacZ[(7.0±0.4)dpm*cell-1比(4.6±0.6)dpm*cell-1],GFAT活性明显增强(约增加1.8倍).大黄酸能够减少MCGT1的糖摄取[(560±64)dpm*μgprot-1比(741±60.5)dpm*μgprot-1),纠正MCGT1的肥大状态,并抑制MCGT1细胞外基质的合成和表达,降低MCGT1的GFAT活性.结论GLUT1的过度表达会明显改变系膜细胞的功能,大黄酸能逆转GLUT1基因转染所致系膜细胞功能的改变.     

小鼠肾小球系膜细胞葡萄糖转运蛋白的鉴定及其功能研究

目的：研究葡萄糖转运蛋白１（ｇｌｕｃｏｓｅｔｒａｎｓｐｏｒｔｏｒ，ＧＬＵＴ１）在肾小球系膜细胞上的表达与功能，探讨共在糖尿病肾病发病机制中的作用。方法：ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ蛋白质表达及其功能的检测分别采用ＲＴ－ＰＣＲ，细胞免疫荧光染色，流式细胞仪分析技术２－Ｄｅｏｘｙ－（＾３Ｈ）－Ｄ－Ｇｌｕｃｏｓｅ摄入法与根皮素竞争性抑制实验。结果：证实小鼠肾小球系膜细胞ＧＬＵＴ１ｍＲＮＡ和蛋白质的表达并表肯定了系     

大黄酸对NOD小鼠糖尿病肾病的治疗作用观察

目的 :观察大黄酸对NOD小鼠糖尿病肾病的防治作用。　 方法 :在NOD小鼠发生糖尿病后 ,以大黄酸 15 0mg/ (kg·d)灌胃 ,连续 15周 ,进行有关生化和形态学检查。　 结果 :随着观察时间的延长 ,糖尿病NOD小鼠的血糖持续升高 ;而治疗组小鼠则随着大黄酸治疗时间的延长 ,血糖水平进行性下降。 15周时 ,治疗组与模型组血糖水平比较 ,差异非常显著 [(7 8± 3 80 )mmol/Lvs(13 9± 4 80 )mmol/L ,P <0 0 1]。大黄酸明显降低糖尿病NOD小鼠血甘油三酯 [(0 74± 0 13)mmol/Lvs (2 16± 0 73)mmol/L ,P <0 0 1]和胆固醇 [(1 84± 0 5 5 )mmol/Lvs (6 5 3±5 2 7)mmol/L ,P <0 0 5 ]水平 ,预防血肌酐的升高 [(4 5 6± 9 0 ) μmol/Lvs (6 1 8± 6 6 ) μmol/L ,P <0 0 1],也减少 2 4h尿蛋白的排泄 [(0 37± 0 17)mg/ 2 4hvs (3 32± 0 6 8)mg/ 2 4h ,P <0 0 1]。组织学显示 ,大黄酸治疗后的糖尿病NOD小鼠肾小球和丝球体面积明显减少 ,系膜增宽及细胞外基质积聚明显改善。双侧肾脏重量和肾重指数也明显降低。免疫荧光染色结果显示 ,经大黄酸治疗后的糖尿病NOD小鼠其肾小球FN荧光染色明显减弱 ,免疫球蛋白沉积减少。电镜下可见 ,糖尿病NOD小鼠系膜区增宽 ,系膜基质增多 ,肾小球毛细血管袢基膜增厚 ,上     

TGFβ1反义基因抵制糖尿病肾病肾系膜增生的作用

近年发现转化生长因子β１（ＴＧＰβ１）在糖尿病肾病发生和发展过程中起着重要作用，ＴＧＦβ１中和抗体抑制糖尿病肾病肾脏肥大的研究结果提示，ＴＧＦβ１反义基因对糖尿病可能有相同作用。反义基因包括反义寡核苷酸、反义ＲＮＡ和核酶。中文阐述了其抑制糖尿病肾病肾系膜增生的原理，并对其优越性进行比较。ＴＧＦβ１反义基因是通过在转录、翻译水平封闭ＴＧＦβ１使其表达下降。理想载体的选择，基因转移效率的提高和转移的特     

大黄酸对db/db小鼠糖尿病肾病疗效的观察

目的 :探讨大黄酸对 2型糖尿病模型db/db小鼠糖尿病肾病的疗效及可能机制。　 方法 :以C5 7BL/KsJdb/db糖尿病小鼠为研究对象 ,以db/m小鼠为正常对照 ,大黄酸 12 0mg/ (kg·d)灌胃 ,连续 12周。定期观察血糖、血生化及血胰岛素变化 ,同时测定 2 4h尿白蛋白排泄量。实验结束时 ,宰杀小鼠 ,留取肾组织 ,作病理形态学检查、免疫组化及定量分析。　 结果 :db/db小鼠在实验开始时 ,已表现出明显肥胖 ,高血糖 ,高胰岛素及高脂血症 ,并出现白蛋白尿 ,随着病程延长 ,这些改变更加明显 ,并逐渐达到顶峰 ,胰岛素水平在实验后期迅速下降 ,同时肾功能受到损害 ,血肌酐明显上升。病理检查发现db/db小鼠未治疗组肾小球明显肥大 ,系膜区扩张 ,基膜增厚 ,细胞外基质 (ECM)合成增加 ,免疫球蛋白沉积增加。经大黄酸治疗 12周后 ,高脂血症被明显纠正 ,血糖轻微下降 ,2 4h尿白蛋白排泄量减少 ,肾功能得到保护。病理改变也明显减轻 ,ECM沉积减少 ,系膜区与丝球体面积比值明显减小 ,免疫球蛋白沉积被大部清除。　 结论 :大黄酸可以明显改善db/db小鼠糖尿病肾病的损害 ,延缓肾功能减退。     

大黄酸对糖尿病大鼠转化生长因子β及其受体表达的影响

目的:探讨大黄酸对STZ糖尿病大鼠肾组织转化生长因子β(TGF-β)及其Ⅰ型(TβRⅠ)、Ⅱ型受体(TβRⅡ)的影响及其可能作用机制。方法:采用STZ腹腔注射法建立糖尿病动物模型。96只3月龄雌性Wistar大鼠随机分为正常对照组,糖尿病模型对照组,低剂量大黄酸治疗组[35mg/(kg·d)]和高剂量大黄酸治疗组[70mg/(kg·d)]。第4、8、12周各组处死8只大鼠并收集标本,记录体重、左肾重,检测血糖、血肌酐、24h尿蛋白排泄量,ELISA法检测24h尿TGF-β水平。RT-PCR法、Westernblot法及免疫组化法检测肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ、FN及葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)mRNA及蛋白质表达水平。结果:糖尿病模型大鼠血糖及24h尿蛋白排泄量明显增高,肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ及FNmRNA表达水平在12周内表现进行性升高,肾组织GLUT1mRNA水平在12周内表现为先下调,再上调的趋势。而肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ、FN及GLUT1蛋白质表达水平均在8周时达到高峰值,12周时表现下降。大黄酸治疗可时间-剂量依赖性降低糖尿病大鼠血糖水平,减少24h尿蛋白排泄量,血肌酐水平下降,使肾重指数下降。大黄酸治疗可时间-剂量依赖性下调糖尿病大鼠肾组织TGF-β、TβRⅠ、TβRⅡ、FN及GLUT1mRNA及蛋白质的表达水平。结论:大黄酸可通过降低糖尿病大鼠血糖水平,一方面直接减少TGF-β的合成,另一方面通过抑制己糖胺通路异常活化,抑制GLUT1的产生及其功能活性,减少TGF-β的产生,从而下调TβRⅠ、TβRⅡ表达,降低肾内TGF-β系统活性,延缓糖尿病肾病的发展。     

TGFβ1反义基因抑制糖尿病肾病肾系膜增生的作用

近年发现转化生长因子β1(1GFβ1)在糖尿病肾病发生和发展过程中起着重要作用,TGFβ1中和抗体抑制糖尿病肾病肾脏肥大的研究结果提示,TGFβ1反义基因对糖尿病肾病可能有相同作用。反义基因包括反义寡核苷酸、反义RNA和核酶。文中阐述了其抑制糖尿病肾病肾系膜增生的原理,并对其优越性进行比较。TGFβ1反义基因是通过在转录、翻译水平封闭TGFβ1使其表达下降。理想载体的选择,基因转移效率的提高和转移的特异性是糖尿病肾病基因治疗亟待解决的问题。     

葡萄糖转运蛋白对大鼠肾小球系膜细胞己糖胺通路的影响

目的探讨己糖胺通路(HBP)在葡萄糖转运蛋白1(GLUT1)基因转染系膜细胞功能改变中的作用.方法利用逆转录病毒载体建立GLUT1基因转染的大鼠系膜细胞,以β-半乳糖苷酶转染细胞(MCLacZ)为对照.用2-脱氧-3H-葡萄糖(2-DG)测定细胞葡萄糖摄入,流式细胞仪分析细胞表型和纤维连接蛋白(FN)的合成,采用比色法测定HBP限速酶--谷氨酰胺6-磷酸果糖转氨酶(GFAT)的活性,RT-PCR检测细胞GFAT基因的表达.结果 MCGT1的2-DG摄入率明显高于MCLacZ[(741.0±60.5)dpm/μg蛋白质 vs (92.2±9.0)dpm/μg 蛋白质,P＜0.01],动力学分析发现MCGT1的Vmax是MCLacZ的3.7倍,而两者Km值无明显差别.MCGT1的GFAT活性明显高于MCLacZ[(3.25±0.25)OD365·μg蛋白质-1·30 min-1·10 vs (1.15±0.16)OD365·μg蛋白质-1·30 min-1·     

高糖状态下肾脏系膜细胞葡萄糖转运蛋白1的表达及氟伐他汀的干预研究

目的观察高糖环境中大鼠肾脏系膜细胞（MC）葡萄糖转运蛋白1（GluT-1）及转化生长因子1（TGF-β1）mRNA表达变化以及氟伐他汀（Flu）的干预作用，探讨其保护肾脏的可能机制。方法原代培养MC分为正常对照（NG）组、甘露醇（MG）组、高糖（HG）组及HG＋Flu组，RT-PCR法检测细胞中GluT-1mRNA和TGF-β1 mRNA的表达，放免法测定各组细胞培养上清液中Ⅳ型胶原含量。结果HG组各时相点GluT-1mRNA、TGF-β1 mRNA表达量均高于NC组（P〈0．01），从48h开始HG组细胞上清液Ⅳ型胶原的含量较NC组增高（P〈0．05），而HG＋Flu组GluT-1 mRNA表达量、TGF-β1 mRNA的表达、细胞上清液Ⅳ型胶原含量均较同时点HG组明显降低（P〈0．01）。结论高糖刺激使MC内GluT-1 mRNA表达增高，TGF-β1 mRNA表达上调，Ⅳ型胶原分泌增多。高糖状态下，Flu抑制细胞外基质积聚的作用可能与其抑制高糖引起MC GluT-1过表达、减少TGF-β1的合成有关。     

大黄酸对低剂量链脲佐菌素肥胖糖尿病大鼠糖尿病肾病的影响

用低剂量链脲佐菌素(25mg/kg体重)加高糖、高脂饲料喂养大鼠诱导肥胖糖尿病模型,用大黄酸(100mg·kg-1·d-1)进行预防性干预或治疗性干预,均显示大黄酸能降低低剂量链脲佐菌素肥胖糖尿病大鼠尿蛋白水平、抑制肾小球肥大、TGF-β1mRNA的高表达及改善肾脏病变。     

大黄酸和罗格列酮对db/db糖尿病小鼠代谢紊乱和肾脏损伤的作用比较

目的:比较大黄酸和罗格列酮对糖尿病db/db小鼠代谢紊乱和肾脏损伤的作用,探讨大黄酸防治糖尿病肾病的机制.方法:实验小鼠分四组:db/m正常小鼠对照组;db/db糖尿病小鼠对照组;db/db糖尿病小鼠大黄酸[120 mg/(Kg·d)]台疗组;db/db糖尿病小鼠罗格列酮[4 m/g(Kg·d)]治疗组.连续灌胃12周,于实验末比较各组体重、血糖和血脂水平.PAS染色、免疫荧光分析肾小球病理形态学改变.电镜分析线粒体数目形态改变.Real-time PCR分析脂肪和肌肉组织过氧化物酶体增生物激活受体γ(PPARγ)、胰岛素抵抗因子(resistin)和脂肪酸转运体(FAT/CD36)mRNA表达.结果:大黄酸和罗格列酮治疗均可明显降低db/db小鼠血糖水平.大黄酸治疗还可明显减轻体重,降低血胆固醇和三酰甘油水平,改善高脂血症;而罗格列酮治疗则增加小鼠体重,提高血胆固醇和低密度脂蛋白水平.组织学显示,db/db小鼠肾小球肥大,系膜区扩张,系膜基质增加,大量纤维连接蛋白;同时肾小管线粒体数目减少,体积增大,嵴结构不清.大黄酸和罗格列酮治疗后均可明显改善上述肾脏病理改变,但对线粒体的作用大黄酸较罗格列酮更为明显.db/db小鼠肌肉和脂肪组织PPARγ和resistin的表达均明显下降,FAT/CD36表达增加.大黄酸和罗格列酮治疗后,PPARγ表达增加,FAT/CD36表达下降,resistin在肌肉组织表达增加而在脂肪组织则表达继续下降.结论:大黄酸明显降低db/db糖尿病小鼠血糖,减轻肾脏组织学异常,其作用和胰岛素增敏剂罗格列酮类似,大黄酸改善脂代谢紊乱和治疗糖尿病肾病的作用明显优于罗格列酮.     

高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞JunD表达及转录因子-激活物蛋白1的活化

转录因子激活物蛋白 1(ａｃｔｉｖａｔｏｒｐｒｏｔｅｉｎ 1,ＡＰ 1)在糖尿病肾病特征性病理改变的发生发展中起重要作用。转化生长因子 (ＴＧＦ) β1、肾小球细胞外基质的重要成分层粘蛋白、Ⅰ型胶原的启动子区域都含有ＡＰ 1的结合位点 ;已有文献提示ＡＰ 1的活化介导了高糖诱导的ＴＧＦ β1表达升高〔1〕,同时ＡＰ 1也参与了ＴＧＦ β1诱导的细胞外基质表达升高〔2〕。转录因子ＡＰ 1由Ｊｕｎ蛋白 Ｆｏｓ蛋白异源二聚体或Ｊｕｎ蛋白同源二聚体组成。其二聚体 (ＪｕｎＤ)为其活化形式 ,可与ＴＰＡ反应元件结合 ,启动靶基因的转录。ＡＰ 1…     

大黄酸抑制TGF—β1诱导的肾小管上皮细胞肥大及细胞外基质产生

目的观察大黄酸对TGF-β1诱导的近端肾小管上皮细胞细胞肥大及细胞外基质(ECM)的影响。方法在体外以TGF-β1（2μg／L）刺激LLC-PK1细胞,诱导细胞肥大和ECM合成增加。与此同时,以不同浓度的大黄酸处理细胞,检测细胞体积,蛋白质含量以及3H-亮氨酸掺入以观察细胞肥大的变化;检测细胞孵育24h后上清的纤维连接蛋白(FN)含量,3H-脯氨酸掺入以及细胞胶原Ⅳ及FNmRNA的表达以观察大黄酸对ECM的影响。结果TGF-β1（2μg／L）刺激可以导致LLC-PK1细胞出现细胞肥大,表现为细胞体积,细胞内蛋白量及3H-亮氨酸掺入量明显增加。大黄酸处理后细胞体积及细胞内蛋白量明显降低。TGF-β1也明显增加LLC-PK1细胞3H-脯氨酸掺入量、培养上清中FN含量、以及细胞内胶原Ⅳ和FNmRNA的表达。大黄酸则抑制上述ECM合成的增加,明显降低细胞内胶原Ⅳ,FNmRNA表达水平。结论大黄酸可以逆转TGF-β1诱导的近端肾小管上皮细胞肥大,抑制TGF-β1刺激的ECM合成。这可能是大黄酸预防或改善糖尿病肾脏病变,延缓糖尿病肾病进展的作用机制之一。     

慢性肝病患者血清可溶性细胞间粘附分子—1和转化？…

目的 探讨血清可溶性细胞间粘附分子－１（ｓＩＣＡＭ－１）和转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）与肝纤维化及肝损害的关系。方法 采用酶联免疫吸附法（ＥＬＩＳＡ）检测正常人、慢性肝炎、肝硬变患者血清ｓＩＣＡＭ－１、ＴＧＦ－β１。结果 慢性肝病患者各组血清ｓＩＣＡＭ－１、ＴＧＦ－β１均显著高于正常人,各组间存在显著性差异。两者与透明质酸（ＨＡ）呈正相关,与血清草酰乙酸转氨酶（ＡＳＴ）、总胆红素（ＴＢｉｌ）、     

高糖对肾小球系膜细胞ERK1／2蛋白表达泛素化调节的影响

目的探训高糖作用的肾小球系膜细胞ERK1／2蛋白表达与泛素一蛋白酶体调节途径的关系。方法体外培养大鼠肾小球系膜细胞,将高糖作为刺激因子,特异性泛素蛋白酶体抑制剂MG132作为干预闪素。脂蛋白免疫印迹法检测各组系膜细胞ERK1／2的表达,细胞免疫荧光染色及激光共聚焦娃微镜检测各组系膜细胞ERK1/2的表达、转位。结果高糖组系膜细胞ERK1/2表达较正常血糖组均增多（P〈0．05）,还可促进ERK1/2由胞浆向胞核内激活、转位,高糖组加入MG132后,系膜细胞ERKl／2表达和激活、转位均减弱（P〈0．05）。结论高糖可通过泛素蛋白酶体途径诱导肾系膜细胞ERK1／2表达增强和ERK1／2由胞浆向胞核内激活、转位。     

已糖胺通路的活化介导系膜细胞转化生长因子β1表达

目的：探讨已糖胺通路（ＨＢＰ）在高糖引起系膜细胞功能改变中的作用。方法：利用体外培养的人肾小球系膜细胞,流式细胞术分析细胞体积、细胞周期和纤维连接蛋白（ＦＮ）的含量,以＾３Ｈ－胸腺嘧啶的掺入反映细胞的增生。采用夹心ＥＬＩＳＡ法和ＲＴ－ＰＣＲ检测转化生长因子β１（ＴＧＦ－β１）蛋白质和ｍＲＮＡ的表达。采用比色法测定ＨＢＰ限速酶－谷氨酰胺：６－磷酸果糖转氨酶（ＧＦＡＴ）的活性。结果：ＨＢＰ激活剂－葡萄