Effect of resveratrol on TNF-α-induced vascular endothelial inflammation in vitro

目的 观察白藜芦醇对TNF-α刺激引起的内皮细胞炎症反应的影响,并围绕TNFR1探索相关作用机制.方法 不同浓度(0.01、0.1、1、2.5、5、10、20、50、100、200、400 ng/ml)TNF-α处理人血管内皮细胞株EA.hy926,24h后MTT法和ELISA法分别检测细胞增殖活力和细胞培养液中slCAM-1释放水平;白藜芦醇(浓度为0.1、1、10 μmol/L)预处理24h后,再用TNF-α( 10 ng/ml)处理24h,利用ELISA法检测细胞培养液中sICAM-1释放水平,qRT-PCR法检测ICAM-1mRNA和TNFR1 mRNA表达水平.结果 高浓度TNF-α(≥100 ng/ml)刺激EA.hy926细胞后,细胞增殖活力显著下降(P＜0.05),当TNF-浓度为200 ng/ml时,与对照组比较细胞增殖活力下降约59.7％;浓度为10 ng/ml的TNF-α刺激内皮细胞后,细胞的ICAM-1及TNFR1 mRNA表达明显上调(P＜0.05);白藜芦醇预处理内皮细胞后可明显下调TNFR1 mRNA表达水平(P＜0.05),并显著抑制TNF-α诱导的ICAM-1的表达(P＜0.05),且抑制作用随着浓度的增加而增强.结论 白藜芦醇可能通过抑制TNFR1表达,进而抑制TNF-α刺激引起的炎性因子释放,减轻内皮炎性损伤.     

白藜芦醇对香烟烟雾提取物诱导的血管内皮细胞早衰的干预作用研究

目的 探讨白藜芦醇对吸烟诱导的血管内皮细胞线粒体功能异常及内皮细胞早衰的改善情况.方法 培养人脐静脉内皮细胞株,加入香烟烟雾提取物模拟吸烟环境.实验分为正常对照组、吸烟模拟组和白藜芦醇处理组,后两组以不同浓度的香烟烟雾提取物(cigarette smoke extract,CSE)干预12、24和48 h后,检测β-半乳糖苷酶染色阳性率、线粒体细胞色素C氧化酶活性、端粒酶活性和细胞内活性氧(ROS)水平.结果 白藜芦醇在12、24和48 h均能改善不同浓度CSE诱导的内皮细胞增殖抑制、端粒酶活性和细胞色素C氧化酶活性,并能降低β-半乳糖苷酶染色阳性细胞率和细胞内ROS水平,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 白藜芦醇以内皮细胞线粒体功能为标靶,能够抑制吸烟引起的血管内皮细胞线粒体功能异常导致的细胞早衰,为临床治疗提供了新的方向.     

肌酸抑制TNF-α诱导内皮细胞粘附分子mRNA的表达

目的 探讨肌酸（creatine,CR）对血管内皮细胞(endothelail cells,EC)黏附分子E-selectin和ICAM-1及其 mRNA表达的影响。方法 以不同浓度的CR加至培养的血管EC 24h, 用TNF-α诱导EC活化3h,添加或未添加腺苷A2A受体拮抗剂(ZM241385),应用ELISA测定EC的E-selectin和ICAM-1的表达水平、用RT-PCR半定量E-selectin和ICAM-1mRNA的表达。结果 EC经TNF-α诱导后,黏附分子及其mRNA表达明显增加,与对照组相比,E-selectin和ICAM-1分别增加82%和32%,E-selectin和ICAM-1的mRNA分别增加53%和24%。在添加CR 0.5mmol/L组,这些表达明显下调,当CR添加浓度为5mmol/L时它们的表达接近对照组水平。CR对激活的CE黏附分子表达抑制作用能因ZM241385的添加而解除(P<0.05)。结论 CR抑制活化了的EC E-Selectin 和ICAM-1mRNR的表达,从而下调EC的E-selectin和ICAM-1的表达以发挥抗炎作用。     

肌酸抑制TNF-α诱导内皮细胞黏附分子mRNA的表达

目的探讨肌酸(creatine,CR)对血管内皮细胞(endothelail cells,EC)黏附分子E-selectin和ICAM-1及其mRNA表达的影响。方法以不同浓度的CR加至培养的血管EC24h,用TNF-α诱导EC活化3h,添加或未添加腺苷A2A受体拮抗剂(ZM241385),应用ELISA测定EC的E-selectin和ICAM-1的表达水平、用RT-PCR半定量E-selectin和ICAM-1mRNA的表达。结果EC经TNF-α诱导后,黏附分子及其mRNA表达明显增加,与对照组相比,E-selectin和ICAM-1分别增加82%和32%,E-selectin和ICAM-1的mRNA分别增加53%和24%。在添加CR0.5mmol/L组,这些表达明显下调,当CR添加浓度为5mmol/L时它们的表达接近对照组水平。CR对激活的CE黏附分子表达抑制作用能因ZM241385的添加而解除(P<0.05)。结论CR抑制活化了的ECE-Selectin和ICAM-1mRNR的表达,从而下调EC的E-selectin和ICAM-1的表达以发挥抗炎作用。     

TNF-α诱导血管内皮细胞凋亡的研究

血管内皮细胞对维持心血管系统的正常功能有着重要的作用,它的凋亡引起的血管萎缩衰退,不仅在临床上造成很多人类疾病而且会促进感染性休克的发生、发展。肿瘤坏死因子α有着强大的细胞毒性,可以造成血管内皮细胞凋亡。本文对肿瘤坏死因子α造成血管内皮细胞凋亡的机制进行综述。     

阿托伐他汀对人脐静脉内皮细胞Lox-1、TNF-α及ICAM-1表达的影响

目的研究阿托伐他汀(ATV)对脂多糖(LPS)诱导的人脐静脉内皮细胞血凝素样氧化低密度脂蛋白受体-1(LOX-1)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响,探讨ATV防治动脉粥样硬化的机制及其抗炎作用。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,加入ATV干预24h,收集细胞,用荧光定量PCR方法测定LOX-1、TNF-α及ICAM-1mRNA的表达;用Western blotting法测定LOX-1、TNF-α及ICAM-1蛋白表达。结果用LPS刺激人脐静脉内皮细胞后,引起LOX-1、TNF-α及ICAM-1的高表达,与空白对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),用ATV干预以后显著抑制LOX-1、TNF-α及ICAM-1的表达,与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论 ATV可抑制LOX-1、TNF-α及ICAM-1的表达,这可能是其发挥抗动脉粥样硬化作用及抗炎作用的机制之一。     

葡萄糖浓度对血管内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1αmRNA及蛋白的影响

目的:探讨葡萄糖浓度对人脐静脉内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α(MIP-1αt)mRNA及蛋白的影响.方法:将培养的人脐静脉内皮细胞用不同浓度(5.6,11.1,16.7,22.0,28.0 mmol/L)的葡萄糖孵育10 d及同一浓度(22.0 mmol/L)葡萄糖孵育0,5,10,15 d.采用原位杂交方法及Western Blot检测MIP-1αmRNA及蛋白的表达水平.结果:在一定浓度范围内(5.6～28.0 mmol/L),随着葡萄糖浓度增加,内皮细胞内MIP-1 α表达明显增加,22.0 mmol/L时表达最高,28.0 mmol/L时表达稍降低;各组内皮细胞内MIP-1α mRNA表达的平均积分光密度值分别为12.54±2.78,17.69±1.38,23.35±2.13,32.23±2.25及28.46±2.46(P＜0.05);各组内皮细胞内MIP-1α蛋白的表达量分别为5.6 mmol/L葡萄糖组的1.42倍、1.87倍、2.58倍及2.12倍(P＜0.05).同一浓度葡萄糖(22.0 mmol/L)孵育后,随着作用时间延长,内皮细胞内MIP-1α表达逐渐增加,至15 d时表达最高;各组内皮细胞内MIP-1α mRNA表达的平均积分光密度值分别为10.43±2.13,18.67±1.46,32.23±2.25及38.28±3.14(P＜0.05);各组内皮细胞内MIP-1α蛋白的表达量分别0 d组的1.75倍、3.06倍及3.64倍(P＜0.05).结论:葡萄糖浓度可促进内皮细胞MIP-1α mRNA及蛋白的表达,这种作用与葡萄糖的浓度及作用时间呈正相关.     

内皮细胞粘着分子(CAMs)和体外循环所致的全身炎性反应综合征(SIRS)

正如败血症、重症胰腺炎、复合外伤和严重烧伤一样 ,体外循环可导致全身炎性反应综合征 (ＳＩＲＳ)。但其独特之处在于 ,体外循环提供的是明确的、可预期发生的炎性反应 ,并可提供基线对照 ,有利于对ＳＩＲＳ的病理生理和治疗的研究 ,在心脏外科临床也有重大意义[1～ 3] 。内皮细胞激活和ＣＡＭｓ的细胞外膜表达是体外循环后全身炎性反应综合征的最主要的表现[4 ] 。ＣＡＭｓ调节着白细胞粘附在血管内皮的过程 ,及其随后的向内皮下组织迁移和脱粒。血浆中可溶性ＣＡＭｓ的水平可用于认定这种分子在细胞外膜的表达 ,ＣＡＭｓ的抑制可防止体外…     

抑肽酶对人脐静脉内皮细胞活化的影响

目的体外观察抑肽酶对人脐静脉内皮细胞活化的影响,探讨其抑制体外循环术后系统性炎性反应的机制.方法将体外培养的人脐静脉内皮细胞随机分为空白组,人TNFα(肿瘤坏死因子α)活化组,抑肽酶 TNFα组,采用免疫细胞化学法观察人脐静脉内皮细胞细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达.用细胞培养小室测定中性粒细胞跨迁单层融合的人脐静脉内皮细胞的迁移率.结果抑肽酶可显著抑制TNFα诱导的人脐静脉内皮细胞ICAM-1的表达(P＜0.05),抑肽酶对中性粒细胞跨迁活化的单层人脐静脉内皮细胞有显著影响(P＜0.05).结论抑肽酶可抑制TNFα诱导的人脐静脉内皮细胞的活化;抑肽酶可抑制中性粒细胞跨迁人TNFα活化的单层人脐静脉内皮细胞,抑肽酶可能通过抑制内皮细胞的活化来抑制体外循环术后系统性炎性反应.     

TNF-α诱导人脐静脉血管内皮细胞凋亡和炎症机制研究

目的 观察肿瘤坏死因子α(tumour necrosis factor alpha,TNF-α)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)凋亡及炎症反应的影响,并探讨其损伤血管内皮细胞的可能机制。 方法 常规培养的HUVECs至第三代,随机分为对照组和TNF-α组。对照组常规方法培养作为对照,TNF-α组应用200 ng/ml的TNF-α刺激HUVECs 6 h后,采用流式细胞法检测HUVECs的凋亡率,Western blot法检测ICAM-1、VCAM-1、E-selectin和eNOS的蛋白表达水平;流式细胞术和Western blot法进一步评价核因子-κB (NF-κB)、激活蛋白-1(AP-1)的表达激活情况。 结果 与对照组相比,200 ng/ml TNF-α能明显增加HUVECs的凋亡率(P<0.05),同时上调ICAM-1、VCAM-1、E-selectin炎症因子在HUVECs中的表达(P<0.05),TNF-α抑制eNOS的释放(P<0.05),并激活NF-κB、AP-1的表达(P<0.05)。 结论 TNF-α能显著增加HUVECs的凋亡和炎症因子表达,其损伤机制可能是通过激活NF-κB、AP-1途径,并抑制eNOS的释放有关。      

氧化低密度脂蛋白诱导小鼠心脏内皮细胞炎性反应中Toll样受体2的表达

目的 研究氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导小鼠心脏内皮细胞炎性反应中Toll样受体（TLR）2的表达.方法 分离小鼠心脏内皮细胞,对照组给予DMEM培养,干预组分别给予不同浓度的ox-LDL（20,40 μg/mL）作用细胞24 h,采用Western blot法检测细胞间黏附分子-1（ICAM-1）、TLR2的表达,利用ELISA方法检测炎症因子白细胞介素（IL）-6、IL-8的变化.结果 与对照组相比,ox-LDL干预组TLR2蛋白表达减少（P＜ 0.01）,ICAM-1蛋白表达增多（P＜ 0.01）,IL-6和IL-8表达明显增加（P＜0.05）;与低浓度组比较,高低浓度组ICAM-1、IL-6和IL-8表达差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 ox-LDL可以诱导小鼠心脏内皮细胞的炎性反应,同时可能抑制了TLR2受体的表达.     

芹菜素对动脉粥样硬化大鼠氧化应激和炎性反应的影响

目的研究芹菜素对动脉粥样硬化大鼠氧化应激和炎性反应的影响。方法将实验用大鼠120只随机分为正常对照组、模型组、芹菜素(20、40、80 mg/kg)预处理组和辛伐他汀(1.8 mg/kg)预处理组。除正常对照组外,其余各组大鼠采用高脂饲料喂养加注射VD3的方法制备大鼠早期动脉粥样硬化模型,造模过程中芹菜素预处理组和辛伐他汀预处理组每天灌胃给药1次,而正常对照组和模型组以等量生理盐水灌胃。12周后,测定各组大鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)、一氧化氮合酶(NOS)、活性氧簇(ROS)的含量以及血浆中炎症细胞因子[C反应蛋白(CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)]的水平,通过HE染色观察主动脉形态学变化并进行主动脉病变分级。结果与模型组比较,芹菜素40、80 mg/kg预处理组大鼠血清中SOD、CAT活性显著升高(P<0.05或P<0.01),MDA、NOS、ROS含量显著降低(P<0.05或P<0.01),芹菜素80 mg/kg预处理组GSH-Px活性显著升高(P<0.01);芹菜素40、80 mg/kg预处理组血浆中CRP、TNF-α、IL-1β、IL-6水平均显著降低(P<0.05或P<0.01),且芹菜素80 mg/kg预处理组IL-10水平显著升高(P<0.01)。主动脉病理性形态学变化显著改善,主动脉病变分级显著降低,以芹菜素80 mg/kg预处理组效果最为显著(P<0.01)。结论芹菜素具有抑制动脉粥样硬化大鼠氧化应激损伤和炎性反应的作用。     

Androsterone在血管内皮细胞Eahy926中对SR-BI表达的影响

目的 研究法尼酯X受体(farnesoid X receptor,FXR)对B类清道夫受体Ⅰ(scavenger receptor class B typeI,SR-BI)表达的调控.方法 FXR配体androsterone不同浓度处理Eahy926细胞,RT-PCR检测FXR特异靶基因小异源二聚体伴侣受体(small heterodimer partner,SHP)表达量的变化.RT-PCR和Real-time PCR分析经androsterone处理后Eahy926细胞中SR-BI mRNA表达的变化.用Western blot检测SR-BI蛋白表达的变化.结果 经androsterone刺激,Eahy926细胞中SHP的表达明显升高,表明FXR被活化.在经androsterone刺激的血管内皮细胞中,SR-BI在转录水平和翻译水平,表达均显著上升.结论 FXR可在血管内皮细胞系Eahy926中上调SR-BI的表达水平.

Abstract：

Objective To investigate the effect of FXR on scavenger receptor class B type Ⅰ(SR-BI) expression.Methods Human vascular endothelium Eahy926 cells were treated with FXR agonist androsterone,and the specific target gene of FXR SHP mRNA was detected by RT-PCR. SR-BI mRNA and protein were determined using RT-PCR, real-time PCR and Westem blotting. Results The level Of SHP mRNA in Eahy926 cells increased after androsterone treatment at different concentrations for 24 h,demonstrating FXR activation in the cells.RT-PCR,real-time PCR and Western blotting detected increased SR-BI expression at both mRNA and protein levels after FXR activation.Conlusion FXR increases the expression of SR-BI in human vascular endothelium cells.     

可溶性血管内皮细胞蛋白C受体的检测

目的：检测冠心病、糖尿病、系统性红斑狼疮（SLE）及败血症患血浆中的可溶性血管内皮细胞蛋白C受体（sEPCR)水平，以探讨sEPCR在不同疾病患血浆中的表达情况及临床意义。方法：要用酶联免疫双抗体夹心法建立sEPCR的检测方法，检测30例冠心病，56例糖尿病，63例SLE，30例败血症及20例正常对照血浆中sEPCR水平，结果：sEPCR在糖尿病患血浆中有较高水平的表达，明显高于正常对照血浆中的sEPCR水平（P＜0．001），败血症患血浆sEPCR水平明显高于正常对照（P＜0．001），SLE合并血栓及SLE无血栓患的sEPCR水平均高于对照组（P＜0．005及P＜001），但SLE并发血栓的sEPCR水平与无血栓患的sEPCR水平差异无显意义（P＞0．05），冠心病患血浆中sEPCR水平与正常对照组无显意义（P＞05），结论：sEPCR可能是促使糖尿病患体内高凝状态形成及并发血栓形成的重要因素之一。sEPCR与SLE患发生无明显关系，而主要参与SLE患及败血症患炎性反应过程。     

皮肌炎/多肌炎患者血清对血管内皮细胞的影响

目的:探讨皮肌炎/多肌炎(dermatomyositis/polymyositis,DM/PM)患者血清对血管内皮细胞活性的影响.方法:取16例未经治疗的DM/PM患者血清为DM/PM组,其中8例治疗前取血清作为治疗前组,经治疗病情好转后再次取血清作为治疗后组,13名健康体检者血清为正常组.体外培养脐静脉内皮细胞(hu...     

黄酒对TNF-α诱导的大鼠血管内皮功能的影响

目的：探讨黄酒对TNF-α诱导的大鼠血管内皮功能的影响。方法大鼠原代主动脉血管内皮细胞（VECs）经分离培养及纯化鉴定后,取第3～4代细胞用于实验。不同浓度酒精（1.0%、1.2%、1.4%、1.6%、1.8%、2.0%）与50μg/L TNF-α共同孵育大鼠 VECs）48h,MTT 法检测酒类对细胞活性的影响,确定最佳干预浓度后分为对照组、TNF-α组、TNF-α＋瑞舒他汀组（10μmol/L）、TNF-α＋酒精组（0.5%、1.0%、1.5%）、TNF-α＋黄酒组（0.5%、1.0%、1.5%）,共9组。培养24h后收集样品,硝酸还原酶法测定培养液上清液NO的含量,化学比色法测定血浆中内皮型一氧化氮合酶（eNOS）活性,免疫印迹法检测VECs中eNOS、细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的表达量。结果与TNF-α组相比,瑞舒伐他汀组、黄酒1.0%组、黄酒1.5%组eNOS活力、eNOS的表达及NO含量升高（P＜0.01或0.05）,ICAM-1表达降低（P＜0.01或0.05）;与瑞舒伐他汀组相比,黄酒1.0%组及黄酒1.5%组eNOS表达降低,ICAM-1表达升高（P＜0.01或0.05）。结论小剂量黄酒能够增强eNOS的活力及其表达,可使NO含量增加,抑制ICAM-1表达,具有类他汀样作用。     

天然及氧化型低密度和极低密度脂蛋白诱导培养的内皮细胞表达巨噬细胞炎性蛋白1α和血管细胞粘附分子1

为探讨天然及氧化修饰脂蛋白对培养的内皮细胞 MIP- 1α及 VCAM- 1m RNA表达的作用 ,取正常人新鲜血液 ,用超速梯度离心法分离出 L DL 和 VL DL 后 ,加 Cu2 使之氧化 ,成为 OX- L DL 和 OX- VL DL。培养人脐静脉内皮细胞 (EC) ,待其汇合后分别加入 L DL、OX- L DL 、VL DL、OX- VL DL,使其终浓度为 2 5 μg/ ml,对照组不加脂蛋白。培养 2 4h后 ,收集 EC,用异硫氰酸胍法提取其总 RNA,用地高辛标记的 MIP- 1α和 VCAM- 1c DNA探针进行斑点杂交。结果显示 ,培养的 EC能表达 MIP- 1α和 VCAM- 1m RNA,当其暴露于 L DL 和 VL DL 后 ,其 MIP- 1α和 VCAM- 1m RNA表达轻度增加 ,而当 EC暴露于 OX- L DL 和 OX- VL DL 后 ,其 MIP- 1α m RNA表达水平明显增高 ,分别为对照组的 3.2倍和 2 .5倍 ;VCAM- 1m RNA的表达分别为对照组的 2 .6倍和 2 .17倍。提示脂蛋白 ,特别是氧化修饰的脂蛋白 ,可促进 EC表达 MIP- 1α和 VCAM- 1m RNA,在动脉内膜单核细胞的募集中起重要作用     

辛伐他汀对同型半胱氨酸诱导的人脐静脉内皮细胞的毒性和炎症反应的影响

目的探讨辛伐他汀对同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)诱导的内皮细胞毒性和炎症的抑制作用。方法用不同浓度的HCY(0．1、0．25、0．5、1 mmol／L)处理人脐静脉内皮细胞24 h,采用四氮唑蓝检测细胞存活率;辛伐他汀(1、10、20μmol／L)预处理人脐静脉内皮细胞1 h,然后与HCY(0．25 mmol／L)共孵育,采用MTT检测细胞存活率,Western印迹和ELISA分析不同时间点相关炎性因子蛋白的表达。结果HCY处理后,人脐静脉内皮细胞存活率显著降低;而经过辛伐他汀(1、10、20μmol／L)预处理后,内皮细胞活性分别为47％±4％、68％±6％、89％±6％,明显高于单纯HCY(0．25 mmol／L)处理组(22％±3％,P均<0．01)。由HCY诱导的内皮细胞TNF-α、IL-6、MCP-1及ICAM-1的表达分别为0．23±0．05、0．14±0．03、0．13±0．04、0．21±0．07,与0 h时比较差异无统计学意义。结论辛伐他汀对同型半胱氨酸介导的内皮细胞损伤及炎症反应有明显的抑制作用。     

γ-干扰素在体外对血管内皮细胞凋亡的诱导作用

目的: 观察γ-干扰素(IFN-γ)对血管内皮细胞(EC)的作用及其对肿瘤坏死因子-α(TNFα)表达的影响。方法: 体外培养EC,MTT法检测IFN-γ(0、20、40、80μg/L)对EC生长的直接影响,半定量逆转录-多聚酶链反应检测不同浓度的IFN-γ对EC凋亡相关基因TNFαmRNA的表达的影响。结果: IFN-γ可抑制体外培养的EC生长(P<0.01),且具有剂量依赖;IFN-γ能明显上调EC的TNFα表达。结论: IFN-γ可能通过上调EC中TNFα的表达而诱导EC凋亡。