转染核结合因子a1/成骨细胞特异性转录因子2基因在兔皮肤成纤维细胞成骨表达中的作用

目的探讨外源性小鼠核结合因子a1(Cbfa1)／成骨细胞特异性转录因子2(Osf2)基因在兔皮肤成纤维细胞中的瞬时表达对该细胞成骨表型表达的作用。方法在阳离子脂质体介导下,将含外源性小鼠Cbfa1／Osf2基因的真核表达载体pSG5一Cbfa1／Osf2导入新西兰兔皮肤成纤维细胞。用RT—PCR方法检测Cbfa1、骨钙素、碱性磷酸酶及Ⅰ型胶原前肽基因表达,以Western—Blot方法检测Cbfa1蛋白表达,以对硝基苯二磷酸底物法及放射免疫方法分别检测碱性磷酸酶活性及骨钙素分泌情况,并通过茜素红染色及扫描电子显微镜检测转染细胞形成骨性结节的能力。结果转染pSG5-Cbfa1／Osf2真核表达质粒的兔皮肤成纤维细胞内可见Cbfa1 mRNA及Cbfa1蛋白瞬时表达,骨钙素mRNA、碱性磷酸酶mRNA及Ⅰ型胶原前肽mRNA大量表达,碱性磷酸酶活性增强,骨钙素大量分泌,细胞表面形成骨性结节。结论转染．pSG5-Cbfa1／Osf2真核表达质粒的兔皮肤成纤维细胞能表达成骨相关基因及蛋白质,并在其表面形成骨性结节。     

细胞周期素D1、p16、Rb蛋白在骨肉瘤中的表达及其意义

我们应用免疫组织化学方法 ,检测43例骨肉瘤和 15例骨软骨瘤手术标本中细胞周期素Ｄ1(ｃｙｃｌｉｎＤ1)、ｐ16、Ｒｂ蛋白的表达 ,探讨 3种基因表达在骨肉瘤发生发展中的意义 ,现报道如下。一、材料和方法1.标本 :中国医科大学附属第一、二医院骨科 1986～ 1998年手术切除骨肉瘤标本 43例 ,按细胞相对分化程度分为 :高分化 9例 ,低分化 34例。良性骨软骨瘤 15例。全部 5 8例标本均不伴有其他部位肿瘤。均经体积分数为10 %甲醛常规固定、脱水透明、石蜡包埋。经常规苏木精 伊红 (ＨＥ)染色 ,重新确诊分级后 ,进行免疫组织化学染色。2 .主要试…     

转录因子E2F与胃癌关系的研究进展

转录因子E2F在控制细胞周期的进展中起关键作用，E2F既能作为靶基因的激活剂使细胞由G1期向S期过渡，又能作为靶基因的抑制剂并诱导细胞凋亡。它在胃癌的形成中是起癌基因作用还是起抑癌作用，其机制正处研究之中，本文对其研究进展进行综述。     

抑癌基因Rb与P16蛋白在骨肉瘤中的表达及其相互关系

为了研究Ｒｂ与Ｐ１６蛋白在骨肉瘤中的表达及其相互关系，作者应用免疫组织化学方法检测了Ｒｂ与Ｐ１６蛋白在４０例骨肉瘤、１８例正常骨组织中的表达。结果发现Ｒｂ蛋白在骨肉瘤标本中的表达低于正常骨组织中的表达；Ｐ１６蛋白在骨肉瘤标本中的表达却高于正常骨组织中的表达，其差异均有显著性意义（Ｐ＜０．０１）。而在骨肉瘤标本中Ｒｂ与Ｐ１６蛋白的表达之间还存在着负相关关系（ｙｓ＝－０．３５５，Ｐ＜０．０５）。且还发现Ｒｂ与Ｐ１６蛋白表达情况与骨肉瘤病人的肿瘤转移无关，而与肿瘤的直径大小有关。作者认为Ｒｂ与Ｐ１６蛋白表达的改变可能与骨肉瘤的发生、发展有关，并在一定程度上反映了Ｒｂ与Ｐ１６基因的异常     

转录因子E2F1在非梗阻性无精症睾丸组织中的表达

目的旨在探讨E2F1核转录因子在人类睾丸组织中的表达与生精功能的关系。方法选取32例人类非梗阻性无精子症睾丸组织石蜡标本，采用HE染色观察曲细精管病理变化，同时用免疫组化SP法检测睾丸组织中核转录因子E2F1的表达;对照组选取13例人类正常睾丸组织。通过分析病理组HE染色，比较E2F1阳性染色范围及程度，评价E2F1核转录因子与生精功能的关系。结果非梗阻性无精子症睾丸组织HE染色显示精曲小管中无或仅少量精子，精曲小管的生精上皮脱落、排列紊乱，精曲小管壁部分有玻变、纤维变，生精细胞萎缩。32例非梗阻性无精子症睾丸组织中E2F1阳性表达8例，阴性表达24例，阳性率25%;13例正常睾丸组织中E2F1的阳性表达9例，阴性表达4例，阳性率69.23%;x2=7.694，差异有显著性（P〈0.01）。结论（1）E2F1核转录因子表达缺失与睾丸生精功能障碍密切相关;（2）非梗阻性无精子症睾丸组织精曲小管的生精上皮脱落、排列紊乱，生精阻滞。     

转录因子E2F与胃癌关系的研究进展

转录因子E2F在控制细胞周期的进展中起关键作用 ,E2F既能作为靶基因的激活剂使细胞由G1期向S期过渡 ,又能作为靶基因的抑制剂并诱导细胞凋亡。它在胃癌的形成中是起癌基因作用还是起抑癌作用 ,其机制正处研究之中 ,本文对其研究进展进行综述。     

转染E1AF对膀胱癌细胞侵袭能力的影响

目的 研究腺病毒早期转录单位增强子结合蛋白（Ｅ１ＡＦ）对膀胱癌细胞侵袭能力的影响。方法 构建真核表达载体ｐｃ ＤＮＡ３－Ｅ１ＡＦ,并以此载体转染膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７。采用Ｂｏｙ－ｄｅｎ Ｃｈａｍｂｅｒ穿膜实验分别检测末转染的ＢＩＵ－８７细胞、转染后细胞和转染空载体细胞的体外侵袭能力。将末转染的ＢＩＵ－８７细胞和转染后的细胞分别接种至裸鼠进行体内实验。结果 转染后细胞侵袭能力较转染前明显增加,肿     

p16及其相关因子在骨肉瘤中的表达和调控研究

目的 通过研究骨肉瘤中ｐ１６及其相关因子表达情况,了解其在骨肉瘤中的异常程度及其功能缺失的实质。 方法 用Ｗｅｓｔｅｒｎ方法检测骨肉瘤组织和不同周期骨肉瘤细胞ｐ１６蛋白及其相关因子的定量表达,用免疫荧光方法检测不同周期骨肉瘤细胞ｐ１６的定痊表达情况。结果 １２例骨肉瘤组织中１０例有ｐ１６蛋白表达,所有标本均有ｐＲｂ表达,但其中８例以高度磷酸化为主;通过骨肉瘤细胞系证明ｐ１６在Ｇ１期表达最低,随周期     

E2F1转录激活SKA1在促进肝癌细胞增殖中的作用及机制研究

目的:本文旨在研究SKA1是否是调节肝癌恶性增殖的一个关键分子,并进一步探究其机制,为后续靶向治疗提供分子理论基础。方法:通过生物信息学技术分析来自TCGA数据库中的肝癌数据,分析了SKA1在肝癌中的表达量,同时,我们还分析了SKA1的表达与肝癌患者预后的关系。采用基于脂质体介导的细胞转染技术,构建过表达SKA1的肝癌...     

E1A因子在膀胱癌组织中的表达及其对基质金属蛋白酶-2的调控作用

目的测定人膀胱移行细胞癌组织中，不同病理分期的人细胞5型腺病毒早期转录单位E1A因子(E1AF)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达，探讨二者之间关系及其临床意义。方法采用RT-PCR和WesternBlot法，检测41例人膀胱癌组织中E1AF和MMP-2的mRNA及蛋白表达，并运用计算机图像扫描分析仪测定图像的吸光度值(A值)进行半定量分析。结果26例表浅性膀胱癌中，E1AF的阳性率为26.90%，MMP-2和E1AF的A值分别为36.09±5.82和29.08±6.26；15例浸润性膀胱癌中，E1AF的阳性率为66.67%，MMP-2和E1AF的A值分别为119.98±10.44和89.62±10.96。E1AF的阳性率、MMP-2和E1AF的A值在两组均有显著性差异；E1AF在G3级膀胱癌组织中的表达量显著高于G     

下调OCT4基因对人骨肉瘤F5M2细胞系增殖能力的影响

目的 探讨下调八聚体结合转录因子4(OCT4)基因对骨肉瘤细胞F5M2增殖能力的影响.方法 采用RNA干扰技术将OCT4基因特异性小干扰RNA(siOCT4)转染到处于对数生长期的F5M2骨肉瘤细胞中作为siOCT4组,并设立siNC组(转染siNC)及空白对照组.采用实时荧光定量PCR及蛋白免疫印迹法检测并比较siOCT4组和siNC组细胞中的OCT4 mRNA水平及蛋白表达水平;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法及5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(EdU)法检测并比较各组细胞的增殖能力;采用克隆形成试验检测并比较三组细胞的克隆形成能力.结果 siOCT4组中OCT4的mRNA表达水平及蛋白表达水平均较siNC组显著降低;MTT法的实验结果显示:与siNC组及空白对照组比较,siOCT4组细胞的生长曲线显著右移,增殖能力显著低于其他两组;EdU法检测结果显示:siNC组细胞的24 h平均增殖率为48.50％±4.54％,而siOCT4组细胞的24 h平均增殖率为32.30％±1.72％;与空白对照组及siNC组细胞比较,siOCT4组的克隆形成能力显著降低;以上差异均具有统计学意义(P均<0.05).结论 下调骨肉瘤细胞F5M2中OCT4的表达能抑制其细胞的增殖能力.     

肺癌抑癌基因1对人骨肉瘤细胞株MG63生长和增殖的影响

目的 观察肺癌抑癌基因1(TSLC1)对人骨肉瘤细胞株MG63的生长和增殖能力的影响.方法 将稳定表达TSLC1的人骨肉瘤MG63细胞株M8T设为研究对象,转染空载体的骨肉瘤MG63细胞株M8P设为对照组,人骨肉瘤细胞株MG63设为空白组.噻唑蓝(MTT)法检测M8T细胞增殖;FACSort流式细胞仪检测细胞周期变化及细胞凋亡;将2×107个瘤细胞皮下注射裸鼠,观察体内成瘤的影响.结果 稳定转染TSLCl的实验组M8T细胞株与对照组及空白组细胞比较,其细胞增殖能力下降,生长速度明显受到抑制;M8T细胞G0-G1期细胞数为(63.76 ±2.78)％,生长周期出现了G0～G1期阻滞,细胞凋亡总数为(28.45 ±0.65)个,显著增加(P＜0.01);裸鼠皮下成瘤于皮下注射后3周开始形成.结论 TSLC1能明显抑制骨肉瘤MG63细胞的生长和增殖.     

缺氧对骨肉瘤SaOS-2细胞生物学特性的影响

目的观察体外缺氧条件下骨肉瘤SaOS-2生物学特性的改变。方法建立骨肉瘤细胞体外缺氧培养模型；流式细胞仪分析细胞周期改变；划痕损伤法和Boyden侵袭小室检测细胞体外侵袭迁移能力的变化；半定量逆转录-聚合酶链反应（RT—PCR）和免疫组织化学（SP法）观察缺氧培养不同时相（8、16、24h）血管内皮生长因子（VEGF）的表达。结果缺氧培养16h内，细胞周期表现为G1期阻滞。24h后，细胞周期恢复常氧状态。缺氧培养24h后，骨肉瘤细胞体外迁移和侵袭能力明显增强。缺氧处理后，VEGF mRNA以及蛋白的表达在缺氧条件下均显著增强。结论骨肉瘤细胞存在缺氧耐受机制，通过一系列生物学特性的改变来应对缺氧带来的不利。     

吡咯喹啉醌对体外培养雪旺细胞增殖及Cyclin E基因表达的影响

目的 观察吡咯喹啉醌(PQQ)对体外培养的大鼠坐骨神经雪旺细胞(Sc)增殖的影响,寻找PQQ促进Sc体外高效扩增的最佳效应浓度,并探讨其促进Sc增殖的作用机制.方法 取SD鼠婴坐骨神经体外培养Sc,应用免疫荧光技术鉴定Sc的纯度,采用噻唑蓝(MTT)比色分析法选择PQQ促进Sc增殖的最佳效应浓度,设6个浓度梯度(1、10、102、103、104、105nmol/L),用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测PQQ对雪旺细胞Cyclin E基因表达的影响.结果 PQQ浓度为1、10、1×102、1×103nmol/L时能促进雪旺细胞的增殖,以浓度为1×102nmol/L时促进作用最明显,PQQ浓度为1×104nmol/L时与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而PQQ浓度为1×105nmol/L对SC具有一定的抑制作用;RT-PCR法显示与对照组比较PQQ浓度为1×102nmol/L时能促进雪旺细胞Cyclin E基因的表达.结论 适宜浓度的PQQ能促进Sc的增殖,其机制可能与其促进Sc中Cyclin E基因的表达有关.     

肼苯哒嗪对人骨肉瘤细胞的生长抑制及对WWOX基因的调控作用研究

 目的 通过观察肼苯哒嗪、5’-氮杂-2’-脱氧胞嘧啶核苷酸(5’-aza- 2’-deoxycytidine,5-Aza-CdR)及其联合使用对人成骨肉瘤细胞MG-63的生长抑制作用,并检测对骨肉瘤细胞中WWOX基因表达的调控作用,初步明确肼苯哒嗪对骨肉瘤细胞的作用机制。方法 取对数生长期的人骨肉瘤细胞株MG-63制成细胞悬液,计数板计数5×10⁴个/ml,加入96孔板。分为肼苯哒嗪组(药物浓度为0.1、l.0、10 μmol／L)、5-Aza-CdR组(药物剂量为5、10、20 μmol／L)、肼苯哒嗪联合5-Aza-CdR组(药物剂量为0.1　μmo/L+5 μmo/L、l.0 μlmol／L+10 μlmol／L、10 μmol／L+20 μmol／L)及对照组(培养基)。噻唑蓝(MTT)比色法检测药物对MG-63细胞生长抑制作用;流式细胞仪检测药物对细胞周期分布作用及凋亡影响; Real-Time PCR 技术检测WWOX mRNA表达改变情况;Western-blot检测药物处理后各组细胞中WWOX蛋白表达水平。结果 肼苯哒嗪、5-Aza-CdR及其联合应用对MG-63细胞的增殖均有明显抑制作用,且呈浓度依赖性并与作用时间相关;联合应用较单用抑制作用明显增强,且各组差异有统计学意义。肼苯哒嗪、5-Aza-CdR可诱导骨肉瘤MG-63细胞凋亡,联合应用时诱导凋亡作用加强。肼苯哒嗪、5-Aza-CdR对骨肉瘤MG-63细胞中WWOX 基因表达有促进作用,联合作用使WWOX表达明显增强。结论 肼苯哒嗪可明显抑制骨肉瘤细胞的增殖并诱导其凋亡,并促进WWOX基因的表达,其作用机制可能为肼苯哒嗪能够使抑癌基因WWOX基因甲基化状态逆转,表达增加,从而抑制MG-63细胞的增殖。     

反义基因转染抑制骨肉瘤中血管内皮生长因子表达的研究

目的　观察以腺相关病毒 (rAAV)为载体的血管内皮生长因子 (VEGF)反义基因转染的骨肉瘤细胞中VEGF蛋白的表达。方法　用不同量 (0、2 0、5 0、10 0、2 0 0、2 40 μl)的以rAAV为载体包装的反义VEGF基因 (rAAV antiVEGF)转染人骨肉瘤细胞系MG 63细胞 ,收集转染前后的培养细胞及上清 ,用链霉素抗生素蛋白 过氧化酶连接法 (SP)和免疫印迹法 (Western blot)检测VEGF蛋白的表达 ;用逆转录聚合酶链式反应 (PCR)检测VEGFmRNA表达。结果　SP结果表明转染rAAV antiVEGF基因的量越多 ,显色越淡 ;Western Blot结果表明转染rAAV antiVEGF基因的量越多 ,其灰度越低。测得不同量 (0、2 0、5 0、10 0、2 0 0、2 40 μl)的转染基因其相应的吸光度值分别为 86614± 13 776、73 2 45± 15 414、610 78± 12 12 4、5 465 7± 10 95 3、3 980 2± 113 0 8、3 2 0 14±15 0 5 7,差异有显著性 (P <0 .0 5 ) ;PCR检测其灰度值分别为 0 .986、0 .913、0 .784、0 .60 6、0 .43 1、0 .40 8,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。结论　rAAV antiVEGF可封闭VEGFmRNA ,使已转染rAAV antiVEGF的MG 63细胞表达的VEGF蛋白减少。     

pcDNA3.0-CBP真核表达质粒的构建及对肺腺癌SPC-A1细胞的影响

目的 观察外源性CBP基因稳定转染对人肺腺癌SPC-A1细胞体外生长的影响.方法 构建CBP真核表达质粒pcDNA 3.0-CBP,应用pcDNA 3.0-CBP和空载体质粒pcDNA3.0(-),脂质体转染法转染体外培养的人肺腺癌细胞株SPC-A1,G418(800mg/L)筛选出抗性克隆.Western blot检测转染前后CBP蛋白水平变化,噻唑蓝(MTT)比色法分析细胞生长抑制作用,Transwell体外侵袭实验和Wound-healing实验对细胞进行侵袭和迁移能力研究.结果 转染CBP基因的细胞株有目的 基因整合和相应蛋白高表达.MTT检测pcDNA 3.0-CBP转染组活细胞吸光度(0.2787±0.0786)低于未转染组(0.5089±0.1301)和pcDNA 3.0(-)空载体转染组(0.4804±0.1547).pcDNA 3.0-CBP转染组与两对照组吸光度的差异有统计学意义(P<0.01).细胞侵袭实验表明pcDNA 3.0-CBP转染组穿透滤膜数(3.52±0.77)明显少于未转染组(8.17±0.86)和空载体转染组(8.22±1.30),转染组与两对照组侵袭力的差异有统计学意义(P<0.01).细胞迁移实验转染组细胞迁移数(71.30±7.68)明显少于未转染组(119.40±8.38)和空载体转染组(111.41±12.56),转染组与两对照组迁移力的差异有统计学意义(P<0.01).结论 外源性CBP基因稳定转染可抑制人肺腺癌SPC-A1细胞的恶性表型,可能通过对Src家族激酶(SFKs)的负反馈调节抑制肿瘤细胞的增殖、侵袭.     

肿瘤转移抑制基因nm23-H1转染对人胆管癌细胞系增殖能力的影响

目的 探讨nm23-H1基因转染对人胆管癌细胞系增殖能力的影响。方法 通过脂质体法将含有全长nm23-H1 cDNA的真核表达载体转染人胆管癌细胞系QBC939,Northern blotring及免疫组织化学观察转染前后细胞内nm23-H1基因的mRNA及蛋白表达情况,噻唑蓝(MTT)比色法检测转染前后细胞体外增殖能力变化,流式细胞仪分析转染前后细胞周期及凋亡改变。结果 转染成功的QBC_(939)-nm23细胞nm23-H1基因的mRNA及蛋白表达明显上升,体外增殖能力下降,G_0/G_1期、G_2/M期、S期比例及凋亡率(％)分别为(70.24±2.05、12.37±0.91、17.39±2.95、9.54±0.78),与亲本QBC_(939)细胞(56.57±0.99、16.00±1.39、27.44±2.09、4.23±1.05)及对照组QBC_(939)-C细胞(56.17±0.82、17.23±0.77、26.60±0.53、3.67±0.49)相比,G_0/G_1期细胞比例明显增加,G_2/M期及S期细胞比例明显下降,凋亡细胞增加(P<0.05)。结论 nm23-H1基因可以抑制体外胆管癌细胞的增殖能力及诱导凋亡。     

STIM1和Orail在骨肉瘤细胞HOS增殖和凋亡中的作用

目的：探讨钙库操纵的钙内流（ SOCE）组成蛋白STIM1和Orai1蛋白在骨肉瘤细胞系HOS增殖和凋亡中的作用。方法用shRNA干扰技术抑制STIM1和Orai1蛋白的表达。 Western blot测定STIM1和Orai1的蛋白表达;激光共聚焦检测细胞Ca2＋内流变化;噻唑蓝（ MTT）比色法检测HOS细胞的增殖能力;流式细胞技术检测HOS 细胞的凋亡变化。结果与空白对照组和转染negative-shRNA的对照组相比,转染48 h后STIM1-shRNA 组STIM1蛋白的表达均明显降低（ P＜0.01）,Orai1-shRNA组Orai1蛋白的表达也明显降低。抑制STIM1和Orai1蛋白后,细胞Ca2＋内流减少。转染24、48和72 h后,STIM1-shRNA组及Orai1-shRNA组HOS细胞的增殖能力明显下降（ P＜0.01）。流式细胞检测显示,与control组和negative-shRNA组相比,转染48 h后细胞的周期受到明显抑制,而凋亡水平明显升高（P＜0.01）。结论 STIM1和Orai1在骨肉瘤细胞HOS增殖中有重要作用,抑制STIM1和Orai1蛋白表达可以抑制HOS细胞增殖、促进凋亡。