异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及TLR4在其中的作用

目的 评价异丙酚对LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α释放的影响及Toll样受体4(TLR4)在其中的作用.方法 将体外培养的BV-2小胶质细胞接种于96孔培养板中,采用随机数字表法,将其随机分为4(n=12):对照组、LPS组、异丙酚组和LPS+异丙酚组.LPS组加入LPS1μg/ml孵育24h;异丙酚组加入异丙酚30 μmol/L孵育24 h;LPS+异丙酚组同时加入LPS 1 μg/ml和异丙酚30 μmol/L孵育24h.于孵育6h时,采用ELISA法检测细胞上清液TNF-α浓度,以此反映TNF-α的释放量,采用RT-PCR法测定TLR4 mRNA表达;于孵育24h时,采用ELISA法检测细胞上清液IL-1β浓度,以此反映IL-1β的释放量,采用Western Blot法检测TLR4蛋白表达.结果 与C组比较,LPS组和LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量升高,TLR4 mRNA及其蛋白表达上调(P＜0.05);与LPS组比较,LPS+异丙酚组IL-1β和TNF-α的释放量降低,TLR4 mRNA及其蛋白表达下调(P＜0.05).结论 异丙酚可抑制LPS诱导BV-2小胶质细胞IL-1β和TNF-α的释放,其机制与抑制TLR4的表达有关.     

急性胰腺炎大鼠脑组织TNF-α mRNA和蛋白表达及其意义

目的 探讨急性胰腺炎大鼠脑组织中TNF-α mRNA和蛋白的表达及其对胰性脑病发病机制的意义.方法 应用5%、1%的牛磺胆酸钠分别诱导急性坏死性胰腺炎(ANP)和急性水肿性胰腺炎(AEP)大鼠模型,同时设立假手术组,每组16只.分别于模型诱导后12 h,以酶联免疫吸附(ELISA)法测定大鼠血液和脑脊液标本中TNF-α的含量,RT-PCR方法测定脑组织TNF-α mRNA的表达,Western-Blot测定TNF-α蛋白的表达水平,免疫组化观察TNF-α蛋白的定位表达.结果 ANP组、AEP组和假手术组的血清TNF-α水平分别为1065.6pg/ml、577.5pg/ml和543.8pg/ml,脑脊液TNF-α水平分别为820.9pg/ml、307.4pg/ml和481.6pg/ml.ANP组血清和脑脊液TNF-α水平同AEP组和假手术组相比,差异均有显著性(P＜0.05).ANP组脑组织TNF-α mRNA和蛋白的表达明显增强.ANP组TNF-α蛋白的表达定位于大脑小胶质细胞和神经元细胞.结论 在ANP病程中,大鼠脑组织可能是细胞因子过度表达的来源之一;脑组织中,TNF-α主要由小胶质细胞和神经元细胞表达;TNF-α的过度表达可能是ANP早期脑髓鞘损伤的原因之一.     

异丙酚对缺氧复氧诱导大鼠肝脏Kupffer细胞释放TNF-α、IL-1β和NO的影响

异丙酚是麻醉诱导与维持常用的静脉麻醉药物之一.研究表明异丙酚可减轻肝脏缺血再灌注损伤.肝脏缺血再灌注时可诱发单核巨噬细胞释放肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)和一氧化氮(NO)等细胞因子,从而导致组织损伤.肝脏Kupffer细胞是位于肝窦内的巨噬细胞.本研究拟通过观察异丙酚对缺氧复氧诱导大鼠肝脏Kupffer细胞释放TNF-α、IL-1β和NO的影响,探讨其减轻肝脏缺血再灌注损伤的机制.     

前列地尔预处理对移植肝TNF-α和细胞凋亡的影响

目的探讨前列地尔预处理对移植肝组织中肿瘤坏死因子α(TNF-α)水平的变化和细胞凋亡的影响。方法将30例终末期肝病患者随机分为实验组和对照组,对照组供体摘取后常规以4℃UW液灌注保存,实验组供体摘取后以UW液灌注同时以10μg前列地尔经门静脉灌注,4℃保存。实验组和对照组均在供肝恢复血流后3小时抽取外周静脉血检测肝功能,并取部分肝组织检测TNF-α水平和肝细胞凋亡指数。结果实验组肝组织中TNF-α水平低于对照组(P<0.05),实验组肝细胞凋亡指数低于和对照组。结论前列地尔预处理可减少供肝TNF-α释放,抑制炎症反应,减少细胞凋亡,减轻肝细胞损伤,对供肝有保护作用。     

血红素加氧酶-1对TNF-α引起内皮细胞炎症损伤的保护作用

目的探讨血红素加氧酶-1(HO-1)在肿瘤坏死因子-α(TNF-α)导致肺微血管内皮细胞损伤中的保护作用。方法采用TNF-α刺激人肺微血管内皮细胞(HPMECs)模拟重症急性胰腺炎肺损伤的体外模型,锌原卟啉-IX(ZNPP-IX)作为HO-1抑制剂预处理细胞。试验分为对照组、TNF-α组、ZNPP-IX组。CCK8比色法检测细胞活性,采用Western blotting法及RT-PCR法检测HO-1、细胞间黏附分子-1(ICAM-1)的表达,黏附试验检测HPMECs对多形核细胞(PMN)的黏附力。结果 1与对照组相比,TNF-α组(78.69%±5.54%)、ZNPP-IX组(62.00%±4.27%)细胞活性明显降低(P0.01);2与对照组相比,TNF-α组(1.59±0.19)HO-1表达增高(P0.05),ZNPP-IX组(0.01±0.01)比TNF-α组显著降低(P0.01);3与对照组相比,TNF-α组(32.72±0.95)、ZNPP-IX组(85.33±2.37)ICAM-1表达明显升高(P0.01),且ZNPP-IX组比TNF-α组更显著(P0.01);4TNF-α引起HPMECs对PMN黏附力增高,抑制HO-1表达后,黏附作用增强。结论 HO-1可能通过下调ICAM-1的表达降低炎症时HPMECs对PMN的黏附,从而改善重症急性胰腺炎引起的肺损伤。     

小胶质细胞与三磷酸腺苷在疼痛中的作用

大量证据表明,细胞内外三磷酸腺苷(adenosine 5'-triphosphate,ATP)在疼痛信号转导中起着重要作用.目前研究主要集中在ATP及其受体在慢性疼痛(尤其是神经病理性疼痛)中的作用及其可能机制.机体受到刺激后,激活的小胶质细胞会高表达P2X4受体和其他ATP受体,从而释放脑源性生长因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)、白介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白介素-6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-a,TNF-α)和一氧化氮(nitric oxide,NO).了解这些ATP受体的重要作用将为慢性疼痛治疗提供新的策略.     

TNF-α及TNF-α抗体对破骨细胞V-ATP酶的影响

目的研究不同浓度的TNF-α及TNF-α抗体对破骨细胞上V-ATP酶表达量的影响。方法体外诱导小鼠RAW264.7细胞分化为破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶染色检测破骨细胞生成情况。然后将破骨细胞分为对照组、TNF-α干预组及TNF-α抗体干预组,TNF-α干预组、TNF-α抗体干预组分别用低、中、高三种浓度的TNF-α、TNF-α抗体干预48 h。用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time PCR)、Western blot检测破骨细胞V-ATP酶的mRNA和蛋白表达水平。结果 TRAP染色检测提示有多核破骨细胞生成。TNF-α处理组V-ATP酶mRNA表达水平显著高于对照组(P0.001);TNF-α抗体处理组V-ATP酶mRNA表达水平显著低于对照组(P0.001)。同时,TNF-α处理组V-ATP酶蛋白表达水平显著高于对照组(P0.05);TNF-α抗体处理组V-ATP酶蛋白表达水平显著低于对照组(P0.05)。结论 TNF-α可提高破骨细胞V-ATP酶的表达;TNF-α抗体可抑制破骨细胞V-ATP酶的表达。上述提示TNF-α可能通过提高破骨细胞V-ATP酶的表达从而增加破骨细胞的骨吸收作用。     

TNF-α介导重症急性胰腺炎肾上腺细胞的凋亡

目的观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)在重症急性胰腺炎(SAP)肾上腺细胞凋亡中的作用。方法采用随机数字表法将40只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(SO组)和SAP组,SAP组又再分为3、6、12及24 h4个亚组,每组8只大鼠。采用5%牛黄胆酸钠(0.1 m L/100 g)逆行胆胰管注射法建立SAP大鼠模型,测定各组大鼠血清淀粉酶及脂肪酶水平,观察胰腺和肾上腺组织的病理学改变,并进行评分;用TUNEL法检测肾上腺细胞凋亡情况,并比较各组大鼠的凋亡指数;采用Western blot法检测肾上腺组织中TNF-α及Caspase-3蛋白的表达。结果造模术后各时间点SAP组大鼠血清淀粉酶和脂肪酶水平以及胰腺组织和肾上腺组织的病理学评分均较SO组显著升高(P0.05);随病程延长,SAP组大鼠肾上腺细胞凋亡指数也进行性升高,并均高于SO组(P0.05);SAP组大鼠肾上腺组织中TNF-α和Caspase-3蛋白的相对表达量也逐渐增高,24 h时略有下降,但均高于SO组(P0.05)。结论 TNF-α可能参与了SAP时的肾上腺损伤,可能通过激活Caspase-3在SAP肾上腺细胞凋亡中发挥重要作用。     

大麻素受体2在谷氨酸诱发小胶质细胞损伤中的作用

目的 评价大麻素受体2(CB2受体)在谷氨酸诱发小胶质细胞损伤中的作用.方法 采用随机数字表法,将小胶质细胞随机分为4组:对照组(C组)细胞常规培养26h;小胶质细胞损伤组(Ⅰ组)细胞于含10 mmol/L谷氨酸的培养基中孵育24h;CB2受体特异性激动剂AM1241组细胞于含2 μmol/L AM1241的培养基中孵育2h,然后于含10 mmol/L谷氨酸的培养基中孵育24 h;CB2受体特异性拮抗剂AM630组细胞含2 μmol/L AM630的培养基中孵育2h,然后于含10 mmol/L谷氨酸的培养基孵育24h.测定细胞活力和LDH释放量,观察细胞形态学.结果 与C组比较,Ⅰ组、AM1241组和AM630组细胞活力降低,LDH释放量增加(P＜0.05);与Ⅰ组比较,AM1241组细胞活力升高,LDH释放量减少(P＜0.05),AM630组细胞活力和LDH释放量差异无统计学意义(P＞0.05).结论 谷氨酸通过抑制CB2受体的功能诱发小胶质细胞损伤.     

慢性排斥移植肾TNF_α和IL-2R原位表达

本文应用免疫组化技术对18例慢性排斥移植肾活检组织中肿瘤坏死因子α(TNFα)及白细胞介素Ⅱ受体(IL-2R)表达进行检测。结果表明TNFα和IL-2R在移植肾中表达较正常肾脏明显增强,且主要分布于移植肾间质浸润炎性细胞(淋巴细胞和巨噬细胞),提示慢性排斥移植肾中浸润淋巴细胞和巨噬细胞处于活化状态,其可能通过产生和释放各种细胞因子发挥其各种生物学作用,从而介导细胞免疫损伤,因而认为细胞免疫可能在慢性排斥发病中起作用,细胞因子及其受体则是这一过程中的重要介质。     

p38MAPK信号途径抑制剂SB203580对大鼠重症急性胰腺炎胰腺组织中TNF-α表达的调控作用

目的研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)信号转导通路在大鼠重症急性胰腺炎(SAP)胰腺组织中的变化规律,探讨p38 MAPK特异性抑制剂SB203580对SAP发展和胰腺组织中TNF-α表达水平的影响。方法采用胰胆管内注射牛磺胆酸钠的方法诱导大鼠重症急性胰腺炎模型,使用SB203580抑制P38MAPK信号传导通路,通过监测大鼠血清淀粉酶(Serum amylase,AMS)和TNF-α的表达检测,观察P38MAPK抑制剂SB203580对大鼠SAP发展和TNF-α表达水平的影响。结果 SAP组TNF-α的表达明显高于对照组。胰腺组织TNF-α的表达水平随胰腺炎病情的进展而升高(P<0.05),使用p38MAPK抑制剂可以显著降低TNF-α的表达(P<0.05)。结论 SB203580可能通过抑制胰腺组织p38 MAPK信号通路进而降低TNF-α的活性,减少炎症介质的释放,达到减轻胰腺损伤,治疗急性胰腺炎的目的。     

LINC00052靶向miR-145发挥对TNF-α诱导人关节软骨细胞损伤的保护作用

目的明确长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)LINC00052在肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)诱导人关节软骨细胞损伤中的作用,并阐明其对miR-145的调控机制。方法利用0、10及30 ng/mL TNF-α诱导建立人C-20/A4关节软骨细胞损伤模型。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(real time quantitative polymerase chain reaction, RT-qPCR)检测LINC00052与miR-145的表达及二者的相关性。通过特异性短发夹RNA干扰C-20/A4细胞中LINC00052的表达,采用四唑盐比色法[3-(4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide, MTT]检测细胞增殖能力。采用蛋白质印迹检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase 3,CASP3)、cleaved CASP3、Bcl-2相关X(Bcl-2 associated X,BAX)蛋白的表达水平。采用酶联免疫吸附剂测定(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测炎症因子白介素(interleukin, IL)-1β、IL-6及IL-13的浓度。采用双荧光素酶报告基因实验分析LINC00052对miR-145的直接调控作用。采用拯救实验验证LINC00052靶向miR-145在TNF-α诱导C-20/A4细胞损伤中的作用。采用t检验与方差分析进行统计比较。结果 LINC00052在0、10及30 ng/mL TNF-α诱导C-20/A4细胞中的表达水平呈上调趋势,而miR-145呈下调趋势,二者表达水平呈负相关(P0.05)。干扰LINC00052降低TNF-α诱导C-20/A4细胞增殖能力,增加CASP3、cleaved CASP3及BAX的蛋白表达水平,并提高IL-1β、IL-6及IL-13的浓度(P0.05)。miR-145是LINC00052的直接靶基因,干扰LINC00052上调C-20/A4细胞中miR-145的表达水平(P0.05)。干扰miR-145部分逆转LINC00052抑制对TNF-α诱导C-20/A4细胞增殖、凋亡及炎症反应的影响(P0.05)。结论 LINC00052靶向miR-145发挥对TNF-α诱导人关节软骨细胞损伤的保护作用,其机制可能与促进增殖并抑制凋亡与炎症反应有关。     

苦参碱对大鼠肝脏冷保存再灌注损伤中TNF-α的影响

目的探讨苦参碱对大鼠原位肝移植供肝冷保存再灌注损伤中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的影响。方法应用延长保存的大鼠原位肝移植模型,168只大鼠随机分为对照组、苦参碱40m g/kg组、苦参碱80m g/kg组和假手术组,分别检测移植术后血中TNFα-、内毒素、丙氨酸转氨酶(ALT)和透明质酸(HA)的含量,并观察移植肝脏病理形态学的改变。结果与对照组比较,苦参碱治疗组术后各时点的TNF-α均显著降低,内毒素血症明显减轻,丙氨酸转氨酶和透明质酸浓度下降,枯否氏细胞增生活跃程度明显减轻,同时肝细胞和肝窦内皮细胞损伤的病理表现也显著改善。结论苦参碱通过抑制TNF-α的分泌对大鼠供肝冷保存再灌注损伤具有保护作用。     

TNF-α重组慢病毒对胃癌细胞自分泌杀伤作用的实验研究

目的探讨TNF-α重组慢病毒对胃癌细胞自分泌杀伤作用。方法 TNF-α重组慢病毒感染SGC-7901胃癌细胞为实验组,并设立阴性对照组以及空白对照组,采用RT-PCR检测3组细胞中TNF-αmR NA的表达情况,ELISA检测3组细胞上清液中TNF-α蛋白含量,流式细胞术检测3组细胞凋亡情况。结果 PCR实验观察到TNF-αmR NA荧光条带24h后稳定表达。测得三组培养液中TNF-α含量,实验组[(2.6926±0.7563)ng/ml]明显高于阴性对照组[(0.9326±0.3091)ng/ml]和空白对照组[(0.8552±0.2768)ng/ml],且差异均有统计学意义(P均0.01),而阴性对照组和空白对照组之间差别无统计学意义(P0.05)。在流式细胞实验中,实验组细胞凋亡率明显高于其他组,差异有统计学意义(P0.05),而阴性对照组和空白对照组差别无统计学意义(P0.05)。结论TNF-α重组慢病毒可以感染SGC-7901胃癌细胞,并在胃癌细胞中稳定表达并自分泌TNF-α,诱导杀伤胃癌细胞。     

黑皮质素4型受体在大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸中的作用

目的 探讨黑皮质素4型受体(MC4R)在大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸中的作用.方法 原代培养大鼠脊髓星形胶质细胞,随机分为3组,每组6孔:正常白对照组(C组)、T组和TH组.C组未作任何处理,T组加入终浓度为10μg/L的TNF-α;TH组同时加入终浓度为10μg/L的TNF-α和终浓度为1 μmol/L的MC4R特异性阻断剂HS014.各组孵育3 h后采用高效液相-串联四级杆质谱法检测上清液谷氨酸(Glu)和天门冬氨酸(Asp)的浓度.结果 与C组比较,T组Glu和Asp浓度升高(P＜0.01),TH组Glu和Asp浓度差异无统计学意义(P＞0.05);与T组比较,TH组Glu和Asp浓度降低(P＜0.01).结论 MC4R介导了大鼠脊髓星形胶质细胞释放兴奋性氨基酸的作用.     

骨髓间充质干细胞对小鼠缺血-再灌注急性肾损伤中IL-10和TNF-α表达的影响

目的探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)对小鼠缺血-再灌注急性肾损伤(IR-AKI)过程中白细胞介素(IL)-10和肿瘤坏死因子(TNF)-α表达的影响。方法将小鼠随机分为假手术组(对照组)、缺血-再灌注损伤组(IRI组)和BMSC治疗组(BMSC组),每组6只。检测各组小鼠肾功能及病理学改变;检测各组小鼠肾组织细胞凋亡情况;检测各组小鼠血清IL-10和TNF-α的表达水平。将小鼠BMSC随机分为对照组和缺氧复氧组(IRI组),检测各组细胞上清IL-10和TNF-α的表达水平。结果对照组小鼠肾组织结构正常,IRI组肾组织结构损伤严重,BMSC组损伤较轻。与对照组比较,IRI组和BMSC组肾组织损伤评分较高;与IRI组比较,BMSC组小鼠肾组织损伤学评分较低(均为P0.05)。与对照组比较,IRI组小鼠血清肌酐(Scr)和血尿素氮(BUN)水平升高,BMSC组BUN水平升高;与IRI组比较,BMSC组小鼠Scr和BUN水平下降(均为P0.05)。IRI组肾组织凋亡细胞数量多于BMSC组和对照组,BMSC组凋亡细胞数量多于对照组(均为P0.05)。与对照组比较,IRI组小鼠血清IL-10和TNF-α水平均升高,BMSC组小鼠血清TNF-α水平下降,IL-10水平升高;与IRI组比较,BMSC组小鼠血清IL-10和TNF-α水平均下降(均为P0.05)。IRI组细胞上清IL-10、TNF-α水平与对照组比较,差异均无统计学意义(P=0.080、0.627)。结论 BMSC输注可降低肾IRI及炎症反应,其机制可能是通过抑制TNF-α表达,而非促进IL-10的表达。     

RA及OA关节滑液TNF-α水平的相关性

目的研究类风湿性关节炎(RA)及骨性关节炎(OA)关节滑液肿瘤坏死因子α(TNF-α)差异,同时分析活动期与稳定期RA滑液TNF-α水平,探讨可否将此作为RA、OA的鉴别指标及活动期与稳定期RA病情分期标准,提供一种早期鉴别分析方法,以利早期针对性治疗.方法取8例RA患者(其中活动期5例、稳定期3例),9例OA患者,10例年轻急性关节内损伤(AAT组)及6例老年慢性关节内损伤患者(CAT组)关节滑液,采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测TNF-α水平.结果RA组滑液TNF-α水平显著高于其他3组,差异有极显著性(P<0.01).OA组TNF-α水平高于AAT组及CAT组,差异有显著性(P<0.05).活动期及稳定期RATNF-α水平无显著性差异(P<0.05).结论在RA和OA滑液中有TNF-o的存在,TNF-α水平在RA和OA患者滑液有显著性差异,可作为鉴别因素.TNF-α水平尚不能作为活动期及稳定期RA病情分期标准.     

颅脑损伤后血清TNF-α和IL-6的表达及对预后影响的临床研究

目的探讨颅脑损伤后血清TNF-α和IL-6的表达及对预后的影响。方法采用双抗体夹心ABC-ELISA方法,检测颅脑损伤后血清中TNF-α和IL-6的含量,比较颅脑损伤分级与血清中TNF-α和IL-6含量之间的关系以及外伤后的变化趋势,并探讨其对临床预后的影响。结果重型颅脑损伤后血清TNF-α和IL-6明显升高,在不同时间轻型、中型颅脑损伤组对比有明显差异(P<0.01)。结论血清中TNF-α和IL-6表达在重型颅脑损伤中明显增高,与颅脑损伤轻重成正比,并与预后密切相关。     

TGF-β1和TNF-α协同刺激诱导人支气管上皮细胞优化上皮间质转化模型

目的探索转化细胞生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)和肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)协同刺激诱导人气管上皮细胞(human bronchial epithelial cell,HBE)细胞,优化上皮间质转化细胞模型的效果。方法采用空白对照、TGF-β1 10 ng/ml、TNF-α10 ng/ml、TGF-β1 10 ng/ml+TNF-α10 ng/ml刺激诱导HBE细胞24 h后,观察细胞的变化。采用CCK8、细胞迁徙、蛋白印迹实验来实现。结果 TGF-β1+TNF-α协同诱导下大多数细胞从鹅卵石样形态变化为梭形、边界消失、间隙明显增宽。空白对照组、TGF-β1 10 ng/ml组、TNF-α10 ng/ml组、TGF-β1 10 ng/ml+TNF-α10 ng/ml组的细胞迁移距离分别为(420.06±10.38)μm、(499.86±34.00)μm、(514.93±10.56)μm和(569.68±33.58)μm。TGF-β1+TNF-α组与对照组、TGF-β1、TNF-α的差异有统计学意义(P0.05)。TGF-β1+TNF-α协同诱导时,上皮标志物E-cadherin明显降低,间质标志物Vimentin明显升高。结论在HBE细胞中采用TGF-β1和TNF-α协同诱导可以优化细胞上皮间质转化模型。     

抑制蛋白激酶Cα活性增加TNF-α对小鼠肝癌细胞毒性的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)及联合蛋白激酶Cα (protein kinase C alpha,PKC-α)抑制剂Go6976对小鼠肝癌(H22)细胞凋亡的影响。方法将处于对数生长期的H22细胞分成两组,每组分四部分,一组仅以不同浓度的TNF-α(0,20、40、60 ng／ml)处理,另一组TNF-α处理同时以Go6976(4．6 nmol／ml)抑制PKC-α活性,分别于4 h,8 h,16 h采用流式细胞仪检测小鼠肝癌细胞的凋亡率,Western blotting方法检测PKC—α和磷酸化PKC-α蛋白的表达情况。结果 TNF-α(0、20、40、60 ng／ml)处理H22细胞4 h,细胞凋亡率分别为2．44％±0．31％、 1．80％±0．32％、2．73％±0．14％、3．05％±0．78％,PKC-α和磷酸化PKC-α表达无显著改变;同时用 TNF-α和Go6976处理H22细胞,凋亡率、PKC-α和磷酸化PKC-α的表达与单独使用TNF-α的结果相似。TNF-α处理8 h,细胞凋亡率分别为2．11％±0．43％、1．83％±0．31％、3．40％±0．47％、6．05％± 0．78％,PKC-α及磷酸化PKC-α的表达随TNF—α浓度增加而上调;TNF—α处理同时抑制PKC-α活性,细胞凋亡率显著升高,分别为2．90％±0．39％、7．76％±0．35％、11．43％±1．05％、12．96％± 2．44％,PKC-α和磷酸化PKC-α表达相应下调。仅以TNF-α处理或TNF—α处理同时抑制PKC-α活性16 h,其结果与8 h的结果基本一致;于Go6976抑制细胞PKC-α活性组,TNF-α60 ng／ml时细胞凋亡率较TNF-α40 ng／ml时有所下降,但坏死细胞的比例却明显升高。结论 TNF-α上调PKC—α和磷酸化PKC-α表达;抑制PKC-α活性,显著增加TNF-α对H22细胞的细胞毒性。