一种复合固定脱钙液在临床病理制片中的应用

临床病理检查经常遇到骨及钙化组织标本,常规处理方法是先固定,待充分固定后进行脱钙处理,然后进入常规制片程序,到完成病理诊断需要较长的时间。如何在较短时间内完成固定、脱钙处理,其速度快、效果好,同时制成的切片又和常规处理的不含骨组织的切片一样,不影响对病变组织     

免疫组化染色中骨组织脱钙方法

由于骨组织的特殊性,制备好的骨组织标本免疫组化并不是一件容易的事。由于骨组织中60％以上为钙盐组成的羟基磷灰石结晶,因而脱钙是制备标本的重要一环。一些强酸如盐酸,硝酸等虽能快速有效除去骨组织中钙盐,但对其中的抗原蛋白也产生了致命性破坏。本实验仿照目前国外利用EDTA低温脱钙方法,取得了比较满意的结果。     

介绍一种骨髓组织脱钙新方法

骨髓组织活检标本来之不易 ,在制片过程中若处理不当 ,会给诊断造成极大的困难。如何既快又好地制作高质量的骨髓病理组织切片对正确诊断尤为重要。笔者通过 2年的反复实践 ,摸索出一种骨髓组织脱钙后的常规制片方法(简称“新法”) ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　标本　中南大学湘雅医院骨髓穿刺的活检组织 4 0例。1.2　试剂　脱钙液 :2 %硝酸 ,即浓硝酸 2ml加 98ml自来水 ;固定液 :10 %福尔马林液 ;染色液 :Gill苏木精 ,沉淀酸化伊红Y乙醇液。1.3　方法　穿刺活检组织入 10 %福尔马林液中固定 30min ;入 2 %硝酸脱钙液 ,室温下脱钙。在…     

复合配方脱钙液处理兔股骨髁标本

背景：兔骨缺损修复模型被广泛应用于骨替代材料的研究中,在实验过程中经常需要对兔股骨髁标本进行脱钙制作病理切片,但普遍存在脱钙困难的问题。 目的：尝试应用一种复合脱钙液实现软骨覆盖兔股骨髁有效脱钙。 方法：取兔股骨髁标本12个,分为2组,分别用自制复合脱钙液和普通甲酸脱钙液进行常温条件下的脱钙处理,复合脱钙液的组成比例如下：盐酸8 mL,甲酸10 mL,醋酸5 mL,中性甲醛固定液100 mL。在经过1周的常规脱钙过程之后,进行标准化的脱水、包埋、切片和染色程序。统计切片的完整率,观察苏木精-伊红染色后切片的质量和细微结构,并对两种脱钙液的经济性进行比较。 结果与结论：复合脱钙液组的切片完整率显著高于甲酸组,差异有显著性意义(74% vs18%,P < 0.05)。复合脱钙液组的切片着色优良,背景清亮,微观结构清晰,细微结构保存完整,不同组织染色对比鲜明。该复合脱钙液的应用成本较常用的甲酸脱钙液降低65%。提示自制复合脱钙液可有效解决兔骨缺损修复模型实验中的脱钙困难问题,且复合脱钙液配置简便,成本低。     

骨髓活检组织制片中改良脱钙液的应用及常见问题分析

正在临床病理外检工作中,骨髓组织由于含有大量的钙盐而比较坚硬,需经过脱钙处理后才能进行常规制片,脱钙不全或脱钙过度均影响骨髓HE染色及免疫组化染色效果,降低病理诊断的准确率。作者在长期的骨髓制片工作中,摸索出一种适合骨髓组织的改良EDTA脱钙液,提高了骨髓制片质量和染色效果。本文现就骨髓活检标本固定及取材、脱钙、制片和染色等环节进行总结,供广大同仁分析交流,共同提高骨髓活检组织制片和染色质量。     

微波辅助脱钙技术在猪脱钙骨基质制备中的应用研究

以猪后腿骨干骺端为对象,考察微波辅助脱钙技术在脱钙骨基质制备过程中的作用.以脱钙骨的脱钙率考察微波对脱钙效果的影响;利用Micro-CT和显微镜观察脱钙骨的大体三维结构;利用Micro-CT测量其孔隙率,利用显微镜及Digimizer3.1软件测量其孔径大小;利用物性测试仪测量脱钙骨的压缩模量以表征其力学性能.结果表明,脱钙骨脱钙率的测量结果显示,与传统脱钙法相比,微波制备法仅需2h就可使脱钙率达到100％,脱钙时间可缩短82％;且制备的脱钙骨具有良好的孔隙率和互相连通的孔径结构,孔隙率达到85％以上,孔径大小为( 345±76) μm,与传统制备方法无显著差异(P＞0.05);并具有良好的力学性能,在脱除90％以上的钙后脱钙骨的压缩模量仍可达到7.11 N/mm2.微波技术可以有效提高脱钙骨基质的制备效率,且制备效果良好,为微波技术在脱钙骨制备领域的应用提供了试验依据.     

超声波在电镜样品制样过程中的应用

骨组织尤其是密质骨 ,其矿物质 (又称骨盐 )干重约占骨的6 5 %～ 75 %。其中 95 %是固体钙和磷 ,钙磷固体以结晶的羟基磷灰石形式存在 ,不溶于水 ,它使骨质十分坚硬 ,采用常规电镜样品制样方法 ,超薄切片困难 ,因此用于电镜观察的骨组织通常都需经过脱钙处理。络合剂乙二胺四乙酸 ( ethylene diamine tetraacetic acid,简称 EDTA)是最常用的脱钙剂。对于 1× 3× 0 .2 mm3体积的骨片 ,在常温下 EDTA常规的脱钙时间需 2 0 d左右 ,致使骨标本的电镜制样周期很长。实验过程中我们发现应用超声波对骨组织进行脱钙 ,可大大缩短骨标本的电镜制…     

小儿颅骨透明标本的制作经验介绍

1 选材 选取新鲜或经固定的5岁以下童尸(要求头部无破损,无外伤史).如是新鲜标本,需用10%福尔马林溶液彻底固定;已经取脑的标本,固定前需用棉花填塞颅腔,以防塌陷变形.2 方法 (1)解离寰枕关节,将颅取下.去掉颅外软组织及颅内脑组织(注意颅缝处保留1～2厘米软组织),流水下冲洗干净.(2)将颅骨浸入1%盐酸脱钙一天左右,取出于流水下冲洗3至4小时,或于清水中浸泡1至2天,以降低颅骨中酸的浓度.(3)将脱钙后的颅骨置于1%的氢氧化钾中浸泡1～2天,初步透明并中和多余的盐酸.(4)取出颅骨,流水下冲洗1～2小时后置入10%的双氧水中漂白3～4天(最好放在阳光下,以增强漂白效果).然后取出,流水下冲洗1～2小时,甩干水分.(5)将漂白后的标本依次置于60%、70%、80%、90%的甘油中逐级透明,每级5～7天.最后放入纯甘油中透明3～4天后留待保存.(6)将透明后的标本移入纯甘油中,装瓶密闭保存.3 操作中的几点体会 (1)脱钙用的盐酸浓度不宜过大,以免将颅缝处软组织腐蚀掉.也不宜过小,过小会延长脱钙时间.(2)脱钙时间不宜过长,应当随时触摸颅骨的硬度,当触摸时有弹性即可停止脱钙.(3)氢氧化钾的浓度不     

面神经全程标本制作法

现将面神经全程标本制作法介绍如下:1　取材　(1)选已固定过的成人尸体,平眉弓、枕外隆凸平面锯去颅盖和脑,保留脑干和下11对脑神经根,清除其余脑组织,沿胸廓上口锯断颈部。(2)制作一侧面部有机玻璃板　取0.2cm厚有机玻璃面部大小一块,在电炉上烤软后,压在准备制作深层结构的一侧面部上,制成与面部外形相同的有机玻璃板。(3)脱钙　将标本放入10～15%的盐酸中脱钙1～3天,以骨质变软,易于解剖为准(若脱钙不全,可用药棉吸稀酸局部脱钙)。脱钙后放在细流水中冲洗1～2天。2　面神经全程解剖法　(1)解剖一侧面部浅层结构:在耳部的前下方将腮腺暴露…     

火棉胶包埋法在制作断层解剖学标本上的应用

随着断层解剖学、医学影像学的发展,制备与磁共振图像（ＭＲＩ）相匹配的断层解剖学标本也有很大提高。作者自１９９６年至今,改进传统的火棉胶包埋方法,对结构精细,临床意义重大的局部进行包埋,用大脑切片机制成断层标本,取得了很好的效果。现将有关制备方法和取材事项介绍如下：１　火棉胶包埋法的技术要点１．１　组织的制备和包埋步骤取用经福尔马林固定后的成人鞍区和脊柱腰部为实验材料,步骤如下：①标本脱钙：所用材料用１０％盐酸浸泡７～１５ｄ,直至骨组织可用针刺入时为止;②冲洗：取出标本,用循环水冲洗２４ｈ;③常规…     

加热式磁力搅拌器在骨组织脱钙中应用

骨组织脱钙制片是临床病理诊断中常用的一种手段 ,而选择适当的脱钙液、脱钙方法以及掌握脱钙的时间往往与骨组织的制片质量密切相关。为了了解经脱钙后的骨组织能否应用于免疫组化和特殊染色 ,进行必要的鉴别诊断 ,我们在实践工作中特对需要脱钙的骨组织进行了实验比较 ,现将结果报道如下。1　材料与方法1 1　材料和仪器　收集临床手术切除的骨肿瘤、病变骨以及钙化组织标本共 5 0例 ,不同的标本根据制片要求用骨锯或骨锉处理成薄片备用。用于脱钙的磁力加热搅拌器为江苏省金坛医疗仪器厂生产的金怡牌 78 1型。1 2　方法　将准备脱钙的标本…     

内耳石蜡切片制作的改进

内耳石蜡切片是组织胚胎学极其重要的教学标本,标本制作的质量,直接影响教学效果。本文通过对内耳组织的脱钙、固定、包埋方向、摊片等传统制作时技术环节的改进,确保切片结构完整,层次分明,无断裂破碎现象。     

微孔对同种异体表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力的影响

目的　观察微孔制备对表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力的影响。方法　用有微孔和无微孔表面脱钙骨基质明胶修复大鼠颅骨上直径为 8mm的环形骨缺损 ,术后不同时间行组织学和X线检查。结果　有微孔制备的表面脱钙骨基质明胶诱导成骨能力优于无微孔的表面脱钙骨基质明胶。结论　微孔制备能提高表面脱钙骨基质明胶诱导成骨的能力。     

甲状腺组织脱钙方式对HE染色、免疫组织化学检测结果及核酸质量的影响

目的探讨对组织蛋白与核酸损伤较小的合适的甲状腺脱钙方法。方法甲状腺钙化标本30例分成6组,每组5例,首先分析比较常规10%硝酸溶液过夜脱钙与表面脱钙之后,标本在伊红-苏木精(HE)染色、免疫组织化学、核酸质量及荧光聚合酶链反应(PCR)检测几个层面的区别;第二,比较多种脱钙液(10%硝酸、20%甲酸-盐酸、PLANK液、氯化钠盐酸甲醛液等)表面脱钙的效果是否不同。结果与过夜脱钙相比,表面脱钙之后各组HE染色质量、细胞角蛋白(CK)7免疫组织化学结果差异未见统计学意义(P>0.05),而甲状腺转录因子1(TTF1)免疫组织化学着色效果、DNA浓度与质量均明显提升(P<0.05)。各表面脱钙液之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论对于有免疫组织化学和分子病理检测需求的甲状腺钙化标本,表面脱钙可能是一种值得推荐的脱钙方式。     

216例骨髓脱钙时间的探讨

骨髓活检不仅关系到造血系统疾病的诊断 ,而且影响治疗及预后 ,由于骨组织是由无机钙盐构成 ,骨盐主要是羟基磷灰石的结晶 ,即磷酸钙和碳酸钙。致组织质硬 ,难以直接制片。必须经过脱钙处理后 ,才能进行常规HE制片、特染及免疫组化检查。然而 ,在临床实践中常因脱钙不全或脱钙过度等原因 ,制作不出良好的组织切片而影响病理诊断。为此 ,笔者对 2 16例骨髓活检标本脱钙时间加以总结 ,并进行改良方法以寻求最佳的制片效果 ,现介绍如下。1　材料与方法1.1　材料　骨髓活检标本 ,4 %盐酸脱钙液 ,70 %乙醇 ,密闭容器。1.2　方法　标本签收后立即…     

三种骨组织脱钙方法的比较

骨组织制片是一重要环节,也是技术的一个难点。如果骨组织脱钙方法不当,会直接妨碍制片切片以及染色结果。作者对目前科研常用三种不同的脱钙方法进行了比较,从中筛选出一种较好的脱钙方法。认为10%甲酸-中性缓冲福尔马林脱钙液处理骨组织标本是一种较为理想的脱钙方法,具有很好的应用价值和推广作用。     

冷冻割断简化方法制备扫描电镜标本

冷冻割断技术是一种制作扫描电子显微镜样品 ,以观察组织细胞内部结构的方法。利用二甲基亚砜冷冻割断简化法制备生物样品 ,在多步骤中可停留过夜 ,能很好地保存生物样品的结构 ,图像反差好 ,具有操作简便 ,重复率高等优点。1　材料与方法本实验采用胃、结缔组织标本。样品制备方法 :第一组为常规二甲基亚砜冷冻割断法制备样品 (程序 :取材→ 1%锇酸固定→二甲基亚砜防冻→冷冻割断→ 0 1%锇酸软化基质→ 1%锇酸后固定→ 2 %单宁酸→ 1%锇酸终末固定→脱水→干燥→镀膜 )。第二组为二甲基亚砜冷冻割断简化法制备样品。即在常规冷冻割断法程…     

保留颞骨和颧弓的三叉神经标本制作法

三叉神经的三大分支分别为眼神经、上颌神经、下颌神经.其位置较深,结构复杂,分支较多.三叉神经展示是解剖学实验教学中的重点难点之一.由于三叉神经标本的制作无论是脱钙法还是非脱钙法[1]都会破坏标本的颧弓、颞骨以及大部分的下颌骨等.笔者经过10例标本制作,探索出最大程度保留上述骨性标志的三叉神经标本的制作方法. 1 材料和方法 1.1 取材与自制器械 用福尔马林固定的完整成人头颅材料,在眉弓上方1 cm处和枕外隆突作一连线,锯开取颅脑后,做正中矢状切.将10 cm长的钢锯条在双轮研磨机上研磨锯齿一端,将其打磨为顶角为10°的等腰三角形的探针(图1).     

骨切片固定液和脱钙剂的筛选及效果观察

在研究某些骨病及骨组织内的各种成分时,尽量减少对骨组织内成分的损伤,选择合适的固定液、固定时间和脱钙液,对骨组织制片非常重要。我们查阅了国内外70年代以来的有关文献,找出固定方法40余种,脱钙方法     

骨骼脱钙液的改良

骨骼脱钙的常规方法多是将骨浸于５％的盐酸中三至四天。我们对常规脱钙法进行了改良，改良后可大大缩短脱钙时间，并增强骨的韧性和弹性，提高脱钙的成功率。改良后的脱钙法可用于出土骨、新鲜骨及防腐固定骨的脱钙处理。现将改良法介绍如下：１材料和方法①材料：选用出...