5氮杂脱氧胞苷对乳腺癌MCF-7细胞中抑癌基因p16mRNA表达的影响

目的 探讨5氮杂脱氧胞苷(5-aza-cdr)对乳腺癌细胞中p16基因mRNA表达的影响.方法 分别用5-aza-cdr 5、10和20 μmol/L处理乳腺癌细胞MCF-7,未处理的MCF-7细胞作为对照.采用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)对药物处理前后的细胞进行p16基因甲基化检测;绿色荧光染料实时反转录聚合酶链反应(SYBR Green qRT-PCR)检测p16 mRNA表达.结果 在未处理的MCF-7细胞中(对照)p16基因呈完全甲基化状态,随着5-aza-cdr浓度增加,甲基化水平逐渐减弱,至5-aza-cdr 20 μmol/L时p16基因甲基化状态完全被逆转;p16 mRNA表达水平也随着药物剂量的递增逐渐增加,5-aza-cdr 20 μmol/L处理组与5、10 μmol/L处理组以及未处理组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 乳腺癌细胞MCF-7中p16基因的甲基化能被5-aza-cdr逆转,去甲基化后可以促进p16 mRNA表达.     

补骨脂素对乳腺癌耐药细胞株周期和细胞凋亡的影响

目的研究补骨脂素对人乳腺癌多药耐药细胞凋亡和周期的影响。方法用MTT法检测不同浓度的补骨脂素对人乳腺癌MCF-7/ADR耐药细胞株的体外生长抑制作用,并运用流式细胞仪观察细胞凋亡和细胞周期的变化情况,采用RT-PCR检测基因caspase-3、Bcl-2和p53的表达。结果补骨脂素对人乳腺癌MCF-7/ADR细胞株有明显的抑制作用,其IC50值为(18.785±1.253)μg/ml;作用24 h后,流式细胞仪检测显示细胞周期S期细胞减少,G0/G1期细胞增加(P<0.05),但对早期凋亡细胞影响较小。并上调凋亡基因p53和凋亡执行基因caspase-3(P<0.05),下调抑凋亡基因Bcl-2(P<0.05)。结论补骨脂素对人乳腺癌MCF-7/ADR耐药细胞有明显体外抑制作用,其抑制机制与影响细胞周期及诱导细胞凋亡有关。     

NKX2-5在乳腺癌患者他莫昔芬耐药中的作用及调控机制

目的探讨NKX2-5在乳腺癌患者他莫昔芬(TAM)耐药中的作用及调控机制。方法采用免疫组化染色检测乳腺癌组织和癌旁组织NKX2-5的表达。利用高通量基因表达数据库(GEO)分析乳腺癌患者的相关资料及NKX2-5表达与乳腺癌患者生存率的关系。构建乳腺癌TAM耐药细胞株(MCF-7/TAM),采用CCK-8试剂盒检测不同浓度TAM处理后细胞增殖的变化,免疫印迹法检测细胞相关蛋白表达,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测细胞NKX2-5 mRNA的表达。结果癌旁组织NKX2-5表达明显高于癌组织(P<0.05)。TAM敏感组织NKX2-5表达明显高于TAM耐药组织(P<0.05)。NKX2-5低表达组总生存率和无病生存率明显低于NKX2-5高表达组(P<0.05);在接受TAM治疗的乳腺癌患者中,NKX2-5低表达组总生存率明显低于NKX2-5高表达组(P<0.05)。与MCF-7细胞比较,MCF-7/TAM细胞NKX2-5蛋白表达明显降低(P<0.05)。采用瞬时转染技术将NKX2-5过表达质粒(Ad-NKX2-5)、空载质粒(Ad-NC)转染MCF-7/TAM细胞(Ad-NKX2-5组、Ad-NC组),NKX2-5小干扰RNA质粒(NKX2-5-siRNA)、空白对照(NC-siRNA)转染MCF-7细胞(NKX2-5-siRNA组、NC-siRNA组)。采用50、100μmol/L TAM处理后,Ad-NKX2-5组细胞增殖抑制率明显高于Ad-NC组(P<0.05),NKX2-5-siRNA组细胞增殖抑制率明显低于NC-siRNA组(P<0.05)。MCF-7/TAM细胞磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38MAPK)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)蛋白表达明显高于MCF-7细胞(P<0.05)。Ad-NKX2-5组p-P38、p-JNK、p-ERK蛋白表达明显低于Ad-NC组(P<0.05),NKX2-5-siRNA组p-P38、p-JNK、p-ERK蛋白表达明显高于NC-siRNA组(P<0.05)。结论乳腺癌TAM耐药细胞中NKX2-5表达下调。上调NKX2-5表达或许能通过抑制丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路逆转MCF-7细胞TAM耐药。     

Stathmin表达水平与乳腺癌细胞侵袭能力相关性研究

目的 探讨乳腺癌细胞MDA-MB-231和MCF-7中Stathmin基因表达水平与细胞生长、黏附、侵袭等生物学行为之间的关系,为进一步研究乳腺癌转移机制奠定实验基础。方法 应用RT-PCR和Western Blot方法检测MDA-MB-231和MCF-7细胞中Stathmin基因的表达水平,同时利用细胞增殖试验、细胞黏附试验和细胞侵袭试验检测MDA-MB-231和MCF-7细胞的生长、黏附、侵袭能力,分析Stathmin表达与细胞的生长、黏附、侵袭能力之间的关系。结果 RT-PCR和Western Blot检测结果显示,Stathmin基因在MDA-MB-231和MCF-7细胞中表达均高于正常对照细胞(F=10.173,P<0.05),且MDA-MB-231细胞中的表达水平明显高于MCF-7细胞中的表达水平(t=4.562,P<0.05)。而MDA-MB-231细胞在生长、黏附和侵袭能力方面均强于MCF-7细胞(P<0.05)。结论 Stathmin表达水平高的乳腺癌细胞相应的生长、黏附、侵袭能力较强,Stathmin表达水平与细胞侵袭能力密切相关。     

miR-34a调控下游基因FUT8表达介导乳腺癌多药耐药的实验验证

目的探究miR-34a及FUT8的异常表达对乳腺癌多药耐药性的调控机制,明确乳腺癌耐药的诊疗靶点。方法采用Real-time PCR及western blot技术检测MCF-7和MCF-7/ADR中miR-34a和FUT8的表达水平; Real-time PCR技术检测乳腺癌细胞系中miR-34a的转染效率;通过生物信息学方法预测并采用双荧光素酶报告实验验证FUT8与miR-34a之间的靶向关系;特异性调控miR-34a的表达后,分别通过Real-time PCR、western blot以及免疫荧光染色检测转染细胞系中FUT8基因及蛋白质水平变化;采用CCK8实验、免疫荧光实验检测其对MCF-7和MCF-7/ADR细胞增殖、耐药性的调控作用。结果 miR-34a在MCF-7中的表达水平明显高于MCF-7/ADR(P=0.002 6);FUT8基因在MCF-7/ADR中的表达水平明显高于MCF-7(P=0.001 6);FUT8是miR-34a调控乳腺癌耐药性的靶点(P=0.001 9);特异性上调MCF-7/ADR细胞中miR-34a的水平可明显抑制FUT8的表达,并抑制该细胞的多药耐药性及增殖性;而下调MCF-7细胞中miR-34a表达后,FUT8的表达水平明显升高,同时增强了细胞多药耐药及增殖能力。结论 miR-34a通过调控下游基因FUT8的表达介导乳腺癌多药耐药。     

盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的影响

目的探讨盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖及迁移能力的影响。方法对数生长期人乳腺癌MCF-7细胞株分为对照组(普通培养液)、紫杉醇组(培养液+100mg/L紫杉醇)、观察组(培养液+盐酸小檗碱),采用MTT法检测盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞增殖的影响,依据细胞生长抑制率计算盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞的半数抑制浓度(half inhibitory concentration,IC_(50))值,参照IC_(50)值进行后续实验;采用划痕实验检测3组人乳腺癌MCF-7细胞迁移率;采用实时荧光定量PCR法检测3组细胞色素P450(cytochrome P450,CYP)1A1和CYP1B1 mRNA表达水平。结果盐酸小檗碱对人乳腺癌MCF-7细胞具有明显的增殖抑制作用,其IC_(50)值为(106±17)μmol/L;人乳腺癌MCF-7细胞迁移率在紫杉醇组[(45.50±4.30)%]和观察组[(37.50±3.43)%]均低于对照组[(84.60±6.88)%],且观察组低于紫杉醇组(P0.05);CYP1A1 mRNA表达量在紫杉醇组(247.69±59.67)和观察组(253.70±60.03)均低于对照组(512.31±76.53),且紫杉醇组低于观察组(P0.05);CYP1B1 mRNA表达量在紫杉醇组(139.09±18.82)和观察组(141.53±19.25)均低于对照组(224.63±33.89)(P0.05),观察组与紫杉醇组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论盐酸小檗碱具有抑制人乳腺癌MCF-7细胞增殖和迁移的作用,其机制可能与抑制CYP1A1、CYP1B1基因表达有关。     

Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后的体外实验研究

目的:探讨Noxa基因转染乳腺癌MCF-7细胞后对MCF-7细胞的影响.方法:利用脂质体将真核表达载体pIRES2-EGFP-Noxa瞬时转染至乳腺癌MCF-7细胞.通过RT-PCR检测转染后mRNA的表达情况.MTT比色法测定细胞增殖的抑制.Hoechst 33342检测细胞的凋亡情况.结果:Noxa基因转染后在乳腺癌MCF-7细胞中成功表达,其转染后24、48、72 h后mRNA表达量逐渐增高.Noxa基因的表达使得乳腺癌MCF-7细胞出现增殖抑制,其24、48、72 h抑制率之间的差异具有显著性(P＜0.05).Hoechst 33342染色显示Noxa基因转染后细胞出现凋亡,其24、48、72 h凋亡率与阴性对照组相比,差异具有显著性(P＜0.05).结论:Noxa基因特染乳腺癌MCF-7细胞后能够抑制细胞增殖并促进其凋亡.     

曲古抑菌素A抑制乳腺癌MCF-7细胞增殖和诱导其凋亡的作用

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古抑菌素A对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制作用和诱导凋亡作用。方法：乳腺癌MCF-7细胞经不同剂量曲古抑菌素作用后,用二甲氧唑黄比色法（XTT）法测定曲古抑菌素A对乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率;用免疫细胞化学染色法观察其对凋亡相关基因p21wafl表达的影响。结果：不同浓度的曲古抑菌素均可抑制MCF-7细胞的增殖,且抑制率具有剂量和时间依赖性;凋亡相关基因p21wafl在曲古押菌素A作用细胞中的表达明显高于未进行处理的细胞。结论：曲古押菌素可抑制体外培养的人乳腺癌（MCF-7）细胞生长,诱导癌细胞发生凋亡。     

MAPK/ERK信号通路调节K562细胞中mdr1基因的诱导性表达

目的 观察多柔比星(doxorubicin,DOX)诱导K562细胞mdr1基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)/细胞外信号调节激酶(ERK)信号通路的作用,探讨mdr1基因的转录调控机制.方法 多柔比星初始浓度为0.01 μg/ml,诱导K562细胞24 h后撤药继续培养至细胞状态恢复,加入多柔比星继续诱导24 h,浓度增加为0.02μg/ml.依上述方法 多柔比星浓度逐渐增加,直至0.05μg/ml.收集DOX浓度为0.01、0.03和0.05μg/ml时的细胞.RT-PCR检测mdr1基因表达,流式细胞仪检测mdr1基因编码的P糖蛋白(P-gP)的表达,Western blot 检测ERK活化情况.MAPK的抑制剂PD98059预处理K562细胞1 h后与多柔比星共同作用,逆转录(RT)-PCR和流式细胞仪分别检测mdr1基因和P-gP的表达情况.结果 经多柔比星作用后K562细胞中ERK磷酸化增强,同时mdr1基因转录上调,及其蛋白产物P-gP的表达也增加,当多柔比星浓度为0.05μg/ml时两者的表达均增加了5倍之多.而用PD98059预处理细胞后能明显抑制多柔比星诱导mdr1基因转录和蛋白表达,多柔比星浓度为0.03μg/ml时PD98059对mdr1基因表达的抑制率为(74.1±0.11)%,多柔比星浓度为0.05 μg/ml时抑制率为(70.2±0.14)%.结论 多柔比星能够诱导K562细胞mdr1基因表达,同时激活MAPK/ERK信号通路,阻断ERK的活化能抑制mdr1基因的诱导性表达.     

雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7 RCAS1表达的影响

目的探讨体外雌激素和孕激素对人乳腺癌细胞MCF-7表达SiSo细胞上的受体结合肿瘤抗原(RCAS1)分子的影响。方法用浓度为10-12~10-8mol/L的雌激素或浓度为10-9~10-5mol/L的孕激素作用乳腺癌细胞MCF-7后,用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测MCF-7细胞RCAS1 mRNA水平的变化,用蛋白免疫印迹试验分析MCF-7细胞表达RCAS1蛋白水平的变化。结果在10-12~10-8mol/L范围内随着雌激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈递增趋势,在10-11、10-10、10-9、10-8mol/L范围内雌激素组与未处理对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。随着10-9~10-5mol/L的孕激素浓度的增加,MCF-7细胞RCAS1 mRNA的表达呈下降趋势,孕激素各组与未处理对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。用RCAS1单克隆抗体能检出相对分子质量为32 000的条带,其灰度随着雌激素浓度的增加而增强,随孕激素浓度的增加而减弱。结论雌激素可上调MCF-7细胞的RCAS1分子表达,孕激素可下调MCF-7细胞的RCAS1分子表达。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

血液透析患者家庭护理提供者的生活质量调查

目的:了解江汉油田血液透析(血液透析)患者家庭护理提供者(护理者)的生活质量。方法:对60例血液透析患者的家庭护理提供者进行一般情况和生活质量综合评定问卷(QOLI-74)调查,并进行相关性和多因素回归分析。结果:家庭护理提供者各维度的主观生活满意度与其客观指标相关,但也与其需求、年龄、文化程度、与患者的关系有关。结论:客观状态是影响主观生活满意度的重要因素,同时应考虑护理者的需求、年龄、文化程度、与患者的关系对护理者主观生活满意度的影响。     

星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察

失眠症又称不寐，指入睡困难，或维持睡眠障碍（易醒、早醒和再入睡困难）导致睡眠时间减少或睡眠质量下降，不能满足身体生理需要，明显影响日间社会功能和生活质量。现将星状神经节阻滞治疗失眠疗效观察总结如下。