乙脑病毒prME与E蛋白编码基因重组构建的DNA免疫试验研究

目的　研究乙脑病毒prME、E蛋白的体外表达特点 ,比较不同重组质粒所进行的DNA免疫效率。方法　分别将乙脑病毒 (JaGAr 0 1株 )prME、E蛋白编码基因 (2 0 0 1bp、15 0 0bp)构建于融合FLAG标记基因的真核表达载体pcDNA(FLAG) 3上 (pJME、pJE) ,脂质体法将二重组质粒转染于HepG2及COS 1细胞系 ;采用不同抗体系统 (anti FLAG、anti E) ,经Westernblot法检测乙脑病毒prME[相对分子质量 (Mr)约 72× 10 3]与E(Mr 约 5 4× 10 3)蛋白表达水平 ;将质粒肌注BALB c鼠 ,二次免疫后 3周 ,腹腔注射乙脑病毒 (10 5PFU 10 0 μl)作为病毒攻击并观察 2 1d。 80 %空斑减少中和实验法检测中和抗体滴度变化。结果　anti FLAG可检测到由质粒pJME、pJE编码的相应蛋白产物在转染细胞内表达 ,同时在pJME转染的细胞内检测到一个新的 11× 10 3的低Mr 蛋白。anti E仅在pJME转染的细胞内检测到E蛋白。肌注pJME可产生高水平中和抗体滴度以及诱导有效的保护性免疫 ,效果等同于普通灭活JE疫苗 ,但优于pJE。结论　pJME的体外表达水平优于pJE。DNA免疫实验结果与prME、E蛋白体外表达特点相一致     

乙脑病毒单克隆抗体的临床疗效观察

本文探讨了静脉使用乙脑病毒单克隆抗体（ＪＥＶ－ＭｃＡｂ）加地塞米松（治疗组）病毒唑加地塞咪松（对照组）治疗乙型脑炎的临床疗效。共治疗５８例，其中ＪＥＶ－ＭｃＡｂ加地塞咪治疗治疗２３例，病毒唑加塞咪松治疗３５例。所获结果是：两组的治愈率（分别为９１．３１％和８８．５７％）好转率（分别为０％和１１．４３％），无效率（分别为８．６９％和０％）及死亡率（分别为４．３％和０％），经统计学处理表明，无显著性意     

西尼罗病毒外膜蛋白的表达及其抗原性鉴定

西尼罗病毒（West Nile virus, WNV）属黄病毒科、黄病毒属，血清学分类与乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus, JEV）同属JEV复合组。该病毒主要引起人和哺乳动物的西尼罗热和西尼罗脑炎，是近年来倍受关注的新发虫媒传染病之一。WNV基因组核酸为单股正链RNA，由约11kb核苷酸组成。     

西尼罗病毒与乙型脑炎病毒生物学性状的比较与鉴别

目的对西尼罗病毒(WNV)和乙脑病毒(JEV)的致细胞病变效应(CPE)、致病性、形态学、免疫学和分子生物学性状进行比较,为WNV感染的鉴别诊断提供依据。方法通过给C6/36细胞和乳鼠接种WNV或JEV,观察两种病毒的CPE和致病性;制作组织切片的透射电镜标本进行病毒形态学观察;分别用间接免疫荧光试验(IFA)和RTPCR方法对两种病毒抗体阳性血清及病毒核酸进行检测。结果WNV和JEV所致C6/36细胞CPE分别以细胞融合和细胞脱落为主要特征;脑内接种两种病毒对乳鼠的致病性未见明显差别;电镜下,两种病毒体的形态与大小相似;WNV与JEV之间存在抗原交叉反应;用黄病毒通用引物可从WNV和JEV感染组织中检出病毒核酸,而用特异引物仅能扩增出相应病毒的核苷酸片段。结论病毒所致C6/36细胞CPE与病毒核酸检测可作为WNV与JEV有效的鉴别方法,对两种病毒抗体效价进行同时测定有助于病原体感染的诊断。     

水痘人免疫球蛋白与疱疹相关病毒免疫交叉反应的试验

由单纯疱疹病毒（HSV）引起的单纯疱疹病毒性角膜炎（HSK）的发病率和致盲率居感染性角膜病的首位，常规抗病毒药物治疗HSK的效果较差，受血清滴眼治疗HSK的启发，临床上使用抗HSV人免疫球蛋白治疗HSK的设想有必要进行试验。但目前市场上没有HSV免疫球蛋白制品。     

免疫球蛋白制品靶抗体谱、效价水平与交叉反应的实验研究

目的：研究免疫球蛋白制品靶抗体谱、效价水平与交叉反应。方法：采用水痘病毒、巨细胞病毒、Ⅰ与Ⅱ单纯疱疹病毒、狂犬病毒、破伤风类毒素IgGELISA试剂盒及乙肝病毒表面抗原RIA试剂盒分别检测水痘、巨细胞、狂犬、乙肝、破伤风5种特免球蛋白及肌注、静注免疫球蛋白中所含靶抗体效价。结果：由疫苗免疫献血员制备的狂犬、破伤风与乙肝人免疫球蛋白有较高的特异性抗体效价,由筛选高效价血浆制备的巨细胞病毒人免疫球蛋白与其它免疫球蛋白比较,其特异性抗体效价差距较小,人群中也普遍存在水痘病毒与单纯疱疹Ⅰ型病毒感染,其强度较巨细胞病毒弱、较单纯疱疹Ⅱ型病毒强。结论：免疫球蛋白受试品均能检测到7种抗原的靶抗体,其抗体效价水平与主动、被动免疫有关,水痘疫苗能诱导出高效价的抗巨细胞病毒交叉反应抗体,肌注与静注IgG之间存在值得注意的抗体效价差别。     

西尼罗病毒多表位基因的融合表达及其免疫保护作用研究

目的研究西尼罗病毒（WNV）多表位基因的融合表达及其免疫保护作用。方法利用生物信息软件Biosun分析西尼罗全基因序列，确定表位基因片段并选择合适片段连接构成多表位基因。采用重叠PCR方法扩增该基因，构建多表位基因的原核重组表达载体pET-43a-M，进行融合表达和纯化。将表达蛋白加弗氏佐剂免疫小鼠并进行攻毒试验，观察其保护作用。结果分子克隆和构建了原核重组表达质粒pET-43a-M，表达和纯化了融合蛋白Nus-M，该蛋白免疫后的小鼠能够部分抵御西尼罗病毒的攻击。结论构建的西尼罗病毒多表位基因能够在原核细胞内表达，表达产物有较弱的免疫保护反应，为该病毒多表位抗原的串联及多表位疫苗研究提供了试验资料，但需要进一步改进。     

一株西尼罗病毒株的生物学特征研究

目的对引进的西尼罗病毒(WNV)毒株的形态学、致病性、细胞敏感性、免疫原性等生物学性状进行探讨，为进一步开展WNV的相关研究奠定基础。方法选择Vero-E6与C6／36细胞观察WNV的细胞病变效应(CPE)，并制作电镜负染标本和组织切片标本进行病毒形态学鉴定；通过乳鼠脑内接种WNV确认其致病性；以灭活的感染乳鼠脑悬液免疫BALB／c小鼠，以间接免疫荧光试验(IFA)测定其血清WNV IgG抗体；用RT-PCR检测病毒核酸，扩增的核苷酸序列通过BLAST作同源性比较。结果WNV所致Vero-E6与C6／36细胞的CPE分别以细胞圆缩和融合为主要特征；电镜下所见病毒体为有包膜、直径约30～50nm的球形颗粒；脑内接种WNV可致全部乳鼠死亡；灭活病毒可诱导小鼠产生WNV抗体；经RT-PCR扩增，在WNV培养液及感染乳鼠脑组织中均检测到目的基因片段，且仅与WNV有较高的同源性(94％～100％)。结论本研究使用的WNV毒株可供进一步开展WNV的相关研究。     

流行性乙型脑炎血清和脑脊液特异性IgM,IgG的检测

对４１例小儿流行性乙型脑炎（乙脑）急性期血清和脑脊液抗乙脑病毒（ＪＥＶ）ＩｇＭ和ＩｇＧ的检测结果进行分析。抗ＪＥＶ－ＩｇＭ检出率，血清（７８．９５％）明显高于在脑脊液（６４．３８％），Ｘ２＝３．９０３２，ｐ＜０．０５，抗ＪＥＶ－ＩｇＭ最早检出时间为第３病日血清和第４病日脑脊液。在不同病日，不同年龄组和病情轻、中、重各组之间，抗ＪＥＶ－ＩｇＭ检出率无明显差异。获取患者双份血清（３５例）和双份脑脊液（３２例），抗ＪＥＶ－ＩｇＧ滴度分别有７７．１４％和４６．８８％明显增长。     

汉滩病毒S基因真核表达载体的构建及免疫小鼠的初？…

目的 研究汉滩病毒Ｓ片段编码区基因免疫小鼠的作用。方法 利用基因重组技术，构建含汉滩病毒Ｓ片段编码区基因的真核表达质粒。用此质粒直接注射到ＢＡＬＢ／ｃ小鼠骨骼肌内进行ＤＮＡ免疫，用间接免疫荧光法检测免疫小鼠血清中汉滩病毒抗体。结果 在初次免疫的小鼠血清中检测出有低滴度的汉滩病毒抗体。加强免疫后，抗体水平显著上升，免疫荧光抗体（ＩＦＡＴ）滴度最高达１：６４０。约８７％的免疫动物发生了血清抗体阳转。抗     

实验感染蚊虫及来亨鸡体内西尼罗病毒的RT-PCR检测

根据已发表的西尼罗病毒Chin-01株基因序列,参照文献资料选择合成一对引物,建立西尼罗病毒的RT-PCR检测方法,对反应条件进行了系列优化后,应用于感染蚊虫样本及来亨鸡血液样本中的病毒核酸检测。该方法的检测敏感性达到1·0PFU,感染蚊虫样本和来亨鸡血液样本均能够扩增出与预期值大小一致的特异性区带,经序列测定证明,与实验感染所用病毒株序列完全相同。可见RT-PCR是检测实验感染蚊虫和来亨鸡体内西尼罗病毒行之有效的方法。     

媒介蚊虫在西尼罗病毒传播循环中的作用

西尼罗病毒的频繁爆发和迅速蔓延成为当今全球普遍关注的新的公共卫生问题。研究证实蚊虫为其主要的传播媒介。为了探讨蚊虫在西尼罗病毒传播中的地位和作用,本文就西尼罗病毒相关的媒介蚊虫的种类、影响蚊虫感染和传播的因素以及蚊虫对于长期保存病毒的机制进行了综述,提出西尼罗病毒传播循环中蚊媒生物学的研究方向。     

乙型脑炎重组痘苗病毒J3免疫性的研究

用含有日本脑炎病毒（ＪＥＶ）结构蛋白ＰｒＭ、Ｅ和非结构蛋白ＮＳ１、ＮＳ２Ａ基因的重组痘苗病毒Ｊ３免疫家兔，能较快地诱生抗ＪＥＶ抗体，其滴度可随免疫次数的增加和免疫时间的延长而增高。此抗血清可被动保护不同毒株ＪＥＶ的致死性攻击，该保护作用与其中抗体和血凝抑制抗体有关。     

西尼罗病毒的宿主及其在传播循环中的作用

西尼罗热或西尼罗脑炎及脑膜脑炎目前已从偶尔发生转变为频繁暴发流行,成为危害公共卫生健康的重要虫媒病。由于西尼罗病毒宿主众多,传播媒介分布广泛,宿主及桥梁宿主和媒介的共同作用促成了该病大面积流行,本文综述了西尼罗病毒的宿主及其在传播循环中的作用。     

西尼罗病毒（WNV）传播动力学模型及防制措施评价的研究

美国1999年首次在纽约检测到西尼罗病毒(WNV)后,病毒快速在西半球传播,导致WNV大范围的流行,仅2005年,截止到12月20日美国共发生近2799例人类感染病例。WNV如此快速的大面积扩散提醒我们要提高对WNV传入的警惕,提高对WNV传播过程的认识。本研究根据WNV生态学特点,构建WNV在媒介(蚊虫)与宿主(鸟类与人群)间感染传播的数学模型。模型建立3个种群(蚊虫、鸟、人)相互间的联系过程。通过WNV感染过程及模型推导出基本传染数R0的计算公式,通过R0的阈值确定WNV传播动力学,如果R0≤1则说明疾病处于稳定状态,不会在局部范围内发生流行;如果R0>1则说明疾病可在一定范围内发生流行。分析通过改变模型中参数提出应采取相应的控制措施,为进一步研究预防和控制WNV提供有力依据。     

视网膜节细胞与视交叉上核AVP神经元联系的研究Ⅱ.假狂犬病毒顺行追踪与免疫荧光双重标记

为进一步揭示视网膜节细胞与视交叉上校精氨酸血管加压素神经元间有无直接的联系，本文将假狂犬病毒注入大鼠眼球内通过顺行追踪结合免疫荧光双重标记法观察到：（1）视交叉上核神经元被病毒感染的时间始于病毒注入后56h，并随存活时间的延长而增多；（2）呈绿色荧光的病毒感染神经元见于双侧视交叉上核，注射对侧优于同侧，主要位于视交叉上核的腹外侧部和嘴侧份，个别散在于二者之外;（3）视交叉上核内个别病毒感染的神经元可同时呈精氨酸血管加压素的红色荧光，此类双标神经元系病毒由视网膜节细胞顺行运输并跨突触传给视交叉上核的精氨酸血管加压素神经元所致。表明视网膜节细胞与视交叉上核的精氨酸血管加压素神经元间有直接的突触性联系。这一结果为视交叉上核节律机制和精氨酸血管加压素神经元的机能调控提供了进一步研究的线索。     

Induction of virus-specific neutralizing immune response against West Nile and Japanese encephalitis viruses by chimeric peptides representing T-helper and B-cell epitopes

West Nile virus (WNV) and Japanese encephalitis virus (JEV), the members of JEV serocomplex group are pathogens of global health concern. The co-circulation of these viruses poses challenges in effective diagnostics due to antigenic similarity between the E-protein of these viruses. The present study aimed to design chimeric peptides and study the immune response against the same. B-cell epitopes were predicted on structural proteins of WNV and JEV based on bioinformatics tools. The peptides representing to these B-cell epitopes were synthesized and subjected to ELISA. Two peptides, one each from WNV (named WE147) and JEV (named JE40) E-protein, showed virus-specific and strong reactivity to the immune mice sera and human clinical samples. The chimeric peptides for WNV and JEV were constructed by synthesizing the B-cell epitope of WNV (WE147) or JEV (JE40) with T-helper epitope (JM17) separated by diglycine spacer in between. The immune response generated against these chimeric peptides was found to be specific to the respective B-cell epitopes. The anti-peptide sera showed virus-specific reactivity in ELISA and in immunofluorescence assay with no cross-reactivity. Also, the anti-peptide sera could neutralize JE and WN viruses in an in vitro virus neutralization assay. The B-cell epitopes identified in the present study may be used as diagnostic markers for differentiating between WN and JE virus infections. The present study can form a basis for future design of vaccines.     

登革Ⅱ型病毒对淋巴细胞和骨髓细胞SCE率影响的实验研究

报道３０例离体培养的人体外周血淋巴细胞及２０例离体培养的正常人骨髓细胞加入登革Ⅱ型病毒前后的ＳＣＥ率改变，结果表明：登革Ⅱ型病毒可以提高外周血淋巴细胞及骨髓细胞的ＳＣＥ率，说明该病毒对人体这两类细胞的染色体均具有损伤作用。实验还观察到不同个体的淋巴细胞及骨髓细胞在加入登革Ⅱ型病毒后，其ＳＣＥ率的升高有个体差异，说明了染色体或ＤＮＡ损伤程度不等。     

中国登革2型病毒分离株乳鼠致病性差异与基因变化关系的研究

本文报道１９８７年从广西病人血清中分离的登革２型（Ｄ２）病毒Ｄ２－４３株和１９８５年从海南病人血清中分离的Ｄ２－０４株乳鼠致病性的差异与基因变化的关系。结果表明Ｄ２－４３株对乳鼠致病，Ｄ２－０４株不致病。Ｄ２－４３株和Ｄ２－０４株Ｃ到ＮＳ１基因的读码框架基本相同，均由３３８１核苷酸组成，编码氨基酸总数１１２７。包含三个结构蛋白Ｃ．ＰｒＭ（Ｍ）、Ｅ和一个非结构蛋白ＮＳ１。该两株病毒核苷酸序列同源性为９３．８％，氨基酸序列的类似性为９１．３％。Ｃ和Ｅ基因同源性为９５．０％～９５．８％，ＮＳ１基因为９２．２％，Ｍ基因为８６．７％，两株之间核苷酸序列的主要差异是在Ｍ基因。两株病毒的Ｃ－ＮＳ１基因与国际参考毒株比较，４３株与ＪＡＭ株类侧性最高，其次是ＮＧＣ株，与Ｓ１株类似性最小。而０４株只有Ｃ、Ｅ和ＮＳ１与ＪＡＭ株最高，ＰｒＭ（Ｍ）都与ＮＧＣ株最高。４３株与０４株的Ｍ基因相比较，０４株的ＰｒＭ（Ｍ）基因的同源性低于４３株，说明两株与国际参考毒株比较，主要差异也在Ｍ基因，乳鼠致病性差异可能与Ｍ基因变化有关。     

Regulation of T lymphocyte apoptotic markers is associated to cell activation during the acute phase of dengue

Dengue fever, a public health problem in Brazil, may present severe clinical manifestations as result of an increased vascular permeability and coagulation disorders. T cell activation is a critical event for an effective immune response against infection, including the production of cytokines. We aim to reveal mechanisms that modulate the virus-cell interaction, with an emphasis on cell death. Apoptosis is involved in lymphocyte homeostasis, contributes to the clearance of virus-infected cells but also may play a role in the pathogenesis. Phosphatidylserine exposure on CD8T lymphocytes from dengue patients support early apoptotic processes and loss of genomic integrity, observed by DNA fragmentation in T lymphocytes and indicating late apoptosis. These T cells express activation and cytotoxic phenotypes as revealed by CD29 and CD107a upregulation. Higher frequencies of CD95 were detected in T lymphocytes mainly in those with the cytotoxic profile (CD107a⁺) and lower levels of anti-apoptotic molecule Bcl-2, suggesting that both CD4⁺ and CD8⁺ T cell subsets are more susceptible to apoptosis during acute dengue. The analysis of apoptosis-related protein expression profile showed that not only molecules with pro- but also those with anti-apoptotic functions are overexpressed, indicating that survival mechanisms could be possibly protecting cells against apoptosis caused by viral, immune, oxidative and/or genotoxic stresses. These observations led us to propose that in dengue patients there is an association between T cell susceptibility to apoptosis and the activation state. The mechanisms for understanding the immunopathogenesis during dengue infection are discussed.