GluR1在大鼠海马结构的表达

目的：观察AMPA受体亚单位GluR1在大鼠海马的表达．方法：在多聚甲醛固定的海马切片上，用免疫组化SP法观察GluR1在正常成年大鼠海马结构的表达与分布。结果：GluR1在正常大鼠海马有广泛表达，在CA3区的起层、锥体细胞层和透明层及齿状回门区内的中间神经元表达最强，阳性表达在CA1区主要见于神经元的胞膜和突起，而在CA3区还可见于胞质。结论：GluR1在海马CA1区和CA3区的表达不同，这种差异可能与海马不同区域具有不同功能有关。     

NMDA受体亚单位NR1、NR2A和NR2B mRNA在成年大鼠海马的表达

目的 研究NMDA受体亚单位（NR1，NR2A和NR2B）mRNA在正常成年大鼠海马结构各区的表达及形态特点。方法 原位核酸分子杂交组织化学反应和图像处理与分析。结果 NR1，NR2A和NR2BmRNA在正常大鼠海马结构各区锥体细胞和颗粒细胞普遍表达，其中NR1mRNA的表达最强，NR2AmRNA的表达最弱，NR1mRNA在齿状回（DG）的表达水平明显强于CA1区和CA3区；NR2AmRNA在CA1区的表达水平则强于CA3区和DG；NR2BmRNA在海马各区的表达水平基本相同。结论 NR1，NR2A和NR2BmRNA在正常成年大鼠海马各区的表达模式不同，其中NR2AmRNA在海马CA1区以及NR1mRNA在DG高表达的分布特点可能与海马的学习，记忆等生理功能以及选择性易损现象有关。     

正常大鼠海马NMDA受体2B亚单位蛋白及其mRNA的平行分布规律

目的 观察正常大鼠海马NMDA受体2B亚单位（NR2B）蛋白质及其mRNA的基础性表达特征及两者在海马不同区域的表达关系。方法 正常SD大鼠海马，灌注取脑，连续冰冻切片，ABC免疫组织化学方法染色和原位杂交组织化学染色，光镜下观察NR2B蛋白质及其mRNA的表达。结果 NR2B蛋白质在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的免疫反应强度存在明显差异，CA1区最强，CA3区次之，齿状回着色较弱。NR2BmRNA在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的原位杂交组织化学反应强度与NR2B蛋白质免疫反应强度存在平行变化，也是CA1区最强，CA3区次之，齿状回着色较弱。结论 NR2B蛋白质及其mRNA在正常大鼠海马CA1区、CA3区及齿状回的表达强度不同，并存在平行表达差异关系，这种基础状态的分布特征可能与海马缺血易损性和耐受性相芰。     

成年大鼠海马p-CREB的分布

目的:观察磷酸化CREB(p-CREB)在正常成年大鼠海马结构的表达. 方法:在多聚甲醛固定的海马脑薄片上,用免疫组化SP法和免疫荧光法观察p-CREB在正常成年大鼠海马结构的表达与分布. 结果:p-CREB在正常大鼠海马结构有广泛表达,在齿状回表达最强,CA3区次之,CA1区最弱. 阳性表达主要位于胞核. 结论:p-CREB在海马结构齿状回和CA1区的表达是不同的. 由于CREB参与某些形式的长期记忆,本结果提示齿状回和海马CA1区可能在长期记忆中的作用不同.     

NMDA和AMPA型谷氨酸受体亚基在成年大鼠前脑室管膜及室管膜下区的分布

目的:观察前脑室管膜及室管膜下区N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)和使君子酸(AMPA)型谷氨酸受体的分布. 方法:应用成年SD大鼠前脑切片免疫组织化学方法,显示NMDA和AMPA受体六种亚基的细胞定位. 结果:在室管膜及室管膜下区有NMDA受体亚基NR1,NR2C及AMPA受体亚基GluR1,GluR2/3,GluR4免疫反应阳性产物的分布,免疫阳性产物则均匀地分布在细胞质或细胞膜. 半定量分析表明NR1和GluR4阳性细胞的数目和染色密度均高于NR2C,GluR1和GluR2/3阳性细胞. 结论:结合以往研究,NMDA和AMPA受体亚基在大鼠前脑室管膜及室管膜下区定位结果提示NMDA和AMPA受体可能参与该区域神经发生等功能活动的调节.     

小鼠海马内HDAC2的表达及其与NMDA受体、PSD-95的共定位

目的探讨组蛋白去乙酰化酶2(HDAC2)在成年C57BL/6小鼠海马内的分布及其与突触后致密区(PSD)蛋白成员的共定位,为揭示HDAC2与PSD蛋白复合物之间的内在联系及在海马相关的学习记忆过程中可能起到的调控作用提供形态学依据。方法应用免疫组化方法观察HDAC2在C57BL/6小鼠海马各区的表达分布。应用免疫荧光双标技术研究HDAC2与PSD蛋白成员N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体亚单位1(NR1)、PSD-95之间是否存在共定位。结果 HDAC2在小鼠海马CA1～CA3区锥体细胞和齿状回颗粒细胞均具有明显表达,而在各区的始层、辐射层、腔隙-分子层以及齿状回多形细胞层表达均较少。免疫荧光双标染色图片的重叠表明,HDAC2与NR1、PSD-95在小鼠海马CA1～CA3区锥体细胞层和齿状回颗粒细胞层内均可见显著共表达现象,其他区域偶见散在分布的双染神经元。结论 HDAC2在小鼠海马锥体细胞层和颗粒细胞层表达丰富,并与PSD蛋白成员间存在共定位现象。本实验结果为探讨HDAC2对谷氨酸能突触后神经元依赖的突触可塑性的调节机制提供了形态学依据。     

精氨酸加压素对大鼠臂旁外侧核AMPA和NMDA受体亚基mRNA表达的影响

目的 探讨精氨酸加压素(AVP)对大鼠臂旁外侧核(LPB)使君子酸(AMPA)受体和N-甲基-D-门冬氨酸(NMDA)受体mRNA表达的影响.方法 腹腔连续注射AVP 1周后,采用RT-PCR技术,半定量分析大鼠LPB AMPA受体亚基GluR1、GluR2、GluR3和GluR4以及NMDA受体亚基NR2A和NR2B mRNA表达的变化.结果 与对照组比较,AVP组大鼠LPB GluR1 mRNA表达明显上调(P<0.05),而GluR2、GluR3和GluR4 mRNA表达虽有上调趋势,但差异无统计学意义(P>0.05),NR2A和NR2B mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05).结论 AVP通过上调LPB AMPA受体,特别是GluR1亚基,而不是NMDA受体,增强LPB谷氨酸能突触传递.     

基于海马CA1区微量注射AMPA对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区阳性细胞的影响探讨逍遥散的调节机制

目的运用免疫组化方法,对比海马CA1区微量注射α-氨基羟甲基恶唑丙酸(AMPA)对肝郁脾虚证模型大鼠杏仁核BLA区AMPA受体亚基阳性细胞的影响,探讨逍遥散调节肝郁脾虚证的机制。方法 25只SD雄性大鼠随机等分为5组,正常组、模型组、假手术组、AMPA组和逍遥散组。以21 d慢性束缚应激方法造肝郁脾虚证模型,于模型大鼠双侧海马CA1区,埋管微量注射AMPA受体的激动剂AMPA,逍遥散组造模方法和AMPA组尽可能相似,突出逍遥散和AMPA干预的可比性。运用免疫组化方法检测杏仁核基底外侧区(BLA区)AMPA受体的2个重要亚基谷氨酸受体1(GluR1)和谷氨酸受体2(GluR2)的阳性细胞数变化情况,比较逍遥散组和AMPA组上述指标的变化趋势是否一致。结果造模21 d后,在杏仁核BLA区,与正常组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均无统计学意义(均P>0.05);与模型组比较,AMPA组和逍遥散组GluR1和GluR2阳性细胞数表达差异均有统计学意义(均P<0.01),且2组GluR1阳性细胞数表达均较模型组增高,GluR2阳性细胞数表达均较模型组降低,2组阳性细胞数表达升降趋势一致。各组阳性细胞积分光密度结果与阳性细胞数结果一致。结论结合前期实验,从免疫组化角度进一步推断逍遥散通过纠正杏仁核和海马AMPA受体的"兴奋-抑制"失衡,重建稳态,从而治疗肝郁脾虚证。     

NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B在生后大鼠海马的免疫组织化学表达

目的 :观察大鼠海马NMDA受体亚单位NR1、NR2A、NR2B三种蛋白质的生后发育变化。方法 :生后不同时段的SD大鼠各 5只 ,作HE染色 ,NR1、NR2A、NR2B组化反应染色。结果 :生后各时间点海马结构各区锥体细胞及颗粒细胞胞体中均有NR1、NR2A、NR2B的表达 ,NR2B还在锥体细胞的顶树突中有较强表达。NR1与NR2B在P1d和P4d ,两者在CA3区的表达均高于CA1区 ,P1w后两者在CA1区的表达则高于CA3区 ,在P2w～P3w其表达至峰值。而NR2A在P1d、P4d时其在海马结构各区的表达较高 ,随发育时间表达下降 ,约在P4w降至谷底。整个发育过程中 ,NR1在海马各区的表达始终高于NR2A和NR2B的表达。提示生后早期中NR1、NR2A、NR2B的表达具有发育性时空差异     

μ型阿片肽受体对癫痫敏感大鼠海马NR2B表达的影响

目的探讨μ型阿片肽受体（MORs）介导大鼠癫痫敏感性形成过程中海马NMDA2B受体（NR2B）表达变化。方法红藻氨酸（KA）皮下注射建立大鼠癫痫发作模型,采用脑立体定位及微渗透泵技术,海马内微量注射MORs激动剂PL017,或和拮抗剂β-FNA。7d后通过阈下剂量KA检测大鼠癫痫发作敏感性,应用原位杂交方法观察海马CA1区锥体细胞及齿状回颗粒细胞NR2B表达变化。结果PL017可显著增加大鼠海马CA1区锥体细胞和齿状回颗粒细胞NR2BmRNA（＋）神经元数及平均灰度。β-FNA则明显降低两个脑区的NR2BmRNA（＋）神经元数及平均灰度。结论MORs介导癫痫发作敏感性形成机制与NR2B表达上调有关。     

NMDA受体与AMPA受体亚单位在培养海马神经元树突上的表达及共定位

目的 :研究含 NR2 B亚单位的 NMDA受体 (以下简称 NR2 B- NMDAR)与含 Glu R2亚单位的 AMPA受体 (以下简称 Glu R2 - AMPAR)在不同发育阶段的培养海马神经元树突上的表面表达及共定位。方法 :以 FL AG- NR2 B、GFP- Glu R2及 CFP- Actin的表达载体共转染原代培养 5 d的大鼠海马神经元 ,分别用抗 FL AG单克隆抗体和山羊抗鼠二抗 - Cy3(红色荧光 )、抗 GFP多克隆抗体和山羊抗兔二抗 - Alex4 88(绿色荧光 )作活细胞双重染色 ,显示并计数表面表达的 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - AMPAR受体簇以及两者共定位的受体簇。结果 :培养 7d和 19d时 NR2 B- NMDAR受体簇密度分别为 39.7± 5 .0和 6 4.7± 6 .1(P<0 .0 1;n=6 ) ;Glu R2 - AMPAR受体簇密度分别为 5 9.1± 3.3和 99.7± 6 .4 (P<0 .0 1;n=6 ) ;两者共定位的受体簇密度分别为 2 9.9± 4 .5和 37.5± 2 .5 (P<0 .0 5 ;n=6 )。培养 7d和 19d时 ,与 Glu R2 - AMPAR共定位的 NR2 B- NMDAR受体簇占总 NR2 B- NMDAR受体簇的比例分别 75 .4 %和 5 7.9% ,而与 NR2 B- NMDAR共定位的 Glu R2 - AMPAR受体簇占总 Glu R2 - AMPAR受体簇的比例分别为 5 0 .6 %和 37.6 %。结论 :随着海马神经元的发育 ,成熟神经元比未成熟神经元树突表面 NR2 B- NMDAR受体簇、Glu R2 - A     

氯胺酮对新生大鼠海马齿状回NMDA受体亚型表达的影响

目的 观察海马齿状回N-甲基-D-天冬氨酸(N-methyl-D-aspartate,NMDA)受体亚型蛋白表达的变化.方法 生后7 d SD大鼠24只,分为2组:给药后即刻组(PND7)和给药后3周组(PND28).2组根据给药剂量不同再各分为3组(n=4),即C组:空白对照组,腹腔注射生理盐水; K1组:诱导剂量100 mg/kg,连续麻醉6 h; K2组:诱导剂量50 mg/kg, 连续麻醉6 h;维持剂量按诱导剂量的1/2追加.PND7组麻醉后24 h内处死,PND28组在相同环境中饲养3周(即生后28 d)后处死.免疫组织化学ABC法进行细胞染色.结果 在海马齿状回,PND7组中处理组NR2A、2B亚型蛋白表达均比对照组有增加的趋势(P<0.05), 但NR2C亚型变化不大.PND 28组中NR2A亚型处理组同样比对照有所增加(P<0.05),但NR2B、2C亚型变化不大.各亚型中K1、K2处理组之间均没有显著性差异(P>0.05).结论 氯胺酮对发育阶段大鼠海马的NMDA受体亚型蛋白的表达具有上调作用,进而可能对大鼠神经系统的发育产生一定影响.     

戊四氮诱导发育鼠癫癎持续状态后海马突触素的变化及MK-801的影响

目的探讨戊四氮诱导发育鼠癫癎持续状态（SE）后海马结构的突触重建以及NMDA受体在其中的作用。方法利用图像分析仪测定戊四氮诱导的发育鼠癫癎持续状态模型及用NMDA受体拈抗剂MK-801治疗后海马结构内CA3区及齿状回内分子层突触素（p38）的阳性免疫反应产物的光密度值（A）。结果不同日龄SD大鼠SE后海马结构内各部p38阳性免疫反应产物光密度值较对照组显著增加，尤以CA3区苔藓纤维层和齿状回分子层内带为甚；MK-801可显著减少p38的表达。结论癫癎持续状态后存在突触重建现象，一方面是癫癎发作的结果，另一方面也可能是导致癫癎反复发作的分子学基础；在此过程中NMDA受体发挥着重要的作用。