人胚胎心脏干细胞系已建立

1998年美国Thomson和Gearhart研究小组分别用不同方法分离获得并建立了人胚胎干细胞(embryonic stemcell，ES)和人胚胎生殖细胞(embryonic germ cell，EG)系，成为干细胞研究史上里程碑性的进展，之后，国内外先后分离培养了神经干细胞、胚胎腭突间充质干细胞及胰腺干细胞等。为寻找心血管组织工程(cardiovascular tissue engineering，CvTE)适宜的种子细胞，第二军医大学生物医学工程研究所的研究人员进行了相关的探索工作，并初步建立了胚胎心脏干细胞(embryonic cardiac stem cells，ECSCs)系。     

用低形态学评分D3胚胎建立人胚胎干细胞系

寻找人胚胎干细胞（hESC）建系材料来源。选用体外受精（IVF）低形态学评分的D3胚胎行序贯囊胚培养，用免疫外科的方法去除滋养细胞，将得到的内细胞团（ICM）接种于丝裂霉素C灭活的小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）上培养5～8d，每4～7d传代1次，分别取不同代的hESC进行碱性磷酸酶（AKP）染色、转录因子OCT-4、阶段特异性胚胎抗原（SSEA）SSEA-4、SSEA-1、肿瘤排斥抗原（TRA）TRA-1-60、TAR-1-81、核型及体内外分化全能性鉴定。     

人胚胎干细胞系的初步建立

目的：探讨人受精卵建立人胚胎干细胞系。方法：将体外受精获得的人受精卵发育至胚胎泡期,用机械法去除胚泡透明带后,取出内细胞团,分散后接种在小鼠胚胎成纤维细胞饲养层上,进行传代培养。通过碱性磷酸酶染色、胚胎干细胞特异性表面标志物检测、染色体核型分析和严重联合免疫缺陷（SCD）小鼠体内畸胎瘤形成实验,对连续传代的细胞进行鉴定。结果：9枚受精卵在体外培养5-7d后,5个存活并发育为胚泡,取出的内细胞团经接种培养,3个内细胞团存活,呈克隆性生长,发育为胚胎干细胞,并连续体外传代7个月保持未分化状态,建系成功。3个细胞系分别命名为CHE1、CHE3和CHE3。取3个细胞系第5、15和30代的细胞进行碱性磷酸酶染色,均为阳性。对CHE3第25、30、40代、CHE1和CHE2第21、22、30代的细胞检测人胚胎干细胞表面标志SSEA-4、SSEA-3、TRA-1-60和GCTM-2,结果均为阳性;检测小鼠胚胎干细胞表面标志SSEA-1,结果为阴性。染色体核型分析为二倍体核型。将连续传代5个月后（30代左右）的3个细胞系接种到SCID小鼠体内,6周后均形成畸胎瘤,组织病理学检查显示含有3个胚层的组织结构。结论：使用5个人受精卵来源的胚泡,成功地在体外建立了3个胚胎干细胞系,长期传代后仍保持胚胎干性和多向分化的能力。     

可分化为肝系细胞的干细胞

干细胞是一类具有自我更新能力和分化潜能的细胞 ,可分为胚胎干细胞和成体干细胞两大类。Evans等[1] 1981年首次建立了小鼠的胚胎干细胞系 ,之后国外相继建立了金黄地鼠 (Goldenhamster;Mesocricetusauratus)、大鼠、鸡、兔、猪和猴的胚胎干细胞系。 1998年美国的Thomson等[2 ] 和Gearhart等[3] 分别建立了人的胚胎干细胞 (embryonicstemcell,ES细胞 )和胚胎生殖干细胞 (embryonicgermcell,EG细胞 )系 ,干细胞研究被Science杂志评为 1999年十大进展的首位。利用干细胞可培育新组织和新器官 ,供移植和替代治疗之用 ,另外还可将干细胞作为…     

胚胎干细胞系向造血干细胞定向分化的研究

目的：建立并稳定和优化诱导胚胎干细胞（ES）向造血干细胞定向分化的方法。方法：应用体外胚胎干细胞分化系统,观察了多种因素对原始细胞成集落细胞（BLast Colony-Forming,Cell,BL-CFC)形成集落的影响。结果;植入不同数量的3.5d胚体衍生的细胞与BL－CFC集落生成数量之间呈高度相关,大约每植入100个3.5d胚体衍生的细胞,能生成1.08-1.2个BL－CFC集落;20％与30％浓度的D4T条件培养液促BL－CFC集落生成作用的效率最高 ;单用D4T条件培养液,EPO或KL对BL－CFC集落的生长无明显促进作用（P＞0．05）;但单用VEGF对BL－CFC集落的生成有极显著的促进作用（P＜0．001）。但当这四种因素两两组合使用时,均比单用VEGF具有明显的促BL－CFC集落生成作用。在VEGF＋KL＋D4T合用的基础上加用EPO,则促BL－CFC集落生成作用大大增强,与其它各组,BL-CFC集落数极显著地增多（P＜0．001）。大约每植入100个3.5d胚体衍生的细胞,能生成1.5-1.6个BL－CFC集落。结论：影响BL－CFC生长的主要因素可能为VEGF;D4T条件培养液具有强大的协同作用;EPO和KL为诱导BL－CFC向造血细胞系分化的主要因素;3.5d胚体衍生的细胞比3.25d胚体衍生的细胞对各种刺激因子反应更敏感,生成BL－CFC的能力更强。原始细胞成集落细胞实验（BL－CFC）可能代表了最原始造血干细胞的检测方法。     

人胚胎干细胞建系及培养的研究进展

人胚胎干细胞的培养是了解人胚胎发育机制和实现治疗性克隆的前提。在人胚胎干细胞建系和维持过程中，胚胎材料来源、内细胞团分离、扩增传代、冻存复苏等均为难点。从鼠源饲养层、人源饲养层到无饲养层培养系统的发展，以及体细胞核移植技术平台的建立，奠定了治疗性克隆的基础。     

SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞

目的为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞。方法以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1。传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能。结果hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长。经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织。结论SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能。     

SNL细胞作为饲养层细胞培养人胚胎干细胞

目的 为便于人胚胎干细胞(ES细胞)的培养和研究,寻找一种建系细胞作为人ES细胞的饲养层细胞.方法 以小鼠成纤维细胞系SNL细胞作为饲养层细胞培养人ES细胞株hES1.传代17代后,检测hES细胞表面特异性标志,包括碱性磷酸酶(AKP)、Oct-4、阶段特异性胚胎抗原(SSEA)-3和SSEA-4的表达;同时观察细胞的多向分化潜能.结果 hES1细胞在SNL细胞饲养层上能持续生长.经多次传代后持续表达人ES细胞表面特异性标志,其注射于重症联合免疫缺陷小鼠皮下仍能形成畸胎瘤组织.结论 SNL细胞能够作为饲养层细胞用于人ES细胞的培养,且操作更方便;该细胞已转染了耐受新霉素的基因,为将来对人ES细胞基因操作时进行药物筛选提供了可能.     

染色体和遗传：单细胞克隆人胚胎干细胞系的建立及其生物学特性的鉴定

建立单细胞克隆人胚胎干细胞系，并对其生物学特性进行鉴定。方法：采取分离自人囊胚内细胞团并传代20代的细胞，用胰酶消化将细胞分散成单细胞悬液．将单个细胞接种至96孔板，生长出的细胞集落用胶原酶消化传代，采用细胞化学法和免疫荧光法检测细胞表面标志物；采用常规G带法分析细胞染色体核型；将细胞接种至严重联合免疫缺陷小鼠后腿肌肉内，观察细胞多向分化潜能。结果：接种的96个细胞生长出2个细胞集落，     

由囊胚内细胞团分离人胚胎干细胞

胚胎干（Embryonic stem，ES）细胞是由着床前胚胎内细胞团（Inner cell mass，ICM）或原始生殖细胞（Primordial germ cells，PGC）经体外分离培养而建立的克隆细胞系。ES细胞的特点是只生长、不分化，并保持早期胚胎发育的多能性。本文比较了人囊胚在G２．２培养液和含DMEM培     

DPF2干扰慢病毒感染人胚胎干细胞建立稳定细胞系

目的 对DPF2干扰慢病毒感染H9细胞,获得稳定的人胚胎干细胞克隆细胞系的方法学探讨.方法 将各型带有GFP荧光标签的DPF2-RNAi慢病毒导入H9细胞中,嘌呤霉素筛选前后,相差和荧光显微镜下观察细胞形态和细胞感染效率;Western blot鉴定感染后的各组H9细胞系内DPF2蛋白表达水平.结果 成功获得慢病毒感染...     

携带α-地中海贫血基因人胚胎干细胞系的建立

【目的】 建立携带α-地中海贫血纯合子基因人胚胎干细胞系.【方法】 收集经胚胎种植前遗传学诊断技术诊断为携带α-地中海贫血纯合子基因的囊胚,机械法分离内细胞团,用无血清培养基进行人胚胎干细胞培养,建立携带α-地中海贫血纯合子基因的人胚胎干细胞系?对所得人胚胎干细胞进行α-地中海贫血基因的DNA序列分析与全能性鉴定. 【结果】 本研究共收集44枚PGD筛查后囊胚,分离12个囊胚内细胞团,建立两株人胚胎干细胞系.两株人胚胎干细胞系均携带α-地中海贫血纯合子基因.两株胚胎干细胞系均有正常的染色体核型.OCT-4基因与细胞表面抗原SSEA-3?SSEA-4?TRA-1-60与TRA-1-80的表达,能够向三胚层细胞分化.【结论】 携带α-地中海贫血纯合子基因的人胚胎干细胞具有向三胚层细胞分化的全能性,携带致病基因的胚胎可用于建立携带遗传疾病基因的人胚胎干细胞系.     

冻融胚胎体外培养至囊胚移植后出生婴儿1例报道

常规体外受精于第3天将胚胎冷冻保存,但冻胚经融解后受多种因素的影响着床能力较低,经体外培养2～3d可观察其发育潜能,将形成囊胚者进行移植,以提高着床的机率,是目前冻胚移植的又一新点。我中心冻融胚胎体外培养至囊胚移植后出生婴儿1例,现报告如下。     

人胚胎干细胞及其潜在应用

人胚胎干细胞在体外给予特殊的生长因子刺激，可以控制其向特定的细胞分化，这些分化成特定的细胞可以用于治疗性移植、检测药物或潜在毒素的筛选、探索胚胎早期发育中染色体的异常、及遗传工程的新开发。     

冻融胚胎体外培养至囊胚移植后出生婴儿1例报道

常规体外受精于第3天将胚胎冷冻保存,但冻胚经融解后受多种因素的影响着床能力较低,经体外培养2～3d可观察其发育潜能,将形成囊胚者进行移植,以提高着床的机率,是目前冻胚移植的又一新点[1]。我中心冻融胚胎体外培养至囊胚移植后出生婴儿1例,现报告如下。1病例介绍患者,女,29岁,主因:"人流术后8年,婚后未避孕不     

人胚胎原生殖细胞中胚胎干细胞的分离培养

目的：探讨人胚胎原生殖细胞分离培养的条件及在体内、外的分化能力．方法：从5～9wk人胚胎生殖嵴中消化分离原生殖细胞(PGC），将其置于饲养层上培养，采用大鼠心肌细胞条件培养基(RH-CM)，改变了常规使用添加白血病抑制因子(LIF)的培养液．结果：成功地完成了对PGC的第4代培养；经过培养形成的克隆以及克隆的生长方式基本符合胚胎干细胞(ES)的特性：AP染色呈阳性；体外分化实验显示此细胞具有发育多能性；悬浮培养时能够自然分化成类胚体(EB)．结论：离散生殖嵴和增殖的。PGC克隆的时机和方法是影响建系的关键；PMEF和HEF对人PGC克隆的影响无显差异；添加RH-CM可有效抑制PGC的分化。     

人脐带间充质干细胞作为维持人胚胎干细胞生长饲养层细胞的研究

目的寻找可以维持人胚胎干细胞未分化生长的人源性细胞作为饲养层细胞,从而解决使用鼠源性细胞作为饲养层带来的安全问题。方法尝试以人脐带间充质干细胞作为饲养层细胞来培养人胚胎干细胞,检验其是否可以维持人胚胎干细胞的未分化生长状态。用胶原酶消化法分离人脐带间充质干细胞,光镜下观察细胞形态;流式细胞仪检测其表面标志;诱导人脐带间充质干细胞向成骨细胞和脂肪细胞进行分化。将人胚胎干细胞系H1接种于丝裂霉素C灭活后的人脐带间充质干细胞上,每隔5d进行一次传代。培养20代后,对人胚胎干细胞特性进行相关检测,包括细胞形态、碱性磷酸酶染色、相关多能性基因的表达、分化能力。结果从人脐带中分离出的间充质干细胞为梭形,呈平行排列生长或漩涡状生长;细胞高表达CD44、CD29、CD73、CD105、CD90、CD86、CD147、CD117,不表达CD14、CD38、CD133、CD34、CD45、HLA-DR;具有分化成脂肪细胞和成骨细胞的潜能。人胚胎干细胞在人脐带间充质干细胞饲养层上培养20代后,继续保持人胚胎干细胞的典型形态,碱性磷酸酶染色为阳性,免疫荧光染色显示OCT4、Nanog、SSEA4、TRA-1-81、TRA-1-60的...     

胚胎干细胞及其应用前景

人类正常胚胎发育过程是按严格的时空程序进行一系列细胞之间、核质之间相互作用的结果。从全能或多能胚胎干细胞分化为具有独特功能的体细胞，主要取决于哪些基因被激活和在什么时间与位点被激活。细胞环境中的各种因子的类型和浓度则是基因选择性激活的重要因素。因此，细胞分化是部分基因选择性的被激活或差异性表达，从而控制转移性蛋白质的合成和排布的结果，从20世纪60年代开始，人们一直在致力于寻找一个既能在体外增殖，又具有胚胎细胞全能性或多能性的，并通过适当条件诱导分化为各种类型的分化细胞的实验模型。