通塞脉制剂对过氧化氢致PC12细胞损伤的保护作用

目的观察通塞脉制剂对过氧化氢(H2O2)作用下PC12细胞的保护作用。方法体外培养PC12细胞,将细胞分为正常对照组,过氧化氢组,通塞脉高剂量组(5mg/mL),通塞脉中剂量组(0.5mg/mL),通塞脉低剂量组(0.05mg/mL)。200μmol/L过氧化氢被加入作为刺激物孵化4h后,再加入终浓度5、0.5、0.05mg/mL的药物,继续培养24h,用MTT法测定并计算药物对H2O2致PC12细胞损伤的保护率;取各组细胞上清液,按照试剂盒的操作方式,测定超氧化物歧化酶(SOD),丙二醛(MDA),一氧化氮(NO),乳酸脱氢酶(LDH)及钙离子含量(Ca2+)。结果通塞脉制剂(5、0.5、0.05mg/mL)对过氧化氢致PC12细胞损伤均有保护作用。过氧化氢组细胞上清液中SOD活性,SOD抑制率降低(P0.05~0.01),MDA,LDH,NO含量与Ca2+含量增加(P0.05~0.01)。而各给药组能提高SOD活性及抑制率,降低LDH,MDA,NO以及Ca2+含量,与过氧化氢组比较有显著性差异(P0.05~0.01)。结论通塞脉制剂对PC12细胞损伤有显著性保护作用,其机制与钙超载,氧化应激等因素有关。     

通塞脉微丸活性部位群化学成分的研究

目的:分离鉴定通塞脉微丸活性部位群中的化学成分。方法:通塞脉微丸活性部位群经硅胶柱层析分离,IR,NMR和MS方法确定结构。结果:分得9个化合物,经鉴定分别是:肉桂酸,阿魏酸,甘草素,木犀草素,异甘草素,甘草苷,咖啡酸,绿原酸,甘草次酸。结论:通塞脉微丸中主要活性部位群是黄酮类、酚酸类及皂苷类等。      

通塞脉微丸活性成分的大鼠在体肠吸收研究

目的考察通塞脉微丸中的活性成分在大鼠不同肠段的吸收动力学及微丸与标准品的吸收差异,评价该制剂用药的合理性。方法采用大鼠在体小肠吸收实验方法。结果微丸中活性成分在小肠各部位均能较好地吸收,无特异性吸收部位。不同浓度溶液对甘草苷、阿魏酸和甘草酸铵的吸收无影响;浓度对肉桂酸吸收有差异,可能借助载体转运。结论标准品中甘草苷、甘草酸铵和肉桂酸较微丸吸收快,阿魏酸无显著差异,提示微丸维持药效更持久。      

通塞脉微丸血清药物化学的初步研究（I）

目的 研究通塞脉微丸复方大鼠给药后血清中移行成分的归属。方法 建立通塞脉微丸及大鼠ig通塞脉微丸后血清的HPLC色谱分析方法;比较全方制剂、金银花、当归、甘草、玄参、黄芪和石斛各单方制剂分别给药后所得的血清样品,分析口服通塞脉微丸后大鼠血中移行成分、来源生药及其代谢产物。结果 大鼠ig通塞脉微丸后从血清中发现了15种入血成分,其中10种成分为复方所含成分的原型,其中绿原酸、阿魏酸、甘草素和肉桂酸为已知确定结构的化合物,另外5种成分分别来源于金银花、当归、甘草、玄参和石斛,其具体结构还有待进一步检测分析;1种为复方给药后新产生的代谢物质;3种为给药后产生的未知化合物。结论 血中移行成分及其代谢产物是通塞脉微丸的体内直接作用物质,对其深入研究将有助于阐明复方效应的物质基础。     

HPLC双波长梯度洗脱同时测定通塞脉微丸中绿原酸、阿魏酸、甘草苷的含量

目的 研究同时测定通塞脉微丸中绿原酸、阿魏酸及甘草苷含量的方法.方法 Kromasil C18色谱柱,乙腈-2%冰醋酸为流动相,梯度洗脱,检测波长λ入1=324 nm,λ2=276 nm.结果 绿原酸、阿魏酸、甘草苷分别在0.208 4～3.334、0.050 35～0.805 6,0.231 5～3.704 μg内有良好的线性关系,r＞0.999 9;平均加样回收率分别为99.07%,100.40%,98.13%,相应的RSD分别为0.73%,1.32%,0.97%(n=6).结论 本法操作简便,结果可靠,重现性好,可作为产品质量控制的方法.     

脉塞通对人血小板膜微粘度的影响

以DPH为荧光探剂,测定人血小板膜偏振度,研究三七的有效成分脉塞通对血小扳膜微粘度的影响。在本实验条件下,血小板膜微粘度随脉塞通浓度的增加和孵育时间的延长而减小。脉塞通能消除低密度脂蛋白增高血小板膜微粘度的作用。脉塞通对血小板膜微粘度的作用大于对红细胞膜微粘度的作用。     

葛根素对过氧化氢诱导PC12细胞损伤的保护作用

目的:研究葛根素对过氧化氢(H2O2)诱导PC12细胞损伤的影响。方法:建立H2O2致PC12细胞损伤模型,倒置相差显微镜下进行一般形态学观察,化学比色法测定乳酸脱氢酶(LDH)释放量及细胞培养液和细胞内丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:100μmol/L H2O2诱导PC12细胞4 h,细胞呈现明显损伤形态,LDH释放量升高(P<0.001),细胞培养液和细胞内MDA含量增加(P<0.001),SOD活性下降(P<0.001)。葛根素可明显改善形态学损伤,显著降低LDH释放量和细胞培养液及细胞内MDA含量,提高SOD活性。结论:葛根素对H2O2诱导PC12细胞损伤具有保护作用,其作用机制可能与提高PC12细胞的抗氧化能力有关。     

通塞脉注射剂治疗脑梗死的临床疗效观察

目的:观察通塞脉用于脑梗死患者治疗的临床疗效。方法:取本院2008年2月～2011年2月间收治的急性脑缺血梗死患者106名,随机分为观察组和对照组,对照组使用常规脑梗死西医疗法,治疗组在常规西医疗法的基础上加用通塞脉片,3次/d,5片/次,以1个月为一疗程。结果:观察组神经功能缺损恢复的总有效率(痊愈+显效+有效)为86.8%;对照组总有效率为66.1%,2组总有效率对比有统计学差异,P<0.05;观察生活能力恢复至3级以上(包括3级)占75.5%;对照组生活能力恢复至3级以上(包括3级)占56.6%,.2组比较有统计学差异,P<0.05。结论:通塞脉可以有效恢复患者的神经功能缺损和生活能力,不仅保护患者生命安全,同时有效改善患者出院后的生活质量,值得在临床广泛推广使用。     

桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧损伤PC12细胞的保护作用

目的 探讨桃红四物汤含药血清对缺糖缺氧（oxygen glucose deprivation,OGD）损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。 方法 采用连二亚硫酸钠（Na2S2O4）联合低糖培养基建立体外OGD致PC12细胞损伤模型;分别给予不同浓度的桃红四物汤含药血清,以MTT法检测细胞存活率,倒置显微镜观察细胞形态学变化;检测乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）和超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量;观察Hoechst33258染色后的细胞形态学变化;Western blot法检测给药后细胞Caspase-3蛋白的表达。 结果 与空白血清对照组相比,经OGD损伤后,细胞活力显著降低,桃红四物汤含药血清可减轻PC12细胞形态损伤,显著提高SOD活力,降低MDA和LDH含量,降低Caspase-3蛋白表达;Hoechst 33258染色结果表明桃红四物汤含药血清能降低OGD诱导的细胞凋亡。 结论 桃红四物汤含药血清对OGD诱导的PC12细胞损伤具有保护作用,其机制与提高SOD活力和降低MDA含量有关。     

硒对微波辐照致PC12细胞损伤的保护作用

目的探讨硒对微波致神经细胞损伤的保护作用.方法以离体培养的PC12细胞为研究对象,采用65 mW/cm2的微波照射20 min进行致伤,以细胞存活率、MDA含量、SOD和GSH-Px活性为实验指标反映Na2SeO3预处理对微波辐照致PC12细胞损伤的影响.结果微波辐照后PC12细胞存活率明显降低,MDA含量增加,SOD、GSH-Px活性降低,而经过Na2SeO3预处理后再接受微波辐照,以上指标的变化明显减轻,并且高剂量Na2SeO3预处理作用更明显.结论硒可以提高PC12细胞的抗氧化能力,保护神经细胞对抗微波辐射导致的细胞损伤.     

镇肝熄风汤载药脑脊液对MPP^＋诱导的PC12细胞c-Jun磷酸化的影响

目的探讨镇肝熄风汤载药脑脊液对甲基-苯基-吡啶离子（1-methyl-4-phenylpyridinium,MPP＋）诱导的PC12细胞c-Jun磷酸化的影响。方法镇肝熄风汤载药脑脊液预处理体外培养的PC12细胞后,加入MPP＋诱导PC12细胞损伤模型。用Western blotting检测c-Jun和phospho-c-jun蛋白表达。结果 MPP＋处理72h,与空白对照组比较,模型组phospho-c-jun蛋白表达显著上调,差异具有统计学意义（P〈0.05）。与模型组比较,镇肝熄风汤载药脑脊液组phospho-c-jun蛋白表达显著下调,差异具有统计学意义（P〈0.05）。而各组之间c-jun蛋白表达无显著性差异（P〉0.05）。结论镇肝熄风汤载药脑脊液对MPP＋诱导的PC12细胞c-Jun磷酸化具有抑制作用。     

Protection of PC12 Cells against Superoxide-induced Damage by Isoflavonoids from Astragalus mongholicus

Objective To further investigate the neuroprotective effects of five isoflavonoids from Astragalus mongholicus on xanthine （XA）/xanthine oxidase （XO）-induced injury to PC12 cells. Methods PC12 cells were damaged by XA/XO. The activities of antioxidant enzymes, MTT, LDH, and GSH assays were used to evaluate the protection of these five isofavonoids. Contents of Bcl-2 family proteins were determined with flow cytometry. Results Among the five isoflavonoids including formononetin, ononin, 9, 10-dimethoxypterocarpan-3-O-β-D-glucoside, calycosin and calycosin-7-O-glucoside, calycosin and calycosin-7-O-glucoside were found to inhibit XA/XO-induced injury to PC12 cells. Their ECs0values of formononetin and calycosin were 0.05 μg/mL. Moreover, treatment with these three isoflavonoids prevented a decrease in the activities of antioxidant enzymes, superoxide dismutase （SOD） and glutathione peroxidase （GSH-Px）, while formononetin and calycosin could prevent a significant deletion of GSH. In addition, only calycosin and calycosin-7-O-glucoside were shown to inhibit XO activity in cell-free system, with an approximate IC50 value of 10 μg/mL and 50 μg/mL. Formononetin and calycosin had no significant infuence on Bcl-2 or Bax protein contents. Conclusion Neuroprotection of formononetin, calycosin and calycosin-7-O-glucoside may be mediated by increasing endogenous antioxidants, rather by inhibiting XO activities or by scavenging free radicals.     

神经生长因子对β-淀粉样蛋白诱导PC12细胞凋亡的保护作用

目的:研究神经生长因子(NGF)对β淀粉样蛋白(Aβ)诱导鼠肾上腺嗜咯瘤细胞(PC12)凋亡的作用,从而探讨NGF对阿尔茨海默病的治疗作用。方法:以PC12细胞为神经元的细胞模型,将Aβ和NGF+Aβ分别加入培养的PC12细胞中,采用MTT法观察细胞存活率,相差显微镜观察细胞形态改变,hochest33258观察细胞核变化,流式细胞仪检测细胞凋亡率,比较两组间差异。结果:Aβ组细胞存活率随作用时间延长而下降(P<0.01),胞体变小,轴突退化变形,可见特征性的凋亡细胞核,并检测到典型的凋亡峰;而NGF+Aβ组细胞存活率明显增高,凋亡率明显减少(P<0.01)。结论:一定浓度的Aβ2535能诱导PC12细胞凋亡,NGF对Aβ诱导的PC12细胞凋亡具有保护作用。     

应用LSCM对脑脊液淋巴瘤细胞内质网的研究

目的：通过激光扫描共聚焦显微镜（LSCM）技术对脑脊液淋巴瘤细胞内质网进行立体、动态、定量研究。方法：将所观察脑脊液细胞分为正常淋巴细胞组、淋巴瘤细胞组，内质网以荧光探针DiOC6(3)标记后，得到内质网的断层扫描图像、荧光强度地形立体分布图并且定量测量内质网的荧光强度值。结果：与正常淋巴细胞相比，淋巴瘤细胞内质网空间立体分布有明显差别，平均荧光值明显增强，有非常显著性差异（P＜0．01）。结论：本研究对中枢神经系统淋巴瘤的诊断、鉴别诊断、瘤细胞分化程度和功能状态判断有一定意义。     

Free and Total Vitamin B12 in Cerebrospinal Fluid

Free and total vitamin B₁₂ levels in serum and cerebrospinal fluid (CSF) were bioassayed, since there were no available data on the relationship between free and total vitamin B₁₂ in CSF or between free vitamin in serum and CSF vitamin B₁₂. The subjects were 43 neurological patients. Serum levels were normal in 40 of 43 patients. Values for free and total vitamin B₁₂ in CSF were the same in 42 of 43 patients. Mean CSF vitamin B₁₂ was 21 μμg./ml. In 17 cases CSF vitamin B₁₂ equalled free vitamin B₁₂ level in serum, in 16 cases CSF vitamin B₁₂ was lower than the free level in serum, and in 10 cases CSF vitamin B₁₂ was higher than the free vitamin level in serum. There was no apparent diagnostic correlation. The findings suggest that vitamin B₁₂ is not bound in CSF and that there is some selective control of passage of vitamin B₁₂ across the blood-CSF barrier.     

腺病毒载体介导的大鼠DNA多聚酶β重组体的构建及其在PC12细胞中的表达

[目的]为探讨DNA多聚酶β在神经细胞损伤中的作用与机制,构建其重组腺病毒载体,并在PC12细胞中表达.[方法]RT-PCR获取大鼠DNA多聚酶β(POLβ)的编码序列,TA克隆测序,酶切POLβ基因并连入穿梭质粒pAdTrack-CMV,电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183.重组腺病毒质粒(pAd-polβ)和Lipofectamine2000转染293细胞,用重组腺病毒感染PC12细胞.[结果]10个TA克隆中有3个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLβ cDNA序列完全一致,同源重组检测时30个克隆中有8个含目标条带.DNA序列正确的POLβ重组腺病毒质粒转染293细胞后,感染Ad-polβ的293及PC12细胞荧光显微镜下可见绿色荧光,重组腺病毒Ad-polβPCR鉴定含目标条带,Ad-polβ感染PC12细胞Western Blot检测到POLβ蛋白表达.[结论]成功构建了大鼠DNA多聚酶β的腺病毒重组体并在PC12细胞中表达     

姜黄素通过抗氧化作用拮抗鱼藤酮致PC12细胞损伤的研究

目的 探讨姜黄素(Cur)对鱼藤酮(Ro)致PC12细胞损伤的保护作用及其机制.方法 用鱼藤酮建立PC12细胞损伤模型;用四氮唑盐(MTT)比色法检测细胞增殖活力;苏木精-伊红染色观察细胞形态学变化;比色法检测细胞内总超氧化物歧化酶(SOD)的活性;DCFH-DA染色检测细胞内活性氧类物质(ROS)水平;流式细胞术(Annexin Ⅴ-FITC/PI双染法)检测PC12细胞的凋亡.结果 0.5 μmol/L姜黄素和1.0 μmol/L姜黄素均可减轻0.1 μmol/L鱼藤酮对PC12 细胞增殖活力的抑制,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P＜0.01);明显减轻了细胞损伤的形态学改变;明显增加了 PC12 细胞内SOD的活性,与鱼藤酮组比较差异有统计学意义(P＜0.05);明显降低了PC12细胞内ROS的含量,明显抑制了鱼藤酮对PC12 细胞凋亡的诱导作用,与鱼藤酮组比较差异均有统计学意义(均P＜0.01).结论 姜黄素可拮抗鱼藤酮致PC12细胞的损伤,其机制可能与清除细胞内ROS,诱导抗氧化酶的活性有关.     

多巴胺对PC12细胞凋亡的诱导作用

目的 研究外源性多巴胺对多巴胺能神经元的毒性作用,方法 采用体外培养的PC12细胞为模型,以终浓度0.45mmol/L的多巴胺对细胞进行诱导。结果 在透射电镜下可见培养的PC12细胞核染色质明显固缩、断裂,原位末端标记技术显示胞核内散在分布断裂DNA片段,流式细胞仪检测到DNA周期中G0-G1期前出现明显的亚二倍体峰,琼脂糖凝胶电泳呈现典型的“梯状”带等细胞凋亡的特征性改变。结论 外源性DA可诱导PC12细胞凋亡。