胆盐输出泵在胆道梗阻-再通大鼠肝组织中的表达及意义

目的探讨胆盐输出泵（BSEP）在胆道梗阻-再通大鼠肝组织中的表达及意义。方法将54只Wistar大鼠随机分为假手术（Sham）组、胆总管结扎（CBDL）组、胆道再通（BR）组，测定各时相点血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆汁酸（TBA）以及肿瘤坏死因子（TNF-α）的水平，采用RT-PCR方法和二步法免疫组化染色分别在基因转录、蛋白表达及肝细胞膜定位上检测BSEP在大鼠肝组织中的表达情况，运用Mias99病理图像分析系统半定量检测BSEP的平均积分光密度（IOD），与TBA和TNF-α作相关分析。结果CBDL术后大鼠血清ALT，TBA及TNF-α显著增高（P〈0．05）；BR术后上述指标逐步好转，7d时仍显著高于Sham组水平（P〈0．05）。BSEPmRNA水平随着梗阻时间的延长明显降低（P〈0．05），CBDL术后14d仅微弱表达，梗阻解除后缓慢增高；BR术后7d仍未恢复至Sham组水平。免疫组化染色显示BSEP表达定位于肝细胞膜上，变化规律与前述一致，并且与TBA和TNF-α呈显著负相关（r1=-0．9257，r2=-0．8536，P〈0．05）。结论胆道梗阻-再通大鼠模型中胆盐的代谢与BSEP水平密切相关，而TNF—α可能是影响BSEP变化的重要因素。     

蛋白酶体抑制剂bortezomib对胆道梗阻大鼠肝脏的保护作用

目的探讨蛋白酶体抑制剂bortezomib对胆道梗阻大鼠肝脏的保护作用.方法将30只大鼠随机分为假手术组(SO组)、胆道梗阻对照组(Con组)和bortezomib实验组(Bor组).Con组通过胆总管结扎建立大鼠胆道梗阻模型,Bor组同法结扎胆总管并于术前1 d、术后第3天腹腔注射bortezomib,假手术组仅行剖腹和胆总管游离.所有大鼠均于术后7 d处死,处死前采集血清测定血清丙氨酸转氨酶(ALT),总胆红素(TB)和总胆汁酸(TBA)水平.免疫组化染色测定肝组织NF-κBp65含量.逆转录-聚合酶联反应测定肝脏组织中TNF-α mRNA水平.结果Con组与Bor组的TB和TBA水平并差异无统计学意义(P＞0.05),而Bor组的ALT水平[(92.4±21.4)μmo1/L]明显低于Con组[(145.7±33.5)μmol/L],P＜0.05.Bor组的NF-κB p65亚基阳性染色率(11.6%±2.7%)明显低于Con组(15.5%±4.3%),P＜0.05.而逆转录-聚合酶联反应发现,Bor组TNF-αmRNA相对表达量(1.0±0.2)明显低于Con组(1.3±0.4),P＜0.05.结论bortezomib可以通过抑制NF-κB的活化减少炎症反应的发生,从而减轻因胆道梗阻引起的肝脏损害.     

组蛋白预处理对胆道梗阻大鼠肝功能影响的实验研究

【摘要】〓目的〓探讨组蛋白预处理对胆道梗阻大鼠肝功能的影响。方法〓104只大鼠随机分成4组:正常组(A组)、假手术组(B组)、胆管结扎组(C组)和His预处理组(D组,胆管结扎前24 h腹腔注射组蛋白(200 μg/kg)。设A组为0时相,B、C、D组分为术后12、24、48、72 h 4个时相,每个时相8只。留取血样和肝组织标本,检测血清ALT、DB、TB水平,观察肝组织病理学改变。ELISA检测血清IL-6和TNF-α水平,RT-PCR方法检测Kupffer细胞TLR4 mRNA表达水平。结果〓C组各时相肝组织病理评分高于A和B组(P<0.01)和D组(P<0.05)的相应时相。C组血清IL-6和TNF-α水平术后逐渐升高,高于B组相应时相(P<0.01);D组各时相血清IL-6和TNF-α水平低于C组,(P<0.05)。C组Kupffer细胞Toll-样受体4 mRNA(TLR4 mRNA)表达术后逐渐升高,高于A和B组相应时相(P<0.01);D组各时相Kupffer细胞TLR4 mRNA表达低于C组(P<0.05)。结论〓对胆道梗阻大鼠给予组蛋白预处理,可以减轻肝功能损害;通过激活Kupffer细胞TLR4减少炎症介质IL-6、TNF-α产生,抑制局部及全身的炎症反应。     

N-乙酰半胱氨酸对大鼠胆道梗阻肝功能损伤的保护作用及机制研究

目的 探讨N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC)对大鼠胆道梗阻所致肝功能损伤的保护作用及其机制。方法Wistar大鼠72只随机均分成3组：(1)胆道结扎+NAC组(DBL+NAC,n=24)：开腹结扎并切断胆总管,建模成功后经腹腔注射NAC（150 mg·kg-1·d-1）连续注射7 d;(2)胆道结扎组（DBL组,n=24）;(3)假手术组(SO组,n=24)：仅行开腹游离胆总管不予结扎和切断。建模成功后1、3、5、7d每组分别活杀6只大鼠,取静脉血及肝组织,检测肝功能、血浆肿瘤坏死因子α(TNF-α)在各时相点的变化并采用Griess法检测一氧化氮(NO)产生情况。结果 在DBL组、DBL+ NAC组谷-草转氨酶(AST)、血清谷丙转氨酶(ALT)、总胆红素(TBIL)、直接胆红素(DBIL)均随胆道梗阻时间延长而升高,但DBL组AST、ALT在各时间点均较DBL+NAC组明显升高(P＜0.05),而TBIL、DBIL在这两组间无明显差异(P＞0.05)。DBL组和DBL+ NAC组TNF-α、NO浓度变化也随梗阻时间延长而升高,但DBL组较DBL+ NAC组TNF-α、NO浓度升高更明显(P＜0.05)。结论N-乙酰半胱氨酸能有效改善胆道梗阻所致肝损害,并有可能是通过下调肝组织中TNF-α、NO的表达这一途径实现的。     

转运蛋白多药耐药相关蛋白2在胆道再通大鼠肝脏中的表达及意义

目的探讨肝细胞毛细胆管面胆红素主要转运子多药耐药相关蛋白2(Mrp2)在胆道再通过程中的表达变化机制。方法对96只胆道梗阻及再通大鼠动物模型的286份肝组织样本进行放免检查TNF-α;进行免疫荧光和RT-PCR,在肝细胞毛细胆管面上染色定位Mrp2,计算机图像分析测定,半定量比较肝细胞毛细胆管面上Mrp2表达情况,并与肝组织匀浆TNF-α、血清胆红素作相关分析。结果Mrp2转运蛋白特异性定位于肝细胞膜的毛细胆管面,荧光染色呈线条形勾勒出毛细胆管轮廓,CBDL术后1、3、7和14 d其Mrp2表达(相对灰度)逐渐下降,由223.0±14.2降为211.0±13.7、167.0±8.7、112.0±11.2、78.0±7.2;RBF术后1、37、和14 d其Mrp2表达缓慢恢复,分别为102.0±9.7、143.0±8.1、177.0±12.4和212.0±15.4。并且随着肝组织匀浆TNF-α、血清胆红素的升高或降低而发生变化。结论胆道再通后肝细胞代谢胆红素的恢复与Mrp2转运蛋白的变化密切相关,且TNF-α可能是影响Mrp2变化的主要因素。     

极化液对内毒素血症大鼠肝损伤的影响

目的研究葡萄糖-胰岛素-钾(极化液,GIK)对内毒素血症大鼠肝损伤的影响。方法雄性SD大鼠60只,体重200~250g,随机分为三组:对照组,脂多糖组(LPS组,LPS 8mg/kg),GIK组(LPS 8mg/kg+GIK 4ml·kg~(-1)·h~(-1))。采用全自动生化仪检测腹腔注射LPS后3d和5d大鼠血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)及天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量,ELISA法检测三组大鼠肝组织匀浆TNF-α含量,并行HE染色观察肝组织病理变化,TUNEL免疫荧光检测肝实质细胞凋亡情况。结果与注射后3d比较,注射后5dLPS组大鼠血清ALT、AST、肝组织匀浆TNF-α含量明显升高,而GIK组大鼠血清ALT、AST、肝组织匀浆TNF-α含量明显下降(P0.05)。与对照组比较,注射后3dLPS组和GIK组大鼠血清ALT、AST、注射后5dLPS组大鼠血清ALT、AST明显升高(P0.05),注射后3、5dLPS组和GIK组大鼠肝组织匀浆TNF-α含量、肝损伤等级评分、肝细胞凋亡指数明显升高(P0.05)。与LPS组比较,注射后3dGIK组大鼠肝组织匀浆TNF-α含量、肝细胞凋亡指数明显降低(P0.05),注射后5dGIK组大鼠血清ALT、AST、肝组织匀浆TNF-α含量、肝损伤等级评分、肝细胞凋亡指数明显降低(P0.05)。结论腹腔注射LPS可引起大鼠肝损伤,导致肝功能改变及肝细胞破坏;GIK可减轻LPS诱导的大鼠肝损伤。     

梗阻性黄疸对心肌的损伤及乌司他丁保护作用的研究

目的 观察胆道梗阻后心肌损伤及乌司他丁(UTI)的保护作用。方法动态观测胆道梗阻大鼠的心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)、血清总胆红素(TBIL)、碱性磷酸酶(ALP)、肌酸激酶同工酶(CK-MB)、内毒素(ET)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)含量；取左心室心肌行光电镜检查，并应用ABC免疫组化染色法，定位TNF-α在心肌组织中的表达和分布。结果胆道梗阻后，血清TBIL，ALP，CK-MB，ET，TNF-α的水平逐渐升高；心肌组织MDA含量逐渐升高，SOD含量逐渐减少，心肌TNFα表达升高；各UTI治疗组与同时相梗阻组比较，血清TBIL，ALP，CK-MB，ET，TNF-α水平及心肌组织MDA含量减少，SOD含量升高，心肌TNF-α表达下降；光电镜下可见随胆道梗阻时间延长，心肌损害加重，各UTI治疗组与同时相梗阻组比较，心肌损害减轻。结论UTI通过对抗自由基损伤、内毒素血症、TNF-α的综合作用，对胆道梗阻所致心肌损伤有明显保护作用。     

肝切除联合胆肠内引流对梗阻性黄疸大鼠的影响

目的探索在高胆红素血症下,大鼠胆肠内引流联合肝切除对肝功能、肝细胞能量代谢以及肝细胞再生和凋亡的影响。方法雄性成年SD大鼠120只,其中6只大鼠作为假手术(SO)组;20只行70%肝切除,同时行胆总管-十二指肠插管桥接(70%PH组);另94只行胆总管结扎(CBDL)制备梗阻性黄疸模型,建模成功后5d时随机取6只动物作为CBDL组,余下的动物5d后行二次手术,再分为胆肠内引流再通组(BDO-RBF组,20只)、42%PH+BDO-RBF组(20只)及70%PH+BDO-RBF组(25只)。检测CBDL组5d时及二次手术后各组术后24h、72h及7d时肝功能和肝细胞能量代谢、肝组织肝细胞生长因子(HGF)和bcl-2mRNA含量及其蛋白表达、肝细胞增殖指数和凋亡指数的变化。SO组只测定术后0h肝功能和肝细胞能量指标。结果正常大鼠能够耐受70%肝切除,术后肝细胞能量代谢和肝功能迅速恢复正常,肝再生良好、细胞凋亡无明显增多。较之SO组和70%PH组,CBDL导致肝细胞能量代谢恶化、肝功能不良、肝组织HGF和bcl-2mRNA含量减少,肝再生受抑制,细胞凋亡显著增多(P<0.05)。胆肠内引流再通后肝细胞能量代谢可迅速恢复,肝细胞凋亡减少,肝再生活跃。42%+BDO-RBF组及70%PH+BDO-RBF组肝细胞能量代谢同样能够较快恢复,肝再生良好。42%+BDO-RBF组与70%PH+BDO-RBF组间各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。结论梗阻性黄疸时,高胆红素血症严重影响肝细胞能量代谢和肝功能,引起肝细胞凋亡增多,肝再生受抑制;及时有效的胆肠内引流能够迅速改善肝细胞能量代谢、肝功能及肝再生,联合肝切除时术前可不需常规胆道引流。     

急性重症胆管炎大鼠肝组织高迁移率族蛋白-1对肿瘤坏死因子-表达的影响

目的 探讨急性重症胆管炎(ACST)大鼠肝组织高迁移率族蛋白1(HMG-1)改变及其对肿瘤坏死因子(TNF-α)表达的调节作用.方法 通过制作ACST大鼠模型,正丁酸钠干预,不同时相点检测肝组织HMG-1及TNF-α表达,同时观察肝功能及结构改变.结果 AGST组12～24 h肝组织HMG-1和TNF-a mRNA表达均显著增强(P＜0.05或0.01).正丁酸钠处理可显著抑制ACST后12～24 h肝组织HMG-1 mRNA表达(P＜0.01),并明显下调肝组织TNF-α mRNA表达及TNF-α水平(P＜0.05或0.01),同时血清谷丙转氨酶(ALT)水平显著降低(P＜0.05或0.01),肝脏的病理形态得到明显改善.结论 ACST大鼠肝组织HMG-1表达可促进局部TNF-α的合成与释放,从而诱导ACST大鼠急性肝功能损害.     

RIP3在大鼠肝脏缺血后处理中的表达与作用

目的:探讨受体相互作用蛋白3(RIP3)在大鼠肝脏缺血后处理中的表达与作用。方法 :采用大鼠70%肝脏热缺血再灌注损伤模型,40只健康成年雄性SD大鼠随机分为4组:假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(IR组)、缺血后处理组(IPO组)和缺血后处理+程序性坏死特异性抑制剂-1组(Nec-1组)。取下腔静脉血检测ALT和AST的水平;HE染色观察组织病理学改变并进行Suzuki’s评分;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肝组织中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和RIP3的蛋白表达水平。结果:与IR组相比,IPO组肝组织病理学表现明显改善,Suzuki’s评分明显降低(P0.05),血清ALT、AST水平明显下降(P0.05);与Sham组相比,IR组、IPO组及Ne c-1组TNF-α和RIP3表达水平均明显升高(P0.05);与IR组相比,IPO组RIP3表达水平显著降低(P0.05);与IPO组相比,Nec-1组RIP3表达水平明显降低(P0.05)。结论:肝脏缺血后处理中有RIP3介导的程序性坏死的参与,缺血后处理的保护机制可能与降低RIP3的表达从而减少程序性坏死的发生有关。     

Consequences of intraperitoneal bile: bile ascites versus bile peritonitis

Recent experience with patients with bile ascites and bile peritonitis prompted a review of other case histories in the medical literature of these conditions. The clinical courses of 24 patients with bile ascites and 34 with bile peritonitis were reviewed. Bile ascites occurred most often as a postoperative complication of biliary tract operations and also occasionally after trauma. Clinical signs were minimal except for abdominal distention, and operations were delayed for an average of 30 days. Peritoneal fluid was sterile in the 11 patients studied. In contrast, bile peritonitis occurred most commonly after spontaneous perforation of the gallbladder or hepatic ducts but also after trauma. All patients had severe signs of peritoneal irritation, and operation was performed earlier, at a mean of 4 days after onset of symptoms. Of 11 patients with specimens of their peritoneal fluid cultured, 6 had sterile fluid and 5 had bacteria. Although both bile salt concentration and bacteria have been implicated in the development of bile peritonitis rather than bile ascites, our understanding of the mechanisms involved is still incomplete.     

腹腔镜胆总管切开取石方法探讨

目的 :探讨腹腔镜下胆总管探查胆道取石的方法。方法 :于腹腔镜下对胆总管结石 4 5例按由简单到复杂 ,由损伤轻到损伤重的原则应用冲洗、挤压及分离钳、胆道镜、改良取石钳取石。结果 :用冲吸法取净结石 3例 ,占 6 .6 % ;挤压和分离钳取净结石 13例 ,占 2 8 9% ;胆道镜取净结石 11例 ,占 2 4 % ;取石钳取净结石 18例 ,占 4 0 %。结论 :腹腔镜下胆总管取石应遵循由简到繁的原则 ,用取石钳取石较为可靠     

经验值得注意——再论胆管损伤与损伤性胆管狭窄

自腹腔镜胆囊切除术普遍开展之后,胆囊切除的病例很快增多,而胆管损伤发生率也随之升高,胆管损伤与胆管狭窄又重新成为本世纪的热门话题。医源性胆管损伤重在预防,预防手术中胆管损伤的基本点仍然是强调外科手术的基本要求,认真细致地施行手术,必要时中转开放手术。在专科中心及有经验的外科医生手中,修复手术结果优良者一般可达到90％,初期修复的效果优于再次修复。恢复胆道生理功能是修复手术的最终目的,当前广泛应用的仍然是肝管Roux-en-Y空肠吻合术。     

腹腔镜胆总管探查一期缝合术后胆瘘及胆总管狭窄的危险因素分析

目的 探讨腹腔镜胆总管探查（LCBDE）及一期缝合术后发生胆瘘及胆总管狭窄的临床危险因素。方法 收集自2017年1月至2019年6月湖州市中心医院收治的92例行LCBDE胆总管一期缝合术患者的临床资料，行回顾性对列研究及多因素回归分析。结果 全组患者术后胆瘘及胆总管狭窄发生率分别为11.9%（11/92）和18.5%（17/92）。合并糖尿病、胆总管直径＜1 cm、由胆总管一期缝合手术操作例数＜30例的主刀医师行手术治疗的患者术后胆瘘及胆总管狭窄的发生率明显升高（P＜0.05）。多因素回归分析发现，上述三个因素是LCBDE胆总管一期缝合术后胆瘘发生的独立危险因素[合并糖尿病：OR（95%CI）4.782（1.176～19.439），P=0.029；胆总管直径＜1 cm：OR（95%CI）5.743（1.535～21.481），P=0.009；胆总管一期缝合手术操作例数＜30例：OR（95%CI）4.693（1.251～17.612），P=0.022]，同时上述三个因素也是术后胆总管狭窄发生的独立危险因素[合并糖尿病：OR（95%CI）3.455（1.147～10.406），P=0.028；胆总管直径＜1 cm：OR（95%CI）4.667（1.500～14.518），P=0.008；胆总管一期缝合手术操作例数＜30：OR（95%CI）3.094（1.049～9.121），P=0.041]。结论 合并糖尿病、胆总管直径＜1 cm、主刀医师经验不足（操作例数＜30例）是LCBDE胆总管一期缝合术后发生胆瘘及胆总管狭窄的独立危险因素。对存在糖尿病或胆总管直径＜1 cm的患者应避免行胆总管一期缝合术；在学习曲线内的主刀医师应采取合理的胆总管一期缝合方式以避免术后胆瘘及胆总管狭窄的发生。     

Lithogenesis and bile metabolism

Gallstone disease exacts a considerable financial and social burden worldwide leading to frequent physician visits and hospitalizations. Based on their composition, gallstones are categorized as cholesterol, black pigment, and brown pigment, with each category having a unique structural, epidemiologic, and risk factor profile. Cholesterol crystal formation requires the presence of one or more of the following: (a) cholesterol supersaturation, (b) accelerated nucleation, or (c) gallbladder hypomotility/bile stasis. Some risk factors for cholesterol stones include age, gender, genetics, obesity, rapid weight loss, and ileal disease. Generally, pigment stones are formed by the precipitation of bilirubin in bile, with black stones associated with chronic hemolytic states, cirrhosis, Gilbert syndrome, or cystic fibrosis, and brown stones associated with chronic bacterial or parasitic infections.     

胆道术后胆漏的原因分析和防治

胆漏是肝胆外科术后常见的并发症之一,由于发生胆漏可明显延长住院时间,增加病人痛苦和经济负担,部分肿瘤病人可能因此而影响术后恢复及综合治疗.现就江都市扬州洪泉医院两年来30例术后胆漏病例的处理进行回顾性总结,并报道如下.