雷公藤内酯醇对胃癌细胞增殖、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨雷公藤内酯醇（TPL）对人胃癌细胞SGC-7901增殖、凋亡及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 常规培养SGC-7901细胞达对数生长后,采用终浓度为12.5、25、50、100 nmol／L TPL处理SGC-7901细胞,应用四甲基偶氮唑盐比色法测定对照组及不同浓度TPL处理24、48、72和96 h的细胞增殖情况,采用流式细胞术检测不同浓度TPL处理48 h的凋亡率和细胞周期分布情况,实时荧光定量聚合酶链反应检测不同浓度TPL处理48 h的促EMT转录因子Snail1、Twist的表达情况,Western blotting检测各组处理48 h后的EMT相关标记分子（E-cadherin、N-cadherin及Vimentin）水平。结果TPL在12.5～100 nmol／L的范围内对SGC-7901细胞有增殖抑制作用,且增殖抑制率呈剂量和时间依赖性,且除24 h 12 5 nmol／L外,其余浓度及作用时间的增殖抑制率均高于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,TPL处理48 h后的早晚期凋亡率升高、G0／G1期细胞比例及E-cadherin水平均升高,S期细胞比例、N-cadherin和Vimentin蛋白水平及Snail1和Twist mRNA水平均降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）,且呈浓度依赖性。结论TPL对胃癌细胞SGC-7901有毒性作用,不仅抑制其增殖且诱导凋亡及细胞周期G0／G1期阻滞,同时可抑制其EMT过程。     

mTOR通路抑制剂依维莫司对宫颈癌SiHa细胞恶性行为的影响

目的 探讨依维莫司（EVE）对人宫颈癌SiHa细胞增殖、凋亡及上皮间质转化（EMT）的影响。方法 常规培养SiHa细胞达对数生长期后,采用终浓度为1、10、100 μmol／L EVE处理SiHa细胞,采用四甲基偶氮唑盐比色法测定对照组及不同浓度EVE处理24、48、72和96 h后的细胞增殖情况,分别采用Annexin V-FITC／PI双染联合流式细胞术和实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测不同浓度EVE处理96 h的早期和晚期凋亡率及凋亡相关基因（Bax、Bad和Bcl-2）的表达情况,Western blotting和免疫荧光法检测各组处理96 h后的EMT相关标记分子包括上皮型钙粘附素（E-cad）、纤维连接蛋白（FN）和波形蛋白（Vim）的水平。结果 EVE在1～100 μmol／L范围内对SiHa细胞有增殖抑制作用,且增殖抑制率呈剂量和时间依赖性,除1 μmol／L作用24 h外,其余浓度及作用时间的增殖抑制率均高于对照组（P＜0.05）;与对照组相比,EVE处理96 h后的早期、晚期凋亡率及Bax、Bad的mRNA水平均升高,而Bcl-2 mRNA水平降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）,且呈剂量依赖性;EVE处理后的E-cad水平均高于对照组,而FN和Vim水平均低于对照组（P0.05）。结论 采用EVE阻断mTOR通路对宫颈癌SiHa细胞有毒性作用,不仅抑制其增殖且诱导凋亡,可能与抑制其EMT过程有关。     

FTY720对耐顺铂非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的:检测芬戈莫德（fingolimod,FTY720)对耐顺铂非小细胞肺癌细胞株A549增殖及凋亡的影响。方法:应用CCK-8检测耐顺铂A549细胞株在FTY720不同浓度（5 μmol/L、10 μmol/L、15 μmol/L和20 μmol/L）作用不同时间（24 h和48 h）后的增殖活性。流式细胞仪检测不同浓度（5 μmol/L、10 μmol/L和20 μmol/L）作用不同时间（24 h和48 h）后耐顺铂A549细胞凋亡情况,Western blot 法检测细胞凋亡相关蛋白的表达。结果:耐顺铂A549细胞的增殖抑制程度和促进凋亡的程度均与FTY720呈时间依赖及剂量依赖性。结论:FTY720以时间依赖及剂量依赖模式对耐顺铂A549细胞呈现出抑增殖及促凋亡作用。     

Melittin对非小细胞肺癌增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响

目的 探讨Melittin对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞增殖、凋亡及PI3K／Akt信号通路的影响。方法 分别采用0、10、20、50、100 μmol／L Melittin处理NSCLC细胞株A549、SPC-A1及人肺上皮细胞株16HBE 24、48、72和96 h后,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测各细胞株的增殖抑制率变化,同时采用流式细胞术Annexin-FITC／PI双染法及PI单染法检测不同浓度Melittin 处理24、48 h后的A549细胞凋亡及细胞周期情况,Western blotting检测不同浓度Melittin处理48 h后的A549细胞中PI3K／Akt信号通路相关蛋白（Akt和PTEN）及凋亡促进基因（caspase-9）的表达情况。结果 在10～100 μmol／L范围内,Melittin可呈剂量和时间依赖的方式提高A549、SPC-A1细胞的增殖抑制率,差异均有统计学意义（P＜0.05）,但对16HBE无细胞毒性作用（P＞0.05）;与0 μmol／L比较,除10 μmol／L Melittin处理24 h后的晚期凋亡率和G2／M期细胞比例无统计学差异（P＞0.05）,10～100 μmol／L的早、晚期凋亡率、G0／G1期细胞比例及PTEN和caspase-9蛋白水平均升高,S期、G2／M期细胞比例及Akt水平均降低,以上差异有统计学意义（P＜0.05）,且10～100 μmol／L范围内各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 Melittin可对NSCLC细胞有毒性作用,但对正常肺上皮细胞无影响,且可诱导A549细胞凋亡及细胞周期阻滞并抑制PI3K／Akt信号通路的激活。     

黄连素对肺腺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响

目的:研究黄连素(BBR)对A549细胞增殖、迁移和侵袭的影响,初步探讨BBR抑制A549细胞转移的机制。方法:用不同浓度的BBR作用于A549细胞,MTT法测定A549细胞增殖水平,流式细胞仪检测A549细胞的凋亡,Transwell实验测定A549细胞的迁移和侵袭能力,Westernblot测定A549细胞中与EMT相关的蛋白E-cadherin、Vimentin、Slug、Snail的表达。结果:BBR以浓度及时间依赖的方式抑制A549细胞的增殖;流式细胞仪检测发现BBR作用于A549细胞后凋亡率呈剂量依赖性增加;Westernblot显示BBR作用A549细胞后,E-cadherin表达升高,Vimentin、Slug、Snail表达降低,Transwell实验显示BBR作用于A549细胞后,能够抑制其迁移和侵袭。结论:BBR能抑制A549细胞增殖,诱导其凋亡,通过促进E-cadherin表达和抑制Vimentin、Slug、Snail的表达来抑制EMT的发生,从而抑制了A549细胞的迁移和侵袭。     

Stellettin B对非小细胞肺癌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨Stellettin B 对非小细胞肺癌细胞增殖和凋亡的影响及可能的作用机制。方法采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法检测不同浓度（01、1、10、100μmol／L）Stellettin B处理A549细胞和NCI-H1299细胞24、48、72和92h的增殖抑制率;采用Hoechst染色检测处理A549细胞24、48h后的凋亡指数;流式细胞术Annexin-FITC／PI双染法和PI染色法分别检测处理A549细胞48h后的凋亡率和细胞周期分布情况;采用Western blotting检测处理48h后A549细胞周期相关蛋白（Cyclin A、CDK2及p21CIP1）的表达水平。结果 不同浓度Stellettin B可显著增强对A549细胞的增殖抑制作用,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）。不同浓度Stellettin B处理24、48h后,A549细胞的凋亡指数、凋亡率均升高且呈剂量依赖性（P＜0.05）。随着Stellettin B浓度的增加,G0／G1期细胞比例及p21CIP1蛋白的表达水平逐渐升高,S和G2／M期细胞比例及Cyclin A和CDK2蛋白的表达水平逐渐降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 Stellettin B 可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,可能与其对细胞周期相关蛋白表达的调控有关。     

蛋白激酶D抑制剂SD-208对非小细胞肺癌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨蛋白激酶D抑制剂SD-208对非小细胞肺癌细胞增殖、凋亡及细胞周期的影响。方法 采用5、10、20、30 μmol／L SD-208处理非小细胞肺癌细胞A549（设不加SD-208仅添加完全培养基组为对照组）,分别在24、48、72 h 3个不同刺激时间点应用四甲基偶氮唑盐比色（MTT）法检测A549细胞的吸光值并计算增殖抑制率;膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）和碘化丙啶（PI）双染色法结合流式细胞术检测不同浓度SD-208处理A549细胞24、48 h后的细胞凋亡情况,PI染色法流式细胞仪检测分析不同浓度SD-208处理A549细胞48 h后细胞周期时相分布情况;Western blotting检测不同浓度SD-208处理48 h后的细胞周期蛋白A（Cyclin A）、Cyclin D1、Cyclin E、细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）和p16蛋白的表达水平。结果 SD-208 可抑制A549细胞的增殖,且呈剂量和时间依赖性（P＜0.05）;SD-208处理后A549细胞的凋亡率及G0／G1期细胞比例均高于对照组,而S、G2／M期细胞比例均低于对照组,各浓度间的差异均有统计学意义（P＜0.05）;与对照组比较,SD-208处理后的Cyclin D1和CDK4蛋白水平降低,p16蛋白水平升高,差异均有统计学意义（P＜0.05）。SD-208处理对A549细胞Cyclin A和Cyclin E蛋白水平无影响,与对照组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。结论 SD-208可抑制A549细胞增殖并诱导细胞凋亡及G0／G1期阻滞,其机制可能与其影响细胞周期及相关调控蛋白水平有关。     

毒黄素对非小细胞肺癌A549细胞株作用的实验研究

目的 研究毒黄素不同浓度和不同作用时间对非小细胞肺癌A549细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 分别取0.5、0.375、0.25和0.125 μmol／L毒黄素作用于A549细胞（实验组）,以不加毒黄素为对照组,分别培养24 h和48 h。采用CCK-8试剂盒、Annexin V-FITC／PI凋亡试剂盒检测A549细胞增殖抑制率和凋亡率。划痕实验对比0.125 μmol／L毒黄素组和对照组（0 μmol／L毒黄素）在12、24和48 h细胞迁移率。结果 0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组24 h细胞增殖抑制率分别为（93.51±3.69）％、（40.38±3.08）％、（23.54±2.58）％和（13.07±2.37）％,48 h为（90.53±3.58）％、（53.72±3.02）％、（34.44±3.10）％和（24.78±2.43）％。0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组24 h细胞凋亡率分别为（78.68±2.22）％、（43.66±2.53）％、（20.81±2.59）％和（6.25±0.96）％,高于对照组的（1.57±0.52）％;0.5、0.375、0.25和0.125 μmol/L毒黄素组48 h细胞凋亡率分别为（88.66±3.16）％、（59.86±2.81）％、（27.89±3.48）％和（9.91±1.33）％,高于对照组的（1.59±0.55）％。0.125 μmol／L毒黄素组12、24和48 h细胞迁移率分别为7％、11％和16％,低于对照组相应的14％、26％和39％。结论 毒黄素对A549细胞有明显增殖抑制和促凋亡作用,并呈时间和剂量依赖性,且可抑制A549细胞迁移活性。     

康莱特注射液对吉非替尼诱导人肺腺癌A549细胞株凋亡影响的实验研究

目的 探讨康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株增殖和凋亡的影响。 方法 应用MTT法计算康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的半数抑制浓度（IC50）,检测康莱特注射液（5、10、20、40、80、100、160 μl／ml）、吉非替尼（0.1、0.5、1.0、5、10、20、40 μmol／L）以及康莱特注射液（80 μl／ml）联合吉非替尼（0.1、0.5、1、5、10、20、40 μmol／L）作用于人肺腺癌A549细胞株24、48、72 h的增殖抑制率;流式细胞仪Annexin V/PI 双标法检测康莱特注射液、吉非替尼及两药联合作用于A549细胞48 h后的凋亡率;免疫细胞化学法检测各药物处理组作用于A549细胞48 h后FAS、AKT2蛋白表达;RT-PCR技术检测各组FAS mRNA、AKT2 mRNA的表达水平。均设未加药的A549细胞为空白对照组。结果 康莱特注射液作用于人肺腺癌A549细胞株48 h的IC50为80 μl／ml。康莱特注射液联合吉非替尼作用于A549细胞的增殖抑制率高于两单药组和空白对照组,且呈时间和浓度依赖性（P＜0.05）。两者的联合作用在一定浓度范围内呈现出协同的抗瘤效果。流式细胞术检测显示,两药联合组的细胞凋亡率显著高于两单药组和空白对照组（P＜0.05）。免疫细胞化学和RT-PCR检测显示,与空白对照组比较,康莱特组和两药联合组FAS蛋白和mRNA的表达水平均升高（P＜0.05）,AKT2蛋白和mRNA表达水平均下调（P＜0.05）。结论 康莱特注射液联合吉非替尼对人肺腺癌A549细胞株有明显的促凋亡作用,康莱特注射液可能增加人肺腺癌A549细胞对于吉非替尼的敏感性。     

过表达TRAIL的间充质干细胞对肺癌A549细胞系生物学功能的影响

目的:探究过表达肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）的小鼠骨髓间充质干细胞（BMSCs）对肺癌A549细胞系生物学功能的影响。方法:通过慢病毒载体携带TRAIL感染小鼠BMSCs,构建过表达TRAIL的小鼠BMSCs,RT-PCR法检测BMSCs中TRAIL基因表达。根据是否感染TRAIL基因,将细胞分为BMSCs组、NC-BMSCs组和TRAIL-BMSCs组,收集各组BMSCs的培养基,作为A549细胞条件培养基。根据条件培养基的不同,将A549细胞分为A549组、A549-BMSCs组、A549-NC-BMSCs组和A549-TRAIL-BMSCs组。MTT、Transwell和平板克隆形成实验检测各组A549细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆能力,Western blot法检测细胞中E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达情况。结果:RT-PCR法检测结果显示,与BMSCs组比较,TRAIL-BMSCs组细胞中TRAIL mRNA的表达水平显著升高,过表达TRAIL小鼠BMSCs构建成功。MTT、Transwell和平板克隆形成实验检测结果显示,与A549组比较,A549-BMSCs组和A549-NC-BMSCs组细胞的增殖、迁移、侵袭和克隆能力显著增加,而A549-TRAIL-BMSCs组细胞在不同时间点的增殖能力显著降低,发生侵袭、迁移的细胞数量和克隆形成数量均显著降低;Western blot法检测结果显示,A549组、A549-BMSCs组、A549-NC-BMSCs组和A549-TRAIL-BMSCs组A549细胞中E-cadherin的表达水平分别为（0.45±0.03）、（0.23±0.03）、（0.25±0.02）、（0.95±0.09）;N-cadherin的表达水平分别为（0.57±0.07）、（0.97±0.08）、（0.99±0.12）、（0.19±0.03）;Vimentin的表达水平分别为（0.52±0.05）、（1.02±0.09）、（0.99±0.11）、（0.20±0.02）,与A549组比较,A549-BMSCs组和A549-NC-BMSCs组细胞中E-cadherin的表达水平显著降低,N-cadherin和Vimentin的表达水平显著增加,A549-TRAIL-BMSCs组细胞中E-cadherin的表达水平显著增加,N-cadherin和Vimentin的表达水平显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:BMSCs可促进A549细胞的增殖、迁移、侵袭、克隆和EMT转化,BMSCs过表达TRAIL基因则对A549细胞的生物学功能具有明显抑制作用。     

上皮间质转化在非小细胞肺癌EGFR-TKIs获得性耐药中的作用研究

目的 探讨上皮间质转化（EMT）在非小细胞肺癌（NSCLC）对表皮生长因子受体 酪氨酸激酶抑制剂（EGFR TKIs）获得性耐药中的作用及可能机制。方法 选用EGFR基因19号外显子突变型吉非替尼耐药细胞PC9／AB和EGFR野生型厄洛替尼耐药细胞H460/ER,通过基因转染获得E-cadherin稳定过表达细胞PC9／AB-CDH1和H460ER-CDH1。四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞的增殖情况,划痕实验及Transwell侵袭实验检测细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和蛋白印迹法检测EMT相关分子、EGFR信号通路分子的mRNA和蛋白表达水平。结果 PC9／AB和H460/ER细胞未发生T790M突变和c-Met基因扩增,但发生了EMT,表现为E-cadherin表达降低和Vimentin表达增加。通过基因转染提高E-cadherin表达水平能逆转PC9／AB和H460／ER耐药细胞的EMT,使其对EGFR TKIs的敏感性增加, PC9／AB-CDH1细胞较PC9／AB对吉非替尼的敏感性增加约11.4倍,其半数抑制浓度（IC50）分别为（0.70±0.22） μmol／L和（8.68±0.44）μmol／L,差异有统计学意义（P＜0.05）; H460／ER-CDH1较H460／ER对厄洛替尼的敏感性增加约6.1倍,其IC50分别为（7.51±1.12）μmol／L和（53.72±12.95）μmol／L,差异有统计学意义（P＜0.05）。同时,逆转EMT后,细胞的EGFR、p-EGFR的mRNA和蛋白表达量均增加,差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 阻断耐药细胞的EMT可逆转NSCLC对EGFR-TKIs的获得性耐药,EMT在NSCLC对EGFR-TKIs的获得性耐药中起重要作用,其机制可能与EGFR磷酸化水平降低有关。     

LPS诱导宫颈癌上皮间质转化的作用

目的:探讨LPS在宫颈癌细胞株Hela细胞增殖和上皮间质转化中的作用。方法:体外培养Hela细胞,以LPS(10μg/ml)诱导后,利用MTT法检测细胞的增殖情况。qPCR检测上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin的RNA水平上的表达。Western blot检测上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物N-cadherin、Vimentin的蛋白水平上的表达。Transwell检测LPS对Hela细胞迁移能力的影响。结果:在LPS诱导后能够明显的促进Hela细胞的增殖。E-cadherin在RNA和蛋白水平上都明显下降,N-cadherin、Vimentin在RNA和蛋白水平上都明显升高;LPS诱导后,明显促进Hela细胞的迁移能力。结论:LPS能够诱导宫颈癌细胞株Hela细胞的增殖和上皮间质转化。     

丙泊酚抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化及其机制探讨

目的:探究丙泊酚对白细胞介素-6（IL-6）诱导的A549肺癌细胞上皮间质转化（EMT）的作用及机制。方法:将A549细胞随机分成四组:对照组、IL-6组（50 ng/ml重组IL-6蛋白）、IL-6+丙泊酚低剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和5 μmol/L丙泊酚）、IL-6+丙泊酚高剂量组（50 ng/ml重组IL-6蛋白和10 μmol/L丙泊酚）。MTT法检测细胞活力，Transwell检测细胞迁移情况，Real-time PCR方法检测EMT相关基因（E-cadherin、Vimentin和Snail1）mRNA的表达水平，Western blot检测EMT相关蛋白及JAK2和STAT3的磷酸化表达水平。使用0.5 μmol/L STAT3激活剂colivelin处理细胞，检测其对丙泊酚调节的IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响。结果:与对照组相比，IL-6组中细胞的活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均增加（P均<0.05）；与IL-6组相比，IL-6+丙泊酚组中细胞活力、迁移、EMT和JAK2/STAT3的活化均降低（P均<0.05），这些变化均具有剂量依赖性。STAT3激活剂能够减弱丙泊酚对IL-6诱导的A549细胞活力、迁移和EMT的影响（P均<0.05）。结论:丙泊酚能够抑制IL-6诱导的A549肺癌细胞EMT进程，这种作用是通过抑制JAK2/STAT3的活化发挥作用的。