Effect of hydrophilic modification of sandblasted,large-grit,acid-etchedtianium surface on adhesion and spreading behavioR of osteoblasts

目的 探讨亲水性处理喷砂大颗粒酸蚀(modSLA)钛表面对牙槽骨成骨细胞黏附及铺展行为的影响.方法 将人牙槽骨成骨细胞分别接种于喷砂大颗粒酸蚀(SLA)和亲水性modSLA的钛片表面.在接种后1、3、6、12、24 h,利用细胞计数法测定两种钛片表面的细胞黏附率,使用共聚焦激光扫描显微镜观测细胞骨架铺展情况并作荧光积分强度(IOD)定量检测,使用Image-Pro Plus 6.0软件测定各时间点细胞形状因子.结果 细胞接种后1、3 h,modSLA组表面细胞黏附率高于SLA组(P<0.05),而6、12、24 h后组间比较差异无统计学意义.接种1 h后,两组细胞形态呈圆形;接种3、6 h后两组细胞逐渐伸展,并形成丝状伪足与材料表面相连.细胞接种12 h后,与SLA相比,modSLA组表面细胞可以观察到较清晰的肌动蛋白结构、细胞铺展更充分.细胞接种3、6、12、24 h后 modSLA组IOD值显著高于 SLA组(P<0.05).随时间延长两种材料表面细胞的IOD值均显著增加(P<0.05).3、6、12 h mod SLA组细胞形状因子均值显著小于 SLA组,差异有统计学意义(P<0.05).随时间延长两种材料表面细胞的形状因子均显著减小,差异有统计学意义(P<0.05).结论 亲水性化学处理能显著促进人牙槽成骨细胞在SLA钛表面的黏附、铺展.     

纯钛表面不同处理方法对成纤维细胞生长影响的研究

将钛片随机分成光滑组、双重酸蚀喷砂组、氢氟酸酸蚀喷砂组、微弧氧化组,分别进行不同表面处理。将小鼠成纤维细胞接种于不同钛片表面,MTT 法检测成纤维细胞在不同钛片表面的黏附和增殖情况,并在培养24 h 后利用扫描电子显微镜观察成纤维细胞在试件表面的铺展形态。结果显示细胞黏附情况存在差异（P <0.05）,光滑组<氢氟酸酸蚀喷砂组<双重酸蚀喷砂组<微弧氧化组;细胞增殖测试中,微弧氧化组在各时间点都显著高于另外3组。相较其他3种表面处理方法,成纤维细胞能够在经微弧氧化处理的试件表面更好地黏附、增殖。     

双酸酸蚀钛表面复合含钙纳米薄片膜层对成骨细胞行为的影响

目的：制备含钙纳米薄片膜层修饰的双酸酸蚀钛表面并评价其对成骨细胞行为的影响。方法：通过双酸酸蚀和氢氧化钙/双氧水混合溶液水热处理,制备2种含钙纳米薄片膜层修饰的双酸酸蚀钛表面（1 h、6 h处理组）。以大颗粒喷砂酸蚀（SLA）钛表面为对照组,2种含钙纳米薄片膜层修饰的双酸酸蚀钛表面为实验组,观察分析不同钛表面的微形貌和表面元素组成;将MC3T3-E1成骨细胞接种于各组试件表面,研究不同钛表面对成骨细胞生物学行为的影响。结果：在双酸酸蚀钛表面制备形成2种形貌均一的纳米薄片膜层结构,均含有微量钙元素。相比于SLA钛表面,2种新型钛表面均有利于MC3T3-E1成骨细胞的黏附和增殖,显著增强成骨细胞的碱性磷酸酶活性,并上调成骨相关基因的表达。其中,1 h处理组性能更优。结论：双酸酸蚀钛表面复合含钙纳米薄片膜层能有效促进成骨细胞的黏附、增殖和分化。     

钛表面喷砂－微弧氧化对骨髓间充质干细胞黏附和增殖的影响

目的：比较喷砂酸蚀法（SLA）、微弧氧化法（MAO）和喷砂－微弧氧化法（SL－MAO）处理钛植入体表面对骨髓间充质干细胞（BMMSCs）黏附和增殖能力的影响。方法采用SLA、MAO和SL－MAO处理钛表面（分别为SLA组、MAO组、SL－MAO组）,通过扫描电子显微镜（SEM）分析表面结构特征。分离培养SD大鼠BMMSCs,采用SEM观察细胞黏附情况,噻唑蓝法定量分析细胞增殖情况。结果 SLA组钛表面形成微米－亚微米复合多孔,但存在喷砂颗粒残留。 MAO组钛表面形成亚微米级微孔,但无微米级大孔结构。 SL－MAO组不仅能形成微米－亚微米复合多孔形貌,而且喷砂颗粒残留现象减小。 BMMSCs细胞黏附和MTT法增殖试验显示：第1～9天期间,SL－MAO组细胞数量与MAO组差异无统计学意义（P＞0.05）,MAO组和SL－MAO组细胞早期黏附和增殖速率均显著高于SLA组（ P＜0.05）。结论 SL－MAO能在钛植入体表面形成良好的微米－亚微米复合多孔形貌,其复合多级孔结构优于单纯使用微弧氧化处理,在膜层的完整性方面优于传统的喷砂酸蚀处理。在BMMSCs细胞早期黏附和促进细胞增殖方面,SL－MAO相比SLA具有显著优势,与MAO差异不显著。     

钛表面载钙磷/银复合膜层的特征及对成骨细胞黏附的影响

目的通过微弧氧化法对钛表面进行改性,在钛表面制备含钙磷/银抗菌膜层,探讨改性后钛表面的理化性能及对人成骨细胞样成骨细胞株MG63黏附形成的影响。方法将钛片分3组,M组为纯钛机械加工组,MAO组为钛表面微弧氧化膜层含钙磷元素组,MAO-Ag组为钛表面微弧氧化膜层载钙磷/银组。应用微弧氧化电源装置对MAO、MAO-Ag组钛片进行表面改性,通过SEM-EDS对钛表面形成的氧化膜进行表面形貌及元素分析,表面接触角测试仪分析其亲水性,分析其粗糙度及表面轮廓。将人成骨细胞株MG63接种于3组钛片表面,培养2、4、8 h时利用Hoechst 33342染色,显微镜下拍照、计数,计算钛片表面成骨细胞的黏附率。结果 SEM显示微弧氧化处理后,MAO、MAO-Ag组纯钛表面生成微孔结构的氧化膜,直径1～5μm。MAO组钛片表面氧化膜层中含Ti、O、Ca、P 4种元素,MAO-Ag组中含Ti、O、Ca、P、Ag 5种元素,各种元素在钛表面均匀分布;MAO、MAO-Ag组微弧氧化试样表面接触角明显大于M组(P<0.05),粗糙度明显大于M组(P<0.05),MAO、MAO-Ag组之间差异无统计学意义。MG63培养2、4 h,MAO、MAO-Ag组表面黏附的细胞明显多于M组表面,差异有统计学意义(P<0.05),MAO、MAO-Ag组之间差异无统计学意义。培养8 h后,3组之间差异无统计学意义。结论通过微弧氧化法可在钛表面形成含钙磷/银的氧化膜层,该层可促进成骨细胞早期在其表面黏附,提示其具有良好的生物相容性,可以用于进一步的动物及临床试验研究。     

比较3种不同储存条件对纯钛SLA表面生物学性能的影响

目的:比较3种不同储存条件对纯钛SLA表面生物学性能的影响。方法:采用喷砂加酸蚀的方法在商用二级纯钛钛片上制备SLA表面,并将其置于3种不同环境中储存不同的时间,分组如下:Ⅰ组钛片为常温常压保存;Ⅱ组钛片为真空保存;Ⅲ组钛片NaCl溶液中保存。分别对不同组别钛片的理化性质、生物活性进行比较。结果:三组之中,Ⅲ组中的纯钛SLA表面表面自由能、蛋白质吸附率、MG63成骨细胞的黏附、增殖、ALP活性及表面矿化效果均为最佳,Ⅰ组中的纯钛SLA表面最容易受到C元素的污染,理化性能及生物活性均明显下降。结论:不同储存条件对纯钛SLA表面的理化性质、生物活性具有明显的影响。将处理后的钛片置于NaCl溶液中有利于降低C污染,并促进钛片表面的蛋白质吸附、细胞黏附、增殖与分化。     

喷砂酸蚀对钛网表面成骨细胞影响的实验研究

目的研究喷砂酸蚀(SLA)后医用钛网表面形貌及对成骨细胞的影响,为钛网表面改性处理、重建上颌骨局部缺损提供理论依据。方法对医用钛网表面进行三氧化铝(Al2O3)喷砂和盐酸、硫酸混合物酸蚀表面改性处理,通过扫描电镜观察样品表面形貌,建立实验兔颌面外周围骨缺损动物模型,分别植入喷砂酸蚀处理前后的钛网,观察术后6个月时钛网诱导成骨形成的效果。结果喷砂酸蚀处理后的钛网表面粗糙,植入实验兔体内6个月后,表面形成较为完整的骨组织层。结论喷砂酸蚀可改变钛网表面形貌,使其形成微米级多孔粗糙结构,有利于成骨细胞形成。     

不同方法制备钛种植体对成骨细胞黏附影响的体外研究

目的研究不同方法制备的钛种植体对体外培养成骨细胞黏附的影响。方法采用目前临床应用较多的喷砂和新的粉末注射成形(metal injection molding,MIM)两种方法制备多孔钛种植体。将种植体分为Sm组(光滑组)、Sa组(喷砂组)、M1组(MIM法制备孔隙度为40%)、M2组(MIM法制备孔隙度为60%)4组。将4组种植体与人成骨肉瘤成骨细胞MG63联合培养,从黏附率和黏附形态两个方面进行观察。结果联合培养4 d及8 d后,Sa、M1、M2组黏附率均高于Sm组,差异有统计学意义(P<0.05),Sa组与M1组之间差异不明显(P>0.05),M2组与Sa、M1组之间差异均有统计学意义;联合培养8 d后,M2组MG63黏附形态优于其他组,能够伸展完全,伪足较多,附着牢固。结论高孔隙度的MIM方法制备的多孔钛种植体在成骨细胞的黏附率、黏附形态及生长方向各方面均优于喷砂,从而为研究新的多孔钛种植体制备方法提供理论依据。     

钛表面塑性变形纳米化对MC3T3细胞黏附的影响

 目的 研究纯钛表面塑性变形纳米化后对小鼠成骨细胞株MC3T3细胞黏附等生物学行为的影响。方法 应用塑性变形技术使纯钛表面纳米化,钛板大小10 mm x 10 mm x 1 mm。未处理纯钛为对照组（n=6）,塑性变形纳米化钛板为实验组（n=6）。扫描电镜观察MC3T3细胞在材料表面的黏附形态,荧光显微镜检测细胞黏附的数目,应用激光共聚焦扫描显微镜观察细胞骨架肌动蛋白的特点。结果 扫描电镜下观察表明,MC3T3细胞是以多个大小不等的胞突黏附于纳米化钛板表面,细胞表现良好的伸展形态;荧光显微镜显示,细胞在纳米化钛板表面的黏附能力较表面未处理钛板明显提高（P＜0.05）;激光共聚焦扫描显微镜下观察发现,纳米化钛板表面结构能促进细胞骨架肌动蛋白纤维的充分铺展。结论 纯钛表面塑性变形纳米化后,能明显促进MC3T3细胞在其表面的黏附和铺展,改善了纯钛的生物相容性。     

锌离子注入沉积钛表面改性对成骨细胞黏着斑形成的影响

探讨锌离子注入沉积纯钛进行表面改性后,钛表面改性层化学组成的变化及其对人成骨细胞样细胞系MG-63黏着斑形成的影响。方法 应用全方位离子注入与沉积技术对纯钛试件表面进行锌元素注入沉积,通过X光电子能谱(XPS)分析研究其表面化学组成和各元素的化学结合价态。将人MG-63细胞接种于锌离子注入沉积组和纯钛组钛试件表面,用激光共聚焦显微镜观察两组钛试件表面对人MG-63细胞黏着斑形成的影响。结果 XPS全谱图显示锌离子注入沉积后试件由钛、氧、锌和碳元素组成,拟合结果显示钛表面改性层的元素以二氧化钛和氧化锌的形式存在。MG-63细胞培养6 h后,锌离子注入沉积组钛试件表面的黏着斑形成数量比纯钛组钛试件表面多,二者间差异具有统计学意义(P<0．05)。 结论 锌离子注入沉积可成功地将锌元素引入纯钛表面形成含有二氧化钛和氧化锌的表面改性层,该层可促进成骨细胞黏附初期黏着斑的形成,提示其具有良好的生物相容性。     

不同表面处理的纯钛对血小板黏附特性的影响

目的:观察钛-血小板相互作用时不同表面处理的纯钛对血小板黏附特性的影响。方法:将商业纯钛片制备成4种不同表面形貌的样本,即抛光表面、酸蚀表面、大颗粒喷砂加酸蚀表面、碱热处理表面,样本经扫描电镜观察及静态接触角分析后,在其表面滴加新鲜制备的富血小板血浆,30 min后进行扫描电镜观察。结果:大颗粒喷砂加酸蚀表面黏附的血小板最多,且形变明显;酸蚀表面血小板的黏附量也较多,但形变较少,以球形居多;抛光表面和碱热处理表面黏附的血小板很少,局部甚至缺无。结论:纯钛表面复杂的微形貌有利于血小板的黏附,钛表面的润湿性对血小板的黏附特性也有影响,亲水性表面不利于血小板的黏附。     

牙周病患牙根面的不同处理对牙周膜成纤维细胞生长的影响

目的:研究牙周病患牙累及的牙根面经EDTA脱矿和富血小板血浆(PRP)单独及联合处理后对人牙周膜成纤维细胞附着、增殖的影响。方法:以因牙周病不能保留而拔除的患牙制备的牙根片为对照组,PRP和EDTA脱矿单独及联合处理患牙根片为实验组,用细胞计数法及四甲基偶氮唑盐(MTT)比色实验分析人牙周膜成纤维细胞在病变根面上的附着和增殖。结果:未处理组的根片上有少量的细胞附着;根片经PRP或EDTA脱矿单独处理能明显增加细胞的附着(P<0.05);二者联合处理促附着效果明显增强(P<0.01)。未处理组根片上生长的细胞随时间延长数量反而下降;经PRP或EDTA单独处理的根片上的细胞有少量的增殖(P>0.05);二者联合处理细胞增殖明显(P<0.05)。结论:EDTA根面脱矿和PRP能有效促进人牙周膜成纤维细胞在牙周病患牙根面上的附着和增殖。     

褪黑素对人胃癌细胞SGC-7901黏附和迁移的影响

目的 :研究褪黑素对人胃癌细胞SGC-7901黏附和迁移能力的影响及探索可能的分子机制。方法 :用不同浓度的褪黑素孵育人胃癌细胞SGC-7901 24 h,通过免疫印迹方法检测F-actin和G-actin蛋白表达水平,通过免疫荧光法检测细胞骨架结构的改变,通过细胞黏附实验观察胃癌细胞对血管内皮细胞黏附能力的变化,通过划痕实验检测褪黑素对细胞迁移能力的影响。结果:褪黑素使人胃癌细胞SGC-7901 F-actin量明显降低,同时细胞骨架结构发生重组,应力纤维出现断裂;褪黑素可抑制胃癌细胞的迁移及对血管内皮细胞的黏附能力。结论:褪黑素可能通过破坏细胞内应力纤维结构的稳定,最终导致了胃癌细胞的黏附和迁移能力的降低。     

Effect of RGD-modified silk material on the adhesion and proliferation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells

In order to investigate the effect ofArg-Gly-Asp （RGD） peptide-modified silk biomaterial on the adhesion and proliferation of bone marrow-derived mesenchymal stem cells （MSCs）, MSCs of third generation were seeded onto the surface of RGD-decorated silk （silk-RGD group）, silk alone （silk group） or tissue culture plate （TCP group）. After incubation for 4 or 12 h, MSCs were examined quantitatively by using precipitation method for cell attachment. The cell proliferation, which was defined as cell density, was compared among the three groups after culture for 1, 2, 3, and 4 days. Cell skeleton, which was labeled fluorescently, was observed under laser confocal microscope after 24 h of culture. The results showed that cell adhesion rate in silk-RGD group was higher than in silk group （P〈0.05）, but similar to that in TCP group after incubation for 4 or 12 h （P〉0.05）. There were no sig- nificant differences in the cell proliferation among the three groups at different time points （P〉0.05 for all）. Laser confocal microscopy revealed that in silk-RGD group, MSCs, strongly fluorescently stained, spread fully, with stress fibers clearly seen, while in silk group, actin filaments were sparsely aligned and less stress fibers were found. It was concluded that RGD peptide could improve the ad- hesion of MSCs to the silk scaffold, but had no impact on the proliferation of the cells.     

大黄素对急性角膜炎症反应中ICAM-1表达的影响及意义

 目的 观察大黄素对急性角膜炎大鼠角膜组织中细胞间粘附分子-1（ICAM-1）表达的影响及意义。方法 建立角膜炎大鼠模型,模型制备前30 min,大鼠结膜下分别注射大黄素（治疗组）及等容二甲基亚砜（炎症组）。按脂多糖(LPS)刺激后不同时点,各组又分为1、3、6、12、24?h组,每亚组8只鼠。于各时点观察大鼠的全身情况,裂隙灯显微镜观察大鼠结膜、角膜及房水等眼部表现;抽取大鼠房水涂片,HE染色观察房水细胞的变化;角膜组织切片,HE染色观察各组大鼠角膜的组织形态学改变;逆转录 聚合酶链反应（RT-PCR）检测大鼠角膜组织中ICAM-1 mRNA的表达。 结果 球结膜下预防性注射大黄素,可明显改善角膜炎大鼠畏光、流泪等眼部表现,减轻角膜混浊、组织水肿等炎症反应。大黄素预处理可明显减轻大鼠角组织及房水中炎症细胞浸润的程度,改善角膜组织水肿及角膜基质层胶原纤维排列的紊乱程度。LPS刺激可引起炎症组大鼠角膜组织中ICAM-1mRNA表达增加,该作用可被大黄素部分抑制,治疗组各时点ICAM-1 mRNA的表达较炎症组均明显降低（P均＜0.01）。  结论 大黄素可减少急性角膜炎症反应中ICAM-1 mRNA的表达,对急性角膜炎大鼠角膜损伤起保护作用。     

双层胶原支架与人牙周膜细胞的体外生物相容性

【目的】 研究双层胶原支架与人牙周膜细胞的体外生物相容性?【方法】 组织块培养法培养原代人牙周膜细胞?MTT法测胶原支架不同浓度浸提液的细胞毒性?将人牙周膜细胞与支架材料三维培养,通过扫描电镜?组织切片观察其复合情况,并检测三维培养后细胞碱性磷酸酶(ALP)?羟脯氨酸(HYP)的分泌情况? 【结果】 不同浓度材料浸提液毒性评级为0 ~ 1级?细胞与支架复合培养后,细胞在支架上黏附?增殖良好,支架材料内部细胞分布均匀,且致密层可起屏障膜作用,阻挡细胞进入支架内部?细胞与胶原支架复合培养24 h后,细胞的ALP活性与对照组无明显差异(P > 0.05),复合培养48?72 h后,细胞的ALP活性高于对照组(P < 0.05)?复合培养24?48?72 h后,细胞的HYP活性均高于对照组(P < 0.05)?【结论】 双层胶原支架具有良好的生物相容性,可进一步应用于牙周组织工程的研究?     

聚二乙醇酸与Degrapol对肌成纤维细胞粘附、生长的影响

目的　寻找一种更加理想的人工降解材料 ,为改进人工降解材料提供理论依据。方法　比较聚二乙醇酸( PGA)与 Degrapol对肌成纤维细胞粘附、生长、繁殖及产生胶原的影响。结果　 1细胞种植 2周和 6周 ,PGA组的细胞计数明显多于 Degrapol组 ( P<0 .0 1) ;2 6周 PGA组胶原含量明显高于 Degrapol组 ( P<0 .0 1) ;3 2周肌成纤维细胞粘附于 PGA上 ,分布广泛 ;6周后 PGA降解 ,胶原含量丰富。而 Degrapol则部分降解 ,胶原含量较少。结论　Degrapol作为一种新型人工降解材料 ,若用于构建组织工程心脏瓣膜 ,在细胞亲和力等方面尚有待进一步改进     

Expression of Cytokeratin,Actin and Endocrine Hormones in Human Hatched Blastocyst Implantation Model in vitro

Objective To investigate the expression of cytokeratin,actin and hCG,E2 and P of human hacthed blastocysts in the model.Methods Human hatched blastocysts were co-cultured with human endometrial decidualization stromal cell monolayer.The process of orientation,attachment,outgrowth and invasion in morphology were observed.Immunofluorescence staining for cytokeratin and actin,immunofluorescence measurement of hCG and radioimmunoassay measurement of E2 and P were performed.Results Blastocysts attached to stromal cell layer after 5h in co-culture.After 24h in co-culture,the trophoblast protruded from two opposite poles of the blastocyst and underwent outgrowth into the stromal cell monolayer,blastocyst became bigger and invaded finally into the stromal cells.After 48h in co-culture,cytokeratin staining was only visible in trophoblast but not stromal cells,actin staining was visible in both of trophoblast and stromal cells with distinct conformation and structure.Stromal cells had prominent linear actin filaments,aligned along the long axis of the cells.Cytokeratin staining in trophoblast cells was localized in short filaments arranged in a mesh.hCG,E2 and P levels in the supernate of stromal cell-blastocyst co-culture were higher than the supernate from blastocyst cultured only （P〈0.01）.Conclusion An implantation model for the reflection of the process of human blastocysts attachment,outgrowth and invasion into stromal cells has been established in vitro.Cytokeratin,actin and hCG,E2 and P take place corresponding changes in the human implantation blastocyst cells.     

增生性瘢痕成纤维细胞P物质表达的研究

目的研究P物质（substance P，SP）在人增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞的表达情况及其与正常皮肤之间的差异，探讨增生性瘢痕组织SP表达增高的原因。方法以酶消化法体外培养成人增生性瘢痕以及正常皮肤的成纤维细胞，将SP（终浓度为10^-7mol／L）加入培养液中刺激成纤维细胞，分别于刺激前和刺激后1、3、6、12、24h采用RT—PCR检测细胞内SP基因的表达情况，ELISA检测培养液中SP浓度。正常皮肤对照组及瘢痕对照组除不应用SP外，余处理均相同。结果未受SP刺激时，人增生性瘢痕及正常皮肤体外培养的成纤维细胞均能分泌一定浓度的SP，两者之间差异有统计学意义（P〈0．01）。SP刺激后，正常皮肤体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达均在1～3h内达到高峰，随后迅速下降，24h后仍高于其正常水平；而增生性瘢痕体外培养的成纤维细胞SP基因和蛋白表达在3～6h内达到高峰，随后缓慢下降，24h后仍高于其正常水平。两种成纤维细胞SP的分泌差异有统计学意义（P〈0．05）。结论外源性SP可诱使成纤维细胞内SP的分泌增加，而增生性瘢痕与正常皮肤成纤维细胞SP的分泌情况有明显差异。