Combined toxicity of nitrobenzene and aniline in primary culture of rat hepatocytes

目的:从氧化损伤途径研究硝基苯和苯胺对Wistar大鼠原代肝细胞的联合毒作用,为预防环境化合物对人体健康损害提供理论依据.方法:分别用不同浓度(1.25、2.5、5.0、10.0和20.0 mmol/L)的硝基苯、苯胺及其混合物处理大鼠原代肝细胞24 h后,采用MTT法测定各组细胞的存活率,并进一步测定各组细胞或上清液中丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-px)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)和超氧化物歧化酶(SOD)的变化.结果:与阴性对照组相比,大鼠原代肝细胞经硝基苯、苯胺及其混合物处理24 h后,其细胞存活率均随所给化合物浓度的增加而降低(P＜0.05),且硝基苯-苯胺联合染毒组的细胞存活率明显低于单一化合物的细胞存活率(P＜0.05).随着硝基苯、苯胺和两者混合物浓度的增高,MDA、ALT含量呈现上升趋势(P＜0.05);且硝基苯-苯胺联合染毒组细胞MDA、ALT含量均显著高于硝基苯和苯胺单独存在时(P＜0.05).与阴性对照组比较,硝基苯和苯胺及其混合物均可显著降低细胞SOD、GSH和GSH-px含量(P＜0.05),并呈现剂量反应关系(P＜0.05).与硝基苯和苯胺单独作用组相比,硝基苯-苯胺联合染毒组细胞SOD、GSH和GSH-px活力均显著降低(P＜0.05).结论:硝基苯和苯胺及其混合物可造成大鼠原代肝细胞氧化损伤,硝基苯与苯胺对肝细胞毒性作用可能存在着协同作用,其作用机制有待进一步研究.     

纳米银对人肺癌和肝癌细胞毒性的差异

目的:研究纳米银对人肺癌(A549)和人肝癌(HepG2)细胞系增殖和凋亡的影响,并探讨纳米银对两种细胞系毒效应的差异及其机制。方法:用20、40、80、160、320、640 μg/mL的纳米银分别染毒A549和HepG2细胞,染毒时长均为24和48 h,以细胞培养液为对照,采用MTT法检测各组细胞的存活率;谷胱甘肽(GSH)和超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒检测细胞内GSH含量和SOD活力。除上述各染毒组,两种细胞均另设置N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理后160 μg/mL纳米银染毒组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率。结果:与对照组比较,染毒24和48 h后, ≥40 μg/mL剂量组A549细胞和所有剂量组HepG2细胞存活率均降低(P<0.05或P<0.01);与相同染毒条件下的A549细胞比较,40~640 μg/mL剂量组HepG2细胞的存活率较高(P<0.05或P<0.01)。SOD活力和GSH含量检测发现,纳米银染毒A549细胞24 h后,40 μg/mL剂量组SOD活力与对照组比较显著降低(P<0.05),而GSH含量上升(P<0.05);染毒48 h后,SOD活力和GSH含量在40~160 μg/mL剂量组下降,其中80 μg/mL剂量组GSH含量与对照组间的差异显著(P<0.05)。纳米银染毒HepG2细胞24、48 h后,SOD活力和GSH含量都表现为上升,其中40、80 μg/mL组SOD活力和20 μg/mL组GSH含量与对照组间的差异显著(P<0.05)。细胞凋亡率检测发现,染毒24 h时,各剂量组A549细胞凋亡率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),而各剂量组HepG2细胞凋亡率均显著增加(P<0.05或P<0.01);染毒48 h时, ≥40 μg/mL剂量组A549细胞和160 μg/mL剂量组HepG2细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05或P<0.01)。使用NAC预处理细胞后,160 μg/mL剂量组两种细胞系凋亡率均显著下降(P<0.01)。结论:纳米银可以引起A549和HepG2细胞表现不同程度的增殖抑制和凋亡,而细胞内不同的SOD和GSH改变可能是纳米银引起两种细胞系不同毒作用的原因之一。     

邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯对MCF-7细胞DNA的氧化损伤

目的:研究邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(mono-2-ethylexyl phthalate,MEHP)对人乳腺癌MCF-7细胞DNA氧化损伤的作用。方法:分别用不同浓度的MEHP(6.25、12.5、25、50和100μmol/L)和二甲基亚砜(溶剂对照,0.1%)处理MCF-7细胞12和24 h后用MTT比色法检测细胞的存活率。再分别于染毒后1.5、3、6、12和24 h,测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2′-deoxyguanosine,8-OHdG)水平。结果:与对照组比较,MEHP染毒12 h,6.25和12.5μmol/L组细胞的存活率显著增加(P0.05)。MEHP染毒24 h,在较高浓度处理组(≥25μmol/L)的细胞存活率显著降低(P0.05);各处理组细胞的SOD活性有所增加,细胞MDA水平、GSH-Px活性以及8-OHdG生成量无显著变化(P0.05)。当MEHP染毒MCF-7细胞较短时间(1.5、3和6 h)时,各处理组MDA水平和8-OHdG生成量均显著升高(P0.05),而SOD和GSH-Px活性则显著性降低(P0.05)。结论:一定浓度MEHP作用在短时间内(1.5、3和6 h)可引起MCF-7细胞的氧化应激反应,并触发细胞DNA的氧化性损伤,具体调控机制有待深入研究。     

纳米二氧化钛经气管染毒对大鼠肝、肾的影响

背景与目的:探讨纳米二氧化钛(nano-TiO2,粒径50nm)经气管染毒对大鼠肝、肾的影响。材料与方法:选取24只SD大鼠,随机分为0.5、5.0、50.0mg/kgnano-TiO2组和对照组(0.15%氯化钠溶液)。经气管注入nano-TiO2(或NaCl溶液)染毒7d后处死,取股动脉血检测血常规及生化指标;计算肝、肾脏器系数;测定血浆、肝脏和肾脏的超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力和丙二醛(MDA)含量;并进行组织病理学检查。结果:血常规、血生化和脏器系数各项检测指标染毒组与对照组比较差异均无统计学意义(P>0.05)。5.0、50.0mg/kgnano-TiO2染毒组大鼠肾脏组织SOD活力与对照组相比明显降低(P<0.05),50.0mg/kgnano-TiO2染毒组大鼠血浆及肾脏组织GSH-PX活力与对照组相比明显降低(P<0.05),0.5、5.0mg/kgnano-TiO2染毒组大鼠肝脏组织MDA含量与对照组相比明显升高(P<0.05),而肝、肾组织未产生明显组织病理学改变。结论:经气管急性染毒后,nano-TiO2可引起肝、肾组织氧化应激作用,但未见肝肾功能及病理学损伤,其生物和毒理学意义有待进一步研究。     

乙酰甲胺磷对雌性大鼠氧化损伤及卵巢功能的影响

背景与目的： 研究乙酰甲胺磷对雌性大鼠氧化损伤及卵巢功能的影响。 材料与方法: 30只健康成年SD雌性大鼠,随机分为5组,每组6只。实验组设高(47.25 mg/kg)、中(23.63 mg/kg)、低(11.81 mg/kg)3个不同剂量乙酰甲胺磷染毒组、阴性对照组(蒸馏水)和阳性对照组(雌二醇,0.1 mg/kg)。染毒组和阴性对照组采用经口灌胃,阳性对照组采用腹腔注射染毒。检测大鼠动情周期、血清和卵巢组织中SOD和GST活性、GSH和MDA含量及卵巢组织形态等的改变。 结果: 与阴性对照组比较,乙酰甲胺磷高剂量染毒组大鼠动情周期延长,血清SOD活力升高,GSH含量降低,差异具有统计学意义(P<0.05)。中、高剂量染毒组大鼠血清MDA含量均高于阴性对照组,高剂量染毒组GST活力显著低于阴性对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。各染毒组卵巢组织匀浆中SOD活力均低于阴性对照组,各染毒组GST活力均高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。低剂量染毒组卵巢组织GSH含量低于阴性对照组,高剂量染毒组MDA含量显著高于阴性对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。高剂量染毒组大鼠卵巢组织的病理改变主要表现为始基卵泡和初级卵泡增多,而次级卵泡和成熟卵泡较少见,且闭锁卵泡增多。 结论： 乙酰甲胺磷对雌性大鼠具有一定的生殖毒性,在高剂量(47.25 mg/kg)染毒下,可引起动情周期的紊乱、卵巢组织的病理学改变,抑制卵巢的抗氧化酶活性,诱导脂质过氧化。     

Effects of mono-2-ethylexyl phthalate on oxidative DNA damage in MCF-7 cells

目的:研究邻苯二甲酸单(2-乙基)己酯(mono-2-ethylexyl phthalate,MEHP)对人乳腺癌MCF-7细-胞DNA氧化损伤的作用.方法:分别用不同浓度的MEHP (6.25、12.5、25、50和100μmol/L)和二甲基亚砜(溶剂对照,＜0.1％)处理MCF-7细胞12和24h后用MTT比色法检测细胞的存活率.再分别于染毒后1.5、3、6、1 2和24 h,测定丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和细胞8-羟基脱氧鸟苷(8-hydroxy-2’-deoxyguanosine,8-OHdG)水平.结果:与对照组比较,MEHP染毒12 h,6.25和12.5μmol/组细胞的存活率显著增加(P＜0.05).MEHP染毒24h,在较高浓度处理组(≥25μmol/L)的细胞存活率显著降低(P＜0.05);各处理组细胞的SOD活性有所增加,细胞MDA水平、GSH-Px活性以及8-OHdG生成量无显著变化(P＞0.05).当MEHP染毒MCF-7细胞较短时间(1.5、3和6 h)时,各处理组MDA水平和8-OHdG生成量均显著升高(P＜0.05),而SOD和GSH-Px活性则显著性降低(P＜0.05).结论:一定浓度MEHP作用在短时间内(1.5、3和6 h)可引起MCF-7细胞的氧化应激反应,并触发细胞DNA的氧化性损伤,具体调控机制有待深入研究.     

硒对镉暴露大鼠肝脏氧化损伤的保护作用及机制研究

目的:探讨硒预处理对镉暴露大鼠肝脏氧化损伤的保护作用及其机制。方法:采用灌胃法建立大鼠镉暴露肝损伤模型。观察硒预处理对大鼠肝脏镉暴露相关氧化损伤的抑制作用并研究相关机制。通过检测血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)活性评价大鼠肝功能;通过免疫印迹法检测Bcl-2和Bax蛋白含量并计算Bax/Bcl-2的比值来判定大鼠肝脏细胞凋亡情况;通过肝组织冰冻切片DHE探针检测肝组织活性氧(ROS)水平和试剂盒测定脂质过氧化产物丙二醛(MDA)的含量研究大鼠肝脏氧化应激状态;通过试剂盒检测肝脏组织匀浆超氧阴离子歧化酶(SOD)及分型SOD-1活力、过氧化氢酶(CAT)和谷胱甘肽过氧化氢酶(GPx)的活力,免疫印迹检测抗氧化酶SOD-1、GP_x-1和CAT及抗氧化调控因子Nrf-2的蛋白水平评价大鼠肝脏抗氧化防御系统的功能。结果:与阴性对照组比较,硒预处理对镉暴露导致大鼠的血清ALT和AST升高具有显著的抑制作用(P均<0.05)。硒能抑制镉暴露导致的肝脏组织Bax/Bcl-2的升高(P<0.05),表明硒具有抑制镉导致的肝细胞凋亡的作用。硒预处理明显减缓了镉暴露导致的肝脏ROS水平和MDA水平的升高(P均<0.05),并引起抗氧化酶SOD和GPx活力的升高(P均<0.05),以及诱导核转录因子Nrf-2蛋白表达的上调(P<0.05),提示硒预处理能够有效地抑制镉暴露导致的肝脏氧化应激损伤作用。结论:硒对大鼠镉暴露导致的肝脏氧化损伤和细胞凋亡具有保护作用,其作用机制可能与增强机体抗氧化能力有关。     

辛硫磷和灭多威对雌性大鼠生殖系统的联合毒性作用

背景与目的： 研究辛硫磷(phoxim,Pho)和灭多威(methomyl,Met)混配对雌性大鼠生殖系统的联合毒性作用。 材料与方法： 选用性成熟健康雌性SD大鼠24只,随机分为辛硫磷组(1/50 LD50 ,29.4 mg/kg Pho)、灭多威组(1/50 LD50 ,0.34 mg/kg Met )、辛硫磷＋灭多威组(两者1：1混合)和阴性对照组(蒸馏水), 共4组,每组6只。每天用受试物给大鼠灌胃1次,每周灌胃5 d,连续灌胃 30 d。采用阴道脱落细胞涂片法观察大鼠动情周期的变化;放射免疫法测定血清雌二醇(E2)、孕酮(P4)水平;分光光度法测定其血清和卵巢超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽硫转移酶(GST)的活力以及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)的含量和血清中丁酰胆碱酯酶(BchE)的含量;并观察子宫及卵巢组织形态的改变。 结果： 析因分析显示,在本试验剂量水平下(0.34 mg/kg) 灭多威使大鼠动情期延长、E2浓度升高、P4含量下降,与对照组比较差异均具有统计学意义 (P<0.01)。辛硫磷组、灭多威组检测结果与阴性对照组比较：血清SOD、GST、GSH 水平升高、MDA含量下降;卵巢SOD、GST、GSH水平下降 、MDA含量升高(P< 0.05或P<0.01)。辛硫磷＋灭多威混配组与阴性对照组比较：血清SOD、GST、GSH 水平升高,血清MDA、 P4含量降低;卵巢SOD、GST,GSH 水平降低(P<0.05或 P<0.01),表现为拮抗作用。辛硫磷和灭多威混配组大鼠卵巢的形态未见明显改变,但子宫出现腺体数目增多以及部分腺体扩张的改变。 结论： 在本试验剂量水平下,辛硫磷和灭多威单剂对大鼠生殖系统和机体抗氧化系统产生一定的影响,辛硫磷和灭多威混配可对大鼠生殖系统产生一定的影响。     

辛硫磷和灭多威对雄性大鼠生殖系统的联合毒性作用

背景与目的:观察辛硫磷(phoxim,Pho)和灭多威(methomyl,Met)对雄性大鼠生殖系统的联合毒性作用.材料与方法:选择健康成年雄性SD大鼠24只,按2×2析因设计随机分为4组:即Pho(1 50 LD<,50>,25.20 mh kg)、Met(1 50 LD<,50>,0.47mg kg)、Pho Met(25.20 mg kg Pho 0.47mg kg Met)和阴性对照组(蒸馏水).灌胃染毒每天1次,每周5 d,连续染毒60 d.末次染毒24 h后测量大鼠体重增长量、脏器湿重,精子参数(精子计数、活率、畸形率),血清和睾丸中氧化损伤相关判定指标:超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽S转移酶(GST)、谷胱甘肽(GSH),睾丸标志酶:酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)、ATP酶,血清中雄性激素睾酮(T),睾丸及附睾组织形态等的改变.结果:辛硫磷和灭多威混配对精子数量、活率、畸形率、和睾酮存在协同作用,对血清中SOD、GSH和睾丸组织中SOD、GST、GSH、ACP及Na<' >-K<' >-ATPase等存在拈抗作用,对其它指标尚未观察到交互作用.辛硫磷和灭多威混配引起的睾丸组织形态学变化主要表现为生精小管管腔内可见脱落的各级生精细胞,部分生精小管生精细胞层数和各级生精细胞数量均减少,细胞排列疏松紊乱,管腔内成熟精子数量减少,附睾未见明显组织病理学变化.结论:辛硫磷和灭多威混配染毒对雄性大鼠生殖系统存在联合毒性作用,对精子数量、活率、畸形率和血清睾酮水平呈协同作用,对部分氧化损伤指标和睾丸标志酶呈拮抗作用.提示辛硫磷和灭多威混配后对雄性大鼠生殖系统的毒作用可能是通过影响睾丸功能、激素水平和精子发生及成熟过程,导致雄性生殖功能的降低.     

巴西蜂胶抗大鼠急性放射性肝损伤的实验研究

目的:探讨巴西蜂胶对30Gy高能X线上腹部照射后大鼠急性放射性肝损伤的防护作用。方法:40只SD大鼠随机分为4组:A组(生理盐水+假放疗组);B组(蜂胶+假放疗组);C组(蜂胶+放疗组);D组(生理盐水+放疗组)。实验大鼠接受高能X线上腹部照射30Gy,并于照射后4天采血、处死,观察大鼠肝细胞凋亡情况、肝脏病理改变,检测血清ALT、AST水平变化,观察肝脏组织的SOD、GSH活性变化。结果:C组与D组比较,大鼠肝细胞凋亡指数、血清ALT、AST水平显著降低,病理损伤减轻,肝脏组织中SOD、GSH均显著增高(P<0.05)。结论:巴西蜂胶可清除自由基,减少辐射所致肝细胞凋亡,进而对急性放射性肝损伤起一定的防护作用。     

川芎嗪对辐射所致小鼠氧化应激损伤的保护作用

目的:研究川芎嗪对辐射所致小鼠氧化损伤的预防和治疗作用。方法:采用~(60)Co-γ射线5 Gy全身单次照射小鼠造模,分别于照射前(预防)和照射后(治疗)每天腹腔注射川芎嗪31.2 mg/kg,连续给药10 d,并设生理盐水阴性对照组,检测各组小鼠肝组织中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、还原型谷胱甘肽(GSH)、谷胱甘肽过氧化物酶(GPx)及总抗氧化力(T-AOC)的变化。结果:与阴性对照组比较,~(60)Co-γ射线照射可显著增加小鼠肝组织中MDA的含量(P0.05),降低SOD、GSH、GPx的活性(P0.05),使肝组织T-AOC下降(P0.05),但对CAT的活性无显著影响(P0.05)。与照射组比较,照射前和照射后给予川芎嗪,均可降低小鼠肝组织MDA含量(P0.05),使SOD、GSH、GPx的活性升高(P0.05)、肝组织T-AOC升高(P0.05),对CAT的活性仍无显著影响(P0.05)。结论:川芎嗪具有较好的抗氧化作用,预防和治疗性用药均可降低辐射所致小鼠的氧化应激损伤。     

Nrf2/ARE信号通路在槲皮素抑制异烟肼诱导的肝细胞线粒体氧化损伤中的作用

目的：探讨核因子E2相关因子2/抗氧化反应元件（Nrf2/ARE）信号通路在槲皮素抑制异烟肼（INH）诱导的L-02细胞线粒体氧化损伤中的作用。方法：将L-02细胞随机分为阴性对照组、INH组（10 mmol/L INH）、单独槲皮素组（50 μmol/L槲皮素）、槲皮素保护组（10 mmol/L INH+50 μmol/L槲皮素）,各组细胞处理24 h后,采用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法测定细胞存活率;荧光探针DCFH-DA检测细胞线粒体活性氧（ROS）水平;比色法测定细胞内丙二醛（MDA）含量、谷胱甘肽（GSH）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性,评价细胞线粒体氧化损伤状态。Western blot检测Nrf2、血红素氧合酶1（HO-1）蛋白表达水平,评价细胞内Nrf2/ARE信号通路的变化。结果：与阴性对照组比较,INH组细胞存活率显著降低（P < 0.01）,线粒体ROS水平和MDA含量显著升高（P < 0.01）,GSH含量及SOD活性明显降低（P < 0.01）;与INH组相比较,槲皮素保护组细胞存活率明显增加（P < 0.01）,线粒体ROS水平和MDA含量显著减少（P < 0.01）,GSH含量及SOD活性明显升高（P < 0.05或P < 0.01）。INH组细胞质中HO-1蛋白及细胞核中Nrf2蛋白表达较阴性对照组明显增加（P < 0.01）;槲皮素保护组细胞质中HO-1蛋白及细胞核中Nrf2蛋白表达明显高于INH组（P < 0.01）。结论：槲皮素能够抑制INH诱导的肝细胞线粒体氧化损伤,这可能与槲皮素对Nrf2/ARE信号通路的活性调节相关。     

喹乙醇对HepG2细胞抗氧化系统的影响

目的：观察喹乙醇对人肝癌细胞（HepG2）抗氧化系统的影响,探讨喹乙醇诱导HepG2细胞氧化性损伤的机制。方法：分别将0、200、400、800μg/ml的喹乙醇作用于HepG2细胞24h后,检测各组细胞内抗氧化酶/物的变化;另设800μg/ml的喹乙醇作用于HepG2细胞3h后,再用超氧化物歧化酶（SOD）（100μg/ml）、过氧化氢酶（CAT）（100μg/ml）及SOD（100μg/ml）＋CAT（100μg/ml）分别作用细胞3h的各实验组,采用分子探针2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐（2,7-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFDA）检测各组处理后细胞内活性氧含量的变化。结果：不同浓度的喹乙醇作用HepG2细胞24h后,细胞总ATPase、Na＋K＋-ATPase及Ca2＋Mg2＋-ATPase和细胞内SOD、谷胱甘肽（GSH）及谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）活性随喹乙醇浓度的升高而下降（P〈0.05或P〈0.01）,且具有一定的剂量-效应关系,细胞内CAT活性较对照组下降（P〈0.01）,但无剂量-效应关系,而细胞内丙二醛（MDA）水平随喹乙醇浓度的升高而增加（P〈0.05或P〈0.01）,且呈一定的剂量-效应关系。经喹乙醇（800μg/ml）处理细胞后,再分别用CAT、SOD及SOD＋CAT处理的各组,其ROS含量与单纯喹乙醇（800μg/ml）组相比分别减少80%（P〈0.01）、40%及95%（P〈0.01）。结论：喹乙醇可使体外培养HepG2细胞的抗氧化系统受到一定的破坏,且产生的ROS形式以H2O2为主。     

1,25-二羟基维生素D3对PM2.5所致HBE细胞氧化损伤的保护作用

目的： 探讨1,25-二羟基维生素D₃[1,25-（OH）₂D₃]对细颗粒物（PM_2.5）致人支气管上皮细胞（HBE）氧化损伤的保护作用。方法： 根据处理因素不同将细胞分为4组,溶剂（乙醇）对照组、1,25-（OH）₂D₃干预组、乙醇+PM_2.5染毒组、PM_2.5染毒+1,25-（OH）₂D₃干预组。溶剂对照组细胞用0.1%乙醇处理48 h,1,25-（OH）₂D₃干预组用1×10^-9 mol/L 1,25-（OH）₂D₃处理48 h,乙醇+PM_2.5染毒组用0.1%乙醇溶剂处理24 h后更换为含乙醇的PM_2.5（200 μg/mL）染毒液继续处理24 h,PM_2.5染毒+1,25-（OH）₂D₃干预组用1×10^-9 mol/L 1,25-（OH）₂D₃预处理24 h后更换为含1,25-（OH）₂D₃的PM_2.5（200 μg/mL）染毒液继续处理24 h。染毒结束后,用CCK-8试剂盒测定细胞存活率、丙二醛（MDA）和还原型谷胱甘肽（GSH）/氧化型谷胱甘肽（GSSG）-Glo^TM试剂盒分别测定MDA浓度和GSH/GSSG比值,Western blot实验测定维生素D受体（VDR）、转录因子NF-E2相关因子2（Nrf-2）与血红素加氧酶-1（HO-1）蛋白的表达水平。结果： PM_2.5染毒处理后,HBE细胞的存活率降至80.8%,1,25-（OH）₂D₃预处理24 h后再进行PM_2.5染毒的细胞存活率降低至75.8%。与对照相比,PM_2.5染毒后,HBE细胞MDA浓度显著增加（P < 0.05）,而GSH/GSSG的比值却明显降低（P < 0.01）。1,25-（OH）₂D₃处理48 h后可显著改善PM_2.5染毒细胞的抗氧化水平（P < 0.05）,主要表现为MDA浓度的降低和GSH/GSSG比值的增加。蛋白分析结果发现,PM_2.5可诱导细胞Nrf-2和HO-1蛋白表达的增加。1,25-（OH）₂D₃干预48 h后可上调HBE细胞内VDR水平,并可增加PM_2.5染毒组细胞内Nrf-2和HO-1蛋白的表达水平。结论： PM_2.5可诱导HBE细胞氧化损伤,主要表现为脂质过氧化水平升高、GSH/GSSG比值下降和抗氧化蛋白Nrf-2与HO-1表达水平的增加。在PM_2.5所致细胞氧化应激效应中,1,25-（OH）₂D₃可起到一定的保护作用,这可能与VDR及Nrf-2/HO-1信号通路有关。而1,25-（OH）₂D₃所致细胞存活率的降低可能与其诱导细胞周期阻滞及促进PM_2.5所诱导损伤细胞的凋亡有关。     

PM2.5对HK-2细胞氧化损伤和凋亡的影响

目的：探讨深圳和太原市PM_2.5对人肾上皮细胞（HK-2）氧化损伤和凋亡的影响。方法：用中流量采样器分别采集太原某大学校园和深圳市疾病预防控制中心楼顶空气,将吸附有PM_2.5的滤膜洗脱后制备PM_2.5混悬液。设置阴性对照组、50 μg/mL深圳PM_2.5样品组、50 μg/mL太原PM_2.5样品组和10 μmol/L Cr⁶⁺阳性对照组,分别处理HK-2细胞24 h,测定4组细胞氧化损伤指标丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、还原型谷胱甘肽（GSH）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-PX）的变化,并应用流式细胞术检测细胞凋亡水平。结果：与阴性对照组相比,深圳PM_2.5样品组、太原PM_2.5样品组和阳性对照组中MDA含量分别升高8.16%、34.51%和72.23%;SOD活性分别降低7.49%、19.67%和29.55%;GSH含量分别降低10.43%、16.39%和37.43%。太原PM_2.5样品组与阴性对照组的差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。GSH-PX活性分别降低42.70%、61.62%和60.98%,细胞凋亡率分别升高197.25%、301.22%和399.08%,上述3组与阴性对照组间的差异均有统计学意义（P < 0.05或P < 0.01）。结论：深圳和太原市PM_2.5均可引起HK-2细胞发生氧化损伤和细胞凋亡率增加,且太原市PM_2.5的作用更为明显。     

阿尔泰金莲花浸膏粉对PM2.5致大鼠急性肺损伤的保护作用

目的：研究阿尔泰金莲花浸膏粉（TAEP）对PM2.5致大鼠急性肺损伤（ALI）的保护作用。方法：60只SD大鼠随机分为正常对照组（生理盐水）,模型组,TAEP 125、250、500 mg/kg组,地塞米松（2 mg/kg）阳性对照组,每组10只。各剂量组按相应剂量每天灌胃1次给予受试物,连续30 d,除正常对照组外,其余各组根据预实验结果,在第30天按14 mg/kg行气管滴注PM2.5（采样于乌鲁木齐市）悬液,造成大鼠急性肺损伤。造模3 h后,经大鼠腹主动脉取血,进行白细胞分类计数并检测血清中乳酸脱氢酶（LDH）、超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）、丙二醛（MDA）、一氧化氮（NO）、白介素-6（IL-6）、白介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的含量;取大鼠右肺上叶作病理组织学检查,下叶称取质量后计算肺湿/干质量比（W/D）,取大鼠左肺行肺泡灌洗,并收集肺泡灌洗液（BALF）,检测其中IL-6、IL-1β、TNF-α的含量。结果：与正常对照组比较,模型组大鼠外周血白细胞计数,血清和BALF中IL-6、IL-1β、TNF-α含量升高（P均 < 0.01）,血清中LDH、MDA、NO含量升高（P均 < 0.01）,肺组织W/D升高（P均 < 0.01）,SOD和GSH含量降低（P均 < 0.01）;与模型组比较,TAEP各剂量组大鼠外周血白细胞计数,血清和BALF中IL-6、IL-1β、TNF-α含量降低（P均 < 0.05或0.01）,血清中LDH、MDA、NO含量降低（P均 < 0.05或0.01）,肺组织W/D降低（P均 < 0.05或0.01）,SOD和GSH含量升高（P均 < 0.05或0.01）;TAEP 500 mg/kg组各项检测指标与地塞米松组接近（P均 > 0.05）,病理检查结果显示随TAEP剂量增加大鼠肺泡形态结构破坏降低,水肿及炎症细胞浸润减少,TAEP 500 mg/kg组大鼠肺脏可见少量炎细胞浸润,肺泡及各级支气管均结构完整,与地塞米松组相近。结论：TAEP对PM2.5致大鼠急性肺损伤具有一定的保护作用。     

Study on the DNA damage induced by coal tar pitch fume extracts in rat alveolar macrophage and it‘s mechanism

The carcinogenic mechanism of coal tar pitch (CTP) as a recognized carcinogen has been studying. It is widely believed that the carcinogenicity of CTP is based on the genotoxicity of CTP. In the process of carcinogenesis caused by extrinsic chemical substance, the DNA damage mainly occurred in the initiation phase. UP to now, the most sensitive detecting endpoint for DNA damage is to detect DNA single strand breaks. The single cell gel electrophoresis has been rapidly becoming a widely used analytical procedure during the last few years, which can detect DNA strand breaks. The method is a fast, relatively inexpensive, easy to perform, non-radioactive, and very sensitive method. This method suits to different tests in vitro or in vivo. Virtually any eukaryotic cell, which could be made into single cell suspensions, can be processed for analysis of DNA damage using the single cell gel electrophoresis. The aim of the study is to investigate the role of DNA damage induced by CTP fume in rat AM, to examine the changes of ROS, MDA and SOD, and to explore the mechanism of DNA damage by CTP fume. The present study is in favor of studying the mechanism of mutagenesis and carcinogenesis induced by CTP. Method: The healthy male Wistar rats were anesthetized intraperitoneally with 40 mg pentobarbital sodium per kilogram of body weight. The animals were exanguinated by excising femoral, and collected the rat alveolar macrophage by Joseph's method. The concentration of AM had been regulated to 1.5×106 cell/ml. AMs, which had been cultured in 24-well culture plate, were divided into 4 groups. These cells were exposured to 5.0 μg/ml extracts of coal tar pitch fume, and contacted with 500 μM, 1 000 μM, and 2 000 μM of GSH respectively. These cells were divided into 4 groups. After incubation 24 hours, the indexes that had been used above were measured. Results: ①The DNA strand breaks induced by coal tar pitch fume extracts: After undergoing electrophoresis, the ‘comet’ cells are seldom in control group, but the ‘comet’ cells increased significantly in experimental groups. When the concentration of CTP fume extracts increased from 0 to 10.0 μg/ml, the incidences of ‘comet’ cell increased from 6.0% to 92.0%. There were significant differences in all groups (P<0.001). There was a dose-response relationship between the concentrations of CTP fume extracts and the incidences of ‘comet’ cell. There were correlation relationship between the grade of DNA damage and the concentration of CTP fume extracts (P<0.001). ②The level of ROS induced by CTP fume extracts in AM: After incubation 24 h, the concentration of ROS increased. The difference between control group and experimental groups were significant (P<0.001). ③ The changes of MDA and SOD in AM induced by CTP fume extracts: As the concentration of coal tar pitch fume extracts increased, the concentration of MDA increased too. The differences between experimental groups and control group were significant. But the difference of SOD activity in all groups weren’t significant. ④The role of GSH interfere: GSH could protect the DNA of AM from DNA-damage induced by CTP fume extracts. With the increasing of the concentration of GSH, the incidences of ‘comet’ cell decreased from 77.0% to 16.0%. The differences of incidences of ‘comet’ cell in all groups were different significantly. There was a dose-response relationship between the concentrations of GSH and the incidences of ‘comet’ cell. There was correlation relationship between the grade of DNA damage and the concentration of GSH (P<0.001). GSH could inhibit the increasing of ROS and MDA. The differences of SOD activity in all groups weren't significant (P>0.05). Conclusion: ①Coal tar pitch fume extracts can induce DNA single strand breaks in rat alveolar macrophage; the single cell gel electrophoresis appears to be suitable to detect DNA strand breaks in rat alveolar macrophage. ②Coal tar pitch fume extracts can induce the rat alveolar macrophage to produce reactive oxygen species (ROS), and can induce lipid peroxidation: the DNA strand breaks induced by coal tar pitch fume extracts in AM are associated with the producing of ROS. ③GSH can inhibit coal tar pitch fume extracts-induced DNA damage in rat alveola r macrophage.