Association of JNK1 activation with palmitic acid-induced insulin resistance in L6 rat muscle cells

目的 建立棕榈酸(PA)诱导的大鼠L6肌细胞胰岛素抵抗模型,初步探讨其机制与C-jun氨基末端激酶1(JNK1)活化的关系.方法 不同浓度PA分别培养已分化的L6肌细胞2、4、8、12、24、36 h,用葡萄糖试剂盒分别检测各组培养液中剩余葡萄糖浓度,观察不同浓度PA对骨骼肌细胞葡萄糖摄取的影响.MTT法检测棕榈酸对L6细胞活性的影响.建立L6肌细胞胰岛素抵抗模型,Western blot检测正常组(NG组)和胰岛素抵抗组(IR组)的JNK1和p-JNK1的蛋白表达水平.结果 0.4 mmol/L的PA孵育24~36 h与0.6、0.8 mmol/L的PA孵育8~24 h后细胞上清液葡萄糖浓度明显高于NG组(P<0.05),MTT结果显示0.8、1.0 mmol/L的PA作用24、36 h时对细胞的活性有影响.Western blot结果显示:NG组JNK1和p-JNK1的表达量较低,IR组JNK1和p-JNK1的表达量上升,其中p-JNK1表达量上升较JNK1明显,但与NG组比较,IR组的JNK1表达差异无统计学意义,p-JNK1、p-JNK1/JNK1表达差异均有统计学意义(P<0.05).结论 通过一定浓度和时间的PA刺激可导致大鼠L6成肌细胞胰岛素抵抗的形成,其机制可能和JNK1的活化有一定关系.     

高糖高脂对β细胞脂肪酸转位酶基因表达的影响

目的观察高糖高脂对β细胞脂质含量及脂肪酸转位酶(FAT/CD36)基因表达的影响。方法体外培养NIT-1细胞,分别以5mmol/L葡萄糖(对照组,NC)、25mmol/L葡萄糖(高糖组,HG)、0.25mmol/L棕榈酸 5mmol/L葡萄糖(高脂组,HP)以及0.25mmol/L棕榈酸 25mmol/L葡萄糖(高糖高脂组,GP)培养24h后,酶法测定细胞内三酰甘油(TG)含量,放免法测定胰岛素分泌,RT-PCR检测FAT/CD36mRNA表达。结果与NC组比较,各处理组细胞内TG含量增加,而葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)下降,以GP组变化最明显(P<0.01),且GP组与HG组和HP组间的差异也有显著性。在高糖的孵育下,HG组和GP组FAT/CD36mRNA表达显著高于NC组(P<0.01),但无论是5mmol/L还是25mmol/L葡萄糖添加棕榈酸后的各组与相应的单纯葡萄糖组比较FAT/CD36mRNA表达均无明显改变。结论在高脂的环境下,高糖可进一步促进β细胞脂质沉积、抑制GSIS;其中高糖上调FAT/CD36mRNA表达可能是其重要机制之一。     

高糖和棕榈酸诱导胰岛INS-1细胞线粒体解偶联改变

目的 通过观察体外高糖和棕榈酸(PA)慢性作用对胰岛INS-1细胞活性氧簇(ROS)水平、解偶联蛋白2(UCP2)mRNA和蛋白表达的影响,初步探讨高糖和PA损害胰岛功能的机制.方法 实验分为正常对照组(含5.5 mmol/L葡萄糖的BSA)、高糖组(含16.7 mmol/L葡萄糖的BSA)、棕榈酸组(含0.4 mmol/L棕榈酸)、高糖+棕榈酸组(含16.7 mmol/L葡萄糖及0.4 mmol/L棕榈酸).将INS-1细胞分别接种于上述不同浓度的葡萄糖和PA作用48h后,分别分析ROS水平、UCP2mRNA和蛋白表达、基础和葡萄糖刺激的胰岛素分泌量(GSIS). 结果 与对照组相比,高糖组、棕榈酸组和高糖+棕榈酸组ROS水平明显增加(P均<0.05);高糖+棕榈酸组解偶联蛋白2(UCP2)mRNA和蛋白表达较其余三组明显增加(P均<0.05);并且它明显增加2.8 mmol/L葡萄糖时的基础胰岛素分泌量,减少16.7 mmol/L葡萄糖时的GSIS(P均<0.05). 结论 在胰岛INS-1细胞,高糖和棕榈酸对胰岛功能的损害与线粒体解偶联功能改变有关.高糖和棕榈酸通过诱导ROS产生增多导致UCP2表达与作用增加,增强了线粒体呼吸链与ADP磷酸化解偶联,使线粒体膜电位下降,引起胰岛素分泌减少,损害胰岛功能.     

胰高血糖素样肽-1抑制软脂酸诱导的MIN6细胞凋亡

目的 探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对软脂酸(PA)诱导的MIN6细胞凋亡及分泌胰岛素功能的影响.方法 传代培养处于对数生长期的胰岛β细胞MIN6细胞株分为三组.PA组:加入0.5 mmol/L PA孵育36 h;GLP-1+PA组:加入10 nmol/LGLP-1,12 h后再加入0.5 mmol/L PA继续孵育36 h,期间每12 h加1次相同浓度的GLP-1;对照组:未加GLP-1或PA,其他培养条件相同.MTT比色法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率;放射免疫分析法测定MIN6细胞胰岛素分泌量.结果 PA组MIN6细胞凋亡率为(39.41±10.16)%,细胞活力较对照组减少25.8%(P＜0.05);GLP-1+PA组MIN6细胞凋亡率为(32.80±8.06)%,细胞活力较PA组增强13.88%(P＜0.05),其高糖和低糖状态下胰岛素分泌均明显高于PA组(P＜0.01).结论 GLP-1可以抑制PA诱导的MIN6细胞凋亡,同时改善细胞胰岛素分泌功能.     

FGF-21与罗格列酮钠对棕榈酸诱导的胰岛细胞株凋亡的保护作用及机制研究

目的 探讨成纤维细胞生长因子-21(FGF-21)和罗格列酮钠(RO)对棕榈酸(PA)诱导的HIT-T15胰岛细胞凋亡的保护作用和机制.方法 ① 0.25、0.50和1.00 mmol/L的PA干预HIT-T15细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡.②在0.50 mmol/L的PA中分别加入FGF-21[12.50 nmol/L(A)、25.00 nmol/L(B)、50.00 nmol/L(C)]、 1 μmol/L RO及3个不同浓度的FGF-21与RO联合,检测细胞凋亡,免疫细胞化学法、Western blot检测各组细胞磷酸化c-jun氨基末端激酶(p-JNK)的表达.结果 ①PA组细胞凋亡高于对照组(P<0.05).②FGF-21 A、B、C组能明显降低0.50 mmol/L PA诱导的凋亡(P<0.05),但凋亡率高于对照组(P<0.05).FGF-21与RO联合干预组的细胞凋亡低于PA组(P<0.05).联合干预组的细胞凋亡低于单用FGF-21组(P<0.05).③ 0.50 mmol/L PA组的p-JNK蛋白表达高于对照组(P<0.05).不同浓度FGF-21组的p-JNK的表达均低于PA组(P<0.05).FGF-21与RO联合干预组的p-JNK均低于PA组(P<0.05).联合干预组p-JNK的表达低于单用FGF-21组(P<0.05).结论 ①PA可剂量依赖性的诱导HIT-T15胰岛细胞的凋亡.②FGF-21能抑制PA诱导的HIT-T15胰岛细胞株的凋亡,此机制可能是抑制了p-JNK的表达,并且与RO有协同作用.     

高糖对胰岛β细胞增殖活力、分泌功能及内质网应激相关分子表达的影响

目的 研究持续高糖刺激对胰岛β细胞株MIN6增殖活力、分泌功能及内质网应激相关分子表达的影响.方法 将不同浓度葡萄糖(5.6、25和33.3mmol/L组)分别加入胰岛β细胞株MIN6培养液中,于不同时间点(24h和96h)收集细胞进行相关检测.CCK-8法检测细胞增殖活力;ELISA法检测胰岛素和胰岛素原分泌能力;Real-time PCR和Western blotting分别检测内质网应激相关分子Total XBP-1、Spliced XBP-1 mRNA及磷酸化IRE1α蛋白的表达.结果 加入葡萄糖后96h,各组细胞增殖活力均显著低于孵育后24h;在同一时间点,33.3mmol/L组和25mmol/L组显著低于5.6 mmol/L组(均P<0.05).加入葡萄糖后96h,33.3mmol/L组胰岛素分泌较干预后24h明显减少,而胰岛素原分泌显著增加(均P<0.05).加入葡萄糖后24h和96 h的各组Spliced XBP-1 mRNA表达,以及加入葡萄糖后96h的各组Total XBP-1 mRNA和磷酸化 IRE1α蛋白表达,均随葡萄糖浓度的增加而上调(P<0.05),呈现浓度依赖性.结论 持续性高糖可使胰岛β细胞的增殖活力下降、分泌功能受损及内质网应激相关分子表达增加,而后者可能是导致葡萄糖毒性的原因之一.     

高糖对胰岛β细胞增殖活力、分泌功能及内质网应激相关分子表达的影响

目的 研究持续高糖刺激对胰岛β细胞株MIN6增殖活力、分泌功能及内质网应激相关分子表达的影响.方法 将不同浓度葡萄糖(5.6、25和33.3mmol/L组)分别加入胰岛β细胞株MIN6培养液中,于不同时间点(24h和96h)收集细胞进行相关检测.CCK-8法检测细胞增殖活力;ELISA法检测胰岛素和胰岛素原分泌能力;Real-time PCR和Western blotting分别检测内质网应激相关分子Total XBP-1、Spliced XBP-1 mRNA及磷酸化IRE1α蛋白的表达.结果 加入葡萄糖后96h,各组细胞增殖活力均显著低于孵育后24h;在同一时间点,33.3mmol/L组和25mmol/L组显著低于5.6 mmol/L组(均P<0.05).加入葡萄糖后96h,33.3mmol/L组胰岛素分泌较干预后24h明显减少,而胰岛素原分泌显著增加(均P<0.05).加入葡萄糖后24h和96 h的各组Spliced XBP-1 mRNA表达,以及加入葡萄糖后96h的各组Total XBP-1 mRNA和磷酸化 IRE1α蛋白表达,均随葡萄糖浓度的增加而上调(P<0.05),呈现浓度依赖性.结论 持续性高糖可使胰岛β细胞的增殖活力下降、分泌功能受损及内质网应激相关分子表达增加,而后者可能是导致葡萄糖毒性的原因之一.     

胰高血糖素样肽-1抑制软脂酸诱导的MIN6细胞凋亡

目的探讨胰高血糖素样肽-1(GLP-1)对软脂酸(PA)诱导的MIN6细胞凋亡及分泌胰岛素功能的影响。方法传代培养处于对数生长期的胰岛β细胞MIN6细胞株分为三组。PA组:加入0.5 mmol/L PA孵育36 h;GLP-1 PA组:加入10 nmol/LGLP-1,12 h后再加入0.5 mmol/L PA继续孵育36 h,期间每12 h加1次相同浓度的GLP-1;对照组:未加GLP-1或PA,其他培养条件相同。MTT比色法检测细胞活力;Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡百分率;放射免疫分析法测定MIN6细胞胰岛素分泌量。结果PA组MIN6细胞凋亡率为(39.41±10.16)%,细胞活力较对照组减少25.8%(P<0.05);GLP-1 PA组MIN6细胞凋亡率为(32.80±8.06)%,细胞活力较PA组增强13.88%(P<0.05),其高糖和低糖状态下胰岛素分泌均明显高于PA组(P<0.05)。结论GLP-1可以抑制PA诱导的MIN6细胞凋亡,同时改善细胞胰岛素分泌功能。     

高浓度葡萄糖条件下罗格列酮对NIT-1细胞FOXO1、TSC2基因表达及细胞分泌功能的影响

目的：研究罗格列酮在不同浓度葡萄糖条件下,对胰岛β细胞增殖凋亡与胰岛素分泌以及叉头转录因子-1(FOXO1)和结节性硬化症-2(TSC2)表达的影响。方法： 将 NIT-1细胞按每孔5×10个放置于24孔细胞培养板,培养48 h后随机分为各处理组：5.6、7.8、11.1、16.7、22.2 和27.6 mmol/L葡萄糖组,继续培养24 h后再分别施加1×10^-5mol/L罗格列酮,分别于干预24和48 h后取细胞培养上清液,采用放射免疫法检测胰岛素水平和免疫荧光法检测细胞增殖情况,RT-PCR半定量法检测FOXO1和TSC2 mRNA表达水平。结果：①1×10^-6～1×10^-5 mol/L罗格列酮可以分别在不同浓度葡萄糖培养条件下使胰岛NIT-1细胞增殖（P<0.05）,且这种变化趋势随剂量的增加而增加（即1×10^-5 mol/L罗格列酮组＞1×10^-6 mol/L罗格列酮组＞1×10^-7 mol/L罗格列酮组）。1×10^-5 mol/L的罗格列酮干预后,可见细胞凋亡百分率增加趋势随着葡萄糖浓度不断升高;②在同一浓度罗格列酮作用下,当葡萄糖浓度为11.1 mmol/L时,胰岛素分泌水平最高,高于其他各组（均P<0.05）,随着葡萄糖浓度增加,胰岛素分泌量逐渐下降（11.1 mmol/L葡萄糖组>16.7 mmol/L葡萄糖组>22.5 mmol/L葡萄糖组>27.6 mmol/L葡萄糖组）,而葡萄糖为5.6 mmol/L时,胰岛素分泌量最低;③ 在1×10^-5 mol/L罗格列酮干预后,FOXO1和TSC-2 mRNA的表达水平均较未干预组明显下降,且呈现出5.6 mmol/L组＜11.1 mmol/L组＜16.7 mmol/L组＜22.5 mmol/L组＜27.6 mmol/L组的变化趋势,而且葡萄糖浓度＞16.7 mmol/L的各组均较前面小剂量葡萄糖组（≤11.1 mmol/L各组）表达明显。结论：罗格列酮可以通过直接影响胰岛β细胞内FOXO1和TSC2表达促进胰岛β细胞的增殖及影响细胞胰岛素分泌功能,提示通过调控FOXO1和TSC2表达,可以直接影响胰岛β细胞的生物学功能,如分泌功能、细胞的增殖与凋亡以及改善胰岛素抵抗状况。     

硫酸脱氢表雄酮对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响

目的探讨硫酸脱氢表雄酮(DHEAS)对胰岛β细胞株MIN6葡萄糖刺激的胰岛素分泌的影响。方法以葡萄糖刺激浓度为2.8mmol/L和16.7mmol/L的对数生长期MIN6细胞作为实验对象,分别以1、5、10μmol/LDHEAS干预10min和24h(不同浓度DHEAS组),以5μmol/LDHEAS或与10μmol/L糖皮质激素受体阻断剂RU486联合干预24h(DHEAS和DHEAS+RU486组),设立空白对照组。ELISA法测定细胞培养上清液中胰岛素分泌量,Real-TimePCR检测细胞胰岛素mRNA表达。结果干预后10min和24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞培养上清液中的胰岛素分泌量均显著高于空白对照组(P<0.05);干预后24h时点,DHEAS+RU486组与DHEAS组MIN6细胞培养上清液中胰岛素分泌量比较差异无统计学意义(P>0.05),但均显著高于空白对照组(P<0.05)。干预后24h时点,5μmol/L和10μmol/LDHEAS组MIN6细胞胰岛素mRNA表达均显著高于空白对照组(P<0.05)。结论 DHEAS对MIN6细胞葡萄糖刺激的胰岛素...     

1,25(OH)2D3联合黄芪多糖对体外骨骼肌细胞胰岛素抵抗的改善作用及其机制

目的 探讨骨化三醇［1,25（OH）₂D₃］联合黄芪多糖（APS）对骨骼肌细胞胰岛素抵抗（IR）的改善作用及其作用机制,为采用1,25（OH）₂D₃和APS缓解IR提供依据。 方法 采用CCK-8法和己糖激酶法确定棕榈酸（PA）溶液（0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mmol·L^－1）的最佳作用剂量和最佳作用时间、APS（25、50、100和200 mg·L^－1）最佳作用剂量及1,25（OH）₂D₃（1、10、100和1 000 nmol·L^－1）最佳作用剂量。将骨骼肌细胞分为对照组（不进行任何处理）、PA组（给予0.4 mmol·L^－1 PA 作用24 h）、PA+APS组（给予0.4 mmol·L^－1 PA 作用24 h后再给予100 mg·L^－1 APS作用24 h）、PA＋1,25（OH）₂D₃组［给予0.4 mmol·L^－1 PA作用24 h后再给予100 nmol·L^－1 1,25（OH）₂D₃作用24 h］、PA＋APS＋1,25（OH）₂D₃组［给予0.4 mmol·L^－1 PA作用24 h后再给予100 mg·L^－1 APS和100 nmol·L^－1 1,25（OH）₂D₃作用24 h］。酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测各组细胞培养上清中白细胞介素6（IL-6）、白细胞介素10（IL-10）、单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）水平,流式细胞术检测各组细胞中活性氧（ROS）水平,Western blotting法检测各组细胞中胰岛素受体（InsR）、胰岛素受体底物1（IRS-1）、磷酸化胰岛素受体底物1（p-IRS-1）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）、P65、磷酸化P65（p-P65）、P38丝裂原活化蛋白激酶（p38MAPK）和Toll样受体4（TLR4）蛋白表达水平。 结果 与对照组比较,PA组骨骼肌细胞中ROS、IL-6、TNF-α、MCP-1水平和P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均升高（P<0.05）,IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均降低（P<0.05）;与PA组比较,PA+APS、PA+1,25（OH）₂D₃和PA+APS+1,25（OH）₂D₃组细胞中ROS、IL-6、MCP-1和TNF-α水平及P65、p-P65、p38MAPK及TLR4蛋白表达水平均降低（P<0.05）,IL-10水平和InsR、IRS-1、p-IRS-1及GLUT4蛋白表达水平均升高（P<0.05）。PA+APS+1,25（OH）₂D₃组细胞中ROS水平、p-P65和p38MAPK蛋白表达水平均低于PA+APS和PA+1,25（OH）₂D₃组（P<0.05）,InsR、IRS-1、p-IRS-1和GLUT4蛋白表达水平均高于PA+APS和PA+1,25（OH）₂D₃组（P<0.05）。 结论 1,25（OH）₂D₃联合APS可有效减轻IR,其机制可能是通过抑制氧化应激通路以及炎性因子的释放来实现的,且联合应用效果优于单独应用。     

丹蛭降糖胶囊对肥胖大鼠骨骼肌IRE1α-JNK信号通路的干预效应

目的 探讨丹蛭降糖胶囊对高脂饮食诱导的肥胖大鼠骨骼肌内质网应激（ERs）相关因子肌醇需求激酶1α（IRE1α）、磷酸化IRE1α（p-IRE1α）、c-jun氨基末端激酶（JNK）、磷酸化JNK（p-JNK）表达的影响。方法 30只雄性SD大鼠随机分为普通饮食组（NC组）、单纯高脂饮食组（HF组）、高脂饮食＋丹蛭降糖胶囊组（FD组）,每组各10只。应用全自动生化分析仪测定骨骼肌三酰甘油（TG）含量;Western blot检测骨骼肌组织IRE1α、p-IRE1α、JNK、p-JNK的蛋白表达水平。结果 1NC组、HF组以及FD组骨骼肌内TG含量分别为（1.87±0.72）、（3.03±0.71）、（2.71±0.58）μmol/g。与NC组比较,HF组大鼠骨骼肌TG含量显著增高（P=0.005）;与HF组比较,FD组大鼠骨骼肌TG含量明显下降（P=0.024）。2Western blot检测结果显示,HF组p-IRE1α/IRE1α及p-JNK/JNK较NC组明显升高（P〈0.05）;FD组p-IRE1α/IRE1α及p-JNK/JNK较HF组明显降低（P〈0.05）。3Pearson相关性分析发现,大鼠骨骼肌TG含量与HOMA-IR、p-IRE1α/IRE1α及p-JNK/JNK均呈正相关（r=0.63、0.66、0.57,均P〈0.01）。结论丹蛭降糖胶囊可减轻骨骼肌脂质沉积,调节ERs相关IRE1α-JNK通路,从而改善骨骼肌胰岛素抵抗。     

高磷诱导内皮细胞凋亡的代谢组学以及MAPK通路研究

目的研究高磷对血管内皮细胞代谢影响并观察MAPK通路变化情况。方法体外培养人脐静脉血管内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）24 h,分为正常浓度组（1.0 mmol/L）、高磷浓度组（3.0 mmol/L）。通过气相色谱/质谱（gas chromatography/mass spectrometry,GC/MS）方法分析代谢物图谱,并采用正交信号校正和偏最小二乘判别分析方法（OSC-PLS-DA）。根据OSC-PLS-DA模型的变量权重（variable importance for projection,VIP）〉1及显著性差异检验结果筛选出差异性代谢物。同时用AnnexinV-FITC/PI双染法检测细胞凋亡率;Western印记法检测MAPK通路ERK1/2、p-ERK1/2、p38 M APK、p-p38 M APK、JNK、p-JNK蛋白表达。结果鉴别出16个显著差异物质,涉及碳水化合物、氨基酸以及脂质代谢通路紊乱;与1.0 mmol/L Pi组相比,3.0 mmol/L Pi组细胞凋亡率明显升高（P〈0.05）,p-ERK1/2蛋白表达明显升高（P〈0.05）,p-p38 M APK蛋白表达明显下降（P〈0.05）,ERK1/2、p38 M APK、JNK和p-JNK蛋白表达无明显改变。结论高磷诱导内皮细胞凋亡是通过上调p-ERK信号通路及下调p-p38MAPK信号通路的活性来实现的。     

饱和脂肪酸对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响及其机制研究

目的：探讨饱和脂肪酸是否造成骨骼肌细胞胰岛素抵抗,并检测核糖体s6蛋白激酶（S6K）是否参与此机制。方法：将棕榈酸偶联到无脂肪酸的牛血清白蛋白（BSA）上,制备成浓度为5mmol／L的棕榈酸储存液,备用。棕榈酸组用0．5mmol／L的棕榈酸孵育16h;溶剂组用含相同浓度的无脂肪酸的牛血清白蛋白（BSA）孵育16h;对照组没有任何处理。用偶联抗体的吸光度分析法测定细胞膜上GLUT4myc的含量,免疫印迹检测胰岛素信号分子胰岛素受体底物（IRS1）、蛋白激酶B（Akt）和S6K的磷酸化水平。结果：与对照组和溶剂组相比,棕榈酸组胰岛素刺激的GLUT4myc转位降低（P〈0．05）;Akt的磷酸化水平降低,S6K的磷酸化水平没有变化,IRS1 S636／639的磷酸化水平也没有改变。结论：棕榈酸可导致骨骼肌细胞胰岛素抵抗,其机制可能不涉及S6K。     

高糖对大鼠肾小球系膜细胞增殖、MCP-1表达及NF—KB活化的影响

目的探讨高糖环境对大鼠肾小球系膜细胞增殖、单核细胞趋化蛋白-l（MCP-1）的表达及NF—KB活化的影响。方法将体外培养大鼠。肾小球系膜细胞（Mc）分为4组：正常对照组（含5．6mm01／L葡萄糖）、高糖1组（含15mmol／L葡萄糖）、高糖2组（含20mmol／L葡萄糖）和高糖3组（含25mmol／L葡萄糖）。MTT法检测细胞的增殖情况,ELISA法检测MCP-1的表达,Westernblotting法检测IKBa以反映NF．KB的活性。结果与正常对照组比较,高糖环境下24h后细胞增殖明显,MCP-1表达明显增强（P〈0．01）。高糖刺激30min后,NF．KB结合蛋白IKB（x明显降解,提示高糖可诱导MCNF—KB活化。结论高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞的增殖及炎症因子MCP-1的高表达可能是通过NF—KB的活化来实现的。     

氯沙坦对高糖诱导大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物及其抑制物表达的影响

目的 研究高糖对正常大鼠肾近端小管上皮细胞纤溶酶原激活物(tPA和uPA)及其抑制物-1(PAI-1)表达的影响,并探讨血管紧张素Ⅱ受体阻滞剂氯沙坦对其改善作用.方法 培养大鼠肾近端小管上皮细胞,并分组为正常对照组、甘露醇组(5 mmol/L D-葡萄糖 25 mmol/L 甘露醇)、高糖组(30 mmol/L D-葡萄糖)、氯沙坦组(10-3 mmol/L氯沙坦)、高糖 氯沙坦组(30 mmol/L D-葡萄糖 10-3 mmol/L氯沙坦).RT-PCR法检测各组细胞tPA、uPA及PAI-1 mRNA表达. 结果与正常对照组比较,高糖组肾小管上皮细胞tPA和uPA mRNA表达下降(P＜0.01), PAI-1 mRNA表达增加(P＜0.01);氯沙坦可部分逆转高糖的作用,高糖加氯沙坦组tPA、uPA表达分别是高糖组的2.06倍、1.69倍(P＜0.01),PAI-1表达为高糖组的44% (P＜0.01). 结论高糖可使肾近端小管上皮细胞PA/PAI-1 mRNA异常表达, 氯沙坦可以在肾小管中通过维持PA/ PAI-1的平衡,对糖尿病肾病防治起一定的作用.     

运动增加糖尿病大鼠葡萄糖运载体蛋白含量及基因表达的研究

研究运动对链脲佐菌素所致的糖尿病大鼠骨骼肌细胞胰岛素受体,葡萄糖运载体４（ｇｌｕｃｏｓｅ ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ,ＧＬＵＴ４）基因表达和蛋白含量的作用,探讨运动训练改善糖尿病大鼠糖代谢的可能作用机理。方法实验大鼠分３组：糖尿病非运动组,糖尿病运动组、正常对照组。糖尿病运动组大鼠进行６周游泳运动。用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹法检测大鼠骨骼肌细胞ＧＬＵＴ４蛋白含量,用斑点印迹杂交法检测骨骼肌细胞内ＧＬＵＴｍＲ     

Apelin对葡萄糖的毒性作用及对胰岛细胞PDX-1表达的影响

目的 探讨Apelin对葡萄糖毒性作用及对胰岛细胞胰十二指肠同源盒蛋白-1(PDX-1)表达的影响.方法 在不同葡萄糖浓度下(正糖组5.6 mmol/L,高糖组16.7 mmol/L,极高糖组33.3 mmol/L),+/-Apelin-36培养胰岛β细胞株NIT-1细胞3d,然后测定基础和葡萄糖刺激后胰岛细胞胰岛素分泌量,测定细胞内胰岛素含量和PDX-1蛋白及mRNA表达.结果 与正糖组比较,高糖组和极高糖组的基础和葡萄糖刺激后胰岛素分泌、细胞内胰岛素均明显减少,PDX-1蛋白表达下降(P＜0.05);与未加Apelin组比较,加Apelin高糖组和极高糖组的基础和葡萄糖刺激后胰岛素分泌、细胞内胰岛素明显减少,PDX-1蛋白表达下降(P＜0.05);6组胰岛细胞的胰岛素水平与PDX-1蛋白表达呈正相关,与PDX-1 mRNA表达无关.结论 Apelin可能通过降低PDX-1蛋白表达参与葡萄糖毒性作用,引起胰岛素分泌减少,从而在糖尿病的发病机制中发挥作用.     

高糖环境对HSkMCs细胞株线粒体融合蛋白2表达及细胞凋亡的影响

目的:探讨高糖对人骨骼肌细胞株(HSkMCs)线粒体融合蛋白2(mfn2)表达及细胞凋亡的影响。方法:体外培养HSkMCs细胞株,将细胞分别以5.55 mmol/L,11.10 mmol/L,22.20 mmol/L葡糖糖培养48 h,检测mfn2mRNA表达及细胞凋亡情况。RT-PCR法测定基因表达,流式细胞技术检测细胞凋亡。结果:以5.55 mmol/L葡萄糖组培养48 h为基础对照,11.10 mmol/L组mfn2表达较对照组下降12.3%(P<0.05);22.20 mmol/L组mfn2表达较对照组降低47.3%(P<0.05);对照组细胞凋亡率为(1.80±0.57)%,11.10 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率为(13.23±1.47)%,22.20 mmol/L葡萄糖组细胞凋亡率为(24.03±3.05)%,均较对照组显著增加(P<0.05)。结论:高糖可诱导HSkMCs细胞mfn2 mRNA表达下调,增加其凋亡。     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4和胰岛素信号传导蛋白的影响

目的：观察游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）和胰岛素信号传导蛋白Grb2及ERK2的影响。方法：分离、培养新生Sprague-Dawley大鼠骨骼肌细胞,分别与软脂酸（0．25mmol/L)或油酸（0．125mmol/L)孵育12、24、36h,提取蛋白后用Western印迹法检测GLUT4、Grb2和ERK2的蛋白水平;用斑点印迹杂交法检测骨骼肌细胞内GLUT4 RNA含量的变化。结果：经软脂酸和油酸孵育12、24、36h后,大鼠骨骼肌细胞GLUT4的蛋白和RNA水平均显著降低（P＜0．05）;同时,Grb2和ERK2的蛋白水平也明显下降（P＜0．05）。结论：游离脂肪酸可抑制GLUT4的基因及蛋白表达和降低胰岛素信号传导蛋白Grb2和ERK2的蛋白表达水平,这可能会影响胰岛素的信号传导作用和骨骼肌的葡萄糖摄取,引起骨骼肌的胰岛素抑抗。