Mechanism of trichostatin A combined with all-trans retinoic acid on HeLa cells

目的 探讨曲古菌素A(TSA)联合全反式维甲酸(ATRA)对宫颈癌HeLa细胞株的杀伤作用及其作用机制.方法 TSA联合 ATRA 或单独处理HeLa细胞,CellTiter 96 Aqueous 法检测细胞增殖抑制情况;7-AAD荧光染色法观察细胞凋亡改变;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot 法检测p21、p53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达变化.结果 TSA联合ATRA对HeLa细胞具有明显的生长抑制作用,诱导细胞凋亡,出现核碎裂等典型凋亡改变,细胞凋亡率明显升高,与对照组和单独用药组比较,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,TSA联合ATRA组中p21、p53、活化性Caspase-3蛋白的表达显著升高(P<0.01),而Bcl-2蛋白表达显著下降(P<0.05).结论 TSA联合ATRA在体外对HeLa细胞有明显的杀伤作用,推测其机制可能是上调p21、p53、活化性Caspase-3蛋白表达水平,下调Bcl-2蛋白表达水平有关.     

全反式维甲酸诱导A549细胞凋亡机制的初步探讨

目的研究全反式维甲酸(ATRA)对肺腺癌A549细胞凋亡的影响及机制。方法MTT法观察ATRA对肺癌细胞株A549的生长抑制作用,流式细胞仪观察ATRA诱导A549细胞凋亡作用和对细胞周期的影响,Western Blot分析凋亡相关蛋白表达。结果ATRA抑制A549的增殖呈剂量依赖性;ATRA可诱导A549细胞凋亡,凋亡过程伴随caspase-3、caspase-9表达增加,而Bcl-2、Bcl-Xs/LP的表达无明显变化。结论ATRA可明显抑制A549细胞的增殖,可通过上调caspase-9、caspase-3的表达促进A549细胞凋亡。     

苯丁酸钠和全反式维甲酸对宫颈癌细胞株Hela的影响

目的研究组蛋白去乙酰化酶(histone deacetylase,HDAC)抑制剂苯丁酸钠(Sodium 4-Phenylbutyrate,SPB)和全反式维甲酸(all transretinoic acid,ATRA)单独及联合运用对宫颈癌细胞株Hela生长及侵袭能力的影响,探讨苯丁酸钠和全反式维甲酸联用的效果。方法体外培养宫颈癌细胞株Hela细胞,根据处理因素不同分为4组,A组:对照组,PBS液(1ml)处理组;B组:1μmol/L ATRA单药处理组;C组:1 mmol/L SPB单药处理组;D组1μmol/L ATRA+1 mmol/LSPB处理组。应用细胞生长曲线、四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、细胞克隆形成试验观察细胞生长的抑制作用;采用流式细胞术测定细胞周期分布的变化;用Transwell小室法检测药物处理前后细胞侵袭力的变化。结果与对照组、单用药组相比,ATRA和SPB联用时宫颈癌细胞株Hela细胞的生长速度明显减慢,克隆形成抑制率达80.37%(P<0.05),细胞周期被阻滞在G0/G1期,S期细胞数减少;药物处理后宫颈癌细胞株Hela的侵袭能力降低,和对照组、单用药组相比,差异有统计学意义(P<0.05)。结论组蛋白去乙酰化酶抑制剂苯丁酸钠和全反式维甲酸联用时有明显的增效作用。     

丹参酮A与全反式维甲酸协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株的分化和凋亡

目的　研究丹参酮 A(Tanshinone A,Tan A)联合全反式维甲酸 (ATRA)对早幼粒细胞白血病细胞 (NB4 )诱导分化及凋亡的协同效应。方法　 0 .5 μg/ m l Tan A分别联合 0 .5 μg/ ml、0 .2 5 μg/ ml和 0 .12 5 μg/ml ATRA作用 NB4细胞 5 d,观察 NB4细胞形态学变化 ,检测硝基蓝四氮唑 (NBT)还原能力 ;流式细胞术检测CD11b,CD33的表达 ,并进行细胞周期和细胞凋亡分析。结果　 Tan A联合 ATRA可协同诱导 NB4细胞分化和凋亡。联合作用组第 5 d细胞生长抑制率均超过 80 % ;90 %左右的 NB4细胞分化 ,其中杆状和分叶核细胞比例超过6 5 % ;NBT还原能力显著升高。流式细胞术分析显示 CD11b表达升高 ,CD33表达降低 ;G0 / G1 期细胞增加 ,有明显的细胞凋亡 ,与 Tan A或 ATRA单独作用组相比均有显著性差异 (P<0 .0 1)。Tan A与 ATRA(0 .12 5 μg/ m l～0 .5 μg/ m l)联合对 NB4细胞的影响没有明显的浓度依赖倾向。结论　 Tan A联合 ATRA对 NB4细胞诱导分化和凋亡有协同作用 ;在 ATRA一定浓度范围内 ,这种协同作用无 ATRA剂量依赖性。     

全反式维甲酸对A549细胞株增殖和Caspase-3蛋白表达的影响

目的:探讨全反式维甲酸(ATRA)对A549肺腺癌细胞增殖和凋亡相关蛋白Caspase-3表达的影响.方法:①取对数生长期的人肺腺癌细胞株A549细胞,消化后于96孔板上按1×10-5 mol/L,1×10-6 mol/L,1×10-7 mol/L 3组ATRA药物浓度组和空白对照组培养,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法观察ATRA作用2 d,4 d,6 d对A549细胞增殖的影响.②用Hoechest33258荧光染色观察1×10-5 moL/LATRA培养24 h后A549细胞胞核形态变化.③利用免疫印迹法(Western blot)检测经1×10-7 mol/L,1×10-6 mol/L,1×10-5 mol/L ATRA作用12 h,24 h后A549细胞中Caspase-3蛋白表达的变化.结果:ATRA处理组与空白对照组相比细胞的增殖活性明显受到抑制(P＜0.05);经1×10-5 mol/L ATRA处理后的细胞呈典型的凋亡核固缩表现,胞核呈致密浓染的颗粒状或块状荧光.ATRA处理组的Caspase-3蛋白表达与空白对照组相比明显增高.结论:ATRA可抑制人肺癌细胞株A549的增殖,并通过上调Caspase-3蛋白表达诱导细胞的凋亡.     

全反式维甲酸对肺癌细胞作用的初步观察

人肺癌细胞株ＳＰＣ－Ａ１加入全反式维甲酸使其浓度为１０μｍｏｌ／Ｌ。培养７ｄ后处理组和对照组分别进行ＭＴＴ，光镜，电镜及流式细胞仪检测发现处理组细胞增殖减慢，细胞聚集成片，胞浆中空泡增多，核浆比例无明显染色体固缩及凋亡小体。     

全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的诱导作用

目的研究全反式维甲酸对人骨肉瘤细胞凋亡的影响。方法在培养液体系中加入不同浓度的全反式维甲酸(ATRA)进行不同时间长度的诱导,以MTT法,流式细胞术,TUNEL法检测细胞凋亡情况。结果1~50μmol/LATRA均能抑制骨肉瘤细胞增殖。5、10、50μmol/L ATRA作用细胞4 d后的凋亡率分别为(12.46±2.37)%、(18.36±1.32)%(、27.15±2.17)%,与对照组[(4.09±1.18)%]比较差异均有显著性意义(均P<0.05)。ATRA浓度越高,抑制作用越明显,呈明显的剂量依赖效应。50μmol/L ATRA作用细胞1、2、34、d后的凋亡率分别为(7.35±1.28)%、(10.72±1.68)%、(17.65±2.14)%(、27.15±2.17)%,与对照组[(4.09±1.18)%]比较差异均有显著性意义(均P<0.05)。ATRA作用时间越长,抑制作用也越明显,呈明显的时间依赖效应。结论ATRA能够诱导人骨肉瘤细胞发生凋亡,呈时间和剂量依赖效应。     

全反式维甲酸对恶性黑素瘤A375细胞增殖及Fas蛋白表达的影响

目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养恶性黑素瘤A375细胞增殖的抑制作用并探讨其作用机制.方法 设置溶剂对照及ATRA不同浓度组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ATRA不同浓度、作用不同时间各组细胞存活和生长情况,分析量效、时效关系;Western blot检测10 μmol/L ATRA作用不同时间Fas蛋白的表达.结果 ATRA在0.01～0.1 μmol/L浓度对A375细胞增殖抑制作用不明显;在1～100 μmol/L浓度有抑制作用;药物作用72 h时各浓度组的细胞抑制率均达到高峰,以100 μmol/L浓度组抑制率最高;10 μmol/L ATRA可上调A375细胞Fas蛋白的表达.结论 ATRA对A375细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖关系.ATRA可能通过Fas信号转导途径诱导A375细胞凋亡.     

丹参酮ⅡA与全反式维甲酸协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株的分化和凋亡

目的研究丹参酮ⅡA(Tanshinone ⅡA, TanⅡA)联合全反式维甲酸(ATRA)对早幼粒细胞白血病细胞(NB4)诱导分化及凋亡的协同效应.方法0.5 μg/ml TanⅡA分别联合0.5 μg/ml、0.25 μg/ml和0.125 μg/ml ATRA作用NB4细胞5 d,观察NB4细胞形态学变化,检测硝基蓝四氮唑(NBT)还原能力;流式细胞术检测CD11b,CD33的表达,并进行细胞周期和细胞凋亡分析.结果TanⅡA联合ATRA可协同诱导NB4细胞分化和凋亡.联合作用组第5 d细胞生长抑制率均超过80%;90%左右的NB4细胞分化,其中杆状和分叶核细胞比例超过65%;NBT还原能力显著升高.流式细胞术分析显示CD11b表达升高,CD33表达降低;G0/G1期细胞增加,有明显的细胞凋亡,与TanⅡA或ATRA单独作用组相比均有显著性差异(P<0.01).TanⅡA与ATRA(0.125 μg/ml～0.5 μg/ml)联合对NB4细胞的影响没有明显的浓度依赖倾向.结论TanⅡA联合ATRA对NB4细胞诱导分化和凋亡有协同作用;在ATRA一定浓度范围内,这种协同作用无ATRA剂量依赖性.     

曲古菌素A对Molt-4细胞细胞周期阻滞和凋亡的作用

目的:本研究旨在探讨曲古菌素A(TSA)对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用及TSA高效低毒的抗肿瘤特性。方法:应用细胞培养、PI单标流式细胞术和DNA Ladder等方法初步探讨TSA对Molt-4细胞的诱导细胞周期阻滞及凋亡的作用。结果:在一定浓度范围内,TSA能以浓度依赖性诱导Molt-4细胞S期及G2期阻滞。TSA以浓度依赖性方式诱导Molt-4细胞凋亡,随着TSA的浓度的升高,细胞凋亡率也显著增高。TSA的各实验组的凋亡率和对照组的凋亡率相比均有显著性差异,P<0.01。经200 nmol/L的TSA处理后,Molt-4细胞凋亡率增高,且呈时间依赖性效应关系。TSA在显著诱导Molt-4细胞凋亡的浓度范围内对正常人外周血单个核细胞(NPBMNC)无明显的诱导凋亡作用。结论:TSA有明确的诱导Molt-4细胞周期阻滞和诱导Molt-4细胞凋亡的能力,并且这种作用呈浓度和时间依赖性,这可能是TSA体外抑制白血病细胞系Molt-4生长和发挥抗白血病作用的主要机理之一,与NPBMNC相比较,TSA能够选择性诱导Molt-4细胞凋亡。     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导PLZF-RARα阳性U937细胞分化

目的：研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A（TSA）和全反式维甲酸（ATRA）对PLZF-RARer阳性细胞的作用．方法：稳定转染PLZF-RARer基因的U937细胞（U937／PLZF）经TSA，ATRA作用一段时间后，Wright-Giemsa染色观察细胞形态，MTF法检测细胞生长和增殖状态，流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面分化抗原CDllb，CD64，CDl4等的表达，荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达，细胞化学染色和硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验观察细胞功能分化情况．结果：U937／PLZF细胞在去除四环素条件培养后，PLZF，RARer表达明显增加．TSA（30斗g／L）联合ATRA（1I．Lmol／L）使U937／PLZF细胞核质比缩小，生长增殖受抑，S期细胞减少，CDllb表达增高，PLZF-RARer蛋白表达减弱，分布以胞核弥漫细小颗粒为主，细胞功能上的分化可能尚不成熟．结论：组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA联合ATRA可使U937／PLZF细胞发生部分分化．     

组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A联合全反式维甲酸诱导PLZF-RARα阳性U937细胞分化

目的:研究组蛋白去乙酰化酶抑制剂曲古菌素A(TSA)和全反式维甲酸(ATRA)对PLZF-RARα阳性细胞的作用.方法:稳定转染PLZF-RARα基因的U937细胞(U937/PLZF)经TSA, ATRA作用一段时间后,Wright-Giemsa染色观察细胞形态,MTT法检测细胞生长和增殖状态,流式细胞仪检测细胞周期和细胞表面分化抗原CD11b,CD64,CD14等的表达,荧光免疫细胞化学染色检测融合蛋白表达,细胞化学染色和硝基蓝四氮唑(NBT)还原试验观察细胞功能分化情况.结果:U937/PLZF细胞在去除四环素条件培养后,PLZF-RARα表达明显增加.TSA (30 μg/L)联合ATRA (1 μmol/L)使U937/PLZF细胞核质比缩小,生长增殖受抑,S期细胞减少,CD11b表达增高,PLZF-RARα蛋白表达减弱,分布以胞核弥漫细小颗粒为主,细胞功能上的分化可能尚不成熟.结论:组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA联合ATRA可使U937/PLZF细胞发生部分分化.     

全反式维甲酸抑制晶体上皮细胞增殖的实验研究

目的 :研究全反式维甲酸 (ATRA)对晶体上皮细胞 (LECs)增殖的抑制作用。方法 :取体外培养的第 2代兔晶体上皮细胞 (RLECs) ,分为正常培养 (对照组 )和加入不同浓度 (1× 10 - 8～ 1× 10 - 5mol/L)ATRA的实验组 ,分别于培养后 2 4h和 4 8h观察各组晶体上皮细胞的形态学改变 ,计算各浓度ATRA的增殖抑制率。结果 :各种浓度的ATRA对兔晶体上皮细胞均有明显的抑制作用。随浓度升高 ,细胞形态异常改变趋于明显 ;其抑制率由低浓度时的 14 .0 %增至高浓度时的 75 .7% ;1× 10 - 6 mol/L为最高有效浓度 ,半效量 (LD50 )浓度为 0 .85× 10 - 6 mol/L。结论 :ATRA对体外培养的兔晶体上皮细胞增殖有明显抑制作用     

Mechanism of inhibition on activator protein-1 activity by all-trans retinoic acid in gastric cancer cells

Objective To determine the mechanism of all-trans retinoic acid (ATRA) on growth inhibiti on in human gastric cancer cells.Methods Gastric cancer cell lines: MGC80-3, BGC-823, SGC-7901 and MKN-45. CAT assay , Northern blot, Western blot, gene transfection and MTT assay. Results ATRA can inhibit the activator protein-1 (AP-1) activity in ATRA-sensitiv e cell lines, but not in ATRA-resistant cell line, and the anti-AP-1 activity of ATRA is mediated by its receptor, retinoic acid receptor α (RARα). ATRA c an al so inhibit the expression of cJun and cFos. One of the mechanisms for ATRA to i nhibit the growth of gastric cancer cells may be through its inhibitory effect o n the AP-1 activity and its influence on up-regulation of RARα expression. T he inhibition of cJun and cFos expressions by ATRA may also contribute to the an ti-AP-1 activity. Conclusions ATRA inhibits the growth of gastric cancer cells through the regulation of AP-1 activity. This action is mediated by RARα.     

三苯氧胺联合全反式维甲酸对大鼠乳腺癌的预防作用

目的 探讨联合应用三苯氧胺及全反式维甲酸对实验性大鼠乳腺癌发生促进期的化学预防作用。方法 利用二甲基苯蒽（DMBA）诱导大鼠乳腺 癌发生,在给药后第8周应用三苯氧胺（TAM）和全反式维甲酸（RA）,在第24周观察大鼠乳肿瘤发生情况及乳腺发育情况。结果 对照组大鼠乳癌发生率为70．58％;TAM组与RA组发生率分别为22．02％和15．79％,明显低于对照组（P＜0．05）;TAM＋RA组无乳腺肿瘤发生（P＜0．01）。组织学及电镜观察发现,TAM组和RA组乳腺上皮均有不同程度增生或典型增生,联合用药组乳腺上皮发育良好。结论 联合应用三苯氧胺和维甲酸,二者在阻止乳发生过程中有显著的协同作用。     

新型VEGF单克隆抗体与全反式维甲酸联合应用对乳腺癌MCF-7细胞增殖的抑制作用

目的:探讨新型血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体、全反式维甲酸(ATRA)、新型VEGF单克隆抗体与ATRA联合用药对乳腺癌MCF-7细胞的影响,为乳腺癌的临床治疗提供新方案.方法:将MCF-7乳腺癌细胞分为对照组(不做任何处理)、VEGF抗体组(20 mg·L-1 VEGF抗体)、ATRA组(10μmol·L-1...     

全反式维甲酸对恶性黑素瘤A375细胞VEGF表达的影响

目的研究全反式维甲酸（ATRA）对体外培养恶性黑素瘤A375细胞VEGF表达影响。方法应用Real-time PCR检测A375细胞VEGF-B在基因水平的表达。应用ELISA法检测A375细胞上清中VEGF蛋白水平的表达。结果ATRA可降低A375细胞培养上清的VEGF的mRNA表达和血清浓度,与对照组相比有统计学意义（P〈0.05）。结论ATRA可在mRNA和蛋白水平下调A375细胞VEGF的表达,且这种抑制作用呈时间剂量依赖关系。     

全反式维A酸对肺腺癌H1299细胞放射敏感性研究

目的:探讨全反式维A酸(ATRA)对肺腺癌细胞株H1299放射敏感性影响及其分子机制.方法:MTT法检测ATRA对H1299细胞存活率的影响;平板克隆形成实验检测H1299细胞的放射敏感性;流式细胞术检测细胞周期;Western blotting检测survivin与NF-κB的蛋白表达情况.结果:不同浓度ATRA对H...