Effects of parthenolide on the cellular outcomes of stem-like side population cells in nasopharyngeal carcinoma cell lines with different level of COX-2

目的:探讨倍半萜烯内酯(sesquiterpene lactones,SLs)类化合物对不同环氧合酶-2 (cyclooxygenase-2,COX-2)表达水平的人鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)细胞中癌干细胞(cancer stem cells,CSCs)转归的影响.方法:分别采用实时定量PCR(qRT-PCR)和Western blot检测人鼻咽癌高分化CNE1L和低分化CNE2L细胞株中COX-2 mRNA和蛋白本底表达水平.给予不同剂量SLs活性成分小白菊内酯(parthenolide,PN)处理2种细胞株后,再分别采用噻唑蓝(MTT)法测定细胞增殖活性;qRT-PCR检测细胞中干性相关基因COX-2、ABCG2、BMI1、OCT4 mRNA水平;流式细胞术分析干性侧群(side population,SP)细胞的相对含量;平板克隆集落形成实验检测干性细胞的自我更新和分化增殖能力.结果:CNE1L和CNE2L细胞中COX-2mRNA和蛋白本底水平显著不同,在CNE1L细胞中明显高于CNE2L细胞(P＜0.05);与对照组比较,PN处理后,细胞增殖抑制率随PN浓度(10～100μmol/L)增加呈剂量依赖性增高(P＜0.05),细胞中COX-2 mRNA在CNE1L中升高、在CNE2L中降低,干性相关基因ABCG2、BMI1 mRNA在CNE1L细胞中升高、而OCT4 mRNA在两株细胞中均降低(P均＜0.05);SP细胞抑制率亦随PN浓度(2.5～40μmol/L作用24 h)增加呈剂量依赖性增高(P＜0.05);而细胞的集落形成能力随PN浓度(0.25～1.5μmol/L作用72 h)增加显著降低(P＜0.05);上述结果在CNE1L和CNE2L细胞株间差异均有统计学意义(P＜0.05),在CNE1L细胞中变化作用更强.结论:PN对不同NPC细胞株中的干性细胞功能具有抑制作用且存在明显差别,可能与不同细胞间COX-2表达的差异性有关.     

环氧化酶-2与鼻咽癌细胞分化的关系

目的检测人鼻咽癌细胞株中环氧化酶-2（COX-2）的表达情况,探讨鼻咽癌细胞中COX-2的表达与细胞分化程度的关系。方法应用流式细胞仪和免疫细胞化学法对细胞中COX-2的表达进行定位定量检测。结果2种细胞株（CNE1和CNE-2Z）均有COX-2的表达,表达强度和分布与分化程度有关,分化越低,表达越高;流式细胞仪检测COX-2在细胞株中表达强弱顺序为CNE-2Z〉CNE1,阳性表达细胞数CNE-2Z〉CNE1,差异有统计学意义,P〈0.01;免疫细胞化学法检测COX-2主要表达在细胞质,分布与分化程度有关,细胞质表达强度CNE-2Z〉CNE1,差异有统计学意义,P〈0.01。结论COX-2在鼻咽癌细胞株中表达和分布与细胞株的分化程度有关。     

倍半萜烯内酯通过非caspase途径诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡

目的 :探讨半胱天冬酶(caspase)活化途径是否在倍半萜烯内酯(SLs)诱导人鼻咽癌(NPC)细胞凋亡中起作用。方法 :CNE1细胞株给予SLs的活性成分 parthenolide(PN)处理 ,以及与caspase-3和 -9特异性抑制剂联合作用进行caspase途径阻断实验 ,检测细胞内caspase -9和 -3活性 ,观察其与细胞毒性和凋亡指标的关系。 结果 :PN作用后细胞TUNEL阳性率和SubG1细胞亚群增高 ,细胞失贴壁率和LDH漏出率显著增加(P<0.05) ,但caspase-9和 -3活性未见升高。特异性抑制剂作用后caspase活性明显降低(P<0.05) ,而细胞凋亡和毒性指标未见明显改变。 结论 :提示PN诱导CNE1细胞凋亡作用与其细胞毒性效应有关 ,与caspase活化途径无关     

舒尼替尼诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞表达NKG2DLs的机制

目的：初步探讨舒尼替尼诱导高、低表达ABCG2(ATPbinding cassette superfamily G member 2)分子的耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞（简称ABCG2highCNE2/DDP细胞、ABCG2lowCNE2/DDP细胞）中NKG2D配体（natural killer group 2 member D ligands,NKG2DLs）表达的分子机制。方法：Caspase8活化试剂盒和线粒体膜电位法分别检测NK细胞处理后ABCG2highCNE2/DDP细胞和ABCG2lowCNE2/DDP细胞caspase8活化水平和线粒体膜电位。RTPCR检测舒尼替尼处理前后两种CNE2/DDP细胞DNA损伤修复系统相关信号分子mRNA的表达。结果：CNE2/DDP细胞+NK细胞组中两种CNE2/DDP细胞caspase8活性均明显增强;舒尼替尼处理后的ABCG2low CNE2/DDP细胞+NK细胞组和ABCG2highCNE2/DDP细胞＋NK细胞组中caspase8的活性是处理前的2～2.5倍（P<0.01）。舒尼替尼预处理后,CNE2/DDP细胞和NK细胞共培养体系中两种CNE2/DDP细胞的线粒体膜电位分别为(76.58±2.32)%和(73.11±1.93)%,较舒尼替尼处理前明显降低（P<0.05）。舒尼替尼可上调两种CNE2/DDP细胞中ATR、CHK1和CHK2 mRNA的表达,并诱导P53和NFκB mRNA的表达。结论：舒尼替尼可能通过激活DNA损伤修复系统相关信号分子和NFκB的表达,诱导耐药鼻咽癌CNE2/DDP细胞NKG2DLs的表达,同时经由死亡受体信号通路和线粒体信号通路增强NK细胞诱导的肿瘤细胞凋亡。     

干细胞标志物在卵巢癌SKOV3细胞侧群细胞中的表达

目的：检测干细胞相关标志物在卵巢癌SKOV3细胞系侧群（side population,SP）细胞和非侧群（Non-SP）细胞中的表达差异,确定卵巢癌干细胞特异性标志物。 方法： Hoechst 33342染色检测SKOV3细胞中SP细胞的比例,流式细胞术检测SKOV3细胞的SP和Non-SP细胞中干细胞标志物CD133、CD117、CD44、ABCG2、ALDH1 的表达情况,荧光定量PCR检测SP和Non-SP细胞中 ABCG2、ALDH2、NANOG、OCT4、SOX2、CD133、CD117 mRNA的表达水平。 结果： SKOV3细胞中SP细胞比例为(1.56±0.35)%。 ALDH1、ABCG2在SP细胞中表达率分别为（87.3±5.76）%、（29.48±4.43）%,在Non-SP的表达率分别为（5.32±0.47）%、（3.01±1.69）%,差异有统计学意义（ P <0.01）;CD44在这两种细胞亚群中的表达率均高于99%（ P >005）;CD133、CD117在这两种细胞亚群中均不表达。 ALDH1、ABCG2、 NANOG、OCT4和SOX2 mRNA在SP细胞中的表达分别是Non-SP细胞的21.03倍（ P =0.001）、3.14倍（ P =0.001）、23.94倍（ P =0.001）、10.73倍（ P =0.009）和21.46倍( P =0001), CD133、CD117 mRNA在两种细胞亚群中均不表达。 结论： 人卵巢癌细胞株SKOV3中存在SP细胞亚群, ALDH1、ABCG2和NANOG、OCT4、SOX2 mRNA可能是卵巢癌干细胞标志物,为诊断及治疗卵巢癌提供了潜在的靶点。     

全反式维甲酸增强顺铂对A549 细胞化疗敏感性及对Survivin mRNA 和COX-2 mRNA表达的影响

目的:体外观察全反式维甲酸（all-trans retinoic acid ,ATRA）增强顺铂（cisplatin,DDP ）对人类非小细胞肺癌细胞株A549 细胞的增殖抑制及对凋亡抑制蛋白Survivin mRNA和环氧化酶-2（cyclooxygenase- 2,COX-2）mRNA 表达的影响。方法:应用不同浓度组DDP（0.5、5、50mg/L）、ATRA（0.1、1、10μ mol/L）以及联合用药组（ATRA 1 μ mol/L,DDP 5mg/L）,处理肺腺癌细胞株A549 细胞,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）比色法观察不同浓度DDP 组、不同浓度ATRA 组及联合用药组对A549 细胞生长的影响;应用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time polymerase chain reaction ,RT-PCR）检测DDP 组、ATRA 组及联合用药组处理前后A549 细胞中Survivin mRNA和COX-2 mRNA 表达变化;应用流式细胞术观察DDP 组、ATRA 组及联合用药组处理前后细胞凋亡率。结果:与空白对照组相比,单独应用DDP 、ATRA 处理A549 细胞均诱导细胞凋亡,且呈浓度依赖性。与单独应用DDP 的作用相比,联合用药组可更显著抑制A549 的增殖,增加细胞的凋亡率（P<0.05）,并增强对A549 细胞Survivin mRNA和COX-2 mRNA表达的抑制作用（P<0.05）;并且,流式细胞术测定结果显示联合用药组的早期凋亡率（7.37± 3.83）% 、中晚期凋亡率（34.37±2.08）% 、继发性坏死率（7.44± 0.46）% 均较单独应用DDP 组高（3.55± 0.75）% 、（6.62± 0.33）% 、（3.03± 0.05）% ,P 均<0.05。结论:全反式维甲酸能够明显提高非小细胞肺癌对顺铂的敏感性,其机制可能与抑制非小细胞肺癌细胞Survivin mRNA和COX-2 mRNA 的表达有关。      

COX-2介导幽门螺杆菌诱导的人胃癌细胞VEGF表达

背景与目的：血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）是重要的促血管生成因子,幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,H. pylori）感染诱导胃黏膜VEGF过表达是胃癌生长、转移的重要环节,但其表达机制尚不清楚。环氧化酶-2（cyclooxygenase-2,COX-2）是一种快速反应蛋白,与胃癌发生发展关系密切。本研究旨在探讨COX-2对H. pylori诱导胃癌细胞VEGF表达的影响,揭示H. pylori感染促进胃癌生长、转移的部分机制。方法：采用实时荧光定量PCR（RFQ-PCR）法检测标准H. pylori（NCTC 11637细胞株）感染人胃癌MKN45细胞VEGF的表达;Western印迹法检测H. pylori对MKN45细胞中COX-2蛋白表达的影响;运用COX-2特异性抑制剂NS398（50 μmol/L）抑制COX-2后,观察H. pylori对MKN45细胞VEGF mRNA表达的影响。结果：H. pylori感染人胃癌MKN45细胞后VEGF mRNA的表达明显上调。H. pylori感染6、12和24 h后VEGF mRNA的表达量分别为正常值的2.33（P〈0.05）、5.69和5.04倍（P〈0.01）;H. pylori感染MKN45细胞24 h后,COX-2蛋白的表达亦显著增加（P〈0.01）。而采用COX-2特异性抑制剂NS398抑制COX-2的表达后,H. pylori诱导的VEGF mRNA表达明显降低（P〈0.01）。结论：H. pylori感染诱导胃癌细胞COX-2和VEGF表达,通过COX-2途径上调VEGF的表达,这可能是H. pylori感染促进胃癌生长、转移的重要机制之一。     

FLNA在鼻咽癌发生中的作用及其可能的分子机制

目的：探讨细丝蛋白A（filamin A,FLNA）在鼻咽癌中的表达水平及其过表达对鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma, NPC)细胞生物表型的影响。 方法： 收集2008年1月至2008年12月唐山市人民医院病理科活检取得并经病理证实的新鲜NPC组织标本63例及21例距其癌组织边缘2 cm以上且镜下未见癌浸润的正常鼻咽组织（对照组）,采用免疫组织化学及Western blotting方法检测NPC组织及正常鼻咽组织中FLNA及MMP-9蛋白的表达。以慢病毒转染建立FLNA过量表达的NPC CNE2细胞株,采用RT-PCR及Western blotting检测转染后NPC CNE2细胞株中FLNA的表达变化;MTT法检测FLNA蛋白过量表达对NPC细胞增殖的影响,Transwell实验检测CNE2细胞的侵袭能力。 结果： FLNA蛋白在NPC组织中的阳性表达率明显低于正常鼻咽组织（36.5% vs 66.7%, P <0.05）,其在NPC组织的相对表达量较正常鼻咽组织的相对表达量明显降低\[（0.378±0031） vs （0.835±0.078）, P <0.05\],FLNA蛋白的表达水平与NPC T分期、有无淋巴结转移、临床分期以及组织分级有关（ P <0.05）。FLNA蛋白高表达的CNE2细胞其增殖能力明显减弱、侵袭转移能力明显降低、 MMP-9蛋白表达量明显下调。 结论： NPC组织中FLNA蛋白表达明显降低可能是鼻咽黏膜恶性转变的重要生物学标志,对预测NPC发生、浸润、转移有重要意义。     

不同转移特性的人鼻咽癌细胞株中Tiam-1表达及其意义

目的探讨Tiam-1在不同转移特性的人鼻咽癌细胞株中的表达,分析Tiam-1表达与鼻咽癌侵袭转移特性的关系。方法采用免疫组化SP-9000法和RT-PCR方法 ,分别从蛋白表达水平和mRNA水平检测Tiam-1在人鼻咽癌细胞5-8F、6-10B、C666-1和CNE2中的表达。结果①Tiam-1蛋白分布于人鼻咽癌细胞胞质中,在具有高转移特性的5-8F细胞中呈棕黄、棕褐色强表达,在没有转移特性的6-10B细胞中呈淡黄色弱表达或不表达,在具有一定转移特性的C666-1、CNE2细胞株中呈黄色中度表达。②Tiam-1mRNA在5-8F细胞中灰度密度比值为（0.817±0.040）,在6-10B细胞中为（0.103±0.015）,在C666-1、CNE2细胞株中分别是（0.383±0.025、0.497±0.047）,各灰度密度比值比较具有统计学差异（F=220.770,P〈0.05）,且与细胞株转移特性呈正相关（γs=0.852,P〈0.05）。结论 Tiam-1在不同转移特性的人鼻咽癌细胞株中呈现不同程度的表达,与细胞株转移特性密切相关。提示Tiam-1可作为鼻咽癌恶性程度及其预后的判断指标。     

NS-398和罗格列酮协同诱导胰腺癌细胞凋亡的研究

目的探讨特异性环氧合酶-2（COX-2）抑制剂NS-398和过氧化物酶体增殖因子活化受体（PPAR）γ激动剂罗格列酮对人胰腺腺癌细胞株SW1990细胞凋亡的调控作用及其机制。方法SW1990细胞接种于含10%胎牛血清的DMEM液中,常规培养24 h后加NS-398（150μmol/L）和（或）罗格列酮（50μmol/L）,连续培养48 h。采用流式细胞仪检测细胞凋亡率,逆转录-聚合酶链反应（RT- PCR）法检测凋亡抑制基因Bcl-2 mRNA表达。结果NS-398组、罗格列酮组和联合用药组的细胞凋亡率分别为（10.65±3.93）%、（14.51±2.36）%和（25.87±5.24）%,显著高于对照组的（3.12±1.76）% （P〈0.05和P〈0.01）,联合用药组的细胞凋亡率明显高于NS-398或罗格列酮单一用药组（P〈0.01）。NS-398和罗格列酮显著下调Bcl-2 mRNA在SW1990细胞的表达（P〈0.01）。结论NS-398、罗格列酮通过下调Bcl-2基因表达而诱导细胞凋亡,两者联合使用具有协同作用。     

趋化因子受体CXCR4在鼻咽癌细胞中的表达

背景与目的:研究表明,趋化因子受体CXCR4及其配体SDF-1(stromalcell-derivedfactor1)与肿瘤的增殖、分化和转移等恶性表现密切相关。本研究通过观察分化程度和增殖能力不同的鼻咽癌细胞中CXCR4的表达,初步了解CXCR4与鼻咽癌细胞恶性表现的关系。方法:分别以全反式维甲酸(all-trans-retinoicacid,RA)和端粒酶反义核酸处理鼻咽癌CNE1(高分化)和CNE2Z(低分化)细胞,原位杂交技术检测CXCR4mRNA表达,免疫组化法检测CXCR4蛋白表达,流式细胞仪检测细胞周期分布,MTT法检测细胞增殖能力。结果:CXCR4mRNA和CXCR4蛋白在鼻咽癌CNE1和CNE2Z细胞均呈强阳性表达,且CNE2Z细胞表达强度显著高于CNE1细胞。经1×10-5mol/L和1×10-4mol/LRA作用后,与对照组比较,CNE1细胞G1期细胞明显增多,CNE2Z细胞S期细胞明显增多,同时两者的CXCR4mRNA表达水平均显著低于对照组(P<0.01),其中1×10-4mol/LRA作用较1×10-5mol/LRA作用强(P<0.01)。经端粒酶反义核酸作用后,CNE1和CNE2Z细胞增殖均明显受抑制,CXCR4蛋白表达水平均显著低于对照组(P<0.01)。结论:CXCR4在鼻咽癌细胞高表达,其表达水平与鼻咽癌细胞的分化程度和增殖能力有关。     

下调miR-21表达抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖和侵袭

背景与目的：miR-21在人类多种肿瘤中异常高表达。本研究探讨干扰miR-21表达对鼻咽癌CNE2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法：使用脂质体将miR-21 inhibitor转染CNE2细胞,以无关序列(NC inhibitor)作为阴性对照。采用qRT-PCR技术验证miR-21 inhibitor转染的CNE2细胞中miR-21的表达水平;通过MTS法、细胞划痕、Transwell侵袭实验观察下调miR-21表达对CNE2细胞增殖、迁移和侵袭的影响。结果：转染miR-21 inhibitor的CNE2细胞中miR-21的表达明显下调,并且呈浓度依赖性。表明转染miR-21 inhibitor能有效抑制CNE2细胞中miR-21的表达。转染miR-21 inhibitor的CNE2细胞与对照细胞相比,增殖速度明显减慢,差异有统计学意义(P<0.05)。细胞划痕实验显示,下调miR-21表达抑制CNE2细胞迁移(P<0.05)。Transwell侵袭实验结果显示,下调miR-21表达抑制CNE2细胞侵袭(P<0.05)。结论：miR-21能促进鼻咽癌细胞增殖、迁移和侵袭,其可能在鼻咽癌的发生、发展中发挥重要作用。     

洛铂对鼻咽癌抗肿瘤作用的体外实验研究

目的 探讨洛铂对鼻咽癌的体外抗肿瘤作用及其可能的机制,为洛铂用于鼻咽癌的临床治疗提供实验依据。方法 在体外将不同浓度洛铂分别作用于低分化鼻咽癌细胞株CNE2、HONE1和SUNE1,采用CCK-8法检测细胞活性;碘化丙啶（PI）染色分析细胞中DNA的含量,流式细胞仪检测细胞周期情况;采用Annexin V-FITC／PI双染法检测细胞凋亡情况;采用蛋白印迹法（Western blotting）检测细胞周期和细胞凋亡相关蛋白的表达。结果 在体外洛铂作用3种鼻咽癌细胞株48h具有明显的细胞抑制作用,并表现出浓度依赖性。洛铂作用鼻咽癌细胞株CNE2、HONE1、SUNE1的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为（4.05±0.49）μmol/L、（4.32±1.17）μmol/L和（2.51±0.15）μmol／L。洛铂作用3种鼻咽癌细胞株48h后,在较低浓度（0.125倍IC₅₀）时将细胞周期阻滞在G₂期,同时伴随G₂期相关蛋白Cyclin B1和phospho-cdc2（Tyr15）表达增高;而在较高浓度（0.5倍IC₅₀）时则诱导细胞呈Caspase依赖性细胞凋亡,并具有浓度依赖性。结论 洛铂对鼻咽癌细胞具有明显的细胞毒作用,且呈浓度依赖性;其机制表现为双重作用,即在较低浓度时阻滞细胞于G₂期和在较高浓度时诱导细胞凋亡,这为洛铂用于鼻咽癌的临床治疗提供可能性。     

槲皮素通过调控p21/cip1和p27/kip1蛋白的稳定性抑制口腔鳞状细胞癌细胞增殖

目的:探究槲皮素通过调控p21/cip1和p27/kip1蛋白的稳定性对口腔鳞状细胞癌细胞增殖的影响.方法:CCK-8试剂盒检测口腔鳞状细胞癌细胞(SCC-15)增殖情况;流式细胞术检测SCC-15细胞周期分布;Western blot检测CyclinD1/CDK复合体、p21/cip1、p27/kip1、p-GSK3...     

汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制。方法 采用不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用鼻咽癌CNE2细胞,以溶剂为对照组。采用实时无标记细胞功能分析仪监测细胞增殖情况,双荧光法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测PCNA、Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平。结果 不同浓度（2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L）汉黄芩素作用24 h后CNE2细胞增殖抑制率依次为20.3%、23.7%、33.4%、40.9%,IC₅₀为42.41 μmol/L;36 h依次为18.0%、22.0%、36.1%、40.5%,IC₅₀为34.46 μmol/L;48 h依次为7.4%、20.2%、35.0%、40.9%,IC₅₀为22.81 μmol/L。与溶剂对照组比较,10.0 μmol/L、20.0 μmol/L汉黄芩素组细胞凋亡率均升高（t=23.710,P=0.001;t=43.934,P<0.001）。20.0 μmol/L汉黄芩素处理鼻咽癌CNE2细胞48 h后,与溶剂对照组比较,Bax蛋白表达水平上升（P<0.05）,Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平下降（P<0.05）。 结论 汉黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖并诱导其凋亡,可能通过促进Bax蛋白表达并抑制Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达发挥作用。     

5-Aza-C对人鼻咽癌细胞hTERT基因表达及端粒酶活性的影响

目的 研究去甲基化药物5-氮杂胞嘧啶核苷（5-Azacytidine, 5-Aza-C）对鼻咽癌细胞亚端粒区D4Z4甲基化状态、hTERT基因表达及端粒酶活性的影响。方法 常规培养鼻咽癌CNE, CNE1,CNE2及5-8F细胞系。5-Aza-C处理鼻咽癌细胞后,甲基化测序聚合酶链反应（MSP）法检测亚端粒区D4Z4甲基化;RT-PCR检测hTERT mRNA水平;端粒重复序列扩增法（telomeric repeat amplification protocol,TRAP）法检测端粒酶活性。结果 5-Aza-C处理后,四种鼻咽癌细胞系的亚端粒区D4Z4序列的甲基化水平较处理前明显下降。2.5 μmol/L 5-Aza-C处理后,四种鼻咽癌细胞hTERT mRNA的表达明显下调,端粒酶活性显著抑制。 结论 在鼻咽癌的发生中,亚端粒区的DNA甲基化水平紊乱起了一定的作用,去甲基化药物5-Aza-C能下调hTERT表达,抑制端粒酶活性。探讨鼻咽癌细胞中hTERT表达与亚端粒区CpG岛甲基化状态之间的关系,可能为亚端粒区染色体结构异常在鼻咽癌发生中的作用提供深刻见解。     

塞来昔布对骨肉瘤MG-63细胞迁移和侵袭能力的影响

目的 研究选择性COX-2抑制剂塞来昔布对骨肉瘤MG-63细胞迁移和侵袭能力的影响,并初步探讨其相关机制。 方法 将培养的MG-63细胞分为5组：试验组(分别以25μmol/L、50μmol/L、100μmol/L 塞来昔布和50μmol/L塞来昔布+10μg/L PGE2处理)和对照组,采用MTT法、迁移试验、Transwell小室侵袭试验和酶联免疫吸附试验(ELISA)研究不同浓度塞来昔布对骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移能力、侵袭能力以及基质金属酶(MMPs)表达量的影响。 结果 MTT法显示塞来昔布作用24h对MG-63细胞增殖无明显影响,作用48h可显著抑制MG-63增殖,且呈现剂量效应关系;迁移试验和侵袭试验表明塞来昔布可抑制MG-63细胞迁移和侵袭,并具有剂量效应关系;酶联免疫吸附试验检测塞来昔布可降低MG-63细胞MMP-2和MMP-9的分泌量,这些抑制效应不能被PGE2完全逆转。 结论 选择性COX-2抑制剂塞来昔布可抑制骨肉瘤MG-63细胞增殖、迁移和侵袭,这种抑制效应可能是通过减少肿瘤细胞MMP-2和MMP-9的表达来实现的,其机制有部分非COX-2依赖途径存在。     

敲低Bmi-1对鼻咽癌细胞CNE2放射敏感性的影响

目的探讨敲低Bmi-1的表达水平对鼻咽癌细胞CNE2放射敏感性的影响。方法通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Western blotting检测4种鼻咽癌细胞株CNE1、CNE2、HNE1和HONE1中Bmi-1的表达,筛选出高表达Bmi-1的细胞株。设计3条针对Bmi-1 mRNA的干扰序列(shRNA1、shRNA2、shRNA3),用于构建慢病毒重组载体Bmi-1-shRNA1、Bmi-1-shRNA2、Bmi-1-shRNA3,然后转染至高表达Bmi-1的细胞株中,筛选出敲低Bmi-1效果最佳的慢病毒重组载体。将筛选出的慢病毒重组载体转染至高表达Bmi-1的鼻咽癌细胞株中,使用2 Gy放射线(IR)进行照射,通过平板克隆形成实验检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞周期分布及凋亡情况。结果在4种鼻咽癌细胞株中,CNE2细胞的Bmi-1 mRNA表达水平最高(P<0.05),CNE1、CNE2细胞中Bmi-1蛋白表达相对较高(P<0.05)。构建的3条慢病毒重组载体Bmi-1-shRNA1、Bmi-1-shRNA2、Bmi-1-shRNA3均可降低CNE2细胞中...     

5氮杂脱氧胞苷对鼻咽癌细胞RASSF1A基因甲基化和mRNA表达的影响

目的:研究5氮杂脱氧胞苷对鼻咽癌CNE2细胞中RASSF1A基因甲基化和mRNA表达的影响。方法:用不同浓度(0、5、10、20μmol/L)5氮杂脱氧胞苷处理CNE2细胞,采用甲基化特异性PCR(MSP)法对处理后细胞中RASSF1A基因甲基化状态进行检测;并用SYBR Green qReal Time-PCR法检测RASSF1A mRNA的表达。结果:阴性对照组CNE2细胞中,RASSF1A基因呈完全甲基化状态,当用5μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,CNE2细胞出现非甲基化产物,20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,CNE2细胞甲基化状态完全被逆转,均为非甲基化产物。阴性对照组CNE2细胞RASSF1A基因呈低表达,经5～20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理后,RASSF1A mRNA的相对表达量逐渐增加,10和20μmol/L 5氮杂脱氧胞苷处理组,RASSF1A mRNA表达水平均明显高于阴性对照组(P0.01);且20μmol/L处理组明显高于5μmol/L处理组(P0.01)。结论:CNE2细胞RASSF1A基因甲基化可以被5氮杂脱氧胞苷逆转,且5氮杂脱氧胞苷可促进RASSF1A mRNA的表达。